用血清药理学方法观察冬连三七组分调控TGF-β1/p38MAPK/CREB通路改善糖尿病动脉硬化兔平滑肌细胞增殖的机理研究*

目的采用血清药理学方法观察冬连三七组分（CONR）干预TGF-β1/p38MAPK/CREB通路对糖尿病动脉硬化兔血管平滑 肌细胞增殖的影响。方法1. 选择纯种雄性新西兰家兔5只,4只分别每日给予辛伐他汀3 mg/kg,CONR150 mg/kg、450 mg/kg灌胃,共10 d;SB203580腹腔注射2 mg/kg,Q12 h,10 d;另一只每日给予生理盐水20 mL作为对照。制备含药血清 。2. 正常雄性新西兰大白兔静脉推注四氧嘧啶并且配合高脂饮食、腹主动脉内膜球囊损伤术诱导糖尿病动脉粥样硬化模型 。3. 造模成功后,分离模型兔腹主动脉SMC,并传代培养,使用3代细胞进行实验。4. 分组：设立正常组、模型组、CONR 高剂量组、CONR低剂量组、SB203580组、辛伐他汀组,实验组予含药血清进行干预,空白组、模型组予正常血清进行干预 。5. 采用cck-8法测定相应的吸光度,计算50%抑制率浓度;WB法检测各组平滑肌p-CREB、p-p38MAPK、TGF-β1蛋白的表达 。结果离体实验表明CONR对平滑肌细胞增殖具有抑制作用,其50%抑制率浓度（IC50）为12.53 μg/mL。CONR高、低剂量组 、SB203580组及辛伐他汀组对p-CREB、p-p38MAPK、TGF-β1蛋白表达均有抑制作用,与模型组比较差异有统计学意义 （P<0.01）;辛伐他汀组及CONR 2组优于SB203580组对p-p38MAPK蛋白的抑制（P<0.01）,3组之间差异无统计学意义 （P<0.01）。实验4组对TGF-β1、p-CREB蛋白有抑制作用,4组间无显著统计学差异（P>0.05）。结论冬连三七组分可能部 分通过抑制TGF-β1/p38MAPK/CREB通路抑制DA兔VSMC的增殖。     

中药有效组分调控p38MAPK改善糖尿病动脉粥样硬化兔炎症反应的机理研究

目的 对中药组分（30%黄连生物碱、40%麦冬多糖、30%三七总皂苷）干预p38MAPK信号转导通路改善糖尿病动脉粥样硬化（diabetic atherosclerosis,DA）兔炎症反应进行研究。方法 静脉推注四氧嘧啶并且配合腹主动脉内膜球囊损伤术诱导雄性纯种新西兰大白兔的DA模型,之后给予中药配伍组分高、中、低剂量组及辛伐他汀组干预。结果 中药组分各组及辛伐他汀组对（p38mitogen-acti–vatedproteinkinase）p38MAPK表达有下调作用,中药组分高剂量组及辛伐他汀组可降低hs-CRP、IL-6、TNF-α、ET、ICAM-1、VCAM-1,与模型组比较差异有统计学意义（P<0.01）;中剂量组可降低hs-CRP、IL-6、ET、VCAM-1,与模型组比较差异有统计学意义（P<0.01）;低剂量组可降低hs-CRP,与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）;中药组分高、中剂量组降低了FBG、GHB、GSP,与模型组比较差异有统计学意义（P<0.01）;中药组分低剂量组降低了FBG,与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,辛伐他汀组没有明显统计学差异（P>0.05）。结论 中药组分可能通过干预p38MAPK信号转导通路,改善DA兔的炎症反应。     

