基于网络药理学和分子对接技术研究黄芪-赤芍治疗COPD的作用机制＊

目的 基于网络药理学和分子对接技术探究黄芪-赤芍配伍对治疗慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）的作用机制。方法 利用TCMSP，Pharmmaper数据库，筛选黄芪-赤芍治疗COPD的活性成分和潜在靶点；结合Genecards数据库挖掘的COPD相关靶点，对黄芪-赤芍药对与COPD靶点进行PPI网络构建，交互处理得到黄芪-赤芍药对治疗COPD的关键靶点，并进行GO分析和KEGG通路富集分析；并采用分子对接技术将主要活性成分与TNF-α（肿瘤坏死因子），IL-6（白细胞介素6）等进行分子对接；最后利用A549炎症细胞与人脐静脉内皮细胞缺氧损伤模型进行体外细胞实验对结果加以验证。结果 黄芪-赤芍药对中44个有效成分作用于COPD，核心成分为：槲皮素、山奈酚、丁子香萜、芍药苷、（2R，3R）-4-methoxyl-distylin、二氢异黄酮；黄芪-赤芍药对通过IL6、PTGS2、TNF等113个靶蛋白，调控Ras、PI3KAkt、IL-17等多条信号通路治疗COPD，且分子对接结果显示槲皮素、山奈酚、丁子香萜、芍药苷与IL-6、PTGS2、TNF大分子蛋白有良好的结合性，体外细胞试验证实，槲皮素与山奈酚均能减少IL-8，MMP-9炎症因子的分泌，具有不同程度的抗炎效果；芍药苷有明显的扩血管、抗血栓之效。结论 黄芪-赤芍药对治疗COPD具有多成分、多靶点、多通路、整体调节的作用特点。初步揭示了黄芪-赤芍药对通过抑制炎症反应、调节上皮细胞生长增强保护屏障等预测出黄芪-赤芍药对治疗COPD的潜在作用机制，以期为其活性成分的药效物质基础提供理论研究和思路。     

双重实时荧光PCR快速鉴别人参和西洋参＊

目的 建立一种能够快速鉴定人参和西洋参的双重实时荧光PCR方法。方法 通过对人参属及其近似种基因序列的分析比对，设计特异性的引物探针，建立双重实时荧光PCR检测方法。PCR反应体系为Premix Ex Taq （Probe qPCR） 10 μL，人参上下游引物各0.5 μL，西洋参上下游引物各0.3 μL，人参与西洋参特异性探针各0.4 μL，DNA模板2 μL，灭菌去离子水补至20 μL。反应条件为95℃预变性30 s；然后以95℃变性5 s，60℃退火延伸30 s进行40个循环。应用该方法测试了27份DNA样品，包括7份人参、6份西洋参、4份人参与西洋参混合样、10份其他人参属样品及其他常见中药材样品的DNA，以确定该方法的特异性。将人参与西洋参样品DNA混合后10倍稀释成不同浓度后进行检测，用以确定该方法的灵敏度。结果 人参及西洋参样品均在特定的荧光通道下出现典型的阳性扩增曲线，人参与西洋参混合样品均同时出现两条阳性扩增曲线，其它对照样品及空白对照均没有出现阳性扩增曲线。灵敏度检测结果显示该方法检测人参及西洋参的最低检测限均为2 pg DNA/反应。结论 本实验建立的双重实时荧光PCR方法能够同时快速、准确、灵敏地鉴别出人参和西洋参。     

健脾益肾方对非小细胞肺癌细胞体外增殖凋亡作用的实验研究

目的:探讨健脾益肾方对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞体外增殖凋亡的作用。方法:人NSCLC细胞系A549分为四组:空白对照组(仅加入细胞培养液)、阴性对照组(加入细胞,不进行中药处理)、实验组(加细胞加中药处理)。荧光定量PCR和Western blot分别检测Survivin、Bcl-2和Caspase-3的mRNA和蛋白表达。MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,阴性对照组细胞在24、48、72 h的吸光度值明显升高,细胞凋亡率下降,Survivin和Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量上调,Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量下调,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);而健脾益肾方处理的实验组24、48、72 h的吸光度值均显著降低,细胞凋亡率显著上升,Survivin和Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量下调,Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量上调,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:健脾益肾方可通过下调Survivin和Bcl-2、上调Caspase-3表达诱导NSCLC细胞凋亡,并抑制肿瘤细胞的增殖,进而抑制NSCLC的发展。     

