细胞间粘附分子-1反义DNA体外对内皮细胞细胞间粘附分子-1表达的抑制作用

目的：研究细胞间粘附分子-1（ICAM-1）反义DNA对内皮细胞ICAM-1表达的抑制作用。方法：构建ICAM-1反义DNA载体,用脂质体转染内皮细胞,TNFα刺激后,流式细胞术检测转染细胞表面ICAM-1蛋白的表达。结果：酶切鉴定证明,1.4kb的ICAM-1DNA片段反向连接到pcDNA3表达载体;流式细胞术检测显示,正常细胞加TNFα刺激后,表面ICAM-1表达明显升高（P<0.01）,转染细胞加TNFα刺激后表面ICAM-1表达无明显升高(P>0.05),转染细胞表面ICAM-1表达低于正常细胞（P<0.05）。结论：ICAM-1反义DNA体外可抑制细胞ICAM-1表达。     

TNF-α刺激A549细胞后细胞间粘附分子-1的表达变化

目的观察TNF-α刺激下上皮细胞样细胞株A549细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的mRNA表达变化，探讨在炎症过程中，A549细胞中ICAM-1的mRNA水平的表达变化。方法培养A549细胞，利用一定浓度的TNF-α刺激后，RT-PCR方法检测不同时间点上A549细胞的ICAM-1的表达变化。结果A549细胞在TNF-α刺激下，ICAM-1mRNA表达水平逐渐升高，6h时表达开始大量升高，12h时达到较高水平，并稳定于一定水平。结论TNF-α刺激后可引起A549细胞ICAM-1的基因表达水平上调，并呈现出一定的时间依赖性。     

细胞间粘附分子表达调控的实验研究

目的 探讨血管内皮细胞激活表达细胞间粘附分子(ICAM-1),及核因子-κB(NF-κB)对其表达调控的作用.方法 通过建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外培养,观察TNFα刺激HUVEC后,采用凝胶电泳迁移率改变分析法检测NF-κB活化强度和应用免疫组化方法检测HUVEC表达ICAM-1.结果 HUVEC受TNFα刺激后2～12 h NF-κB的活性显著增高(P＜0.01),峰值在刺激后6 h;同时ICAM-1表达显著增强(P＜0.01),并于12 h达峰值,NF-κB活化与ICAM-1表达之间有峰值水平和时间顺序的正相关.且NF-κB可与含ICAM-1基因的κB序列的寡聚核苷酸系列特异结合;竞争抑制实验进一步证实了NF-κB与标记的κB系列结合的特异性;超迁移试验表明,与κB系列结合的NF-κB是由P65亚基构成的同源二聚体.结论 TNFα可有效地激活HUVEC高效表达ICAM-1,其表达受P65亚基同源二聚体构成的NF-κB调控.     

曲格列酮对炎症诱导系膜细胞细胞间粘附分子1表达的影响

目的:探讨曲格列酮对肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子1(Intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的影响及其可能机制.方法:将培养的系膜细胞分为空白对照组,TNF-α组,曲格列酮对照组,不同浓度曲格列酮干预组,采用MTT法测系膜细胞增殖,RT-PCR检测ICAM-lmRNA的表达,ELISA检测培养上清中ICAM-1蛋白浓度,免疫组化法检测NF-K B的表达.结果:曲格列酮可抑制系膜细胞的增殖,TNF-α组系膜细胞ICAM-lmRNA和蛋白的表达均比空白对照组增加(P相似文献   

肾小球系膜细胞的JNK/SAPK活性及其对ICAM-1表达的调控研究

目的　检测体外培养的系膜增生性肾小球肾炎 (MSPGN)肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK活性 ,并探讨其对细胞间粘附分子 1(ICAM- 1)的调控作用。方法　选取 6例正常人和 7例 MSPGN患者的肾组织 ,分别采用免疫沉淀和免疫印迹法检测体外培养的肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK活性 ,RT- PCR检测 ICAM- 1m RNA表达 ,流式细胞仪检测细胞表面 ICAM- 1平均荧光强度。结果　在自发培养条件下 ,与正常对照组相比 ,MSPGN组肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK明显增高 (P<0 .0 5 )。在 TNFα诱导下 ,两组肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK活性均有增加 ,但 MSPGN组仍高于正常对照组 (P<0 .0 5 )。经 TNFα诱导后 ,随着 JNK/ SAPK活性增强 ,ICAM- 1m RNA及其平均荧光强度也均增加 (P<0 .0 5 )。经蛋白激酶抑制剂 DMAP阻断后 ,随着 JNK/ SAPK活性下降 ,ICAM- 1m RNA及其平均荧光强度亦下降 (P<0 .0 1)。 MSPGN的 JNK/ SAPK活性与 ICAM- 1m RNA表达和ICAM- 1平均荧光强度呈正相关关系 (r=0 .6 94,P<0 .0 1)。结论　 MSPGN的肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK存在异常活化 ,这种异常活化可能介导了 ICAM- 1的过度表达。     