p38MAPK/eNOS信号通道在胰高血糖素样肽-1抑制AGEs诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨p38MAPK信号通道在胰高血糖素样肽-1（GLP-1）拮抗糖基化终末产物（AGEs）诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡
的作用。方法实验组分为对照组、AGEs组、GLP-1组、AGEs+GLP-1组、AGEs+抑制剂组及AGEs+GLP-1+抑制剂组,western
blot技术检测p-p38MAPK/p38MAPK、p-eNOS/eNOS蛋白表达情况,Annexin V/PI流式检测细胞凋亡率。结果与对照相比较,
单独加入AGEs或GLP-1可分别导致p-p38MAPK蛋白表达水平明显上升（P=0.001）或下降（P<0.001）;与对照组相比AGEs可
显著降低p-eNOS表达水平（P=0.007）,而予以GLP-1或p38MAPK抑制剂（SB203580）预处理后,受抑制的eNOS蛋白表达水平
再次显著升高（P=0.004）;在AGEs 组加入SB203580 或GLP-1 预处理后,AGEs诱导的细胞凋亡率均显著下降（P<0.001,P<
0.001）。结论GLP-1至少部分通过抑制p38MAPK蛋白磷酸化,上调磷酸化eNOS蛋白的表达,对人脐静脉内皮细胞起到抗凋
亡的保护作用。
     

抑制p38MAPK通路对帕金森病模型小鼠黑质BAD和caspase-3表达的影响

目的 研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路对亚急性帕金森病(PD)模型小鼠中脑黑质Bcl-xl/Bcl-2死亡相关因子(BAD)和半胱氨酸蛋白酶3(easpase-3)的表达调控作用,探讨PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元进行性变性丢失的可能机制.方法 健康雄性C57BL/6N小鼠45只,随机分为3组,(1)1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)模型组:腹腔注射MPTP(30 mg/kg,溶于生理盐水),1次/d,连续5 d;(2)抑制剂组:在每次MPTP注射前1h腹腔注射SB203580(10 mg/kg,溶于5mg/ml DMSO)1次/d,连续5 d;(3)对照组:注射与模型组和抑制剂组等量的生理盐水和DMSO.观察模型小鼠行为学变化,中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、BAD、caspase-3和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)的表达变化,及给予p38MAPK通路特异性抑制剂SB203580对上述表达变化的影响.结果 模型小鼠出现典型的PD行为学症状,中脑黑质区TH阳性神经元和蛋白水平分别下降约60%和65%(P<001).p-p381APK、BAD和caspase-3阳性细胞数及蛋白水平显著增加(P<0.01);经p38MAPK特异性抑制剂SB203580处理后,PD小鼠行为学症状改善,TH阳性神经元和蛋白水平下降程度明显减轻;中脑黑质BAD、caspase-3和p-p38NAPK阳性细胞数显著减少,蛋白水平下降明显(P<0.01).结论 p38MAPK通路在亚急性PD模型小鼠黑质BAD和caspase-3表达中可能有重要调控作用,p38MAPK通路特异性抑制剂SB203580对PD小鼠具有一定的神经保护作用.     

普伐他汀对P38MAPK信号通路介导的胰岛微血管内皮细胞炎症损伤的保护作用

目的研究脂多糖（LPS）诱导胰岛微血管内皮细胞（IMECs）炎症损伤的相关信号通路及采用普伐他汀干预后的作用机
制。方法以IMECs为实验材料,分为空白对照组、LPS组、SB203580组、普伐他汀组、SB203580+普伐他汀组。以Hoechst凋亡
染色及Annexin V/PI双染色法对不同条件下IMECs的凋亡进行定性定量检测,Western blot法检测总P38MAPK（total-p38）、磷
酸化P38MAPK（p-p38）蛋白及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白的表达水平。结果LPS 组IMECs 较对照组凋亡率升高,
total-p38、p-p38、iNOS蛋白的表达水平上调。与LPS组比较,SB203580组、普伐他汀组与SB203580+普伐他汀组均有凋亡率降
低,total-p38、p-p38、iNOS蛋白表达水平下调。结论LPS诱导的IMECs炎症损伤与P38MAPK及iNOS/NO炎症通路的激活有
关,普伐他汀可阻断以上通路,起到抑制IMECs凋亡、坏死,改善炎症损伤的保护作用。
     

