血管性痴呆小鼠海马胆碱乙酰转移酶mRNA表达特征及石杉碱甲的影响

目的观测石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经元胆碱乙酰转移酶(ChAT)原位杂交的影响,进一步研究其在血管性痴呆发病中的作用及石杉碱甲对其影响的机制。方法双侧颈总动脉线结,反复缺血-再灌注法制备模型,药物组用石杉碱甲溶液灌胃,跳台试验和水迷宫试验观测其行为学改变,采用原位杂交技术观测小鼠海马神经元ChAT mRNA的表达变化。结果石杉碱甲组小鼠学习、记忆成绩优于模型组(P<0.01),其海马ChATmRNA表达也明显增高(P<0.01)。结论石杉碱甲改善血管性痴呆小鼠学习、记忆成绩与其恢复海马低水平的ChAT mRNA有关。     

血管性痴呆小鼠海马NMDA受体mRNA表达特征及石杉碱甲的影响

目的　观测石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经元N-甲基D-天门冬氨酸受体原位杂目的　观测石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经元N-甲基D-天门冬氨酸受体原位杂交变化的影响,以探讨其在血管性痴呆发病中的作用及石杉碱甲干预作用的机制。方法　双侧颈总动脉线结,反复缺血-再灌注法制备模型,药物组用石杉碱甲溶液灌胃,跳台试验和水迷宫试验观测其行为学改变,采用原位杂交技术观测小鼠海马神经元 N-甲基 D-天门冬氨酸受体的表达变化。结果　石杉碱甲组小鼠学习、记忆成绩优于模型组(P < 0.01),其海马 N-甲基 D-天门冬氨酸受体 mRNA表达也明显增高(P <0.01)。结论　石杉碱甲改善血管性痴呆小鼠学习、记忆成绩与其恢复海马低水平的N-甲基D-天门冬氨酸受体mRNA有关。     

尿酸对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响及其机制

目的 观察尿酸对阿尔茨海默病(Alzheimer disense,AD)大鼠学习记忆能力的影响,并探讨作机制.方法 Morris水迷宫实验筛选出90只大鼠,随机分为空白对照组,模型对照组.尿酸处理组(1～4组),每组15只.Aβ1-42海马注射制作AD模型,用Morris水迷宫实验观察干预前后大鼠空间学习记忆能力的变化,丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒测定海马区MDA的含量;免疫组化染色测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达.结果 与空白对照组比较,模型对照组大鼠空间学习记忆能力下降(P<0.01),海马区MDA含量和caspase-3明显增高(P<0.01);与模型对照组比较,2种剂量尿酸处理组大鼠的学习记忆能力明显改善(P<0.01).海马区MDA和caspase-3的表达减少(P<0.01).结论 尿酸具有改善AD大鼠空间学习记忆作用,可能与抗氧化应激作用及抑制海马中easpase-3表达有关.     

黄芪甲苷对甲基苯丙胺依赖大鼠脑组织中bcl-2、caspase-3表达的影响

目的探讨黄芪甲苷对甲基苯丙胺(MA)依赖大鼠脑组织bcl-2及caspase-3蛋白表达的影响。方法选用健康Wistar雄性大鼠60只,随机分为空白对照组、MA依赖模型组、黄芪甲苷(10 mg/kg)+MA干预组和黄芪甲苷(20 mg/kg)+MA干预组,每组15只。空白对照组腹腔注射生理盐水;MA依赖模型组及药物干预组按剂量逐日递增法腹腔注射给药,建立MA依赖大鼠实验动物模型;同时灌胃给药黄芪甲苷干预治疗。应用免疫组化法检测大鼠脑组织bcl-2及caspase-3蛋白的表达;应用RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳方法测定bcl-2、caspase-3 mRNA的表达。结果与空白对照组比较,MA依赖模型组脑组织的caspase-3表达增加(P<0.01),bcl-2在应激状态下也有明显表达;大剂量黄芪甲苷处理组与MA依赖模型组比较bcl-2表达显著增加(P<0.01),caspase-3蛋白表达明显减少(P<0.01);bcl-2 mRNA的表达显著增加,caspase-3 mRNA的表达明显减少(均P<0.01)。结论黄芪甲苷可明显增加MA依赖大鼠脑组织bcl-2蛋白表达,降低caspase-3蛋白表达作用,并上调bcl-2 mRNA表达和下调caspase-3 mRNA表达的作用。     

