中风前抗轴突生长抑制因子DNA免疫促进脑缺血后神经再生

目的为了澄清中风前抗轴突生长抑制因子DNA免疫对局部脑缺血神经再生的促进作用。方法经腓肠肌注射抗轴突生长抑制因子DNA疫苗免疫动物，每周一次，共6W；血清中检测出相关抗体后，采用永久性阻断大脑中动脉的方法制备左侧局部脑缺血模型，通过立体定向脑内注射生物素化葡聚糖胺（BDA）追踪皮质红核束的新生轴索。结果中风前接受抗轴突生长抑制因子DNA免疫，局部脑缺血后皮质红核束的代偿性新生轴索明显增多。结论中风前抗轴突生长抑制因子DNA免疫可提高永久性局部脑缺血后的神经再生。     

轴突生长抑制因子DNA疫苗对大鼠脑缺血后神经再生的影响

目的研究大鼠轴突生长抑制因子的DNA疫苗（pcDNA3．1（＋）-neurite growth inhibitors，pcDNA—NGIs）对局部脑缺血神经再生的影响。方法采用永久性阻断大脑中动脉血流的方法制备雄性SD大鼠左侧局部脑缺血模型，分别在阻断血流前后经腓肠肌注射pcDNA—NGIs免疫动物，每周一次，共6周；血清中检出特异性抗体6周后，立体定向脑内注射生物素化葡聚糖胺追踪皮质红核投射的新生轴索。结果无论是阻断血流前还是阻断血流后给予pcDNA—NGIs，局部脑缺血后皮质红核投射的代偿性新生轴索都明显增多。结论本研究提示，阻断血流前或阻断血流后给予pcDNA—NGIs均可提高局部脑缺血后的神经再生。     

轴索生长抑制因子DNA疫苗安全有效地防治大鼠缺血性脑中风

目的评估轴索生长抑制因子DNA疫苗(pcDNA3.1(+)-neurite growth inhibitors,pcDNA-NGIs)防治缺血性脑中风的安全性和有效性。方法肌肉注射pcDNA-NGIs后,采用改良实验性自身免疫性脑髓鞘炎记分系统、改良神经病严重程度记分和逃避作业评估神经系统炎症、感觉运动和认知缺陷;采用生物素右旋糖胺追踪皮质红核投射的新生轴索。结果pcDNA-NGIs免疫不会引起神经系统炎症和感觉运动缺陷;阻塞大脑中动脉之前或之后进行pcDNA-NGIs免疫可增加皮质红核投射的新生纤维数(P=0.018)并削弱缺血性脑中风的感觉运动缺陷(P=0.042)。结论pcDNA-NGIs免疫不会使健康大鼠产生神经炎症和神经病症状,但可促进中风大鼠的神经再生和感觉运动功能恢复。     

黄芪注射液对大鼠红核神经元逆行溃变的影响

目的探讨黄芪注射液对大鼠红核神经元逆行溃变的影响。方法将48只SD大鼠随机分为4组:正常组、假手术组、实验组和模型对照组,每组12只。假手术组在脊髓C3、C4之间切开黄韧带。实验组和模型对照组在脊髓C3、C4之间外侧索横断损伤红核脊髓束,随后分别以黄芪注射液和生理盐水进行腹腔注射。4周后,各组取6只大鼠将轴突示踪剂生物素葡聚糖胺(BDA)注入红核进行顺行示踪,检测轴浆顺行运输能力;另外6只大鼠行尼氏染色显示红核神经元形态及数目。结果实验组和模型对照组被BDA标记轴突的相对面积及数目低于正常组或假手术组(均P0.01),实验组被BDA标记轴突的相对面积及数目明显高于模型对照组(均P0.01);实验组和模型对照组存活的红核神经元数目和平均截面积均低于正常组或假手术组(均P0.01),实验组的红核神经元数目和平均截面积均高于模型对照组(均P0.01)。结论黄芪注射液可通过改善轴浆运输能力,提高胞体的存活率,从而对逆行溃变的红核神经元具有保护作用。     

RhoA与神经轴突的生长

成年哺乳动物中枢神经系统（CNS）轴突损伤后很难再生的一个重要原因是损害局部环境中存在一些生长抑制因子，目前发现轴突生长抑制因子Nogo—A，髓鞘相关糖蛋白（MAG）和少突胶质细胞髓鞘糖蛋白（OMGP）均通过相同的受体NgR介导，在p75的参与下，影响细胞内RhoA信号通路抑制神经轴突再生。现将RhoA与神经轴突生长研究进展进行简要综述。     

