丙泊酚激活线粒体凋亡通路诱导乳头状甲状腺癌TPC 1细胞凋亡和生长阻滞

【摘要】目的 探讨丙泊酚（PPF）通过线粒体凋亡通路对乳头状甲状腺癌TPC 1细胞凋亡和生长的影响。方法 分别采用0、12.5、25、50 μM丙泊酚处理TPC 1细胞,将细胞随机分为PPF 0 μM组、PPF 12.5 μM组、PPF 25 μM组和PPF 50 μM组进行后续实验。BrdU染色检测细胞增殖;克隆形成法检测细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡;流式分选检测线粒体膜电位;蛋白免疫印迹检测Ki67、PCNA、Bcl 2、Bax、Caspase 3、Caspase 9、c Myc蛋白表达水平;试剂盒检测SOD、MDA、GSH含量。结果 与PPF 0μM组相比较,PPF 25 μM组和PDF 50 μM组BrdU阳性细胞数显著降低（P＜005）,克隆形成率显著降低（P＜005）,Ki67、PCNA蛋白水平显著降低（P＜005）,细胞凋亡率显著升高（P＜005）,细胞线粒体膜电位明显降低,Bax/Bcl 2、cleaved caspase 3/Caspase 3、cleaved caspase 9/Caspase 9比值显著升高（P＜005）,c Myc蛋白水平显著降低（P＜005）,SOD含量显著降低（P＜005）,MDA、GSH含量显著升高（P＜005）。结论 丙泊酚激活线粒体凋亡通路诱导乳头状甲状腺癌TPC 1细胞凋亡和生长阻滞。     

三氧化二砷诱导肿瘤细胞凋亡与Caspase3及Bcl-2蛋白家族的关系

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法：以Namalwa,SGC7901和Bcap37细胞为体外模型，通过流式细胞仪检测亚G1期（sub－G1）细胞含量和细胞膜磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine,PS)外翻量鉴定细胞凋亡；流式细胞仪检测Bcl-2和Bax蛋白表达及细胞线粒体跨膜电位（△φm）；比色法8测定半胱氨酸酶3（Caspase3）活性。结果：As2O3诱导肿瘤细胞凋亡与Bax和Bcl-2蛋白表达及Caspase3活性有密切关系。结论：As2O3可能通过调节Bax和Bcl－2蛋白的表达引起△φm下降从而激活Caspase3最终导致肿瘤细胞凋亡。     

大鼠阻塞性睡眠呼吸暂停综合征海马组织细胞凋亡参与作用研究

目的:探讨大鼠阻塞性睡眠呼吸暂停综合征海马组织细胞凋亡参与作用.方法:采用大鼠咽腔多点注射医用透明质酸钠凝胶方法建立阻塞性睡眠呼吸综合征模型,分析大鼠海马组织中细胞凋亡蛋白Bax/Bcl2、Caspase3/9及P53和C-myc的表达.结果:与对照组相比,模型组大鼠平均血氧饱和度、最低血氧饱和度均明显低于对照组大鼠,而睡眠呼吸暂停指数明显高于对照组大鼠,且海马组织细胞凋亡蛋白Bax、Caspase3/9的表达明显上调,Bcl2蛋白的表达明显下调,而P53蛋白和C-myc蛋白的表达无显著的统计学差异性.结论:细胞凋亡相关蛋白Bax/Bcl2及Caspase3/9的异常表达参与了点注射医用透明质酸钠凝胶方法建立阻塞性睡眠呼吸综合征的发病过程.     

奥沙利铂处理人肝癌细胞株HepG2、QGY后凋亡相关基因蛋白的表达

目的观察抗肿瘤药物奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2、QGY凋亡相关基因蛋白表达的影响,探讨奥沙利铂诱导HepG2、QGY细胞发生凋亡的机制.方法采用人肝癌细胞株HepG2、QGY作为研究对象,免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关基因蛋白的表达.结果奥沙利铂作用72h后,免疫细胞化学表明Bax表达增强,突变型P53蛋白(MTP53)、Bcl-2、Myc表达减弱,Fas表达无差异.结论奥沙利铂诱导肝癌细胞凋亡的作用与上调Bax蛋白表达及下调MTP53、Bcl-2、Myc蛋白表达有关,该药可能不是通过Fas途径诱导细胞凋亡.     

