人脑星形胶质细胞瘤恶性程度相关蛋白表达谱的分析与鉴定

目的 应用蛋白质组学技术确定与人脑星形胶质细胞瘤恶性程度相关的差异表达蛋白质分子. 方法 二维电泳技术比较分析12例正常脑组织和52例不同恶性程度星形胶质细胞瘤组织(Ⅱ级23例、Ⅲ级15例、Ⅳ级14例)差异表达蛋白质斑点,高效液相色谱-电喷雾(ESI)串联质谱技术、生物信息学方法分析鉴定与恶性程度相关的差异表达蛋白质分子. 结果 共鉴定出15种差异表达的蛋白质分子,其中热休克蛋白27、抑制素、葡萄糖调节蛋白78、过氧化物氧化酶1、过氧化物氧化酶6、膜联蛋白Ⅱ、组织蛋白酶D、纤溶酶原激活物抑制剂-1、肌动蛋白(胞浆型1)、谷胱甘肽S-转移酶M这10种蛋白的表达在Ⅲ级和Ⅳ级星形胶质细胞瘤组织中升高,二硫键异构酶A3、αB晶体蛋白质、T复合体蛋白1(ε亚单位)、泛素C-末端水解酶同T酶L1、胶质纤维酸性蛋白这5种蛋白的表达降低. 结论 蛋白质组学技术可有效鉴定与肿瘤恶性程度相关的差异表达蛋白,为星形胶质细胞瘤的分子个体诊断和分子靶向治疗提供实验依据.     

脑血管痉挛的差异蛋白质组学研究

目的采用蛋白质组学技术分离和鉴定动脉瘤性蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)患者组及无痉挛患者组发病后第1 d脑脊液中差异表达蛋白质,寻找与脑血管痉挛相关的蛋白质。方法采用双向凝胶电泳分离无脑血管痉挛组(对照组)、轻中度痉挛组(实验组1)和重度痉挛组(实验组2)脑脊液总蛋白质,比较分析实验组和对照组之间的差异表达蛋白质,应用基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质。结果实验组1、实验组2与对照组表达差异2倍以上的蛋白质斑点共有68个,成功鉴定出23个差异表达蛋白质。结论初步建立了脑血管痉挛的差异表达蛋白质双向电泳技术体系,筛选出一批与血管痉挛相关蛋白质候选物。本研究为脑血管痉挛的发病机制研究提供了新的方法,为寻找脑血管痉挛的生物标志物、寻找药物治疗靶标和预后评估打下研究基础。     

增塑剂邻苯二甲酸二丁酯致小鼠睾丸组织的病理学改变

背景：目前国内外研究邻苯二甲酸二丁酯对生殖损害研究对象多为大鼠,且不同时间点下小鼠病理组织学未见,以小鼠为移植对象没有明确移植时间。 目的：探讨邻苯二甲酸二丁酯致小鼠睾丸组织病理学改变,并找出其改变最大的时间点,为移植做准备。 方法：妊娠balb/c小鼠20只随机分成3组,分别为正常对照组6只,玉米油对照组6只,DBP组8只。自妊娠12~21 d,分别经口给予邻苯二甲酸二丁酯和玉米油,分别在小鼠出生后4~8周每间隔1周观察仔代雄小鼠睾丸的组织病理学改变,找到变化最大的时间点。 结果与结论：邻苯二甲酸二丁酯组染毒小鼠睾丸出现明显的生理、病理和电镜下的改变。邻苯二甲酸二丁酯可引起雄性仔鼠性分化异常,睾丸生精上皮损害和生精过程障碍,从而对雄性仔鼠生育力产生不利影响,在5,6周小鼠睾丸组织损害最大,可以作为移植变化最大时间进行选择。     

