健脾化瘀方对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关基因表达的影响

目的:观察健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901凋亡相关基因表达的影响。方法:采用RT-PCR法测定不同浓度健脾化瘀方作用后人胃癌细胞株SGC-7901凋亡相关Bax、Bcl-2、Survivin等基因表达的变化。用Western Blotting测定健脾化瘀方对SGC-7901细胞凋亡相关Bax、Bcl-2蛋白表达的变化。结果:健脾化瘀方大、小剂量组中Bax表达上调,Bcl-2、Survivin表达下调(P0.05)。结论:健脾化瘀方能通过上调Bax表达,下调Bcl-2、Survivin表达,达到抑制胃癌细胞生长,诱导细胞凋亡的作用。     

肿节风总黄酮促进白血病K562细胞凋亡的效应及机制研究

目的:研究肿节风总黄酮促进人白血病K562细胞凋亡的效应及分子机制。方法:用系列浓度的肿节风总黄酮干预K562细胞24、48、72 h后,化学发光法检测细胞活力计算IC_(50),并依此将细胞分为空白对照组、肿节风总黄酮25、50、100μg/mL剂量组进行实验。AO-EB染色法及流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果:肿节风总黄酮能够明显降低K562细胞存活率,且呈时间和剂量依赖关系,24、48、72 h的IC_(50)分别为(64.90±5.16)μg/mL、(50.60±4.00)μg/mL、(34.90±2.46)μg/mL。与空白对照组相比,50、100μg/mL的肿节风总黄酮明显促进K562细胞凋亡。Western blot实验显示,与空白对照组相比,肿节风总黄酮100μg/mL剂量组Caspase-3蛋白表达显著下调;肿节风总黄酮50和100μg/mL剂量组Cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调,Bcl-2的蛋白表达显著下调;Bcl-2/Bax比值明显减小,Cleaved Caspase-3/Caspase-3比值明显增大。结论:肿节风总黄酮能有效促进K562细胞凋亡,其机制可能与其下调Bcl-2、Caspase-3蛋白,上调Cleaved Caspase-3蛋白的表达有关。     

健脾化痰方对裸鼠前胃癌MFC瘤组织P53 Bcl-2 Survivin Bax基因表达的影响

目的观察健脾化痰方对前胃癌(MFC)裸鼠肝转移模型瘤组织中P53,Bcl-2,Survivin,Bax基因表达的影响,探讨健脾化痰方抗肿瘤作用的分子机制。方法将MFC细胞接种于裸鼠脾脏中,建立裸鼠肝转移模型后,随机分为模型组、氟尿嘧啶(5-Fu)组及健脾化痰方高、中、低剂量组,给药4周后处理动物,用免疫组织化学法、RT-PCR法分别检测P53,Bcl-2,Survivin,Bax蛋白及mRNA表达。结果健脾化痰方各组均能下调P53,Bcl-2,Survivin蛋白及mRNA的表达,上调Bax蛋白及mRNA的表达。结论健脾化痰方的抗胃癌作用与下调P53,Bcl-2,Survivin的表达,上调Bax的表达有关。     

益气养阴方对cDDP诱导卵巢颗粒细胞凋亡线粒体途径的影响

目的:探讨益气养阴方对顺铂(c DDP)诱导的大鼠卵巢颗粒细胞(GC)凋亡线粒体途径的影响。方法:采用c DDP诱导建立GC细胞凋亡模型,用低、中、高剂量(10.5,21,31.5 g·kg-1)益气养阴方含药血清干预,另设空白组,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜测定线粒体膜电位(MMP)和钙离子(Ca2+)荧光强度;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测mRNA表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶(PI3K-Akt)表达。结果:与空白组比较,模型组GC凋亡率显著增加,MMP下降,Ca2+荧光强度升高,细胞死亡的B淋巴细胞瘤-2基因抑制剂(Bad),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9 mRNA表达均显著上调,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA则显著下降;PI3K,p-Akt蛋白表达显著下调(P0.05);中、高剂量组MMP显著升高,Ca2+浓度下降,Bad,Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达下调,Bcl-2 mRNA表达上调;PI3K和p-Akt蛋白表达显著上调(P0.05)。结论:益气养阴方抑制c DDP诱导的GC凋亡,其作用机制可能与激活PI3K/Akt,上调抗凋亡因子Bcl-2,抑制下游促凋亡因子Bad,Caspase-9,Caspase-3等表达;稳定MMP,减少Ca2+内流等有关。     