异氟烷预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌p38丝裂原活化蛋白激酶水平的影响

 目的 探讨异氟烷预处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）水平的影响。方法 雄性Wistar大鼠90只,体重270~390 g。腹腔注射硫代仲丁巴比妥钠150 mg/kg麻醉后,阻断左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h,建立心肌缺血再灌注损伤模型。取60只大鼠,随机分为6组（n=10）,于缺血前CON组静脉注射0.9%生理盐水;SB组经3 min静脉注射p38 MAPK抑制剂SB203580 1.5 mg/kg;DMSO组经3 min静脉注射SB203580溶剂DMSO 0.2 mL;ISO组吸入1.0MAC异氟烷30 min后停止吸入15 min;SB+ISO组和ISO+SB组分别在吸入异氟烷前即刻和吸入异氟烷后即刻静脉注射SB203580 1.5 mg/kg。再灌注2 h后采用氯化硝基四氮唑蓝染色法测定心肌梗死面积。取剩余的30只大鼠,随机分为5组（n=6）,CON组、SB组、ISO组、SB+ISO组和ISO+SB组所有处理同前。缺血前即刻、再灌注后2 h即刻取心肌标本,采用Western blot法测定p38 MAPK的表达水平。结果 与CON组比较,SB组、ISO组、SB+ISO组和ISO+SB组心肌梗死面积降低（P<0.05）。再灌注后的CON组和ISO组p38 MAPK水平高于缺血前CON组（P<0.05）。结论 异氟烷预处理和p38 MAPK抑制剂SB203580对心肌有保护作用,但p38 MAPK未参与异氟烷预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制。     

抑制p38MAPK信号通路对尿源性脓毒血症兔肾组织细胞凋亡的影响及其作用机制

目的 探讨抑制p38MAPK信号通路对尿源性脓毒血症兔肾组织细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 将60只新西兰兔按随机数字表法分为4组:假手术组(sham)、模型组(Model)、p38MAPK抑制剂SB203580组(SB203580)、SB203580 +p53激活剂Nutlin-3组(SB203580+ Nutlin-3),每组15只.采用输尿管近端注入大肠埃希菌菌液法制作尿源性脓毒血症模型,术前30 min静脉注射30 μg/kg SB203580或腹腔注射128 mg/kg Nutlin-3进行干预,1次/d,共3d.记录术后24、48、72 h时各组兔肛温、呼吸频率和心率;全自动分析仪检测白细胞计数以及血清肌酐、尿素氮含量;ELISA检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡情况;qRT-PCR法检测肾组织MDM2和p53 mRNA表达水平;Western blot法检测肾组织Cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p-p38MAPK、MDM2、p53和PUMA等蛋白表达水平.结果 与Model组比较,SB203580组兔肛温、呼吸频率、心率、白细胞计数、血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平以及血清肌酐和尿素氮含量降低(P＜0.05),同时肾组织细胞凋亡率、p53 mRNA以及p53、Cleaved caspase-3、Bax、PUMA、p-p38 MAPK等蛋白水平降低(P＜0.05),而MDM2 mRNA以及MDM2、Bcl-2等蛋白水平增加(P＜0.05).与SB203580组比较,SB203580+ Nutlin-3组兔肛温、呼吸频率、心率、白细胞计数、血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平以及血清肌酐和尿素氮含量升高(P＜0.05),同时肾组织细胞凋亡率、p53 mR-NA以及p53、Cleaved caspase-3、Bax、PUMA等蛋白水平增加(P＜0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P＜0.05),而MDM2 mR-NA以及MDM2、p-p38MAPK等蛋白水平无显著变化(P＞0.05).结论 抑制p38 MAPK信号通路通过促进MDM2表达而抑制p53介导的细胞凋亡途径,从而减少尿源性脓毒血症兔肾组织细胞凋亡.     