小剂量茶碱对大鼠气道平滑肌细胞表达NF-κB与ICAM-1的影响

目的：观察小剂量茶碱对培养的大鼠气道平滑肌细胞表达核因子kB（NF-kB）与细胞间黏附分子1（ICAM-1）的影响，探讨小剂量茶碱在气道发挥抗炎作用的可能机制。方法：体外培养正常大鼠鼠婴的气道平滑肌细胞，将培养出的细胞随机分为3组：空白对照组、肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激组、茶碱干预组。采用免疫组织化学SP法检测经TNF—α刺激的大鼠的气道平滑肌细胞中加入不同浓度的茶碱共同培养4h，以及加入同一浓度茶碱共同培养不同时间，NF-kB活性和ICAM-1表达的变化。结果：TNF-α刺激组与空白对照组的NF—kB活性和ICAM-1表达相比较，差异均有显著性（P〈0．05）。经TNF-α刺激的大鼠的气道平滑肌细胞中加入5，10，15mg／L的茶碱共同培养4h，NF-kB活性和ICAM-1表达均有所下降。与TNF-α刺激组相比，5mg／L组无统计学差异（P〉0．05），余两组差异均有显著性（P〈0．05）。且茶碱干预组内两两比较，差异均有显著性（P〈0．05）。经TNF-α刺激的大鼠的气道平滑肌细胞中加入10mg／L茶碱共同培养2，4，24h。与TNF—α刺激组相比，茶碱处理组的差异均有显著性（P〈0．05）。但茶碱处理组内不同处理时间两两比较，差异无显著性（P〉0．05）。结论：茶碱可能通过抑制气道平滑肌细胞NF—kB活性和ICAM-1的表达，进而减少炎症细胞在气道的浸润。     

姜黄素对TNF—α诱导人脐静脉内皮细胞产生NO及表达ICAM-1的影响

目的探讨姜黄素对TNF—α诱导人脐静脉内皮细胞产生NO以及表达ICAM-1的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用10ng／mLTNF—α刺激后,再加入（5～40）μg／mL姜黄素共同孵育lh,采用MTT和ELISA法检测姜黄素对内皮细胞的增殖以及N0和ICAM-1的表达。结果（5～40）μg／mL姜黄素处理HUVEC细胞后,能明显抑制ICAM-1的表达,并增加NO的产生,呈剂量依赖性。结论姜黄素通过抑制内皮细胞ICAM-1的表达,促进NO的分泌,从而发挥内皮细胞保护作用以及抗动脉粥样硬化。     

α-硫辛酸抑制高糖诱导的系膜细胞增殖及细胞间黏附分子1的表达

目的:探讨α-硫辛酸对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响.方法:体外条件下采用正常糖浓度(5.6 mmol/L,NG)、高糖浓度(25 mmol/L,HG)及HG 不同浓度α-硫辛酸(50、100、200、300 μmol/L)分别与大鼠系膜细胞共同培养不同时间(12、24、48 h).MTT法测定系膜细胞增殖;RT-PCR法检测细胞ICAM-1 mRNA的表达;ELISA法测定细胞培养上清ICAM-1蛋白的浓度. 结果:50～300 μmol/L的α-硫辛酸可抑制系膜细胞增殖.高糖刺激24 h时, 200 μmol/L的α-硫辛酸干预组ICAM-1的蛋白浓度[(288.4±23.4) ng/ml]明显低于HG组[(542.3±35.6) ng/ml,P<0.01].100 μmol/L及200 μmol/L的α-硫辛酸均可下调高糖诱导的ICAM-1 mRNA的表达.结论:一定浓度的α-硫辛酸可抑制高糖诱导的系膜细胞增殖,并可降低ICAM-1蛋白和mRNA的表达.     

丹参单体对TNF-α诱导大鼠动脉平滑肌细胞NF-Κb和ICAM-1的影响

目的观察丹酚酸B和丹参酮ⅡA对肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)核因子κB(NF-κB)和细胞间黏附分子(ICAM-1)表达的影响,探讨丹参单体抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法体外培养大鼠主动脉VSMC;RT-PCR法和免疫细胞化学法检测VSMCICAM-1mRNA和ICAM-1蛋白的表达;细胞ELISA和免疫细胞化学法检测NF-κB的表达。结果TNF-α上调VSMCICAM-1mRNA和ICAM-1蛋白的表达,提高NF-κB水平(P<0.01)。两种丹参单体都抑制上述因子的表达,以丹酚酸B效果更佳。结论丹参单体抗AS的机制之一是抑制炎症相关因子的表达,丹酚酸B抗炎效果优于丹参酮ⅡA。     

核转录因子NFAT5对LPS致伤小鼠肾集合管细胞iMCD3的影响

目的 研究核转录因子激活T细胞核因子(NFAT5)在脓毒症并发急性肾损害调节炎症瀑布效应的作用.方法 体外培养小鼠肾集合管细胞iMCD3,用LPS(10 ng/ml)刺激细胞,同时加入 NFAT5 siRNA,12 h 后,qRT-PCR 和 ELISA检测炎症因子TNFα和MCP-1的基因水平和蛋白水平,Western blot检测细胞核内NFAT5蛋白表达水平,并用染色质免疫共沉淀(ChIP)分别检测NFAT5和TNFα及MCP-1启动子片段结合的富集倍数.结果 LPS(10ng/ml)刺激肾集合管细胞导致炎症因子TNFα和MCP-1的转录合成显著升高(P＜0.05),利用 siRNA 沉默 NFAT5后,TNFα 和 MCP-1的转录及合成均下降.虽然使用Western blot未能检测到LPS刺激iMCD3其核内NFAT5蛋白表达水平增加,但是使用ChIP探测到NFAT5可以分别与TNFα和MCP-1启动子片段结合,开启炎症因子转录及蛋白合成.结论 核转录因子NFAT5参与调节脓毒症并发肾损害的炎症瀑布效应,通过直接结合肾小管细胞中炎症因子TNFα和MCP-1的启动子发挥独特作用.