加味温胆方对心肌缺血(痰浊血瘀证)大鼠细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3表达的影响

目的探讨加味温胆方对心肌缺血(痰浊血瘀证)大鼠细胞凋亡及B淋巴细胞瘤(Bcl-2)、Bcl-2同源二聚体X蛋白(Bax)、Survivin、Caspase-3表达的影响。方法清洁级SD大鼠雄性100只,根据体质量随机分成5组:空白组、模型组、加味温胆方低剂量组(5.0 mg/kg)、加味温胆方中剂量组(10.0 mg/kg)、加味温胆方高剂量组(20.0 mg/kg)。模型组、加味温胆方各剂量组喂以高脂饲料,同时分别以0.9%氯化钠注射液及各剂量加味温胆方灌胃,连续灌胃7周,在第49天施冠状动脉结扎术;空白组喂以普通饲料,以0.9%氯化钠注射液灌胃,实验结束后,测定凋亡光密度及面积、Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3蛋白及m RNA水平。结果与空白组比较,模型组及加味温胆方组各剂量Bcl-2、Survivin mRNA、蛋白表达水平降低,Bax、Caspase-3mRNA、蛋白表达水平、心肌细胞凋亡光密度及面积升高(P 0.05);与模型组比较,加味温胆方组各剂量组Bcl-2、Survivin mRNA、蛋白表达水平降低升高,Bax、Caspase-3 m RNA、蛋白表达水平、心肌细胞凋亡光密度及面积降低,且随着加味温胆方组给药剂量的增加,Bcl-2、Survivin mRNA、蛋白表达水平逐渐升高,Bax、Caspase-3 mRNA、蛋白表达水平、心肌细胞凋亡光密度及面积逐渐降低,剂量-效应关系明显(P 0.05)。结论加味温胆方能减轻冠心病大鼠的病理损伤,抑制心肌缺血(痰浊血瘀证)大鼠细胞凋亡,其机制与加味温胆方能促进Bcl-2、Survivin mRNA、蛋白的表达,抑制Bax、Caspase-3 m RNA、蛋白的表达有关。     

半枝莲提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨半枝莲提取物(Scutellaria barbata D.Don extract,SBE)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2,Survivin和Caspase-3表达的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,以2.5,5和10 mg.L-1SBE处理48 h,并以2.5 mg.L-1顺铂(DDP)作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,二步法免疫组化检测Bcl-2,Survivin和Caspase-3蛋白表达。结果与正常对照组相比,SBE各浓度组细胞抑制率显著升高(P(0.001),细胞凋亡率明显上升(P(0.01),Caspase-3蛋白表达显著上升(P<0.01或P<0.05),Bcl-2和Survivin蛋白表达明显下降(P<0.01或P<0.05)。结论SBE具有诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用,其分子机制可能与上调Caspase-3蛋白表达以及下调Bcl-2和Survivin蛋白表达有关。     

白屈菜红碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制探讨

目的:研究白屈菜红碱(CHE)体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用与机制。方法:以肝癌HepG2细胞为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法测定CHE对细胞的增殖作用,荧光染料Hoechst 33285染色观察CHE对人肝癌细胞HepG2凋亡形态的变化,免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),Bcl-2家族的抑凋亡蛋白Bcl-xl,促凋亡相关半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白和基因表达。结果:与溶剂组比较,CHE能显著抑制HepG2细胞的增殖,其6,12,24 h的半数抑制浓度(IC50)分别为12.98,10.53,11.21μmol·L~(-1),在Hoechst 33258染色结果中,CHE组出现细胞凋亡的典型特征;与溶剂组比较,高浓度CHE能明显上调Bax,Caspase-3的蛋白及mRNA表达,明显降低Bcl-xl蛋白及mRNA表达(P0.05)。结论:白屈菜红碱能抑制肝癌细胞HepG2的增殖,并能上调促凋亡蛋白和mRNA,下调抗凋亡蛋白和mRNA表达,进而诱导凋亡。     