P38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞凋亡的影响

〗［摘 要］
目的：探讨P38MAPK信号传导通路在乙醛刺激的大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）凋亡过程中的作用及P38蛋白表达的变化,为肝纤维化的临床治疗提供依据。方法：实验设阴性对照组（HSC-T6加含10%小牛血清的DMEM培养液）、乙醛组（对照组基础上加乙醛）和实验组（乙醛组基础上加P38MAPK抑制剂SB203580,使其终浓度为4、8、16 μmol·L^-1）,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;Western blotting法检测磷酸化P38MAPK表达水平,SABC法检测caspase-3蛋白表达。结果：与对照组比较,乙醛组HSC-T6的凋亡率和caspase-3蛋白阳性表达率均降低（P<0.05或P<0.01）,P38MAPK磷酸化水平表达增高（P<0.01）。抑制剂SB203580作用后,细胞凋亡率逐渐增高(P<0.01);P38MAPK磷酸化水平降低(P<0.01);caspase-3蛋白水平升高（P<0.01）;且随剂量的增加,磷酸化水平不断降低,蛋白表达水平不断升高。结论：P38MAPK抑制剂SB203580能促使乙醛刺激的HSC-T6凋亡,且凋亡的发生可能与SB203580抑制P38MAPK的磷酸化途径和caspase-3的活化有关。     

朝药鹿茸及SB203580对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响

[目的]探讨朝药鹿茸与特异性p38蛋白激酶(p38MAKP)抑制剂SB203580对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响.[方法]将BABL/c小鼠随机分为正常组、哮喘模型组、鹿茸低、高剂量组、SB203580组.每日分别灌胃给予鹿茸低、高剂量组2,18mg用生理盐水溶解的鹿茸冻干粉0.4mL,腹腔注射给予SB203580组5mg/kg SB203580.分别采用ELISA法和蛋白质印迹法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞分类及计数、炎性细胞因子白细胞介素(IL)-4,IL-5水平及肺组织磷酸化p38MAPK表达,并观察肺组织病理学改变.[结果]与正常组比较,哮喘模型组BALF中炎性细胞计数、IL-4,IL-5水平及肺组织中磷酸化p38MAPK表达水平均显著增高(P<0.05);与哮喘模型组比较,朝药鹿茸低、高剂量组和SB203580组BALF中炎性细胞计数、IL-4,IL-5水平及肺组织中磷酸化p38MAPK表达水平均明显降低(P<0.05).与哮喘模型组比较,朝药鹿茸低、高剂量组和SB203580组肺组织病理学改变均明显减轻(P<0.05),而朝药鹿茸低、高剂量组与SB203580组间差异无统计学意义(P>0.05).[结论]朝药鹿茸和SB203580均具有治疗哮喘作用,其机制与抑制哮喘小鼠p38MAPK信号通路的表达相关.     

p38MAPK在体外培养脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化中的作用

目的 观察体外培养脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化过程中p38MAPK活性、TNF-Ot、NO水平及NOS活性的变化,探讨p38MAPK活性变化与脊髓星形胶质细胞活化的关系.方法 分离培养的SPF大鼠脊髓星形胶质细胞设正常对照组(止常组)、SP刺激组(SP组,10-7mol/L)、SB203580阻断p38MAPK组(SB组,10 umol/L)和sP刺激+SB203580阻断p38MAPK组(SP+SB组).WB法、RT-PCR法、ELISA法检测1,3,12,24 h和36 h时p38MAPK、p-p38(磷酸化p38MAPK)含量及GFAP mRNA、TNF-0、NO水平和NOS活性的变化.结果 脊髓星形胶质细胞GFAP阳性表达率大于95%.SP组脊髓星形胶质细胞总p38MAPK水平无显著变化,1 h后p-p38开始升高,3 h后GFAP mRNA水平显著增高,同时NO、NOS和TNF-a水平显著增高.用SB203580阻断p38MAPK通路后,sP+sB组较sP组p-p38、GFAP mRNA、NO、NOS、TNF-a水平显著降低.SB组总p38MAPK、p-p38、GFAP mRNA、NO、NOS、TNF-a水平无显著变化.结论 p38MAPK信号通路参与r脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化过程,阻断p38MAPK信号通路可有效降低炎性因子水平.     

