α-硫辛酸与维生素C和维生素E的抗氧化作用比较

维生素C和维生素E以及α-硫辛酸是三种重要的维生素类物质,必须由食物供给[1-3].20世纪初,维生素C防治坏血病成为光辉的一页;20世纪中叶,维生素E又成为防癌抗衰老的新秀;近年来发现α-硫辛酸也具有许多重要生理作用[4-8];但它们三者的共同特点是都具有很强的抗氧化活性.虽然它们的抗氧化途径各不相同,抗氧化效果也有很大差别,却都能有效清除体内自由基对细胞的毒性作用,从而起到保护细胞的作用.本研究是从它们提高细胞抗氧化能力和协助细胞从氧化损伤状态下恢复这两个方面来研究,旨在为进一步探讨三种物质的抗氧化机制奠定基础,也为一些需要长时间暴露在环境空气中进行的细胞实验积累有益资料,并为需要在高氧环境下进行的临床治疗研究提供参考数据.     

NOD鼠甲状腺炎动物模型T细胞克隆的建立

目的为了阐明实验性免疫性甲状腺炎的诱发机制,本研究以甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)为抗原,树突状细胞(dendritic cells,DCs)为抗原提呈细胞(antigen-presenting cells,APCs),建立了T细胞克隆。方法NOD鼠饲养于无菌环境中喂养0.05%碘化钠8周后,每2周采血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测Tg水平,然后每只小鼠用100μg Tg的剂量混于完全弗氏佐剂(complete Freund adjuvant,CFA)中免疫小鼠2次,用增殖实验优化Tg的含量,寻找DCs摄取提呈Tg的最适抗原量,然后将免疫后鼠的脾细胞作为T细胞与同基因鼠的与抗原孵育过的DCs培养。结果建立了3个Tg特异性的T细胞克隆,这些细胞克隆在体外培养时间>2年以上,流式细胞仪检测其表型均为CD4+,而且分泌干扰素(IFN)-γ,不分泌白细胞介素(IL)-4。结论DCs起APCs的作用,在T细胞系及T细胞克隆的建立中起极为重要的作用。否则,T细胞即使在Tg及IL-2存在的培养环境中也仅能存活数天,此实验结论将为研究实验性免疫性甲状腺炎的诱发机制提供理论依据和实验手段。     

补气类中草药对缺氧性肝细胞生长作用的影响

目的观察补气类中草药对缺氧性肝细胞生长作用的影响,为进一步研究其促细胞生长机制奠定基础。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、活细胞观察法分析细胞生长情况,并进行统计学处理。结果4种补气药(人参、党参、黄芪、西洋参)对正常肝细胞均有明显促生长作用(P<0.05),尤以人参效果最好。而对于缺氧性肝细胞则西洋参促生长效果最好(P<0.05);人参、党参效果虽优于黄芪,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论不同补气药对正常肝细胞与缺氧性肝细胞的促生长作用不同:人参对正常肝细胞效果最好,西洋参对缺氧性肝细胞效果最好。     

人骨髓间充质干细胞在不同输注液中的生存和生长

背景: 间充质干细胞移植技术快速发展,需要异地移植病例不断增加,但是关于细胞保存运输条件的研究甚少.目的: 比较几种临床常用输注液及实验室配制的输注液对间充质干细胞生存和生长的影响.方法: 抽取健康志愿者髂骨骨髓,采用密度梯度离心和贴壁筛选相结合的方法,分离培养骨髓间充质干细胞.对骨髓间充质干细胞进行细胞形态、细胞表面标记和多向分化能力的鉴定.25℃条件下,用10%FBS-DMEM、细胞输注液和5种临床常用细胞输注液(9 g/L氯化钠注射液、50 g/L葡萄糖注射液、50 g/L葡萄糖氯化钠注射液、2%和5%的人血自蛋白溶液)保存第3代骨髓间充质干细胞,检测1,2,4和6 h细胞的存活率.然后4℃条件下,以细胞输注液保存骨髓间充质干细胞,检测2,4,8,12,24 h细胞的存活率和存活细胞的生长曲线.结果与结论: 第3代骨髓间充质干细胞呈均匀一致的长梭形,平行或旋涡状紧密排列.细胞表面标记CD44、CD105表达阳性,CD45表达阴性.成骨诱导3周后,长梭形骨髓间充质干细胞变成多角形,von Kossa染色可见典型的黑色钙化小结;成脂诱导2周后,细胞变成短梭形或椭圆形,油红O染色可见胞浆内密集的被染成红色的脂滴.在25℃条件下,细胞输注液中保存的骨髓间充质干细胞,其存活率远高于在上述5种临床常用输注液中所保存细胞;4℃条件下,细胞输注液和完全培养基中保存的骨髓间充质干细胞存活率和再生长能力基本相同.提示细胞完全培养基成分配制的输注液是维持间充质干细胞脱离培养环境后保持细胞活性,且延长细胞存活时间最适宜的溶液.     

