Foxp3和HO-1在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓中的相关性表达及依达拉奉保护作用的研究

目的探讨叉头样转录因子-3(Foxp3)和血红素加氧酶(HO-1)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的相关性及依达拉奉对EAE的保护机制。方法建立大鼠EAE动物模型,观察依达拉奉干预前后动物发病情况,应用Real-time PCR方法检测脊髓组织中Foxp3 mRNA和HO-1 mRNA的含量变化;应用免疫组化染色观察脊髓组织Foxp3和HO-1阳性表达。结果依达拉奉能降低EAE的发病率,延迟发病,改善神经功能评分,减少脊髓中炎性细胞浸润和"血管袖套"的形成,促进脊髓中Foxp3和HO-1的转录。结论依达拉奉对EAE和MS具有保护作用,这种作用在病程早期更明显,是通过促进HO-1的表达上调和CD4+CD25+Foxp3+T调节型淋巴细胞(CD4+CD25+Foxp3+Tregs)的发育和功能实现的,具有抗炎和抗氧化的双重作用。     

神经生长因子和血管内皮生长因子联合应用对兔局灶性脑缺血再灌注损伤神经元的保护时间窗

目的：观察神经生长因子和血管内皮生长因子对兔局灶性脑缺血再灌注损伤的神经元的保护作用，以及发挥作用的有效时间窗。 方法：实验于2005-05／08在河北医科大学第二医院神经分子影像医学和神经病学实验室进行。34只雄性4．5～5月龄新西兰白兔随机数字表法分为假手术组（n=6）、生理盐水组（n=8），再灌注3h因子治疗组（n=10）和再灌注6h因子治疗组（n=10）。采用兔大脑中动脉阻断局灶性脑缺血再灌注模型，假手术组线栓插入的深度不同。因子治疗组在缺血2h再灌注损伤后3h和6h应用微量进样器将2．5μg／L血管内皮生长因子16550μL和神经生长因子400AU（相当于16μg／L）立体定向导入梗死灶周，生理盐水组则注入同等剂量的生理盐水，于再灌注72h，应用MR影像学、红四氮唑染色和流式细胞术评价各组动物脑梗死体积、灶周缺血半暗带细胞凋亡率、表观弥散系数值比率及半胱氨酸蛋白酶3活性表达。在大脑中动脉阻塞2h再灌注后24，72h，采用Purdy评分标准行神经功能缺损评分。总得分最低为2分，表示无神经功能缺陷；总得分最高为11分，表示动物意识丧失或死亡。 结果：在实验过程中，无动物死亡，均进入结果分析。①缺血2h再灌注72h，MR影像测得梗死灶主要限于左侧大脑中动脉供血区的皮质和皮质下白质和部分尾壳核。再灌注3h因子治疗组、再灌注6h因子治疗组脑梗死百分率分别较生理盐水组下降44．0％和33．3％。②缺血2h再灌注72h的再灌注3h因子治疗组、再灌注6h因子治疗组神经功能缺损评分分别较生理盐水组明显减少，差异有显著性意义[（6．4&;#177;0．5），（4．8&;#177;0．8），（5.4&;#177;0.5），P〈0.01）；[（2．8&;#177;0．4），（3．2&;#177;0．8），（4．6&;#177;0．5），P〈0．01]。③再灌注3h因子治疗组、再灌注6h因子治疗组脑组织含水量与生理盐水组相比明显减少，差异均有显著性意义[（79．2&;#177;0．5）％，（79．9&;#177;0．6）％，（81．8&;#177;0．3）％，0．01]。④缺血2h再灌注72h的再灌注3h因子治疗组、再灌注6h因子治疗组灶周皮质区梗死灶周区表观弥散系数值与生理盐水组相比明显升高，差异有显著性意义[（89&;#177;3）％，（83&;#177;3）％，（74&;#177;4）％，P〈0．01]。这两组灶周皮质凋亡率及半胱氨酸蛋白酶3活性表达与生理盐水组相比则明显降低，差异均有显著性[（10．4&;#177;0．7）％（15．5&;#177;1．2）％（20．2&;#177;1．3）％，P〈0．01]；[（17．4&;#177;1．3），（26．1&;#177;1．0），（54．1&;#177;6．9），P〈0．01]。结论：联合神经生长因子和血管内皮生长因子治疗脑缺血再灌注损伤具有明显的神经元护作用，有效时间窗最少是再灌注后6h。     