补肾益气方调控Bcl-2和XIAP蛋白对早孕期人滋养层细胞凋亡的拮抗作用

目的:探讨补肾益气方对正常早孕期人滋养层细胞凋亡的调节作用及机制。方法:体外培养正常早孕期人细胞滋养层细胞,分别加入空白对照组、5%含药血清组、10%含药血清组、20%含药血清组,用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪检测含药血清作用24、48、72h后细胞的增殖活性,Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞Caspase-3酶活性,Western blot检测Fas、FasL、Bcl-2和XIAP蛋白表达。结果:含药血清培养24、48、72h后,细胞在490nm波长的吸光度值增加(P<0.01);sub-G1期细胞减少(P<0.01),S期细胞增加(P<0.01),G2/M期细胞明显减少(P<0.01),Caspase-3酶活性降低;含药血清对Fas和FasL表达均有上调作用,呈剂量依赖式诱导(P<0.05);Bcl-2蛋白表达水平上升,随着浓度增加,表达量也增加,同时伴随XIAP水平升高(P<0.05)。结论:补肾益气方通过提高凋亡抑制蛋白Bcl-2水平,从而增强XIAP表达,抑制Caspase-3活性,抑制细胞死亡。FasL表达水平的上调有利于母胎免疫耐受的维持。     

补骨脂素对成骨细胞Caspase-3、8、9蛋白和Bcl-2、Bax、Bid蛋白的调控机制研究

目的分析补骨脂素对成骨细胞Caspase-3、8、9蛋白和Bcl-2、Bax、Bid蛋白的调控,探讨细胞凋亡信号途径和骨质疏松症的关系。方法选用1日龄SD大鼠获取原代的成骨细胞体外培养,细胞分成补骨脂素组、雌二醇组和正常组,补骨脂素组的培养基中添加补骨脂素,雌二醇组的培养基中添加雌二醇,正常组常规培养,采用MTT比色法检测补骨脂素的最佳浓度及最佳时间,荧光定量PCR法检测各组Caspase-3、8、9蛋白和Bcl-2、Bax、Bid蛋白的表达。结果在补骨脂素的最佳浓度及最佳时间方面,第8天时成骨细胞的OD值达最大值,而且以5μmol·L~(-1)显著;对于Bax蛋白,与正常组比较,雌二醇组更能显著下调Bax蛋白的表达(P0.05)。对于Bid蛋白,补骨脂素组较雌二醇组更能上调该蛋白的表达量(P0.05)。对于Bcl-2蛋白,补骨脂素组的相对表达量高于雌二醇组和正常组(P0.05),而且补骨脂素组的Bcl-2/Bax的比值也高于雌二醇组(P0.05)。在Caspase表达方面,相对于正常组,补骨脂素组和雌二醇组均能显著下调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达量(P0.05),而且补骨脂素组比雌二醇组更能下调Caspase-9蛋白的表达(P0.05)。结论补骨脂素可以上调成骨细胞内Bid蛋白和Bcl-2蛋白的表达,结合补骨脂素对成骨细胞的增殖情况,提示补骨脂素有可能以上调抑制凋亡蛋白为主,而且补骨脂素可能通过线粒体途径进行细胞凋亡的调控。     

丹蒌片对心肌梗死大鼠心肌Bcl-2,Caspase-3表达的影响

目的:观察丹蒌片对异丙肾上腺素(isoproterenol,Iso)所致急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)大鼠心肌梗死面积和心肌原癌基因Bcl-2 (B-cell lymphoma leulemia-2,Bcl-2)、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartates pecific proteinase-3,Caspase-3)表达的影响.方法:雄性Wistar大鼠40只随机分为4组:空白组(生理盐水10 mL·kg-1);模型组(生理盐水10 mL·kg -1);丹蒌高剂量组(900mg·kg-1);丹蒌低剂量组(450 mg·kg-1),各组10只,连续ig 14 d.14 d后除空白组以外,其他各组一次性sc Iso 15 mg·kg-1制备急性心肌梗死模型.造模后24h观测心肌病理形态学、梗死面积、心肌Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平.结果:与模型组比较,丹萎片900 mg·kg-1可明显减轻缺血心肌病理损害程度,缩小心肌梗死面积[2组依次为(2.185±0.637)％及(1.224±0.365)％,P＜0.01],上调缺血心肌Bcl-2积分吸光度(IA):(27.32±7.00及42.41±8.13,P ＜0.01)蛋白表达,下调心肌Caspase-3积分吸光度(IA):(38.40±6.33及26.26±6.79,P＜0.01)蛋白表达.结论:丹萎片通过上调心肌Bcl-2蛋白表达,下调Caspase-3蛋白表达,减轻心肌细胞凋亡,减少心肌梗死面积,保护心肌缺血损伤.     

