血脑屏障微流控芯片模型的构建及其中药活性成分跨膜转运研究

构建血脑屏障微流控芯片模型,应用于中药活性成分跨血脑屏障渗透性研究。该芯片模型由垂直交叉的两层通道及单层聚碳酸酯膜组成,采用原代人脑微血管内皮细胞,并能模拟血管剪切应力。通过活/死细胞染色和免疫荧光染色观察芯片上细胞生长状态,细胞生长状态良好,且在动态培养下细胞间黏附连接蛋白结构完整;考察该芯片模型对荧光示踪剂和3种模型药物的渗透性和P-糖蛋白(P-gp)的表达情况,结果显示荧光示踪剂和模型药物的渗透性与文献报道一致,芯片上P-gp表达和功能正常,表明该血脑屏障芯片模型具有完整的结构和功能。将构建成功的芯片模型应用于6种中药活性成分跨血脑屏障渗透性评价,采用HPLC-MS/MS法测定跨膜转运液中的药物浓度,获得各成分的P_app结果。延胡索甲素P_app为(4.51±1.90)×10^-7cm·s^-1、延胡索乙素P_app为(9.10±6.59)×10^-7cm·s^-1、欧前胡素P_app为(9.38±2.53)×10     

白术内酯类在人源Caco-2细胞单层模型中的肠吸收研究(英文)

采用人源Caco-2细胞单层模型,研究了倍半萜内酯类的白术内酯Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的肠渗透性。研究了它们从顶端到基底侧以及从基底侧到顶端的双向渗透性。HPLC法测定其浓度。白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的P_app值皆在10^-5cm/s水平,表明其具有高肠渗透率和良好吸收的特性。它们的双向转运具有时间和浓度依赖性,提示其吸收转运的主要机制为被动扩散。此外,白术内酯Ⅰ的吸收转运可能部分存在主动转运机制。     

肠道转运Caco-2细胞单层模型的建立及验证评价

目的建立Caco-2细胞单层模型用于药物转运研究。方法按照常规的细胞培养方法,将Caco-2细胞接种到Millicell小室内(接种密度1×10⁶个·mL^-1),培养21 d。定期用细胞电位仪监测跨上皮细胞电阻（TEER）,评价细胞单层的紧密性与完整性;通过荧光黄转运实验检查Caco-2细胞单层模型细胞旁路转运通透性;通过普萘洛尔转运实验验证Caco-2细胞单层模型跨细胞被动转运通透性。结果培养21 d后,TEER值达到（981±123）Ω·cm²,荧光黄和普萘洛尔的表观通透系数分别为0.33×10及16.7×10^-6cm·s^-1。结论本研究建立的Caco-2细胞单层模型紧密、完整,具有良好通透性,可用于药物转运研究。     

金丝桃苷在Caco-2细胞模型中的跨膜转运方式

目的研究金丝桃苷在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法用Caco-2细胞单层模型研究金丝桃苷的双向转运,考察pn、药物质量浓度、方向、温度、抑制剂对金丝桃苷细胞转运的影响。采用HPLC法检测金丝桃苷的含量,计算其表观渗透系数(P_app)。结果金丝桃苷的细胞转运P_app。具有pH依赖性。金丝桃苷肠腔（A）侧→基底（B）侧P_app>B→A,并且随着金丝桃苷质量浓度的增大而减小,具有浓度依赖性。P-gp抑制剂维拉帕米增加金丝桃苷的细胞正向转运P_app,降低了其逆向转运P_app。金丝桃苷较高浓度时,MRPl抑制剂吲哚美辛和ATP抑制剂叠氮化钠显著降低了金丝桃苷的转运量。结论金丝桃苷在Caco-2细胞单层模型中的转运具有pH依赖性和浓度依赖性,是以主动转运为主,被动扩散为辅,同时涉及外排蛋白作用的转运方式。     