Outcomes after neoadjuvant or adjuvant chemotherapy for cT2-4N0-1 non–small cell lung cancer: A propensity-matched analysis

Objective

Comparative survival between neoadjuvant chemotherapy and adjuvant chemotherapy for patients with cT2-4N0-1M0 non–small cell lung cancer has not been extensively studied.

Risk for Upgrade to Malignancy After Breast Core Needle Biopsy Diagnosis of Lobular Neoplasia: A Systematic Review and Meta-Analysis

PurposeLobular neoplasia (LN) detected on breast core needle biopsy is frequently managed with surgical excision because of concern for undersampled malignancy. The authors performed a systematic review and meta-analysis to estimate the risk for upgrade to malignancy in the setting of imaging-concordant classic LN diagnosed on core biopsy.MethodsPubMed and Embase were searched for original articles published from 1998 to 2020 that reported rates of upgrade to malignancy for classic LN, including atypical lobular hyperplasia (ALH) and classic lobular carcinoma in situ (LCIS). Two reviewers extracted study data and assessed the following quality criteria: exclusion of variant LCIS, exclusion of imaging-discordant lesions, and outcome reporting for ≥70% of lesions. For studies meeting all criteria, pooled risks for upgrade to any malignancy (invasive carcinoma or ductal carcinoma in situ) and invasive malignancy for all LN, ALH, and LCIS were estimated using random-effects models.ResultsFor 65 full-text articles included in the review, the risk for upgrade to any malignancy ranged from 0% to 45%. Among the 16 studies that met all quality criteria for the meta-analysis, pooled risks for upgrade to any malignancy were 3.1% (95% confidence interval [CI], 1.8%-5.2%) for all LN, 2.5% (95% CI, 1.6%-3.9%) for ALH, and 5.8% (95% CI, 2.9%-11.3%) for LCIS. Risks for upgrade to invasive malignancy were 1.3% (95% CI, 0.7%-2.4%) for all LN, 0.4% (95% CI, 0.0%-4.2%) for ALH, and 3.5% (95% CI, 2.0%-5.9%) for LCIS.ConclusionsThe risk for upgrade to malignancy for LN found on breast biopsy is low. Imaging surveillance can likely be offered as an alternative to surgical management for LN, particularly for ALH.     

养精种玉汤辅助体外受精-胚胎移植对排卵障碍性不孕患者的影响

目的：探究养精种玉汤辅助体外受精-胚胎移植（IVF-ET）对排卵障碍性不孕患者的影响。方法：选取2016年12月至2017年3月邯郸市中心医院收治的排卵障碍性不孕患者82例作为研究对象，按照随机数字表法随机分为对照组与观察组，每组41例。对照组给予促性腺激素释放激素激动剂（Gn）+控制性促排卵+IVF-ET治疗，观察组在此基础上联合养精种玉汤治疗，至HCG日停止服用。治疗后统计2组Gn使用情况、取卵数及妊娠率；检测并比较HCG日2组子宫内膜容受性指标；比较2组妊娠结局及治疗期间相关不良反应发生情况。结果：观察组Gn使用天数及使用剂量均低于对照组，而妊娠率高于对照组（P<0.05或P<0.01）；观察组子宫内膜类型为A型患者比例高于对照组，而子宫内膜类型为C型患者比例低于对照组（P<0.05或P<0.01）；观察组子宫内膜厚度大于对照组，而子宫内膜动脉血流参数PI及RI均低于对照组（P<0.01）；2组不良反应发生率差异无统计学意义（P>0.05），且治疗期间2组血清肝功能指标及血尿常规检测均未发现异常。结论：养精种玉汤辅助IVF-ET可有效增强排卵障碍性不孕患者子宫内膜容受性，提高患者妊娠率并改善其妊娠结局，具有良好的安全性。     