大鼠脑出血继发性脑损伤及脑水肿中补体受体2型的作用

目的：探讨补体受体2型在实验性大鼠脑出血后继发性脑损伤及脑水肿中的作用。方法：实验于2003-07／2004-10在河北医科大学第二医院神经内科实验室进行。60只SD大鼠随机分为脑出血后6，24，48，72h，7d及假手术6组。应用脑立体定向技术建立大鼠中等量(50μL)自体动脉血脑出血模型，分别对脑出血组及假手术组大鼠进行动态行为学评分，观察脑损伤程度；用干-湿重法行脑含水量测定；用免疫组织化学染色观察炎性细胞浸润；用单克隆补体受体2型抗体检测病灶周围脑组织补体-受体2型表达。结果：大鼠脑出血后脑水肿、炎性细胞浸润均于48h达到高峰，补体受体2型的表达高峰为24～48h，即补体受体2型表达与脑水肿及脑损伤存在时间上相关，且与假手术组相比有显著性差异。结论：补体受体2型在脑出血后脑组织损伤和脑水肿的形成中起到了一定的作用，为脑细胞功能保护早期干预措施提供了实验学数据。     

构建空肠弯曲菌致兔中枢神经系统病变的动物模型

背景：近年来，吉兰-巴雷综合征和眼肌麻痹-共济失调-无反射综合征屡有发现中枢神经系统受累，受累部位包括视神经、脑干和小脑。眼肌麻痹-共济失调-无反射综合征患者的脑干和脊髓小脑束发现MRI异常信号。因此建立空肠弯曲菌感染后脑炎的动物模型并通过影像学、免疫学及病理学等方法手段探讨其形成机制是实验出发点。 目的：建立空肠弯曲菌penner 4型感染后中枢神经系统病变的动物模型。 设计：随机分组设计、对照动物实验。 单位：河北医科大学第二医院影像科、神经内科。 材料：实验于2003—08／12在河北医科大学第二医院分子影像实验室完成。选择健康大耳白兔15只，随机分为实验组10只，对照组5只。 方法：实验组于第1周将空肠弯曲菌灭活菌液与等体积的完全弗氏佐剂对抽充分乳化后，分别于双腋窝、双腹股沟及背部脊柱旁皮下多点注射免疫，每处1mL，每只总量5mL。以后每2周以单纯空肠弯曲菌灭活菌液腹腔注射加强免疫，每只每次总量5mL，共5次。对照组以相同体积的生理盐水代替空肠弯曲菌菌液，注射方法及时间与实验组完全相同。评价方法：①症状与体征：观察动物精神状态、饮食、尿便及肢体活动状况等。②血清学检查：用酶联免疫吸附法分别检测动物血清中抗空肠弯曲菌抗体、抗IgG型GM1抗体及髓鞘碱性蛋白含量。③影像学观察：使用TOSHIBA 1．5T磁共振成像设备分别于每次免疫前随机抽取两组实验动物行MRI检查。扫描序列包括：自旋回波序列T1加权像，扫描参数为500／15ms（TR／TE）；快速自旋回波序列12加权像，40（30／108ms（TR／IE）；液体衰减反转恢复序列，参数为10000／120ms（TR／TE），翻转角90&;#176;，以上扫描层厚4．0mm，层间距0．8mm。④组织学检查：发病动物于初次免疫后4周经心脏灌注致死，立即开颅取视神经、部分白质、海马、脑干、小脑及颈、胸，腰各段脊髓，固定于40g／L甲醛溶液，分别行苏木精-伊红染色、坚固蓝染色及髓鞘碱性蛋白免疫组化染色。免疫后10周于实验组内随机选取5只及对照组5只以同样方法获得组织学标本。 主要观察指标：症状与体征；动物血清中抗空肠弯曲菌抗体、抗IgG型GM1抗体及髓鞘碱性蛋白含量；影像学观察；组织学观察。 结果：纳入动物15只，14只进入结果分析，实验组中1只动物于免疫后4周时死亡。①实验组1只动物于免疫后2周出现精神症状及肢体活动障碍。②实验组动物血清抗空肠弯曲菌-IgG抗体滴度在2-4周达到高峰，自第2周起，实验组动物血清A值显著大于对照组（实验组、对照组分别为1．923&;#177;0．403，0．973&;#177;0．633，P〈0．05）。IgG型GMI（A值）在第8周时明显升高，但与对照组比较差异无显著性（实验组、对照组分别为0．115&;#177;0．042．0．097&;#177;0．039，P〉0．05）。血清髓鞘碱性蛋白含量（A值）均在第8周时显著上升（0．134&;#177;0．041）。③影像学检查发现实验组动物在免疫后2～4周出现不同程度的颅脑MRI异常信号。④组织学改变见实验组动物脑干，延髓、颈髓、胸髓及腰髓等部位髓鞘肿胀，未见炎细胞浸润及髓鞘脱失。对照组上述部位均未见明显改变。 结论：空肠弯曲菌Penner 4型可诱发中枢神经系统病变。     