去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004大鼠在体肠吸收动力学研究

目的考察去氢骆驼蓬碱衍生物DH-004大鼠在体肠吸收动力学特征,探讨其可能的吸收机制。方法建立UPLC法测定灌流液中DH-004浓度,用大鼠在体单向肠灌流模型考察不同质量浓度的DH-004在不同肠段的吸收特征。结果 DH-004在全肠段均有吸收。20.0μg·mL^-1 DH-004在十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收速率常数(K_a)分别为(11.66±3.84)×10^-2,(10.85±2.65)×10^-2,(7.48±1.70)×10^-2和(4.75±1.14)×10^-2 min,药物表观渗透系数(P_app)分别为(1.47±0.33)×10^-2,(1.55±0.20)×10^-2,(1.25±0.10)×10^-2和(0.98±0.22)×10^-2 cm·min^-1。DH-004在十二指肠段与空肠段的K_a均明显大于其在回肠和结肠的K_a(均P<0.05)。结论 DH-004在大鼠小肠全段有不同程度地吸收,十二指肠和空肠可能为其主要吸收部位。     

用HPLC-MS/MS法同时测定患者血浆中吉非替尼、厄洛替尼、尼洛替尼和伊马替尼的浓度

目的 建立同时测定吉非替尼、厄洛替尼、尼洛替尼和伊马替尼血药浓度的高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)方法。方法 用乙腈沉淀蛋白法处理血浆样品,用Diamonsil C18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 3.5μm)进行色谱分离,流动相为0.1%甲酸水(A)—0.1%甲酸乙腈(B);梯度洗脱,流速为0.7 mL·min^-1,柱温40℃,进样量3μL。以安罗替尼为内标,用电喷雾电离源,采用正电离模式,以多反应监测的方式进行扫描。考察该方法的专属性、标准曲线、定量下限、精密度、准确度、回收率、基质效应和稳定性。测定20例慢性粒细胞白血病(CML)患者伊马替尼和厄洛替尼的谷浓度及3例非小细胞肺癌(NSCLC)患者吉非替尼和厄洛替尼的谷浓度。结果 4种药物的标准曲线分别为吉非替尼：y=2.536×10^-3x+9.372×10^-3(线性范围20～2 000 ng·mL^-1,R²=0.996 6),厄洛替尼：y=3.573×10^-3x+7.406×10<...     

矢车菊黄素在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究

目的 研究矢车菊黄素（centaureidin）在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制。方法 以HPLC分析矢车菊黄素浓度,用Caco-2 细胞单层模型评价吸收时间、药物浓度、介质pH值、抑制剂等对矢车菊黄素吸收的影响,研究矢车菊黄素的吸收机制,计算表观渗透系数（apparent permeability coefficient, Papp）。结果 药物的吸收与药物浓度和吸收时间正相关;弱酸性介质条件下有利于药物的吸收;2,4-二硝基酚（DNP）对药物吸收无影响,但异博定（verapamil）可增加药物的吸收;从肠腔侧到基底侧的转运小于基底侧到肠腔侧的转运。结论 矢车菊黄素在Caco-2细胞模型中的吸收主要是被动转运,受P-糖蛋白的外排作用。     

牡荆素鼠李糖苷在Caco-2细胞模型中的跨膜转运研究

目的 研究牡荆素鼠李糖苷(RHV)在Caco-2细胞模型中的跨膜转运机理.方法 采用Caco-2细胞模型,考察不同浓度、不同吸收促进剂(十二烷基硫酸钠、牛胆盐)对RHV跨膜转运的影响.结果 RHV从肠腔侧到基底侧的转运与从基底侧到肠腔侧的转运相似,前者表观渗透系数随浓度的增大逐渐降低,但差异不具有统计学意义(P>0.05).与对照组比较,加入吸收促进剂后,其表观渗透系数增大.结论 RHV在Caco-2细胞模型中主要表现为被动转运,十二烷基硫酸钠和牛胆盐都能增大RHV从肠腔侧到基底膜侧的转运量.     

白花前胡丁素在人结肠腺癌细胞系细胞模型上的吸收转运特征研究

目的研究白花前胡丁素在人结肠腺癌细胞系(Caco-2)细胞模型上的转运特征。方法利用Caco-2单层细胞模型研究白花前胡丁素的双向转运,采用高效液相色谱(HPLC)法测定药物的转运量,计算其表观渗透系数(Papp),并考察时间和药物质量浓度对其转运的影响。结果白花前胡丁素在Caco-2细胞模型上的双向转运量在120min内均随时间与浓度的增加而增大,其从肠腔侧(AP)向基底侧(BL)和从BL向AP的Papp介于2.0×10-6cm/s～5.0×10-6cm/s,Papp(BL-AP)/Papp(AP-BL)<1.5。结论白花前胡丁素为吸收较差的药物,主要以被动扩散方式经肠道吸收。     