低剂量奥沙利铂联合紫杉醇诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡的内质网应激机制研究

目的:本文对低剂量奥沙利铂联合紫杉醇诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡相关机制进行研究,为新药开发和临床治疗提供参考.方法:人卵巢癌细胞A2780经低剂量奥沙利铂联合紫杉醇处理后,MTT法检测细胞增殖情况;采用real-time PCR及Western Blotting方法检测内质网应激相关蛋白PERK,CHOP以及细胞凋亡蛋白Caspase3和Caspase9的表达情况.结果:低剂量奥沙利铂(1μM)联合紫杉醇(10 mM)处理72 h后,A2780细胞抑制率为39.5％,明显高于其他组,差异具有统计学意义(P＜0.01);且PERK、CHOP及细胞凋亡蛋白在mRNA和蛋白质水平上均明显上调,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:低剂量奥沙利铂联合紫杉醇可能通过激活人卵巢癌细胞A2780的内质网应激及细胞凋亡通路起抑制细胞增殖的作用.     

线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用

目的 探讨线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用.方法 应用人胃癌细胞株AGS,根据不同实验处理分为常温对照(NT)、单纯温热(HT)、常温化疗(NTCT)和温热化疗(HTCT)四组.Western blotting法检测AGS细胞中Bax、Bcl-2蛋白及其线粒体胞质蛋白中细胞色素C的表达,实时PCR检测其Bax、Bcl-2的mRNA表达;分别测定各组AGS细胞Caspase 3和Caspase 9的酶活性变化.结果 与NT、HT、NTCT组比较,HTCT组AGS细胞Bcl-2蛋白表达下调而Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2显著上升;线粒体胞质蛋白中细胞色素C表达增加;Caspase 9和Caspase 3的酶活性显著增高.结论 HTCT可引起AGS细胞Bcl-2、Bax基因和蛋白表达水平发生改变,促使其细胞色素C由线粒体释放进入细胞质,从而诱导细胞凋亡.     

苦豆碱对缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨苦豆碱对缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法：培养人脐静脉内皮细胞,随机分为对照组、缺氧/复氧组、苦豆碱（20、50和100 mg/L）预处理组和苦豆碱预处理+LY294002组,并进行相应处理。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,比色法检测Caspase?3活性,Western blot法检测Bax、Bcl?2、Akt和p?Akt蛋白表达。结果：苦豆碱可提高缺氧/复氧抑制的人脐静脉内皮细胞增殖（P < 0.05）,显著减少缺氧/复氧诱导的细胞凋亡（P < 0.05）,逆转缺氧/复氧引起的Caspase?3活性和Bax表达的增加、Bcl?2表达的降低,提高Bcl?2/Bax值（P < 0.05）。此外,苦豆碱预处理可明显上调缺氧/复氧降低的p?Akt蛋白表达（P < 0.05）,而PI3K/Akt抑制剂LY294002明显逆转苦豆碱抗缺氧/复氧诱导的凋亡作用（P < 0.05）。结论：苦豆碱通过激活PI3K/Akt通路抑制缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。     

线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用

目的探讨线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用。方法应用人胃癌细胞株AGS,根据不同实验处理分为常温对照(NT)、单纯温热(HT)、常温化疗(NTCT)和温热化疗(HTCT)四组。Western blotting法检测AGS细胞中Bax、Bcl-2蛋白及其线粒体胞质蛋白中细胞色素C的表达,实时PCR检测其Bax、Bcl-2的mRNA表达;分别测定各组AGS细胞Caspase3和Caspase9的酶活性变化。结果与NT、HT、NTCT组比较,HTCT组AGS细胞Bcl-2蛋白表达下调而Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2显著上升;线粒体胞质蛋白中细胞色素C表达增加;Caspase9和Caspase3的酶活性显著增高。结论HTCT可引起AGS细胞Bcl-2、Bax基因和蛋白表达水平发生改变,促使其细胞色素C由线粒体释放进入细胞质,从而诱导细胞凋亡。     

兰索拉唑诱导心肌细胞氧化应激损伤的机制研究

目的：探索兰索拉唑（lansoprazole,LPZ）对大鼠心肌细胞H9C2的潜在损伤效应及相关机制。方法：以10 μmol/L LPZ孵育H9C2细胞不同时间（0 h、12 h、24 h、48 h）后,采用DCFH?DA荧光探针检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,Western blot检测内质网应激蛋白（GRP78、CHOP）及凋亡相关蛋白（Cleaved?Caspase?12、Cleaved?Caspase?3、Cyt C、Bax/Bcl?2）的表达。此外,兰索拉唑及ROS抑制剂N?乙酰?L?半胱氨酸（N?acetyl?L?cysteine,NAC）单独或联合孵育细胞48 h后,检测H9C2细胞内ROS水平,以及内质网应激和凋亡相关蛋白的表达情况。结果：LPZ可以时间依赖性增加ROS的水平,诱导GRP78和CHOP的表达,并进一步增加Cleaved?Caspase?12、Cleaved?Caspase?3、Cyt C、Bax/Bcl?2的表达。NAC显著降低LPZ诱导的ROS水平,降低GRP78、CHOP以及Cleaved?Caspase?12、Cleaved?Caspase?3、Cyt C、Bax/Bcl?2的表达水平。结论：LPZ可诱导心肌细胞凋亡,机制可能与氧化应激和内质网应激有关。     