大鼠Barrington核内脊髓投射神经元直接接受腰骶髓传入的电镜研究

将结合生物素的葡聚糖胺 (BDA)注射到大鼠腰骶髓后 ,在电镜下观察脑桥Barrington核内腰骶髓投射神经元与来自腰骶髓传入投射纤维间的突触联系。与先前的研究相一致 ,注射BDA到腰 6和骶 1节段后 ,光镜下可见Barrington核内出现大量顺行标记的神经末梢和一定数量的逆行标记细胞。电镜下发现标记的轴突末梢和标记的树突之间存在直接的突触连接。结果表明 ,Barrington核直接接受腰骶髓的传入投射 ,提示大鼠脑桥排尿反射的脊髓内上行投射通路中可能存在一条直接通路。     

大鼠Barrington核内脊髓投射神经元直接接受腰骶髓传入的电镜研究

将结合生物素的葡聚糖胺(BDA)注射到大鼠腰骶髓后,在电镜下观察脑桥Barrington核内腰骶髓投射神经元与来自腰骶髓传入投射纤维间的突触联系.与先前的研究相一致,注射BDA到腰6和骶l节段后,光镜下可见Barrington核内出现大量顺行标记的神经末梢和一定数量的逆行标记细胞.电镜下发现标记的轴突末梢和标记的树突之间存在直接的突触连接.结果表明,Barrington核直接接受腰骶髓的传入投射,提示大鼠脑桥排尿反射的脊髓内上行投射通路中可能存在一条直接通路.     

编码轴突生长抑制因子的重组DNA疫苗的免疫原性研究

目的 探讨以前期实验所构建的腺病毒骨架质粒pAdEasy为载体,编码神经损伤后轴突生长抑制因子Nogo-A、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白(OMgp)、腱糖蛋白-R(TN-R)和髓磷脂相关糖蛋白(MAG)的重组DNA疫苗的免疫原性. 方法 16只5周龄Lewis大鼠按随机数字表法分为DNA疫苗注射组(Vaccine组)和空质粒注射组(pAdEasy组).Vaccine组大鼠以DNA疫苗经双侧胫骨肌注射免疫,1次/周,共持续8周.每次进行疫苗注射前采血和分离血清,Dot-blot和ELISA法对血清中抗体进行定性和定量检测. 结果 6周后Vaccine组大鼠血清能与GST-TN-R和GST-OMgp融合蛋白产生较强的免疫反应,点杂交反应较明显;pAdEasy组大鼠血清则不能与GST-TN-R和GST-OMgp融合蛋白产生免疫反应.6周后Vaccine组大鼠血清中抗体效价则可以达到1:100万,并保持稳定的水平. 结论 编码轴突生长抑制因子Nogo-A、OMgp、TN-R和MAG的重组DNA疫苗接种大鼠后能够产生特异性的抗体.说明该重组DNA疫苗具有良好的免疫原性.     

生物素标记葡聚糖胺神经束路示踪见证神经干细胞移植后皮质脊髓书的再生

实验旨在运用生物素标记葡聚糖胺神经束路示踪标记神经干细胞移植治疗脊髓损伤后皮质脊髓束的再生和神经的重新支配状况,结果表明神经干细胞移植治疗胸10脊髓横断损伤大鼠运动功能评分在横断损伤3周后逐渐升高。治疗后12周有部分生物素标记葡聚糖胺阳性标记的皮质脊髓束再生通过脊髓横断损伤部位,电镜检查发现再生的生物素标记葡聚糖胺阳性标记的神经终末与损伤远端神经元形成新的突触联系。说明生物素标记葡聚糖胺神经束路示踪能有效提供脊髓损伤后神经恢复的解剖形态学依据。     