SB203580对大鼠慢性非细菌性前列腺炎作用的研究

目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK)特异性抑制剂SB203580对大鼠慢性非细菌性前列腺炎(Chronic nonbacterial prostatitis,CNP)的作用,及对细胞因子肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor α,TNF-α)、基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、环氧合酶(Cyclooxygenase 2,COX-2)表达的影响.方法:将成年雄性SD大鼠随机分为3组,炎症组和处理组去势后每日皮下注射苯甲酸雌二醇连续4周,同时处理组腹腔注射SB203580隔日1次,对照组不做任何处理.HE染色观察前列腺组织的病理学改变,免疫组化观察TNF-α、MMP-9、COX-2、磷酸化p38(Phosphorylation p38,p-p38)表达,Western blot和RT-PCR检测各组TNF-α、MMP-9、COX-2、p38(p-p38)的表达.结果:光镜下SB203580处理组较炎症组的炎症轻.p38 mRNA的表达在SB203580处理组明显比炎症组低.炎症组TNF-α、MMP-9、COX-2、p-p38蛋白呈高表达,应用SB203580表达显著降低与模型组有差异,与对照组无显著差异.结论:p38 MAPK信号转导途径在CNP中被激活,SB203580能有效地抑制炎症细胞因子TNF-α、MMP-9、COX-2等表达的调控,缓解炎症,这为CNP的治疗提供了新的理论和实验依据.     

SB203580防治新生大鼠高氧肺损伤的作用与机制

目的:探讨P38 MAPK特异性抑制剂SB203580对新生大鼠高氧肺损伤产生保护作用的机制。方法:160只新生大鼠随机分为空气对照组、高氧肺损伤组、高氧肺损伤+SB203580组和高氧肺损伤+生理盐水组,建立模型。作用12,24,72 h和1周后,分别处死大鼠。取72 h的左肺以Western blot法检测P38 MAPK的表达情况,取4个时相点的右肺检测肺组织中丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(TAOC)。结果:72 h时高氧肺损伤组和高氧肺损伤+生理盐水组P38 MAPK呈阳性表达,肺组织MDA含量随时间延长呈上升趋势,在各时相点均高于空气对照组和高氧肺损伤+SB203580组(P<0.01);TAOC随时间延长逐渐降低,在各时相点均低于空气对照组和高氧肺损伤+SB203580组(P<0.01)。结论:SB203580可能通过阻断P38 MAPK表达,进而通过减轻机体的氧化应激反应来减轻新生大鼠高氧肺损伤。     

白桦脂醇对宫颈癌小鼠自然杀伤细胞杀伤力及淋巴细胞增殖活性的影响

目的 探究白桦脂醇对宫颈癌小鼠自然杀伤（NK）细胞杀伤力及淋巴细胞增殖活性的影响。方法 通过皮下注射人宫颈癌HeLa细胞复制宫颈癌小鼠模型。将45只模型小鼠随机分为模型组、白桦脂醇组和白桦脂醇+SB203580组，每组15只。另取15只未做处理的小鼠作为对照组。白桦脂醇组和白桦脂醇+SB203580组白桦脂醇灌胃干预（100 mg/kg）。白桦脂醇+SB203580组通过腹腔注射SB203580（50 ng/kg）抑制p38通路。采用免疫组织化学染色检测细胞增殖。比较各组p38蛋白、NK细胞杀伤力及淋巴细胞增殖活性。结果 白桦脂醇组和白桦脂醇+SB203580组肿瘤体积和质量小于模型组（P <0.05），并且白桦脂醇+SB203580组肿瘤体积和质量小于白桦脂醇组（P <0.05）。白桦脂醇组和白桦脂醇+SB203580组免疫组织化学染色评分、p38蛋白相对表达量低于模型组（P <0.05），并且白桦脂醇+SB203580组免疫组织化学染色评分、p38蛋白相对表达量低于白桦脂醇组（P <0.05）。白桦脂醇组和白桦脂醇+SB203580组脾脏指数、NK细胞杀伤力、淋巴细胞增殖活性高于模型组（P <0.05），并且白桦脂醇+SB203580组脾脏指数、NK细胞杀伤力、淋巴细胞增殖活性高于白桦脂醇组（P <0.05）。结论 白桦脂醇通过抑制p38通路抑制宫颈癌细胞增殖，并提高NK细胞杀伤力和淋巴细胞增殖活性。     

