大鼠在空间学习记忆时脑海马区内星形胶质细胞纤维酸性蛋白的表达

目的:利用水迷宫试验观察大鼠内海马内星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白的表达在空间辨别性学习记忆时的变化。方法:实验于2003-12/2004-07在暨南大学医学院人体解剖学教研室实验室完成。雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、模型5d组和模型15d组,每组10只。采用Morris水迷宫训练,对模型5d组和模型15d组大鼠以定位航行试验建立空间辨别性学习记忆模型,对照组大鼠在无平台的迷宫内自由游泳,2次/d,2min/次,持续5d。各组大鼠停止训练后12h,取脑,冠状连续切片。免疫组织化学S-P法染色以胶质纤维酸性蛋白标记星形胶质细胞。Tiger2000图象分析系统对胶质纤维酸性蛋白的表达进行定量分析。结果:建立了空间辨别性学习记忆模型后,大鼠海马内胶质纤维酸性蛋白的表达模型5d组(CA1区:330.83±36.85;CA3区:333.31±30.37;齿状回区:326.20±36.75)和模型15d组(CA1区:398.33±38.47;CA3区:404.99±48.91;齿状回区:423.55±40.50)高于对照组(CA1区:297.69±27.22;CA3区:296.98±31.13;齿状回区:163.50±33.98),差异有显著性意义(t=2.87～5.37,P均<0.01)。结论:星形胶质细胞参与空间辨别性学习记忆过程并与记忆的进一步巩固有关。     

阿尔茨海默病患者微量元素检测分析

目的 探讨微量元素与阿尔茨海默病(AD)的临床关系,为AD的防治提供依据.方法对深圳市社会福利中心老人颐养院2006年1月至2008年9月收治36例AD患者和46例对照者进行头发的锌、铁、铜、锰、铅5种微量元素及钙元素的检测,对数据进行统计学处理. 结果 AD组患者头发的锌、钙、锰含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 AD病理与锌、钙、锰等微量元素的含量低下有密切关系.     

编码轴突生长抑制因子的重组DNA疫苗的免疫原性研究

目的 探讨以前期实验所构建的腺病毒骨架质粒pAdEasy为载体,编码神经损伤后轴突生长抑制因子Nogo-A、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白(OMgp)、腱糖蛋白-R(TN-R)和髓磷脂相关糖蛋白(MAG)的重组DNA疫苗的免疫原性. 方法 16只5周龄Lewis大鼠按随机数字表法分为DNA疫苗注射组(Vaccine组)和空质粒注射组(pAdEasy组).Vaccine组大鼠以DNA疫苗经双侧胫骨肌注射免疫,1次/周,共持续8周.每次进行疫苗注射前采血和分离血清,Dot-blot和ELISA法对血清中抗体进行定性和定量检测. 结果 6周后Vaccine组大鼠血清能与GST-TN-R和GST-OMgp融合蛋白产生较强的免疫反应,点杂交反应较明显;pAdEasy组大鼠血清则不能与GST-TN-R和GST-OMgp融合蛋白产生免疫反应.6周后Vaccine组大鼠血清中抗体效价则可以达到1:100万,并保持稳定的水平. 结论 编码轴突生长抑制因子Nogo-A、OMgp、TN-R和MAG的重组DNA疫苗接种大鼠后能够产生特异性的抗体.说明该重组DNA疫苗具有良好的免疫原性.     

舌慢反应传入神经终末与三叉神经脊束核的突触联系

目的　研究舌感觉慢反应传入纤维终止于三叉神经脊束核形成的突触类型及各类型突触出现的频率 ,为神经生理学和神经解剖学研究提供参考资料。方法　采用细胞内注射 ,电镜连续超薄切片技术。结果　猫舌感觉传入慢反应纤维投射到三叉神经脊束核形成的突触类型分单纯型、中间型和复杂型三种 ,以复杂型突触出现率最多。形成突触的各组成部分以轴 树及轴 轴突触形式为主 ,未见轴 体突触。结论　复杂型突触和轴 -树及轴 -轴突触是三叉神经脊束核处理感觉信息的形态学基础。     

大鼠在学习记忆时内侧隔核星形胶质细胞GFAP表达的变化

目的观察大鼠在空间辨别性学习时内侧隔核内星形胶质细胞GFAP表达的变化,为星形胶质细胞在学习记忆过程中的作用提供形态学依据。方法30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型5d组和模型10d组。Morris水迷宫训练大鼠建立模型,免疫细胞化学S-P法染色以GFAP标记星形胶质细胞,用体视学方法对星形胶质细胞GFAP的表达进行定量分析。结果大鼠经Morris水迷宫训练5d和15d,即建立了空间辨别性学习记忆模型后,内侧隔核的星形胶质细胞GFAP的表达与对照组相比均有显著的统计学意义(P<0.01)。结论星形胶质细胞参与空间辨别性学习记忆过程。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后bcl-2、bax表达和细胞凋亡

目的观察大鼠大脑中动脉重度栓塞后再灌注动物的脑细胞凋亡及其相关调控基因bcl-2和bax阳性蛋白质表达的变化;方法采用插线法制作大鼠大脑中动脉栓塞后再灌注模型,并观察脑缺血/再注不同时点大鼠脑细胞凋亡(TUMEL法)、凋亡相关调控基因bcl-2、bax(S-P免疫组化法)的阳性表达和脑组织含水量(Hallenbeck法)、脑梗塞体积(Nedergaard法)的变化.结果大鼠大脑中动脉栓塞3h、栓塞3h/再灌注24、48h时,细胞凋亡逐步加重,损伤加重,bcl-2、bax表达增强.     