单纯疱疹病毒、水痘-带状疱疹病毒感染与脑梗死

目的检测单纯疱疹病毒(HSV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)与脑梗死(CI)的发生是否有相关性。方法采用聚合酶链反应(PCR)的方法来检测入选者病毒DNA。结果 HSV在无常见危险因素死组、高危组及对照组存在差异(P0.05),且组间比较结果为无常见危险因素组与对照组有差异;VZV在脑梗死各组中不存在差异(P0.05)。结论 HSV可能为脑梗死发生的存在关联,VZV与脑梗死的发生无明显相关性。     

轴索损伤在大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎不同时期的动态变化及意义

目的: 研究不同发病时期实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠轴索损伤的动态变化及意义。方法: 对不同发病时期EAE大鼠进行HE染色判断炎症损害,以免疫组化方法标记β-淀粉样前体蛋白(β-APP)和磷酸化tau蛋白,了解轴索急性损伤及反复发病后的神经变性情况。结果: 急性组大鼠脊髓组织内可见大量炎症细胞弥散分布,在炎症细胞区内有大量β-APP阳性表达,神经纤维变性标志物tau蛋白只有少量沉积;瘫痪组大鼠血管周围有淋巴细胞浸润,呈袖套样分布,β-APP在无炎症的区域也有部分表达,并有tau蛋白大量沉积,提示反复发病的瘫痪大鼠存在持续的轴索损伤,并发生明显的轴索变性。急性组、瘫痪组轴索中β-APP和tau蛋白阳性数均多于正常组,差异显著,急性组和瘫痪组比较,轴索中β-APP和tau蛋白阳性表达数亦有显著差异。结论: (1)发病早期轴索损伤与炎症破坏有关,并呈可逆性。(2)神经变性主要存在于EAE的慢性病程中。(3)在EAE发病过程中轴索损伤呈动态变化,疾病后期轴索发生神经变性并导致神经功能不可逆损伤,在EAE研究中有重要意义。     