胶质细胞源性神经营养因子缓释微球及NogoA, ChABC缓释微球联合应用损伤脊髓再生的形态学变化*☆

摘要 背景：促进轴突再生的原则是改善抑制再生的环境和提高轴突生长能力,措施主要有轴突生长抑制因子阻滞剂和神经营养因子应用。用可降解微球加载药物是一种在局部提供持续药物释放的方法。 目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子、NogoA、ChABC 缓释微球联合应用促进大鼠损伤脊髓再生病理形态学修复的作用。 方法：建立SD大鼠T10 脊髓完全横断伤模型,分别在损伤局部给予生理盐水、胶质细胞源性神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子缓释微球、NogoA缓释微球、ChABC 缓释微球及3种微球联合治疗,并设立未造模的正常组及假手术组。损伤后10周,每组行四甲基若丹明葡聚糖胺顺行示踪,及神经丝蛋白200、生长相关蛋白43、胶质细胞源性神经营养因子免疫组化检查,并采用免疫组化图像分析系统进行定量分析。 结果与结论：胶质细胞源性神经营养因子、NogoA、ChABC 缓释微球联合能提高脊髓损伤局部神经丝蛋白200、生长相关蛋白43、胶质纤维酸性蛋白的表达水平,显示局部脊髓再生修复加强,其效果优于单用胶质细胞源性神经营养因子缓释微球。提示,胶质细胞源性神经营养因子缓释微球及NogoA,ChABC 缓释微球联合促大鼠损伤脊髓再生修复其效果优于单用胶质细胞源性神经营养因子缓释微球。 关键词：胶质细胞源性神经营养因子;微球;聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物;脊髓损伤;神经再生 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.03.014     

Postischemic administration of basic fibroblast growth factor improves sensorimotor function and reduces infarct size following permanent focal cerebral ischemia in the rat

Basic fibroblast growth factor (bFGF) is a polypeptide with potent trophic and protective effects on the brain. bFGF has been reported to exert neuroprotection against a wide variety of insults, including ischemic neuronal injury. To date, animal models of focal ischemia have not been translated to efficacy in stroke clinically with respect to testing of neuroprotective agents. Because functional outcome is the measurement of efficacy for putative neuroprotective agents in the clinic, we sought to evaluate the functional consequences of bFGF administration in rats subjected to focal ischemia. In this study, we assessed the effects of bFGF on functional outcome as well as infarct size in rats subjected to severe cerebral ischemia by permanent occlusion of the middle cerebral artery (MCAO). Male Sprague-Dawley rats were subjected to permanent MCAO by the intraluminal filament technique. Two hours following occlusion, rats were infused intravenously with either bFGF, at a dose of 150 microg/kg, or vehicle alone. Functional sensorimotor impairment, which was assessed by the accelerating rotarod test, was recorded at baseline and compared to performance assessed at 24 h after MCAO. Permanent occlusion of the MCA caused marked impairment in rotarod performance in both groups. Treatment of rats with bFGF showed a significant 46% improvement in rotarod fall latency when compared with that from the animals treated with vehicle alone. The volume of cortical infarction was significantly reduced by 32% as a function of bFGF treatment. These results suggest that the delayed intravenous administration of bFGF improves sensorimotor function as well as reduces infarct size following permanent focal ischemia in rat.     

Temporary focal ischemia in the mouse: technical aspects and patterns of Fluoro-Jade evident neurodegeneration

Animal models of cerebral infarction are crucial to understanding the mechanisms of neuronal survival following ischemic brain injury and to the development of therapeutic interventions for victims of all types of stroke. Rodents have been used extensively in such research. One rodent model of stroke utilizes either permanent or temporary occlusion of the middle cerebral artery (MCAO) to produce ischemia. Since the development of an endovascular method for this was published in 1989, MCAO has been applied commonly to the rat, and often paired with 2, 3, 5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for stroke volume measurement. Meanwhile, advances in the ability to genetically alter mice have allowed exciting lines of research into ischemia. Because of technical demands and issues with survival, relatively few laboratories have investigated the MCAO method in the mouse. Our present work utilizes a mouse middle cerebral occlusion (MCAO) model of embolic stroke to study neuronal degeneration following temporary focal cerebral ischemia. C57Bl/6J mice were used to examine the exact effects of MCAO using Fluoro-Jade, a marker of neurodegeneration that allows observation of specific brain regions and cells destined to die. A time course of escalating neuronal degeneration from 10 min to 7 days following MCAO was established. Technical aspects of this popular method for transient focal ischemia as it applies to the mouse are discussed.     

Leukocyte-endothelium interactions during permanent focal cerebral ischemia in mice.

The contribution of leukocyte infiltration to brain damage after permanent focal cerebral ischemia and the underlying molecular mechanisms are still unclear. Therefore, the aim of this study was to establish a mouse model for the visualization of leukocytes in the cerebral microcirculation in vivo and to investigate leukocyte-endothelial interaction (LEI) after permanent middle cerebral artery occlusion (MCAO). Sham-operated 129/Sv mice showed physiologic LEI in pial venules as observed by intravital fluorescent microscopy. Permanent focal cerebral ischemia induced a significant increase of LEI predominantly in pial venules. The number of rolling and adherent leukocytes reached 36.5 +/- 13.2/100 microm x min and 22.5 +/- 7.9/100 microm x min, respectively at 120 minutes after MCAO (P = 0.016 vs. control). Of note, rolling and adherent leukocytes were also observed in arterioles of ischemic animals (7.3 +/- 3.0/100 microm x min rolling and 3.0 +/- 3.6/100 microm x min adherent). Capillary density was not different between groups. These results demonstrate that leukocytes accumulate in the brain not only after transient but also after permanent focal cerebral ischemia and may therefore contribute to brain damage after stroke without reperfusion.     