唑来膦酸盐通过p38 MAPK通路调控高糖条件下破骨细胞分化生成及骨吸收功能

目的 探究在高浓度葡萄糖的条件下,唑来膦酸盐（ZOL）对破骨细胞分化及功能的影响,以及p38丝裂原蛋白活化激酶（p38 MAPK）通路在其中的调控机制。方法 将RAW264.7细胞向破骨细胞方向分化诱导,分为4组：低糖组（5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（16.5 mmol/L葡萄糖）、低糖+ZOL组（5.5 mmol/L葡萄糖+0.1 μmol ZOL）、高糖+ZOL组（16.5 mmol/L葡萄糖+0.1 μmol ZOL）。MTT法测定各组细胞增殖活性,光学显微镜检测RAW264.7细胞的迁移数目,免疫荧光组织化学染色检测各组破骨细胞细胞骨架的清晰程度。增加第 5 组：高糖+ZOL+SB203580（16.5 mmol/L 葡萄糖+0.1 μmol ZOL+10 μmol SB203580）后,TRAP染色鉴定各组阳性破骨细胞数量;将RAW264.7细胞与牙本质磨片共同培养,扫描电子显微镜测定各组细胞骨吸收陷窝的数量及面积;实时荧光定量PCR（Real-time PCR）及Western blotting检测破骨细胞相关因子的mRNA和蛋白的表达情况。结果 细胞增殖实验中各组细胞增殖情况无明显差别。高糖条件对RAW264.7细胞的迁移具有促进作用,差异具有统计学意义（P<0.05）;抑制细胞骨架的清晰程度及破骨细胞封闭区的形成;下调p38 MAPK、p-p38 MAPK、NFATc1、CTSK、TRAP mRNA和蛋白表达情况从而对破骨细胞的分化及功能发挥抑制作用,差异具有统计学意义（P<0.05）。加入唑来膦酸盐后,RAW264.7细胞迁移受到抑制,差异具有统计学意义（P<0.05）;细胞骨架的清晰程度进一步下降,破骨细胞封闭区的形成被进一步破坏破;p38 MAPK、p-p38 MAPK、NFATc1、CTSK、TRAP的mRNA和蛋白质表达降低,进一步抑制破骨细胞分化及功能,差异具有统计学意义（P<0.05）;加入SB203580后,破骨细胞分化和骨吸收功能受到抑制,p38 MAPK、p-p38 MAPK表达受到抑制,下游NFATc1、CTSK、TRAP表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 高糖条件抑制破骨细胞的分化生成和骨吸收功能。ZOL通过p38 MAPK信号通路实现了对高糖条件下破骨细胞分化及功能的抑制作用,提示p38 MAPK分子通路可作为唑来膦酸盐调控糖尿病性骨质疏松的新机制。     

P38信号转导通路对蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛的影响

目的:探讨促分裂原活化蛋白激酶P38(P38 MAPK)在兔蛛网膜下腔出血(SAH)后迟发性脑血管痉挛(CVS)中的作用。方法:35只新西兰白兔随机分为对照组(n=5),SAH组(n=10)、SAH+DMSO(n=10)、SAH+SB203580组(n=10),采用枕大池二次注血的方法建立SAH模型。分别在注血后第5天、第7天活体灌注处死,留取基底动脉标本。用免疫组织化学、测量基底动脉横截面积的方法检测P38 MAPK的表达和CVS程度的变化。结果:5 d处死的SAH组、SAH+DMSO组兔基底动脉横截面积与对照组相比有统计学意义(P<0.01),平滑肌细胞P38 MAPK的表达与对照组相比显著增强(P<0.01);5 d处死的SAH+SB203580组CVS明显缓解(P<0.01),平滑肌细胞P38 MAPK的表达减弱。结论:SAH后兔基底动脉平滑肌细胞内激活的P38 MAPK诱导了迟发性CVS的产生;SB203580能够有效的缓解基底动脉平滑肌持续性的收缩。     