隐丹参酮在Caco-2细胞模型中的吸收机制

目的 研究隐丹参酮在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法 用Caco-2细胞单层模型研究隐丹参酮的双向转运，并考察时间、药物浓度及抑制剂对隐丹参酮吸收的影响。用高效液相色谱法检测药物浓度，计算其表观渗透系数。结果 隐丹参酮在Caco-2细胞模型中，从单层细胞层顶端到基底端的转运大于基底端到顶端的转运，随时间和浓度的增加，药物吸收呈饱和趋势，且可被其结构类似物丹参酮Ⅱ。竞争性抑制。结论 隐丹参酮在Caco-2细胞模型中的吸收主要是由载体介导的主动转运，且该主动转运的载体位于Caco-2细胞单层的顶端。     

芙朴感冒颗粒中橙皮苷小肠吸收特征研究

目的 研究芙朴感冒颗粒中的橙皮苷跨膜吸收特征及其影响因素.方法 使用Caco-2细胞模型考察橙皮苷的小肠吸收,研究不同药物浓度、pH值、温度和抑制剂对橙皮苷在transwell细胞培养板中从顶膜(AP)到基底(BL)的双向渗透吸收的影响.采用药动学实验研究芙朴感冒颗粒在体内对橙皮苷吸收的影响.结果 橙皮苷以3种测试浓度...     

坤复康片中芍药内酯苷在Caco-2细胞模型中的吸收特征研究

目的 研究坤复康片中的芍药内酯苷在Caco-2细胞模型中的跨膜吸收特征,探讨人小肠对芍药内酯苷的吸收和转运.方法 研究了不同药物浓度、pH值、温度和抑制剂对芍药内酯苷在Transwell细胞培养板中从顶膜(apical,AP)到基底(basolateral,BL)的双向渗透吸收的影响.结果 芍药内酯苷以3种测试浓度给药...     

大蒜素在Caco-2细胞模型转运特征的研究

目的研究大蒜素在Caco-2细胞的转运特征。方法应用Caco-2细胞模型考察转运时间、药物浓度时大蒜素吸收的影响,采用高效液相色谱法测定大蒜素浓度,计算其表观渗透系（Papp）。结果随着浓度增加和时间延长,大蒜素累积通透量逐渐增加;大蒜素的Papp在2个方向比值[Papp（BL→AP）,Papp（AP→BL）]为1．80,存在方向性差异。结论大蒜素的转运属于双向转运,且吸收良好。     

HPLC考察白头翁汤4种标志成分在Caco-2细胞模型的转运特征

目的研究白头翁汤中标志成分秦皮甲素、秦皮乙素、小檗碱、白头翁皂苷B4在Caco-2细胞模型的转运特征及其机制。方法通过HPLC建立白头翁汤指纹图谱以及4种标志成分的同时定量分析方法,随后以Caco-2细胞模型和p-gP抑制剂维拉帕米考察复方标志成分的双向转运机制,通过HPLC检测药物浓度计算其表观渗透系数（Papp）。结果①秦皮甲素在顶端（AP）和底端（BL）双向转运大致相同,为被动转运机制;②秦皮乙素在AP侧转运大于BL侧,维拉帕米可抑制AP侧向BL侧转运,为主动转运机制;③小檗碱在AP侧和BL侧转运大致相同,对于BL-AP侧外排Papp值显著低于单体的文献报道值,在复方中可能存在化学成分抑制小檗碱BL侧向AP侧外流载体,促使外流减少,增加小檗碱的摄取;④白头翁皂苷B4紫外响应弱,未能检测出。结论白头翁汤中秦皮甲素、秦皮乙素、小檗碱可通过HPLC考察其在Caco-2细胞模型的转运特征。     

Absorption of CH330331, a novel 4-anilinoquinazoline inhibitor of epidermal growth factor receptor tyrosine kinase: comparative studies using in vitro, in situ and in vivo models