过度激活的Rho/ROCK通路介导的心肌缺血再灌注损伤及贝那普利的改善作用

目的 该研究探索过度激活的Rho/ROCK信号通路在缺血再灌注损伤中的参与机制及贝那普利的改善作用.方法 SD大鼠随机分为4组:假手术组、缺血再灌注组、Y27632组和贝那普利组.采用大鼠冠状动脉左前降支结扎法复制心肌缺血再灌注模型,Y27632组和贝那普利组分别给予对应药物灌胃治疗.分析各组血清中MDA、SOD、GSH-px、Rho/ROCK、MMP2/9及Bax/Bcl2和Caspase3/9的表达.结果 模型组血清MDA水平明显增高(15.6→24.1μg/mL)而SOD(83.1→34.6 U/mL)水平明显降低,Rho/ROCK(0.18→0.64;0.19→0.69;0.16→0.65)、MMP2/9(0.28→0.60;0.27→0.63)、Caspase9表达明显增强(0.25→0.68).Y27632和贝那普利组大鼠的上述异常得到显著的改善.结论 贝那普利通过抑制过度激活的Rho/ROCK、激活的细胞凋亡信号通路、改善细胞外基质降解与重构发挥保护缺血再灌注大鼠心肌损伤的作用.     

盐霉素联合奥沙利铂对PANC89的增殖及诱导凋亡的机制

目的研究盐霉素对人胰腺癌细胞株PANC89的增殖及诱导凋亡的影响及其联合奥沙利铂后增敏其抗肿瘤的作用及机制。方法采用CCK-8法及Hoechst 33342染色法,分别检测盐霉素及盐霉素联合奥沙利铂对PANC89细胞生长的抑制、凋亡的影响;并且用流式细胞术检测细胞凋亡率。Real—time PCR和Westernblot用于分析盐霉素处理后相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果盐霉素抑制PANC89的增殖,且可增敏奥沙利铂抗胰腺癌作用;经过盐霉素联合奥沙利铂处理后,胰腺癌细胞的凋亡率增加（P〈0．05）。经盐霉素以及联合奥沙利铂作用后Bax、Bak的表达明显增加,而Bcl-2及Bcl—x及β—cateninandp-GSK-3p的表达亦被明显抑制（P〈0．05）。结论盐霉素可抑制PANC89的增殖,增敏奥沙利铂的抗肿瘤作用,通过Bcl-2途径诱导人胰腺癌细胞株PANC89的凋亡,并且这可能是通过对Wnt／β—catenin通路的抑制产生的。     

DAPT抑制胃癌BGC-823细胞增殖的体外实验研究

目的探讨Notch信号通路抑制剂氮-[氮-（3,5-二氟苯乙酰）-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯（DAPT）对胃癌细胞系BGC-823增值率的影响及其机制。方法体外培养BGC-823细胞,利用MTT检测DAPT引起的BGC-823细胞增值率的变化以及Western Blotting检测DAPT对凋亡相关蛋白caspase-3、Cytochrome C、Bcl-2和Bax表达水平的影响。结果与对照组相比,不同浓度DAPT可以引起明显的BGC细胞增值率的下降,同时凋亡相关蛋白caspase-3表达水平明显上升,线粒体凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比率、Cytochrome C表达水平明显升高。结论 Notch信号通路抑制剂DAPT可以通过线粒体凋亡通路诱导BGC-823细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

双氢青蒿素对人肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响

目的探讨双氢青蒿素（dihydroartemisinin, DHA ）对人肺腺癌细胞株A549的作用及其机制。方法将对数生长期的A549细胞分成对照组（control）和双氢青蒿素组（DHA）。对照组细胞常规培养,双氢青蒿素组细胞培养体系中加入双氢青蒿素（500 nmol／L）。各组细胞培养72 h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖,实时荧光定量PCR检测细胞p85、 Akt、 Bax、 Bcl－2基因表达,免疫蛋白印迹法（Western blotting）检测细胞中p85、 Akt、 p－p85, p－Akt、 Bax、 Bcl－2蛋白的变化, Caspase3活性试剂盒检测Caspase3活性。结果与对照组比较, DHA组A549细胞增殖率显著下降（P＜0．01）, p85、 Akt mRNA表达无显著差异, Bax mRNA表达水平增高（P＜0．001）, Bcl－2 mRNA表达水平降低（P＜0．05）; p85、 Akt总蛋白表达无显著变化（P＞0．05）, p－p85、 p－Akt、 Bcl－2蛋白表达显著减少, Bax蛋白表达显著增多（均P＜0．01）, Caspase3活性显著增加（P＜0．001）。结论双氢青蒿素能抑制A549细胞增殖,促进A549细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制PI3K／Akt信号传导通路而促进凋亡。     