葛根素加尼莫地平治疗糖尿病周围神经病变疗效观察

目的 探讨葛根素加尼莫地平治疗糖尿病周围神经病变的作用.方法 选取126例糖尿病周围神经病变患者,随机分成2组,治疗组(葛根素加尼莫地平) 64例,对照组(尼莫地平)62例.2组控制血糖的方法相同,对照组给予尼莫地平注射液8mg静滴,1次/d.治疗组葛根素注射液400 mg加入生理盐水250 ml中静滴,尼莫地平注射液8 mg静滴,1次/d,疗程均为4周.结果 治疗4周后,患者主观症状和体征均有明显改善,葛根素加尼莫地平治疗糖尿病周围神经病变总有效率81.3%,对照组总有效率51.6%,2组疗效比较差异有显著性(P＜0.01).同时神经传导速度,2组疗效比较,差异具有统计学意义(P＜0.01),治疗中未见不良反应.结论 葛根素加尼莫地平是治疗糖尿病周围神经病变安全有效的药物.     

盐酸多奈哌齐对血管性痴呆小鼠海马CA1区Calpain 1表达的影响

目的 探讨盐酸多奈哌齐对反复脑缺血-再灌注后血管性痴呆(VaD)小鼠海马CA1区Calpain 1表达的影响.方法 采用双侧颈总动脉反复缺血-再灌注合并尾端放血的方法制备VaD动物模型.分别于术后第4周和第8周测试小鼠的学习和记忆成绩,应用免疫组化方法观察海马CA1区Calpain 1表达的变化及盐酸多奈哌齐对其的影响.结果 术后4周和8周时模型组小鼠的学习、记忆成绩均明显劣于假手术组小鼠(P<0.01),海马CA1区Calpain 1表达分别是(0.090 0±0.010 0)和(0.102 0±0.008 4),显著高于假手术组的(0.033 2±0.004 3)和(0.031 7±0.004 6)(P<0.01).多奈哌齐治疗组小鼠在术后4周和8周时学习记忆能力较模型组显著改善(P<0.01),海马CA1区Calpain 1表达各为(0.052 0±0.008 4)和(0.068 0±0.008 4),显著低于模型组小鼠(P<0.05).结论 Calpain 1可能参与了脑缺血再灌注后小鼠VaD的发生,盐酸多奈哌齐改善VaD小鼠学习和记忆的能力可能与其减少Calpain 1表达有关.     

丁苯酞对慢性脑缺血大鼠海马iNOS及MG表达的影响

目的观察丁苯酞对慢性脑缺血大鼠海马区诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、小胶质细胞(microglia,MG)表达的影响,探讨丁苯酞脑保护作用机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为4组:正常大鼠组为A组,假模型组为B组,模型组为C组,丁苯酞干预组为D组。行双侧大鼠颈总动脉永久结扎的方法制作大鼠慢性脑缺血模型。丁苯酞干预组在慢性脑缺血模型成功后给予丁苯酞软胶囊0.2g·kg~(-1)治疗12周,采用Y迷宫测定各组大鼠学习记忆能力,免疫组化染色测定iNOS及OX42(小胶质细胞的标志)表达,特异性尼氏染色方法测定海马CA1区神经元。结果 A、B组大鼠学习记忆能力正常,海马区iNOS、OX42少量表达,神经元数目正常。C、D组大鼠学习记忆能力下降,海马区iNOS、OX42表达增多,神经元数目减少。与C组相比,D组大鼠学习记忆能力明显增加(P0.01),海马区iNOS、OX42表达减少(P0.01),神经元数目增加(P0.01)。结论丁苯酞可减少慢性脑缺血大鼠海马区iNOS、OX42表达,减少MG的过度激活,减少海马区神经元坏死,提高大鼠的学习记忆能力,具有脑保护作用。     

钙调神经磷酸酶对阿尔茨海默病大鼠模型海马区PSD-95及Homer、Shank基因各亚型表达的影响

目的探讨钙调神经磷酸酶(Calcineurin,Ca N)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠模型海马区PSD-95及Homer、Shank基因各亚型表达的影响及其作用机制。方法采用Aβ1-42海马注射建立AD大鼠模型,并用他克莫司(FK506)干预,以Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力,并用实时定量PCR(RealTime PCR)检测大鼠海马区PSD-95及Homer、Shank各亚型的mRNA表达情况。结果与对照组相比,模型组大鼠学习记忆能力明显减退(P<0.01),PSD-95、Homer1b、Shank1、Shank3的mRNA表达均下调,而Homer1a的mRNA表达上调(P<0.05)。FK506干预后,与模型组比较,学习记忆能力显著改善(P<0.01),同时PSD-95、Homer1b、Shank1、Shank3的mRNA表达均上调(P<0.05),而Homer1a的mRNA表达下调(P<0.01)。Shank2的mRNA表达在三组中均未见显著性差异(P>0.05)。结论抑制Ca N激活可明显增高海马区突触相关蛋白在基因的表达水平,从而影响突触的功能和可塑性,这可能是其改善AD症状的作用机制之一。     