生长相关蛋白-43影响神经细胞分裂方向作用的研究

目的研究生长相关蛋白-43(growth associated protein-43,GAP-43)与G蛋白对神经细胞分裂方向的调控,探讨GAP-43参与神经发生的机制。方法 6只C57BL/6J GAP-43高表达的转基因孕鼠(E13.5 d和E17.5 d的胎鼠均为24只)为实验组,6只野生型孕鼠(E13.5 d和E17.5 d的胎鼠均为24只)为对照组。分别取E13.5 d的3只实验组及对照组胎鼠,脑室区进行免疫荧光染色测定GAP-43的表达位置;再分别取E13.5 d的12只实验组及对照组胎鼠,向脑中加入裂解液分别提取膜蛋白和细胞质蛋白,通过Western blot测定GAP-43的表达位置及表达量;取E17.5 d的3只GAP-43高表达的转基因胎鼠的鼠脑进行GAP-43和G蛋白的免疫荧光共染色,观察二者的共定位情况;取E17.5 d的9只GAP-43高表达的转基因胎鼠的鼠脑进行免疫共沉淀(coimmunoprecipitation,co-IP)检测GAP-43与Gαi间的相互作用。取E13.5 d和E17.5 d的9只实验组胎鼠计数转基因胚胎鼠脑中神经前体细胞(neuro progenitor cell,NPC)中沿水平和垂直不同方向分裂的细胞数量,并与对照组小鼠进行对照。结果 E13.5 d实验组胎鼠的GAP-43蛋白的表达量高于对照组(P0.05);GAP-43特异性表达于细胞膜上;免疫荧光共染色结果表明GAP-43与Gαi共定位于细胞膜上,进一步通过co-IP证明GAP-43和Gαi相互结合;E13.5 d时,转基因组与对照组相比,细胞沿水平、中间和垂直角度分裂的细胞数量差异有显著性(P0.05)。结论 GAP-43可调控神经细胞分裂方向,这可能是GAP-43参与神经发生的机制。本研究为进一步研究GAP-43对卒中后神经损伤修复的作用机制提供基础。     

6-羟基多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型中Peroxiredoxin6表达的研究

目的 应用蛋白质组学技术研究6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)模型中Peroxiredoxin6(Prx6)的表达变化.方法 在建立6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型的基础上,分别提取6-OHDA实验组和对照组孵育24h的细胞总蛋白,应用荧光差异双向凝胶电泳(DIGE)技术获得蛋白点的差异表达信息,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定出差异蛋白质.结果 DIGE分析发现实验组有一个表达明显上调的差异蛋白质点(P<0.01),经质谱分析鉴定确认为Prx6.结论 6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞的帕金森病模型中Prx6表达上调,提示PD中有氧化应激存在,Prx6上调及氧化应激可能与PD的发病机制有关.     

胚胎及出生后大鼠视网膜细胞促红细胞生成素的表达

背景：促红细胞生成素是低氧诱导因子1的下游靶基因,受低氧诱导因子1的调节。 目的：观察大鼠视网膜胚胎期及出生后早期发育过程中促红细胞生成素的时空表达与视网膜发育的关系。 方法：取胚胎12,16,20 d鼠胚及成年Wistar大鼠各5只,处死后摘除眼球,分离视网膜,用免疫组织化学方法、半定量反转录聚合酶联反应检测视网膜促红细胞生成素蛋白及促红细胞生成素 mRNA的表达。 结果与结论：胚胎期大鼠视网膜神经上皮及色素上皮细胞的胞浆及胞核内均有促红细胞生成素阳性表达,表达趋势随胎龄增长而逐渐减弱;成年鼠视网膜促红细胞生成素阳性表达最弱。说明大鼠视网膜胚胎发育过程中促红细胞生成素的表达存在时空上的变化,这种变化可能与大鼠视网膜胚胎期的发育密切相关。     