大鼠在空间辨别性学习记忆时隔—海马ACh能纤维的变化

目的 观察大鼠内侧隔核(MS)和海马CA1、CA3区及齿状回(DG)内乙酰胆碱(ACh)能纤维在空间辨别性学习记忆时的变化。方法 以Morris水迷宫训练大鼠建立模型,用乙酰胆碱酯酶(AChE)的组织化学方法染色,显微镜方格目测计数和Tiger2000图像分析仪分别对AChE阳性纤维的密度和含量进行定量分析。结果 建立了空间辨别性学习记忆模型后,训练15天组大鼠各观察部位AChE阳性纤维密度(MS:102.00±21.68;CA1:108.90±24.28;CA3:100.27±22.43;DG:100.71±27.83)和含量(MS:0.1307±0.0264;CA1:0.1617±0.0214;CA3:0.1537±0.0186;DG:0.1695±0.0108)比对照组各部位内AChE阳性纤维密度(MS:79.53±20.47;CA1:73.17±18.57;CA3:75.48±22.92;DG:76.11±24.01)和含量(MS:0.1124±0.0221;CA1:0.1385±0.0232;CA3:0.1365±0.0191;DG:0.1421±0.0260)均有显著增加(P均<0.05)。结论ACh参与空间辨别性学习记忆过程并与记忆的进一步巩固有关。     

骨髓基质细胞及血管内皮祖细胞移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复的影响

目的 观察经静脉移植骨髓基质细胞(BMSCs)及血管内皮祖细胞(EPCs)后,缺血性脑损伤大鼠神经系统功能恢复情况.方法 40只健康成年Wistar大鼠按随机数字表法分为模型组、移植BMSCs组、移植EPCS组、移植BMSCs/EPCs组,每组10只.线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.造模后24h取1 mLBMSCs、EPCs、BMSCs/EPCs细胞悬液(3×10~6个/mL)分别经尾静脉注射移植入后3组大鼠.模型组大鼠注射等量生理盐水.移植前、移植后1、7、14、28 d,采用旋转试验、躯体感觉试验、神经系统功能评分(NSS)评估各组大鼠神经功能的恢复情况.移植后28d,免疫荧光染色检测各组大鼠缺血脑组织的微血管密度(MVD).结果 移植后第7天,旋转试验显示移植BMSCs/EPCs组大鼠旋转时间长于其他3组,躯体感觉试验和NSS评分分别显示移植BMSCs/EPCs组大鼠移物时间和NSS评分低于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05);移植后28 d,免疫荧光染色检测结果显示缺血脑组织MVD明显高于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 静脉BMSCs/EPCS联合移植可增强缺血性脑损伤功能的恢复.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后bc1-2、bax表达和细胞凋亡

目的　观察大鼠大脑中动脉重度栓塞后再灌注动物的脑细胞凋亡及其相关调控基因bc1 2和bax阳性蛋白质表达的变化 ;方法　采用插线法制作大鼠大脑中动脉栓塞后再灌注模型 ,并观察脑缺血 /再注不同时点大鼠脑细胞凋亡 (TUMEL法 )、凋亡相关调控基因bc1 2、bax(S P免疫组化法 )的阳性表达和脑组织含水量 (Hallenbeck法 )、脑梗塞体积 (Nedergaard法 )的变化。结果　大鼠大脑中动脉栓塞 3h、栓塞 3h/再灌注 2 4、4 8h时 ,细胞凋亡逐步加重 ,损伤加重 ,bc1 2、bax表达增强     

pDsRed2-N1-SDF-1α真核表达载体的构建及在小鼠骨髓间充质干细胞中的表达

目的构建pDsRed2-N1-SDF-1α真核表达载体并转染骨髓间充质干细胞(MSCs),观察其在MSCs内的表达。方法设计并合成SDF-1α基因引物,用RT-PCR法从小鼠平滑肌细胞中扩增出带有XhoI与EcoRI酶切位点的SDF-1α基因片段,将SDF-1α基因片段克隆到真核表达载体pDsRed2-N1上,酶切和测序鉴定。培养小鼠MSCs并Vimentin蛋白免疫荧光鉴定。通过脂质体将pDsRed2-N1-SDF-1α转染入小鼠MSCs。免疫荧光检测转染后的MSCs表达SDF-1α蛋白的情况。结果扩增出的基因片断大小与基因文库中已知的SDF-1α序列大小完全相符,酶切也得到目的基因片断,测序结果显示与已知的SDF-1α序列相同,成功构建pDsRed2-N1-SDF-1α真核表达载体。培养的细胞经Vimentin蛋白免疫荧光检测为阳性,pDsRed2-N1-SDF-1α表达载体转染到MSCs,24h后细胞免疫荧光检测可见SDF-1α融合蛋白表达。结论pDsRed2-N1-SDF-1α真核表达载体能够在小鼠MSCs中表达SDF-1α蛋白。