大鼠脑出血继发性脑损伤及脑水肿中补体受体2型的作用

目的:探讨补体受体2型在实验性大鼠脑出血后继发性脑损伤及脑水肿中的作用。方法:实验于2003-07/2004-10在河北医科大学第二医院神经内科实验室进行。60只SD大鼠随机分为脑出血后6,24,48,72h,7d及假手术6组。应用脑立体定向技术建立大鼠中等量(50μL)自体动脉血脑出血模型,分别对脑出血组及假手术组大鼠进行动态行为学评分,观察脑损伤程度;用干-湿重法行脑含水量测定;用免疫组织化学染色观察炎性细胞浸润;用单克隆补体受体2型抗体检测病灶周围脑组织补体受体2型表达。结果:大鼠脑出血后脑水肿、炎性细胞浸润均于48h达到高峰,补体受体2型的表达高峰为24～48h,即补体受体2型表达与脑水肿及脑损伤存在时间上相关,且与假手术组相比有显著性差异。结论:补体受体2型在脑出血后脑组织损伤和脑水肿的形成中起到了一定的作用,为脑细胞功能保护早期干预措施提供了实验学数据。     

多系统萎缩4例

多系统萎缩病例临床较少见,无特效治疗方法,现将我们遇到的4例报告如下. 例1,男,73岁,主因站立时头晕、全身无力1年余,加重1个月入院.1年前偶尔站立时头晕、全身无力,伴二便失禁、阳痿、全身出汗减少,睡眠时鼾声大.1个月前站立后5分钟出现晕厥,平卧后意识逐渐转清.查体:神清、语利、无智能障碍,颅神经正常.四肢肌力、肌张力正常.腱反射正常.双侧巴氏征(-),指鼻试验、跟膝胫试验稳准,皮肤划痕试验减弱.入院后行血压卧立位试验,直立位收缩压下降大于40 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),头颅MRI示:脑桥、小脑萎缩.诊断为多系统萎缩.给予抬高头部,增加食盐量,并给予盐酸米多君,营养神经等药物治疗,住院10天,病情未见明显好转.     

单鼻孔经蝶入路鞍区手术的蝶窦前壁解剖学研究

目的为单鼻孔经蝶入路鞍区手术准确寻找堞窦口、避免副损伤提供解剖学依据。方法采用15个防腐头颅标本,在手术显微镜下鼻中隔及蝶窦前壁进行解剖学观察。结果鼻中隔在前、中、后部的厚度分别为4.2±0.6mm、4.9±0.9mm、5.2±0.8mm、鼻小柱根部至蝶窦口下极的距离为60.40±3.20mm、与鼻腔底水平的夹角为31.5±2.7。蝶窦口下极距离鼻后中隔动脉上支和下支分别为3.82±0.35mm、6.62±0.48mm。结论鼻中隔中部切口入路最为值得提倡;蝶窦口这一解剖学标志在单鼻孔经蝶入路鞍区手术中极为重要;开放蝶窦口下界不应超过3.5mm。     

缓解-复发型EAE大鼠轴索损伤与神经功能障碍相关性研究

目的研究恢复期不同预后缓解-复发型EAE大鼠轴索损伤与神经功能障碍之间的关系。方法按照发病情况把缓解-复发型EAE大鼠分为缓解组和瘫痪组,分别进行HE染色和改良的Bielschowsky轴索染色,以免疫组化方法标记脊髓白质轴索中Tau蛋白的表达。结果缓解组和瘫痪组大鼠脊髓组织内均可见多个血管周围炎性细胞浸润呈袖套样分布,改良的Bielschowsky银染色轴索成空泡样缺失。神经纤维变性标志物Tau蛋白在变性的轴索内沉积,呈阳性表达的轴索数在缓解组和瘫痪组均高于正常组,差异显著(P<0.01),瘫痪组轴索内Tau蛋白呈阳性表达的数量高于恢复组,差异显著(P<0.01),具有统计学意义。结论缓解-复发型EAE大鼠的组织病理学改变为炎性细胞浸润和轴索损伤;恢复期大鼠缓解组与瘫痪组均发生轴索变性,当损伤达到一定程度会发生临床不可逆性神经功能障碍,导致肢体瘫痪。