诱生型血红素氧合酶mRNA、诱生型一氧化氮合酶mRNA在脑缺血中的表达

目的观察诱生型血红素氧合酶(HO-1)mRNA、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA在局灶性脑缺血中的表达及其不同作用。方法采用逆转录酶多聚酶链反应(RT-PCR)方法,测定HO-1mRNA、iNOSmRNA在局灶性缺血脑组织中不同时间点的表达变化。结果iNOSmRNA的表达在缺血后2 h出现,24 h达最高峰,以后逐渐下降。HO-1mRNA表达在缺血后2 h即出现,缺血后12 h达最高峰。结论脑缺血的病理生理过程中存在着一氧化氮(NO)及一氧化碳(CO)两种信使系统之间的相互作用。HO-1mRNA及iNOSmRNA的表达上调并具有时相性。缺血后期HO-1mRNA仍然维持在一定的水平,可能具有对抗后期iNOSmRNA增高所产生的NO毒性作用。     

轴突生长抑制因子DNA疫苗对大鼠中枢神经系统的影响

目的 探讨轴突生长抑制因子DNA疫苗（pcDNA-NGIs）免疫是否会对中枢神经系统造成损害。方法 以pcDNA-NGIs免疫成年Sprague-Dawley大鼠,免疫期间进行实验性自动免疫性脑髓鞘炎评分,同时观察实验动物的感觉运动功能和认知行为。结果以pcDNA-NGIs免疫的大鼠未出现实验性自动免疫性脑髓鞘炎症状。复合神经病学评分、粘附纸条清除试验和开放场地试验表明,pcDNA-NGIs免疫不会损害实验动物的感觉运动功能。另外,被动回避试验和主动回避试验证明,pcDNA-NGIs免疫不会引起学习和记忆障碍。结论 pcDNA-NGIs免疫不会损害实验大鼠中枢神经系统。     

鼠脑缺血时氧化还原因子-1蛋白的表达

目的：观察大鼠永久性脑缺血后不同时相脑组织氧化还原因子－1蛋白的表达特性。方法：采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻断模型,以尾壳平面为模板,采用免疫组化方法,观察正常对照组,假手术及缺血1、6、12、24和48h氧化还原因子－1蛋白阳性染色细胞的分布部位及数量。结果：免疫组织化学染色显示,正常对照组、假手术组、左侧大脑半球氧化还原因子－蛋白在细胞核表达,而缺血组,在梗死中心的坏死区无氧化还原因子－1蛋白表达,在半暗带区,氧化还原因子－1蛋白表达随缺血时间的延长而下降,各时间点间差异有显著意义。结论：脑缺血后,半暗带区氧化还原因子－1蛋白免疫活性下降和DNA修复机制的失效,考虑与局灶性脑缺血半暗带区细胞凋亡的发生有关。     

血红素氧合酶-1及血红素氧合酶-2在大鼠局灶性脑缺血中的意义

目的　研究血红素氧合酶 1(HO 1)及血红素氧合酶 2 (HO 2 )在局灶性脑缺血中的作用。方法　采用大鼠大脑中动脉栓塞脑缺血模型 ,对 6 6只大鼠脑缺血后不同时间点进行HO 1、HO 2免疫组化染色及病理学研究 ,并用计算机图像分析技术计算两者表达水平。结果　栓塞后 30min大鼠皮质及海马即有HO 1阳性神经元及胶质细胞的表达 ,且随着时间推移HO 1的表达逐渐增强 ,到栓塞后 12h达峰值 (P <0 0 1) ,以后逐渐下降 ,栓塞后 1周仍有HO 1表达。HO 2在正常大鼠及梗死大鼠脑组织内均有表达。栓塞后不同时间段 ,HO 2阳性神经元的数量无明显变化 (P >0 0 5 ) ,但HO 2表达呈动态变化 ,2 4h时最高 (P <0 0 1) ,以后逐渐下降。结论　脑缺血时脑内HO 1、HO 2表达的不同变化 ,是脑组织对损伤恢复重要的机制之一。HO 1修复受损的神经元和胶质细胞 ,而HO 2在于维护正常细胞的稳定