微滴式数字PCR和实时荧光定量PCR对新型冠状病毒肺炎患者不同时间血便尿中核酸检测结果初步探讨

目的 分析微滴式数字PCR(droplet digital PCR, ddPCR)和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的核酸检测结果,比较两种方法检测各类样本的差异性,为改进新型冠状病毒核酸检测方案提供数据支持。 方法 利用ddPCR和qPCR技术对已经确诊的3例新型冠状病毒肺炎患者发病不同时间的全血、尿液、粪便共22份标本进行新型冠状病毒核酸检测。 结果 两种方法对人保守区域基因扩增结果一致:全血标本信号最强,尿液次之,粪便最少;ddPCR在1份全血,1份尿液,5份粪便中检出ORF-1ab和N基因的阳性微滴,qPCR仅在3份粪便中检出上述基因,漏检的3个标本基因拷贝数平均浓度为128 copies/ml;ddPCR在发病<5、5~15、>15 d的各类标本中都有检出,qPCR检出以中晚期为主;重症病例用ddPCR均可测到阳性微滴,qPCR检测的各类标本均为阴性;轻症病例的各类标本中qPCR只有粪便核酸检测阳性,ddPCR检出率高于qPCR。 结论 ddPCR可以有效克服qPCR 灵敏度不足的难题,是对qPCR 的有益补充,尤其是针对病毒载量比较低的血液、尿液和可疑的粪便或肛拭子标本,适用于早期感染的判断及患者治愈后出院诊断。     

Recent advances in preclinical in vitro approaches towards quantitative prediction of hepatic clearance and drug-drug interactions involving organic anion transporting polypeptide (OATP) 1B transporters

Hepatic uptake mediated by organic anion transporting polypeptide (OATP) 1B1 and 1B3 can serve as a major elimination pathway for various anionic drugs and as a site of drug-drug interactions (DDIs). This article provides an overview of the in vitro approaches used to predict human hepatic clearance (CL_h) and the risk of DDIs involving OATP1Bs. On the basis of the so-called extended clearance concept, in vitro–in vivo extrapolation methods using human hepatocytes as in vitro systems have been used to predict the CL_h involving OATP1B-mediated hepatic uptake. CL_h can be quantitatively predicted using human donor lots possessing adequate OATP1B activities. The contribution of OATP1Bs to hepatic uptake can be estimated by the relative activity factor, the relative expression factor, or selective inhibitor approaches, which offer generally consistent outcomes. In OATP1B1 inhibition assays, substantial substrate dependency was observed. The time-dependent inhibition of OATP1B1 was also noted and may be a mechanism underlying the in vitro–in vivo differences in the inhibition constant of cyclosporine A. Although it is still challenging to quantitatively predict CL_h and DDIs involving OATP1Bs from only preclinical data, understanding the utility and limitation of the current in vitro methods will pave the way for better prediction.     

PCR仪与测序仪应用于丙型肝炎病毒基因型检测的临床效果观察

目的:观察PCR仪与测序仪在丙型肝炎病毒(HCV)基因型检测中的应用。方法:选择2018年1月~2018年12月收治的134例HCV感染患者为研究对象,给予患者PCR仪检测、测序仪检测。结果:测序仪检测134例均可分型,PCR仪检测130例患者可分型,4例未能分型。PCR检测结果:134例HCV感染患者中,1b型59例,2a型47例,3a型6例,3b型15例,6a型3例,4例为分出型别。基因测序结果:134例均可分型:1型59例,2a型40例,2i型7例,3a型6例,3b型15例,6a型3例,6n型4例。PCR仪检测法检测符合率97.0%。结论:PCR仪测序仪检测用于丙型肝炎病毒基因型检测,操作便捷,但其只能检测探针覆盖的型别,个别罕见型别不能分型。