脑脉泰对慢性脑缺血大鼠认知功能的保护作用及其机制研究

目的研究脑脉泰影响脑组织神经生长因子(NGF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,进而改善慢性脑缺血大鼠的认知功能。方法采用大鼠双侧颈总动脉永久结扎法(2-VO)制备慢性脑缺血模型。术后分别给予脑脉泰不同剂量灌胃治疗6 w。应用Morris水迷宫测定大鼠的学习记忆能力、HE染色观察海马CA1区神经元形态、免疫组化方法检测大鼠脑组织NGF及GFAP的表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠的学习能力和记忆能力降低,脑组织中NGF表达减少(P<0.01),GFAP表达增多(P<0.01);脑脉泰给药能够改善大鼠的记忆和学习能力,增加脑组织中NGF表达(与模型组相比,低剂量组P<0.05,高剂量组P<0.01),降低GFAP表达(与模型组相比,低、高剂量均为P<0.01)。结论脑脉泰可能通过提高脑组织NGF和降低GFAP表达来改善慢性脑缺血大鼠的认知功能。     

PKC、CaMK Ⅱ在慢性脑缺血大鼠认知功能损害中的作用

目的 观察慢性脑缺血大鼠海马组织蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-depend-ent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)水平变化,探讨其在慢性脑缺血认知功能损害中的作用.方法 采用双侧颈总动脉永久性结扎(per-manent occlusion of bilateral common carotid arteries,2-VO)制作慢性脑缺血模型,40只大鼠随机分为假手术组,缺血3周组,缺血8周组,缺血12周组(n=10),Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,Western blot法检测大鼠海马神经元PKC、CaMKⅡ、谷氨酸受体NMDAR1、NMDAR2B的表达水平,并观察其动态变化过程.结果缺血3周组大鼠的空间学习记忆能力较假手术组显著下降(P<0.05),缺血8周和12周组下降更加明显(P<0.01).缺血3周组海马区PKC、CaMKⅡ与谷氨酸受体NMDAR 1、NMDAR 2B表达水平较假手术组增高(P<0.01),缺血8周和12周组表达均降低(P<0.01).结论 PKC、CaMKⅡ与谷氨酸受体NMDAR 1、NMDAR2B变化规律相同,在缺血后期PKC、CaMKⅡ表达减低可能与学习记忆损害有关.     

细胞外信号调节激酶在NGF/VEGF介导的神经保护作用中的动态变化及其调控机制

目的探讨细胞外信号调节激酶1(ERK1)在局灶性脑缺血/再灌注不同时间、不同脑区的动态时空变化,以及其在NGF/VEGF介导的神经保护作用中的调控表达机制。方法采用兔大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,所有动物随机分为假手术组(n=6)、缺血/再灌注组(n=60)、因子干预组(n=40)。应用免疫组化检测ERK1在脑缺血/再灌注损伤不同脑区的动态表达,同时,应用免疫组化、流式细胞术和电镜检测caspase-3表达、凋亡和超微结构的变化。结果免疫组化分析显示,再灌注损伤1hERK1首先在海马CA3和齿状回(DG)表达增加,6h后其它脑区也相继增加,随再灌注时间延长而加剧,1~3d达高峰。再灌注1hcaspase-3活性表达在各脑区迅速增加,3d达高峰。应用神经保护剂(NGF/VEGF)后各脑区ERK1表达呈明显抑制,caspase-3表达同时被抑制。结论ERK信号通路可能通过调节死亡受体途径介导神经保护作用,抑制ERK信号途径可能是减轻脑缺血损伤过程中神经细胞死亡的有效方法。     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的探讨胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响。方法将动物随机分为假手术组、缺血组及干预组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞（mid-dle cerebral artery occlusion,MCAO）再灌注模型,干预组大鼠在脑缺血即刻给予胰岛素及葡萄糖腹腔注射,分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元Caspase-3的表达通过免疫组化法来测定,并采用TUNEL法原位标记DNA片段,检测TUNEL阳性细胞的变化。结果缺血组大鼠脑皮质Caspase-3的表达较假手术组显著增强（P〈0.01）,TUNEL阳性细胞数较假手术组显著增多（P〈0.01）;给予胰岛素处理后,Caspase-3的表达较缺血组明显减弱（P〈0.01）,TUNEL阳性细胞数较缺血组明显减少（P〈0.01）,但两者均显著高于假手术组（P〈0.01）。结论短暂的脑缺血再灌注可导致脑皮质神经元Caspase-3的表达增加,促进细胞凋亡,胰岛素可下调脑皮质神经元Caspase-3的表达,发挥神经保护作用。     