颈动脉粥样硬化斑块的非标记定量蛋白质组学研究

目的建立颈动脉粥样硬化不稳定斑块和稳定斑块的表达图谱,进行差异蛋白质组学分析,鉴定出差异表达蛋白,寻找对颈动脉粥样硬化不稳定斑块诊断有特异性和敏感性的生物学标志物。方法依据颈动脉B超检查结果初步分为颈动脉不稳定斑块组、颈动脉稳定斑块组。募集经颈部血管超声检查发现颈动脉狭窄,且做颈动脉内膜剥脱术的缺血性卒中患者20例,分为不稳定斑块组10例和稳定斑块组10例。利用SDS-PAGE酶解后反相色谱Orbitrap Fusion进行蛋白质分析,并质谱数据处理,检索软件,产生的质谱原始文件采用MaxQuant软件处理。结果运用蛋白质组学技术鉴定出差异表达蛋白1240个,在不稳定斑块中,表达下调的蛋白有432个,表达上调的有808个。COG分析显示主要与信号转导、脂质转运和代谢、细胞翻译后修饰、细胞骨架、蛋白酶解等方面相关。结论颈动脉粥样硬化不稳定斑块和稳定斑块的表达图谱是有差别的,进行差异蛋白质组学分析,鉴定出差异表达蛋白,为进一步筛选特异性功能相关蛋白和干预靶位奠定了基础。     

蛋白质组学技术筛选破裂颅内动脉瘤的血清标志物

目的探讨用双向凝胶电泳结合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析技术从血清中筛选颅内动脉瘤标志蛋白的可行性。方法分别采集6例破裂颅内动脉瘤患者和健康成人的血清,进行双向凝胶电泳分离血清总蛋白,考马斯亮蓝染色,全自动斑点处理工作站处理差异蛋白质斑点,MALDI-TOF MS分析获取肽质量指纹图谱,对鉴定的差异蛋白质进行分析。结果两组表达差异2倍以上的蛋白质斑点有81个,质谱鉴定出5个差异蛋白质,在颅内动脉瘤血清中均呈上调表达,即α2-巨球蛋白前体、补体3前体、玻璃黏连蛋白前体、缓激肽和载脂蛋白E3。结论蛋白质组学技术平台为大规模水平筛选破裂颅内动脉瘤血清标志物提供了新方法。     

两个可能有所不同或可能相互关联的蛋白质组表达变化谱：维甲酸和佛波酯相继诱导SH-SY5Y细胞分化及多巴胺对已分化SH-SY5Y细胞之损伤

由多巴胺氧化产生的氧化应激和由此引发的蛋白质表达变化能够改变与帕金森病相关的细胞代谢过程。SH-SY5Y细胞经过10 μmol/L维甲酸和80 nmol/L 佛波酯相继诱导各72小时后出现了分化的神经元表现型,SH-SY5Y分化细胞暴露于100 μmol/L多巴胺24小时后出现氧化应激。在本研究中,为了在这个帕金森细胞模型中发现由氧化应激引发的蛋白质表达变化谱,我们通过二维差异胶内电泳和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱的蛋白质组学方法,筛选和鉴定了显著性变化的蛋白质。结果显示,诱导分化作用使6个蛋白质表达显著性地变化（6个蛋白质表达均增加）,毒性暴露作用使14个蛋白质表达显著性地变化（11个蛋白质表达增加,3个蛋白质表达降低）;同时,在SH-SY5Y分化细胞中显著性地增加的微管蛋白alpha1,在SH-SY5Y分化细胞经过毒性暴露作用后显著性地降低,并且被鉴定为泛素化微管蛋白alpha。这提示,SH-SY5Y细胞在诱导分化作用后的蛋白质表达变化谱和SH-SY5Y分化细胞在毒性暴露作用后的蛋白质表达变化谱是不同但相关的。 关键词：SH-SY5Y细胞;维甲酸;佛波酯;多巴胺;氧化应激;蛋白质表达;蛋白质组学分析     