益肾解毒方对小鼠肺腺癌骨转移瘤RNase L蛋白表达的调控作用

目的： 研究益肾解毒方对小鼠溶骨性骨转移瘤细胞核糖核酸酶L（ribonuclease L,RNase L）蛋白及凋亡终末蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达的调控作用。方法： 将已经获得国家专利的肺腺癌溶骨性骨转移细胞株,给予裸鼠左心室注射,制备溶骨性骨转移模型,随机分为5组,益肾解毒方高、中、低剂量（24,12,3 g ·kg^-1）组,帕米磷酸二钠组及模型组,以MicroSPECT/CT显像及病理组织学方法观察骨转移发生情况,定时定量给药并于5周后取材,通过免疫组织化学、蛋白免疫印迹法（Western blot）以及反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）等方法研究RNase L,Caspase-3及益肾解毒方的干预作用。结果： 与模型组比较,帕米磷酸二钠组、益肾解毒方高、中、低剂量组骨转移瘤细胞RNase L蛋白,mRNA表达降低（P<0.01）,益肾解毒方中、低剂量组及帕米磷酸二钠组骨转移灶中Caspase-3蛋白,mRNA表达升高（P<0.01）。讨论： 肺腺癌骨转移灶中RNase L高表达,而细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶Caspase-3表达降低,其内在机制可能与肺腺癌骨转移细胞的凋亡逃避机制相关,益肾解毒方能够降低RNase L表达,增强Caspase-3表达,一定程度上抑制了肿瘤细胞的凋亡逃避,这可能是益肾解毒方抗肿瘤的内在机制。     

健脾益气方含药血清通过Caspase-3/Vimentin促进人肝癌MHCC-97H细胞凋亡

目的:观察健脾益气方含药血清对人MHCC-97H肝癌细胞凋亡的影响,探讨凋亡过程中波形蛋白(Vimentin)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化及其意义。方法:采用血清药理学方法,并结合Vimentin裂解剂和Caspase抑制剂,观察7.5%,15%,30%体积浓度健脾益气方含药血清干预对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡,及Vimentin,Caspase-3,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)蛋白表达的影响。结果:健脾益气方中、高剂量含药血清均可以降低MHCC-97H肝癌细胞中Vimentin蛋白表达(P0.01),其下调程度与肝癌细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率趋势一致;Vimentin裂解组细胞增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率在各组中均最高;Caspase抑制组细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率在各组中均最低。与空白血清组比较,健脾益气方中、高剂量组,Vimentin裂解组Caspase-3蛋白表达上调(P0.01),Vimentin,PARP-1蛋白表达下调(P0.01),且PARP-1蛋白出现了裂解片段;Caspase抑制组Caspase-3表达下调(P0.01),Vimentin,PARP-1蛋白表达无统计学差异,PARP-1无蛋白裂解片段出现。结论:15%的健脾益气方含药血清对人肝癌细胞MHCC-97H的干预效果最佳,可能通过Caspase-3下调细胞中Vimentin蛋白表达,抑制肝癌细胞的增殖与侵袭;同时可能利用Caspase-3/Vimentin形成的正反馈促凋亡信号诱导肝癌细胞发生凋亡。     

基于AQP9和线粒体细胞凋亡途径相关性探讨健脾活血祛湿方对体外培养H22肝癌细胞的影响

目的:观察健脾活血祛湿方对体外培养H22肝癌细胞的影响,探讨健脾活血祛湿方基于通过干预水通道蛋白9(aquaporin 9,AQP9)调控肝癌细胞线粒体凋亡途径,从而发挥抗肿瘤的作用及可能机制。方法:培养小鼠H22肝癌细胞株,取对数生长期细胞,与高、中、低不同剂量健脾活血祛湿方和环磷酰胺(CTX)共同培养,分别采用比色法(MTT)测定H22细胞增殖抑制率,Annexin V-FICT/PI法检测H22细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测H22细胞AQP9的表达,免疫印迹法(western blotting,WB)检测H22细胞AQP9、B细胞淋巴瘤-2(b-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(bcl-2 associated x protein,Bax)表达,共聚焦显微镜观察JC-1法检测细胞线粒体膜电位变化。结果:与空白组比较,CTX组在48h、72h和96h对小鼠H22肝癌细胞的抑瘤率明显升高,凋亡率、AQP9mRNA转录水平和AQP9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平明显增加;CTX组Merge图显示绿色荧光增多(箭头所示),提示线粒体膜电位有明显降低;与CTX组比较,健脾活血祛湿方各剂量组的抑瘤率呈时间/剂量依赖性增高,高剂量组的AQP9mRNA转录水平明显增高,中、低剂量组的AQP9mRNA转录水平下降,AQP9、BAX蛋白表达水平呈剂量依赖性增高,Bcl-2表达呈剂量依赖性下降,整体凋亡率均明显增加。结论:健脾活血祛湿方可以抑制小鼠H22肝癌细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与调控AQP9表达、激活线粒体细胞凋亡通路有关。     