CH330331 is a prototype of a new class of synthetic small molecule tyrosine kinase inhibitors (TKIs). In vitro Caco-2 cell monolayers, the in situ single-pass rat intestinal perfusion (SPIP) technique with mesenteric vein cannulated and an in vivo animal model were employed to investigate its permeability and transepithelial transport mechanisms. The Caco-2 model showed that the transport of CH330331 across the monolayers from the apical (AP) to basolateral (BL) side was 6- to 10-fold higher than that from the BL to AP side. The apparent permeability coefficient (P(app) ) values of CH330331 at 5-20?μg/ml from the AP to BL and from BL to AP side were 5.30-2.21 × 10(-6) cm/s, with a decrease in P(app) values from the AP to BL side at increased CH330331 concentrations. In the perfused rat intestinal model, a concentration dependent change in permeability was detected where P(blood) at 5?μg/ml (1.66 ± 0.69 × 10(-6) cm/s) and 10?μg/ml (1.80 ± 0.45 × 10(-6) cm/s) was significantly different from P(blood) at 20?μg/ml (0.98 ± 0.31 × 10(-6) cm/s, p<0.05). Some inhibitors could also change the transepithelial transport of CH330331. Moreover, the in vivo study showed that the oral bioavailability of CH330331 was 82.7% in the rat. All the results confirmed that the transepithelial transport of CH330331 was rapid and saturable, which might involve an active mechanism. The oral bioavailability of CH330331 was relatively high in vivo.     

人参皂苷Rb_3在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征研究

目的:研究人参皂苷Rb3在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。方法:人参皂苷Rb3细胞样品经高速离心后取上清液,以乙腈-1mmo·lL-1甲酸铵水溶液(34∶66)为流动相,以人参皂苷Rg2为内标,采用电喷雾离子源(ESI),在负离子条件下以多重离子反应监测模式(MRM)检测。检测离子:m/z1077.7→m/z783.4(人参皂苷Rb3),m/z783.6→m/z475.1(人参皂苷Rg2)。测定透过Caco-2单细胞层的人参皂苷Rb3浓度并计算其表观渗透系数(Papp)。结果:人参皂苷Rb3的线性范围为50～2000ng·mL-1,日间、日内精密度均小于15%。Papp从基顶侧(AP)到基底侧(BL)为3.22×10-6cm·s-1,从BL侧到AP侧为6.0×10-6cm·s-1,其P(BL-AP)/P(AP-BL)比值为1.86。结论:本方法简单、灵敏度高,可用于研究人参皂苷Rb3在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。     

左旋紫草素肠道转运及Caco-2细胞转运特性

目的研究左旋紫草素肠道及Caco-2细胞转运特征及其机制。方法应用翻转肠囊法和Caco-2细胞模型考察时间、浓度对左旋紫草素转运吸收特性的影响,应用P-糖蛋白抑制剂维拉帕米对左旋紫草素转运吸收机制进行研究,采用HPLC法测定左旋紫草素的浓度,计算其表观渗透系数(Papp)。结果在Caco-2细胞模型,随浓度增加和时间延长,左旋紫草素的累积转运量逐渐增加;加用维拉帕米后,使AP侧到BL侧的表观渗透系数Papp(AP→BL)显著增加,而从BL侧到AP侧的表观渗透系数Papp(BL→AP)显著降低。在翻转肠囊模型,100μmol·L-1左旋紫草素中加入维拉帕米后Papp显著增加。结论左旋紫草素的转运存在被动转运和主动转运2种形式,P糖蛋白参与主动转运过程;该药经肠道吸收中等,加入维拉帕米可能促进吸收。     

流式细胞仪筛选P-糖蛋白的底物或抑制剂

目的以Caco-2细胞模型筛选妥舒沙星、斯帕沙星、辛伐他汀是否为P-糖蛋白(P-gp)的底物。方法以Caco-2细胞为模型,以酮康唑、兰索拉唑为对照,用流式细胞仪测定妥舒沙星、斯帕沙星、辛伐他汀对Caco-2细胞表面的P-gp转运罗丹明-123的影响,经筛选得到可能为P-gp底物的药物后,再用药物转运实验,验证其是否为P-gp的底物。结果妥舒沙星和斯帕沙星存在明显抑制P-gp向细胞外转运罗丹明-123的作用;在加入P-gp抑制剂(酮康唑)后,妥舒沙星的PappBL→AP/PappAP→BL由10.03±0.47降至0.93±0.19,斯帕沙星PappBL→AP/PappAP→BL由2.54±0.12降至1.02±0.04。结论流式细胞仪联用罗丹明-123可简单有效地从多种药物中筛选出可能是P-gp底物的药物(如妥舒沙星和斯帕沙星)及转运机制等。