蚯蚓提取物中蛋白质含量测定方法的研究

目的寻找能够精确反映蚯蚓提取物中蛋白质含量的测定方法。方法采用改良Lowry法和考马斯亮蓝染料结合法(Bradford法)测定蚯蚓提取物蛋白质含量;分别使用2法测定标准牛血清白蛋白(BSA)水溶液在碱性蛋白酶水解前后的蛋白质含量。结果改良Lowry法的测定结果明显高于Bradford法。BSA水溶液酶解前,2法测定的蛋白质含量相当;使用改良Lowry法,BSA水溶液酶解前后的蛋白测定值相近;而使用Bradford法测定BSA水溶液蛋白质含量时,酶解后的测定值较酶解前出现大幅下降。结论在测定多肽含量多的供试品中蛋白质含量时,改良Lowry法测定更为精确。蚯蚓提取物中存在大量的多肽成分,所以对其进行蛋白质含量测定时,改良Lowry法能够更加精确、真实地反映蚯蚓提取物的蛋白质含量。     

RGD肽类似物的合成及活性测定

 目的合成RGD(精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸)肽类似物-AoGDw(ω-氨基辛酸-甘氨酸-天门冬氨酸-色氨酸),研究其结构对血小板聚集功能的影响。方法采用固相法合成AoGDW,经Sephadex G-10纯化,RP-HPLC(反相高效液相色谱法)、质谱和氨基酸组成分析对其进行鉴定,并采用比浊法测定其抗血小板聚集的活性及稳定性。结果获得了纯度为98.3%的目的肽、质谱和氨基酸组成分析结果均与理论值一致。AoGDW及对照组抑制血小板聚集的IC₅₀分别为(4.7l±2.51)和(61.82±8.08)μmol·L^-1在血浆中孵育3 h,仍保持100%的活性。结论AoGDW具有更强的抗血小板聚集的活性及稳定性,说明与RGD序列紧邻的氨基酸残基对其功能有重要的影响。     

细胞因子激活的杀伤细胞与肿瘤治疗

细胞因子激活的杀伤细胞(CIK)是一种有效杀伤肿瘤细胞的免疫活性细胞.在体内对肿瘤组织有独特的异嗜性,与树突状细胞联合应用极大增强了其杀伤肿瘤能力,无论是采用自体细胞还是异基因细胞治疗肿瘤,均能取得较好疗效,为解决细胞来源、提高扩增能力、增强细胞毒活性开辟了新的思路.     

噬菌体展示技术构建重组人TNF-α单链抗体库

目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L inker-prim erm ix经重叠延伸反应将重链可变区基因与轻链可变区基因拼接成单链抗体。再用RS prim erm ix以单链抗体为模板进行第二次聚合酶链反应,从而获得全套抗rhTNF-α的单链抗体基因。以SfiⅠ/NotⅠ,位点定向插入pCANTAB-5E噬菌粒载体,转化大肠杆菌TG1后,经M13KO7辅助噬菌体拯救,构建成全套抗rhTNF-α单链抗体表面展示文库。结果成功构建了rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库。经M13KO7超感染后,噬斑计数滴度为2.1×1011pfu。结论rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建,为研究rhTNF-α抗体结合位点,了解其结构与功能的关系以及研究用于临床免疫治疗的新型抗体打下了基础。     

中药复方补益剂对不同细胞生长影响的实验研究

目的观察中药复方补益剂对不同细胞生长作用的影响,为进一步研究其作用机制奠定基础。方法用含不同补益剂(四君子汤、四物汤、八珍汤、十全大补汤)的培养基分组孵育肝细胞、心肌细胞和脑细胞,然后观察细胞生长情况,并用MTT法进行检测,用SPSS软件分析。结果复方补益剂促进细胞生长作用效果显著(P<0.05);在肝细胞2周组中四物汤比四君子汤效果更好(P<0.05);四君子汤与十全大补汤对心肌细胞2周组比1周组效果更明显(P<0.05);八珍汤和十全大补汤对脑细胞1周、2周组作用均显著优于四君子汤、四物汤(P<0.05)。结论补益剂对细胞生长有显著促进作用,而且不同补益剂对细胞促生长作用有明显差异,同种补益剂对不同细胞或同种细胞的不同生长时期作用效果也不相同。     

脂质体介导的肝细胞生长因子基因在脐静脉内皮细胞中的表达与鉴定

目的构建含肝细胞生长因子(HGF)基因真核表达载体pEGFP-N1-HGF,观察HGF基因在人脐静脉内皮细胞中的表达。方法由重组质粒pRc/CMV-HGF中扩增出HGF基因,将其克隆到含增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1中,应用脂质体将重组质粒pEGFP-N1-HGF转染到人脐静脉细胞株ECV304中,G418筛选获得稳定表达克隆,采用荧光显微镜观察、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学方法鉴定。结果经G418筛选后可形成抗性细胞克隆;荧光显微镜下观察到有绿色荧光;RT-PCR能扩增出HGFmRNA预期的699bp片段;免疫细胞化学证实转染HGF基因的细胞有HGF蛋白的表达。结论重组质粒pEGFP-N1-HGF能够在细胞株ECV304转录、表达。