新城疫病毒D90株对乳腺癌MCF－7细胞作用的实验研究

目的:国内外研究表明,新城疫病毒在体内外对多种肿瘤具有明显抑制作用?本研究旨在探讨新城疫病毒D90株体外对乳腺癌MCF－7细胞的作用及可能机制?方法:CCK－8法检测MCF－7细胞增殖抑制;光学显微镜及DAPI染色观察D90株对MCF－7细胞形态学影响;流式细胞术检测MCF－7细胞凋亡率;Western blot检测MCF－7细胞凋亡相关蛋白的表达情况?结果:D90株对MCF－7细胞具有显著抑制作用并呈浓度和时间依赖性;D90株能够诱导MCF－7细胞凋亡并调节凋亡相关蛋白的表达,包括上调Bax蛋白?下调Bcl－2蛋白,并促进Caspase－3和 Caspase－9的裂解活化?结论:D90株能够调节凋亡相关蛋白的表达,并促进Caspase－3和 Caspase－9的裂解活化,通过线粒体途径诱导MCF－7细胞凋亡并呈浓度和时间依赖性?     

脱氧紫色杆菌素抑制结肠癌TH29细胞增殖及诱导凋亡作用与机制

目的探讨脱氧紫色杆菌素(Deoxyviolacein)对人结肠癌HT29细胞增殖抑制和诱导凋亡及其可能机制。方法用不同浓度的脱氧紫色杆菌素处理HT29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,检测脱氧紫色杆菌素对HT29细胞的抑制率;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase9表达的变化。结果脱氧紫色杆菌素对HT29细胞有明显的增殖抑制作用;可提高G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例;细胞凋亡率升高,Bax和Caspase9蛋白表达升高,Bcl-2蛋白的表达降低。结论脱氧紫色杆菌素抑制结肠癌HT29细胞增殖并诱导凋亡,其凋亡机制可能作用于线粒体介导的内源性通路。     

奥沙利铂抗人结肠癌细胞株HT29增殖及其机制的研究

目的 观察抗肿瘤药物奥沙利铂对人结肠癌细胞株HT29体外增殖的影响,初步探讨其作用机制.方法 采用人结肠癌细胞株HT29作为研究对象,MTT法检测不同浓度和作用时间的奥沙利铂对细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察细胞形态和超微结构的改变;流式细胞仪分析细胞周期的分布及凋亡的情况;免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白及凋亡相关基因蛋白的表达.结果 奥沙利铂对HT29细胞的增殖有抑制作用而且呈剂量和时间依赖性.奥沙利铂作用72 h后,电镜可见凋亡细胞及凋亡小体;流式细胞仪检测发现细胞阻滞于G2/M期,G0/G1、S期细胞减少及出现凋亡峰;免疫细胞化学显示Bax和Fas表达增强,CyclinB1、Bcl-2、PCNA表达减弱.结论 奥沙利铂对HT29结肠癌细胞的增殖有抑制作用,其作用机制与细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡有关.     

Twinfilin-1过表达缓解镉诱导肾细胞重金属中毒及凋亡

目的 探究细胞骨架调控蛋白Twinfilin-1过表达对镉诱导肾细胞重金属中毒及凋亡的影响。方法 体外培养猪肾细胞LLC-PK1,随机分为对照组、模型组、模型+pc DNA空载体组、模型+Twinfilin-1过表达组,以8 μmol/L镉处理细胞24 h建立重金属中毒模型。采用实时荧光PCR技术和蛋白印迹实验检测Twinfilin-1的表达,CCK8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位的变化,蛋白印迹检测凋亡相关蛋白［B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase3、9）］水平。结果与对照组比较,模型组Twinfilin-1 mRNA及蛋白水平、细胞增殖能力、线粒体膜电位降低,细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、cleaved cas9/cas9及cleaved cas3/cas3水平增加（P<0.05）;与模型组比较,模型+Twinfilin-1过表达组Twinfilin-1 mRNA及蛋白水平、细胞增殖能力、线粒体膜电位增加,细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、cleaved cas9/cas9及cleaved cas3/cas3水平降低（P<0.05）,而模型组+pc DNA空载体组无明显变化（P>0.05）。结论 Twinfilin-1过表达可能通过下调凋亡关键因子Bax/Bcl-2水平,抑制Caspase3、9的活化,减少细胞凋亡,维持正常线粒体膜电位,从而保护镉诱导肾细胞重金属中毒。     