灯盏花素对非小细胞肺癌A549细胞的作用及机制研究

目的:探讨灯盏花素(BVP)对非小细胞肺癌A549细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法:将非小细胞肺癌A549细胞分为对照组、BVP低剂量组(20 μmol/L)、BVP中剂量组(40 μmol/L)、BVP高剂量组(80 μmol/L),使用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞12、24、48 h细胞存活率,使用AnnexinV-FITC /PI双染法检测各组细胞24 h细胞凋亡情况,使用蛋白印记法检测各组细胞细胞周期、凋亡相关蛋白表达。结果:BVP低、中、高剂量组A549细胞12、24、48 h时的细胞存活率依次呈降低趋势(P<0.05),作用相同时间时,BVP低、中、高剂量组A549细胞存活率均明显低于对照组(P<0.05),存在剂量效应(P<0.05); BVP低、中、高剂量组24 h细胞凋亡率和Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达均明显低于对照组(P<0.05),而p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05),存在剂量效应。结论:BVP可降低非小细胞肺癌A549细胞存活率和促进细胞凋亡,其机制可能与调节细胞增殖、凋亡相关蛋白表达有关。     

基于PI3K/AKT通路研究升降通癃方对前列腺增生细胞的影响

目的:研究升降通癃方通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氧酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路对前列腺增生细胞增殖和凋亡的影响。方法:培养人前列腺增生细胞(BPH-1),随机分为对照组、升降通癃方低、中、高浓度组、阳性组五组,分别给予各组需要的药物处理24 h后,通过四唑盐比色法(CCK8法)检测药物对BPH-1细胞增殖的影响;用细胞划痕实验测定BPH-1的水平迁移能力;通过流式细胞术(FCM)检测升降通癃方对BPH-1细胞细胞凋亡的影响;通过蛋白质印迹法(Western blot)检测药物对细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氧酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)、重组人α晶状体球蛋白B(Cryab)蛋白表达的影响。结果:加入升降通癃方后,BPH-1的迁移能力明显受到抑制,升降通癃方高、中、低浓度组比较差异有统计学意义(均P<0.05);FCM检测结果显示,升降通癃方组低、中、高浓度组的细胞凋亡率明显高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。Weste...     

透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨透骨消痛胶囊含药血清影响软骨细胞线粒体凋亡通路的作用机制。方法:SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,Ⅱ型胶原原位杂交鉴定。第3代软骨细胞培养72h,SNP诱导软骨细胞凋亡,采用含药血清干预凋亡软骨细胞,Hocehst 33342染色检测软骨细胞的凋亡率,Real time RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达。结果:干预24h,软骨细胞的OD值,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bcl-2mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bax、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显低于空白组(P<0.05)。结论:透骨消痛胶囊含药血清能下调软骨细胞促凋亡基因Bax、Caspase-9、Caspase-3表达,上调抗凋亡基因Bcl-2表达,抑制软骨细胞线粒体凋亡通路的信号转导。     

姜黄素抑制人胃癌BGC-823细胞生长并诱导其凋亡的机制研究

目的:探讨姜黄素抑制人胃癌BGC-823细胞生长并促人胃癌BGC-823细胞凋亡的生物学作用及其调控机制。方法:常规体外培养对数生长期胃癌BGC-823细胞,细胞分为对照组,低、中、高姜黄素处理组四组,姜黄素浓度分别为0mg/L5,mg/L1,0mg/L,20mg/L。姜黄素处理24h后,采用甲基噻唑(MTT)比色法及流式细胞仪测定细胞增殖水平及细胞凋亡率;采用免疫组化法测定细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达;采用PCR检测Caspase-3的mRNA表达水平。结果:MTT检测显示姜黄素能抑制人胃癌BGC-823细胞増殖,呈现浓度依赖性;流式细胞仪显示姜黄素能有效诱导细胞的凋亡,呈现浓度依赖性,其中20mg/L姜黄素处理24h后细胞凋亡率为48.3%;免疫组化试验表明姜黄素处理使人胃癌BGC-823细胞中Bax表达水平上调,同时Bcl-2蛋白表达水平下调;且细胞中Caspase-3的mRNA表达水平受姜黄素诱导而增高。结论:姜黄素对人胃癌BGC-823细胞的增殖具有明显抑制作用,呈浓度依赖性促进细胞凋亡,这种生物学效应可能与激活Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达而活化Caspase-3的信号通路有关。该研究为深入探讨姜黄素诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的机制提供了重要依据。     