吗啡成瘾大鼠的行为学及脑内核团形态学改变的研究

目的研究吗啡成瘾对大鼠学习、记忆、情感等行为学的影响及脑内核团的形态学变化。方法将64只大鼠随机分成吗啡成瘾组和对照组,应用Morris水迷宫、开野实验、隔离残杀实验,观察大鼠学习、记忆、攻击性等行为学变化和脑内海马、伏核及内侧额前皮质在光镜和电镜下的形态学变化。结果成瘾组和对照组部分实验项目中存在统计学差异(P<0.05);在成瘾大鼠伏核、海马、内侧额前皮质观察到细胞器减少、线粒体肿胀、染色质边集、核固缩甚至坏死等形态学变化。结论长期使用吗啡可导致脑内结构的损害,同时可导致大鼠的探索行为及攻击性等行为变化。     

大鼠脑缺血-再灌注损伤早期DWI参数和AQP4蛋白表达相关性研究

目的脑水肿是脑缺血后主要的病理表现之一,研究表明水通道蛋白4(AQP4)在脑梗死后脑水肿的形成和发展中起着重要作用,目前尚缺乏磁共振弥散加权成像(DWS)与AQP4表达在急性脑缺血-再灌注早期相关性的研究。本文旨在评估大鼠脑缺血—再灌注早期脑损伤区水通道蛋白4表达、DWI信号强度(SI)及表观扩散系数(ADC)之间的相关性以及AQP4表达与缺血性脑水肿之间的关系。方法健康成年SD雄性大鼠(n=40),随机分成4组,分别为脑缺血—再灌注12h、1d、3d组和假手术组,采用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血—再灌注(MCAO/R)模型,Zea Longa评分评价神经功能损伤程度,Philips Achieva 3.0T MRI扫描仪对假手术组和缺血—再灌注后不同时间点大鼠脑部行冠状位DWI扫描,在工作站上重建ADC图,测量基底核层面梗死灶DWI-SI和ADC值,计算相对ADC值(rADC)和相对DWI—SI(rDWI—SI)值。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评价梗死体积的变化。免疫组化染色测定AQP4蛋白表达,用平均吸光度(MOD)值评价染色程度。结果假手术组动物麻醉苏醒后未见神经功能缺损,脑缺血—再灌注后12h、1d和3d组大鼠出现不同程度神经功能损伤,1d组最重。假手术组TTC染色未见梗死体积,脑缺血—再灌注后12h、1d和3d梗死体积逐渐增加,3d时最大。水肿变化规律同梗死体积相仿。假手术组海马区及皮质区AQP4免疫组化染色较浅淡,MCAO/R后12h缺血侧海马区及皮质均可见AQP4阳性细胞,12h-3d AQP4的MOD值随时间延长逐渐增高,3d时达到高峰。12h、1d和3d组大鼠脑水肿体积与相应时间点缺血侧皮质区和海马区AQP4表达均呈正相关(r=0.642,r=0.605,均P0.05);三组大鼠基底核区梗死灶rADC值与缺血侧皮质区、海马区AQP4表达均呈正相关(r=0.542,P=0.037;r=0.655,P=0.008)。结论大鼠脑缺血—再灌注早期脑水肿体积、rADC值与AQP4的表达水平存在时间上的相关性。因此结合DWI检查对脑缺血后AQP4表达部位、作用及调节机制进行更深入系统的研究,可能为临床早期治疗缺血性脑水肿提供新的思路。     

脑缺血再灌注时bcl-2蛋白的表达及药物干预作用的研究

探讨ｂｃｌ－２在脑缺血再灌注时脑损伤过程的作用,以及川芎嗪和尼莫通对其影响。方法：采用免疫组化法检测大鼠缺血再灌注不同时间内ｂｃｌ－２蛋白表达的水平,以及川芎嗪和尼莫通干预后ｂｃｌ－２蛋白表达的变化。结果（１）脑缺血再灌注时缺血侧皮层和基底节区均有ｂｃｌ－２阳性表达,其阳性表达率随再灌注时间不同而不同,于缺血２再灌注３ｈ阳性表达达高峰。（２）川芎嗪,尼莫通干预组脑缺血再灌注时层和基底节区ｂｃｌ－２     