球形脂联素对高糖诱导的NRK-52E细胞单核趋化蛋白-1的表达影响及其可能机制

目的:探讨球形脂联素(gAd)对高糖环境下大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)单核趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA和蛋白表达的影响以及其与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路的关系。方法:将体外培养NRK-52E细胞分为6组:正常糖对照组NG(含5.6mmol/L葡萄糖)、高糖组HG(含25mmol/L葡萄糖)、gAd处理组(分别用gAd2,5,10mg/L+25mmol/L葡萄糖)、p38MAPK抑制剂组(25mmol/L葡萄糖+10μmol/LSB203580)。30min后采用Western印迹方法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)和总p38MAPK(t-p38MAPK)的表达;24hRT-PCR法、Western印迹方法分别检测MCP-1mRNA和蛋白的表达。结果:高糖环境下,NRK-52E细胞p-p38MAPK、MCP-1mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),加入gAd及SB203580后,NRK-52E细胞p-p38MAPK、MCP-1mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05),且呈现剂量依赖性(P<0.05)。结论:gAd呈现剂量依赖性抑制高糖诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞MCP-1高表达,且这种肾脏保护作用是通过p38MAPK途径介导的。     

加味丹参饮预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨加味丹参饮（ JDSH ）预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤（ IRI ）的保护作用及机制。方法采用结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min 后再灌注30/60 min 模型,将56只 SD 雄性大鼠随机分为7组：假手术组、缺血/再灌注（ I/R ）30 min 组、I/R 60 min 组、p38MAPK 阻断剂SB203580+I/R 30 min 组、SB203580+I/R 60 min 组、JDSH+I/R 30 min组、JDSH+I/R60 min 组。各组干预2 d 后, HE 染色心肌组织标本,全自动生化分析仪测定血清 CK、LDH ,免疫组化法检测p38MAPK、COX-2和 ICAM-1蛋白的表达。结果经 JDSH 预处理或 p38MAPK 阻断剂 SB203580处理后心肌细胞形态结构保持更好。与假手术组比较,I/R30 min 组和 I/R 60min 组大鼠血清中的 CK、LDH 明显升高（P＜0.01）;与 I/R 30/60 min 比较,SB203580＋I/R 30/60 min 组和 JDSH＋I/R 30/60 min 组均明显降低（P＜0.01）。与假手术组比较,I/R 使大鼠心肌组织的 p38MAPK、COX-2、ICAM-1蛋白表达增加（P＜0.01）,且随再灌注时间的延长而增加;与 I/R 30/60 min 组比较,SB203580和JDSH 均能减少其蛋白表达（P＜0.01）。结论大鼠心肌 IRI 时,激活了 p38MAPK 信号通路,且与再灌注时间（30~60 min ）呈正相关。 JDSH 通过抑制 p38MAPK 信号通路,降低其下游基因 COX-2和 ICAM-1的表达,降低CK、LDH ,减轻心肌损伤,起到保护心肌作用。     

P38信号通路调控帕金森病小鼠黑质NF-κB和iNOS的表达

目的探讨P38丝裂原活化蛋白激酶（P38 MAPK）信号通路与核因子NF-κB、一氧化氮合酶（inducible nitricoxide, iNOS）
之间的关系,通过给予P38 MAPK特异性抑制剂SB203580,研究P38 MAPK信号通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶
（MPTP）制备的帕金森病（PD）小鼠模型的作用机制。方法将小鼠随机分为模型组、干预组和对照组。观察小鼠行为学变化,
采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶（TH）、磷酸化P38（p-P38）、NF-κB和iNOS的表达变化;以及
给予SB203580后对上述变化的影响。结果与对照组相比,模型组小鼠出现典型PD症状,TH阳性神经元明显丢失、蛋白水平
下降,P38 MAPK信号通路被激活,其磷酸化产物p-P38表达明显增多,NF-κB和iNOS表达也明显增加;经SB203580干预处理
后,上述变化均减轻。结论P38 MAPK信号通路可能参与激活NF-κB、iNOS而诱导PD模型小鼠黑质多巴胺能神经元的损伤,
采用SB203580抑制P38 MAPK信号通路可对PD模型小鼠多巴胺神经元起到保护作用。
     