白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制

研究白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制。采用MTT检测细胞增殖情况,活性氧试剂盒分析细胞内ROS水平;流式细胞术观察细胞凋亡和细胞周期的变化。Western blot检测凋亡相关蛋白以及相关通路蛋白表达。结果表明,经不同药物浓度处理,白藜芦醇可以诱导DU145细胞发生凋亡,使细胞周期阻滞于G₀/G₁期,提高细胞内ROS水平,降低细胞内线粒体膜电位水平,并呈剂量依赖性。白藜芦醇通过上调Bax蛋白的表达和抑制Bcl-2蛋白表达,促使Bax/Bcl-2比值升高,激活Caspase级联反应从而诱导细胞发生凋亡。进一步研究发现白藜芦醇可以升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位水平,从而通过线粒体途径诱导DU145细胞发生凋亡。因此,白藜芦醇可能通过ROS-线粒体途径诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡。     

藤黄酸诱导肺癌细胞H1975凋亡的机制研究

目的 研究藤黄酸（GA）诱导人肺癌细胞H1975凋亡的分子机制,探讨氧自由基（ROS）和JNK信号通路在GA杀伤 肺癌细胞中的作用。方法 以人肺癌细胞H1975为研究对象,MTT法测定GA抑制细胞增殖的作用,Annexin V/PI 双染法测定细胞凋亡率,DCFH-DA 法测定ROS 含量,JC-1探针染色分析线粒体膜电位（MMP）,Western blot检测JNK 信号通路的激活和线粒体凋亡途径相关蛋白表达的变化。结果 GA 呈剂量依赖性抑制H1975细胞的增殖,各实验组细胞存活率与空白对照组比较,均有统计学差异（P＜0.05 或0.01）。1、2.5 和5滋mol/L GA 作用24h 后,细胞凋亡率分别为25.2%、51.8%和75.1%,剪切型凋亡相关蛋白cleaved caspase-9、cleaved caspase-3 和cleaved PARP 的表达随GA 浓度增高而显著增加,与空白对照组比较,均有统计学差异（P＜0.05或0.01）。GA 作用2h 后H1975细胞ROS 含量显著升高,磷酸化JNK（p-JNK）表达上调（P＜0.05或0.01）。GA 作用16h后各实验组细胞MMP 均明显降低（均P＜0.05）。GA 作用24h后实验组细胞线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bak、Bik表达增加,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达与空白对照组相比明显下降（P＜0.05 或0.01）。结论 GA 具有诱导H1975 细胞凋亡的作用,其可能机制是上调细胞内ROS含量,激活JNK 信号通路,进而引起MMP 降低和线粒体凋亡途径激活。     

奥沙利铂抗人肝癌细胞株QGY增殖及其机制的研究

目的观察抗肿瘤药物奥沙利铂对人肝癌细胞株QGY体外增殖的影响并探讨其机制,为其能否应用于肝癌的临床治疗提供理论依据.方法采用人肝癌细胞株QGY作为研究对象,MTT法检测不同浓度和作用时间的奥沙利铂对细胞增殖的抑制效应;光镜及透射电镜观察细胞形态和超微结构的改变;流式细胞仪分析细胞周期的分布及凋亡;免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白及凋亡相关基因蛋白的表达.结果奥沙利铂对QGY细胞的增殖均有抑制作用而且呈时间和剂量依赖性.光镜观察发现细胞体积缩小,变圆,胞浆浓缩,核固缩深染,呈现凋亡早期的形态学改变.电镜可见凋亡细胞及凋亡小体.流式细胞仪检测到细胞阻滞于细胞周期的S期和G2/M期,G0/G1期细胞减少及凋亡峰.奥沙利铂作用72 h后,免疫细胞化学表明cyclin A、Bax表达增强,突变型P53蛋白(MTP53)、Bcl-2、Myc表达减弱,Fas表达无差异.结论奥沙利铂对QGY肝癌细胞的增殖都有一定的抑制作用,阻滞细胞周期于S期及G2/M期,它通过上调Bax的表达,下调MTP53、Bcl-2、Myc的表达而诱导细胞凋亡,该药可能不是通过Fas途径诱导细胞凋亡.