钙拮抗剂对大鼠缺血性脑损伤后Bcl-2和Bax基因表达的作用

目的探讨大鼠实验性脑缺血后海马组织Bcl-2和Bax基因的表达及尼莫地平预处理对Bcl-2和Bax基因表达的影响。方法采用线栓法建立大鼠脑缺血模型；尼莫地平预处理；逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定其海马组织中Bcl-2和Bax mRNA。结果大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)后，海马组织Bcl-2和Bax基因均被诱导表达，Bcl-2表达量持续升高，而Bax表达量在脑缺血24h达高峰，随后逐渐下降。在脑缺血后6h和24h，经尼莫地平预处理7d的大鼠，海马组织Bcl-2基因的表达水平较未经预处理的大鼠明显上调，而Bax基因表达水平则较未经预处理的大鼠明显下调。结论钙拮抗剂尼莫地平能有效地调控大鼠缺血性脑损伤后海马组织Bcl-2和Bax基因表达的水平，为干预脑卒中后基因表达提供依据。     

葛根素对大鼠全脑缺血再灌注后学习记忆障碍保护作用及其机制的研究

目的 探讨葛根素对大鼠全脑缺血再灌注后学习记忆能力的影响及其机制。方法 采用四血管阻断法建立SD大鼠全脑缺血再灌注损伤模型，暗回避反应法测定学习记忆能力，并应用免疫组织化学法、原位末端标记法，检测大鼠全脑缺血再灌注海马CA，区的bcl-2阳性细胞数、凋亡细胞数的动态变化。结果 (1)与再灌注组相比，葛根素组大鼠潜伏期明显延长；(2)脑缺血再灌注后，海马CA1区bcl-2蛋白的表达随再灌注时间不同而变化，缺血20min后再灌注24h达高峰，葛根素组bcl2蛋白的表达于相应的时间点明显增多；(3)脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡损伤在再灌注72h损伤最重，葛根素组可减少相应时点神经细胞凋亡数。结论 葛根素对全脑缺血再灌注后大鼠学习记忆能力具有明显的改善作用，其作用机制可能与通过上调bcl-2基因表达从而抑制或延迟脑缺血再灌注后细胞凋亡有关。     

慢性脑缺血信号转导和转录激活因子-1的表达

目的 探讨慢性脑缺血大脑皮质及海马STAT-1的变化.方法 采用免疫组织化学和激光共聚焦方法观察慢性脑缺血大鼠脑中STAT-1蛋白表达变化.结果 STAT-1免疫反应阳性细胞在正常和假手术大鼠脑内发现有少量表达;缺血30d组,STAT-1蛋白阳性细胞分布于皮层及海马,细胞数量明显多于非缺血组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 STAT-1可能参与慢性脑缺血大鼠神经细胞死亡的诱导.     

大鼠酒精中毒后大脑皮质、海马、小脑的病理学改变及caspase-3的异常表达

目的探讨大鼠慢性酒精中毒后大脑皮质、海马、小脑的病理学改变及caspase-3的异常表达。方法选用健康雄性Wistar大鼠随机分为两组,其中酒精中毒组30只;盐水对照组20只。酒精中毒组每日每只大鼠分别按8ml/kg灌胃2w,随后再按照10ml/kg灌胃1w,按12ml/kg灌胃1w,共灌胃4w。每日灌胃两次,其间隔均为6h,酒精浓度为50%。对照组用等量的生理盐水灌胃。并对两组大鼠进行体重、一般生物学特征、HE染色、TUNEL染色、免疫组化caspase-3的检测。结果造模成功后,两组大鼠的体重存在的统计学差异;HE染色后酒精组大鼠大脑皮质、海马、小脑锥体细胞数目减少,部分神经元变性、坏死;TUNEL法测定酒精组大鼠凋亡细胞数量明显多于对照组(P<0.05),酒精组大鼠大脑皮质、海马、小脑的caspase-3表达明显高于对照组(P<0.05)。结论慢性酒精中毒可引起大鼠大脑皮质、海马及小脑的病理学改变,出现神经细胞凋亡,引起与凋亡相对应部位caspase-3阳性表达,并参与大鼠酒精中毒后凋亡机制的发生、发展。