去氢木香内酯诱导乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡的机制研究

目的观察去氢木香内酯(Dehydrocostuslactone,Dehy)对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法体外培养乳腺癌SK-BR-3细胞,分别加入不同浓度Dehy(5、10、20、30、40、50、60、80、100μmol·L-1)作用24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率。将SK-BR-3细胞分为空白对照组(0μmol·L-1)和Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组,干预48 h后,利用倒置显微镜观察乳腺癌SK-BR-3细胞的形态;采用流式细胞术检测细胞周期;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡的形态学变化;Western Blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果Dehy干预SK-BR-3细胞24、48、72 h后的IC50值分别为24.84、19.39、11.45μmol·L-1,且呈现浓度和时间依赖性。与空白对照组比较,Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞数量明显减少,细胞结构松散、轮廓消失、变圆,贴壁不良;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的G2/M期细胞比例及细胞凋亡率均显著升高(P<0.05,P<0.01),呈明显的浓度依赖性;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞出现不同程度的细胞核浓染、固缩及碎裂等凋亡现象,且细胞核致密浓染的比例显著升高(P<0.05,P<0.01);Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论Dehy能够抑制乳腺癌SK-BR-3细胞的增殖及诱导其凋亡,可能与其调控Bax/Bcl-2/Caspase-3凋亡信号通路来抑制乳腺癌细胞的抗凋亡能力有关。     

健脾活血解毒法拆方含药血清对人大肠癌细胞HCT-116细胞的增殖抑制作用及其机制研究

目的:探讨健脾活血解毒法拆方含药血清对人结直肠癌细胞系HCT-116细胞的生长、细胞凋亡率、细胞凋亡相关基因和自噬基因表达的影响.方法:实验分为对照组、健脾组、活血组、解毒组、健脾活血组、健脾解毒组和健脾活血解毒组,分别采用酸性磷酸酶法(APA)、流式细胞术(FCM)和Western blot法检测各组含药血清对肿瘤细胞的生长、细胞凋亡率的变化、凋亡相关基因Caspase-3表达以及自噬相关基因LC3表达.结果:各组10％含药血清作用24h后均能抑制HCT-116细胞增殖,但组间不具有明显差异.光镜下可见,健脾活血解毒法各组含药血清作用24 h后,细胞数量减少,且体积变小;细胞早期及中晚期凋亡率与对照组相比无显著性差异,但自噬相关蛋白LC3出现活性剪切条带.结论:健脾活血解毒法含药各拆方血清体外可抑制人结直肠癌HCT-116细胞增殖,机制可能与自噬作用通路密切相关.     

岩黄连总碱对人肺癌A549细胞增殖,凋亡及Caspase,Survivin表达的影响

目的:初步探讨岩黄连总碱对人肺腺癌A549细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用,及其可能的作用机制。方法:将肺癌A549细胞株在体外条件下加入不同质量浓度岩黄连总碱。用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测不同浓度(0.1,0.05,0.01,0.005 g·L-1)岩黄连总碱分别作用24,48,72 h后,对人肺腺癌A549细胞的生长抑制情况。采用Hoechst染色法检测岩黄连总碱处理A549细胞48 h的生长情况。流式细胞术检测岩黄连总碱不同药物浓度诱导凋亡的情况。RT-PCR法检测岩黄连及顺铂对A549细胞中Caspase-3,Survivin mRNA的表达影响变化情况。结果:MTT结果提示岩黄连总碱对肺癌A549细胞增殖具有一定的抑制作用,且抑制作用呈现时间-剂量关系。MTT及Hoechst染色显示岩黄连总碱组较阴性组明显抑制A549细胞增殖(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示岩黄连诱导A549细胞凋亡作用随着药物浓度的增加,凋亡率升高。RT-PCR结果提示岩黄连组较阴性组上调了Caspase-3 mRNA的表达,下调了Survivin mRNA的表达。结论:岩黄连总碱具有一定的抑制人肺腺癌A549细胞增殖和诱导凋亡作用,并呈时间-剂量关系。其机制可能与上调Caspase-3的表达和下调Survivin的表达有关。