局灶性皮质发育障碍致痫的蛋白质组学研究

目的 寻找皮质发育障碍致痫的疾病相关差异蛋白,以期寻找抗癫痫治疗的新靶点,同时寻找早期十预脑皮质发育障碍新的手段.方法 利用液氮损伤诱导皮质发育障碍,应用比较蛋白质组学方法研究致痫组和对照组皮质蛋白表达图谱差异,并对发现的差异蛋白质进行分析和鉴定.结果皮质发育障碍致痫组筛选到103个差异表达蛋白质斑点,其中64个在致痫组表达上调,39个在致痈组表达下调.有12个蛋白质最终鉴定确认,分别是lissencephaly-lprotein (LIS-1)、synaptotagmin Ⅳ、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、热休克蛋白70(HSP70)、生长相关蛋白-43(GAP-43)、neuronal enolase、tubulin beta chain、谷氨酰胺合成酶、神经元胞浆蛋白、电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)、丙酮酸激酶(PK)、neurofilament light polypeptide.结论 12个差异蛋白鉴定有利于进一步研究皮质发育障碍与癫痫关系,该结果也为运用蛋白质组学方法寻找皮质发育障碍致痫治疗新靶点提供了实验数据.     

Mental illness in England,in Scotland and in Scots living in England

Summary Beginning from the observation that Scots living in England have much higher rates of mental hospital admission than do the English, several hypotheses are proposed to account for this. Much of the excess in rates of mental illness is accounted for by those diagnosed as having alcohol-related disorders and behaviour and personality problems. The results of an examination of offical statistics in the two countries enabled some explanations to be offered. It was found that rates of admissions to mental hospitals are higher in Scotland than in England but not as high as those found among Scots migrants who have a much higher rate of readmission to hospitals than either of the other groups. In fact, if first admissions only are considered the rates of admission in Scotland are not only higher than rates for English natives but also higher than for Scottish migrants. It seems that Scots living in England are somewhat less likely to become mental patients than Scots in Scotland but that once they do achieve this status they are very much more likely to be readmitted on subsequent occasions. It was concluded that there might be two fairly distinct groups of migrants from Scotland to England who have different backgrounds, different reasons for migrating and different psychological characteristics. On the one hand there are stable, economically motivated migrants who move south for definite employment related reasons and who show few psychological symptoms. While on the other hand there is a group of migrants who perhaps have psychological problems and who move more in hope than expectation without definite prospects and who account for the high rates of mental hospital admission found in Scottish migrants.     

Prostacyclin release in the coronary circulation during sustained stimulation in in vitro and in in vivo experimental systems

Prostacyclin release from rat isolated perfused hearts and from dog coronary circulation was studied by measuring immunoreactive 6-keto-PGF1 alpha (6-keto-PGF1a) in heart perfusate and in plasma obtained from the great cardiac vein respectively. Continuous infusion of arachidonic acid at constant concentration in isolated perfused hearts induced an increased prostacyclin release. This release showed a rapid peak within 10 min and a subsequent decrease. Low-flow ischemia induced an increased perfusate concentration of 6-keto-PGF1a but, considering the decreased flow, prostacyclin release was actually reduced. During the whole period of ischemia (60 min) prostacyclin release was constant. In open-chest anesthetized dogs 6-keto-PGF1a concentration in the great cardiac vein was increased after ligation of the left anterior descending coronary artery. A prolonged period of coronary occlusion (4.5 hours) resulted in a progressive rise of prostacyclin release. 6-keto-PGF1a determinations in the femoral vein and in the aorta did not show relevant variations during the observation period.     

癫痫与抑郁关系的研究进展

抑郁是癫痫患者中常见的精神障碍,严重地影响了患者的生活质量。传统的观点认为癫痫患者因为存在着诸多社会学问题易出现抑郁倾向,癫痫和抑郁是单向的联系,但大量的研究已经证明癫痫和抑郁之间存在双向的联系,一种异常状态的存在可能易转化为另一种异常状态的发展。癫痫和抑郁存在着共同的发病机制。本文主要就癫痫和抑郁的双向联系以及抗抑郁药物在癫痫患者中的应用进行阐述。     

Neuroimaging in epilepsy in tropics

Epilepsy is a major public health problem in many tropical countries. Also, some of the tropical diseases are major contributors to the higher prevalence of epilepsy in these countries. The etiologic factors responsible for epilepsy in these countries are quite different from those in the developed world. This article discusses the etiologic factors and neuroimaging of epilepsy in light of the conditions in these tropical countries.