肝肾移植患者CYP3A5和MDR1基因多态性与他克莫司浓度/剂量比的关系

【摘要】 目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在溃疡性结肠炎(UC)以及葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎中的作用。方法①7只Balb/c小鼠随机分为3组:正常对照组、DSS结肠炎组、p38MAPK选择性抑制剂SB203580干预组。结肠炎组小鼠每日饮用5%DSS溶液,干预组小鼠则在饮用5%DSS溶液72h后,加用SB203580〔1mg/(kg.d)〕进行腹腔注射。观察并记录各组小鼠的疾病活动指数(DAI);7d后处死小鼠,观察各组小鼠肠黏膜组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。②收集36例活动性UC患者的肠黏膜组织标本,并以18例结肠癌旁的正常组织标本作对照,通过体外组织培养,观察SB203580对UC患者肠黏膜活检组织中TNF-α和IL-1β表达的影响。结果①DSS结肠炎小鼠的DAI评分、肠黏膜组织中TNF-α和IL-1β的水平明显升高(P均<0.01),经SB203580干预后,其DAI评分、TNF-α、IL-1β的水平均明显降低,但仍然高于正常对照组(P均<0.01)。②体外组织培养结果显示,与未用SB203580处理的UC组比较,SB203580处理后UC患者肠黏膜组织中TNF-α和IL-1β的水平明显降低(P<0.01)。结论 SB203580能阻断p38MAPK信号转导通路,从而降低促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的释放。     

依达拉奉对Aβ\25-35诱导的PC12细胞MAPKs信号通路的影响

目的探讨自由基清除剂依达拉奉通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号转导通路发挥细胞保护作用的途径,为阿尔茨海默病(AD)发病机制及AD治疗新药的研发增添理论依据。方法培养肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞),根据不同的干预措施将细胞分为4组。阴性对照组(高糖DMEM组);AD模型组(30μmol/L Aβ25-35处理组);抑制剂对照组:10μmol/L SB203580〔丝裂原活化蛋白激酶p38(p38)抑制剂〕、10μmol/L SP600125〔c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂〕或10μmol/L PD98059〔细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂〕处理组;依达拉奉低、中、高剂量组:依达拉奉20、40、80μmol/L及30μmol/L Aβ25-35共同孵育组。Western blot检测各组细胞p-p38、p-JNK及p-ERK蛋白的表达;RT-PCR法检测以上各组(抑制剂对照组仅加入SB203580 10μmol/L)p38 mRNA的表达。结果 1与阴性对照组比,AD模型组p-p38蛋白表达增高(P<0.01);与AD模型组比,抑制剂对照组和依达拉奉各组p-p38蛋白的表达减低(P<0.05);依达拉奉3组的p-p38蛋白表达高于抑制剂对照组(P<0.05),与低剂量依达拉奉组比,中剂量依达拉奉组p-p38蛋白有所减低(P<0.05)。2与阴性对照组比,AD模型组p-JNK蛋白表达增高(P<0.05);与AD模型组比,抑制剂对照组p-JNK蛋白的表达减低(P<0.05)。3 pERK表达在各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。4与阴性对照组比,AD模型组的p38mRNA表达增加,而抑制剂对照组的p38mRNA表达减少(分别P<0.05);中、高剂量依达拉奉组p38mRNA表达比AD模型组减低,且比抑制剂对照组还低(P<0.05);以40μmol/L依达拉奉组p38mRNA表达最低,与20μmol/L、80μmol/L依达拉奉组均明显不同(P<0.05)。结论 Aβ25-35可能直接激活MAPK信号通路,尤其p38及JNK,损伤PC12细胞。依达拉奉可能同时在mRNA水平及蛋白质水平,阻断p38信号转导通路,发挥抗Aβ25-35引起的PC12细胞损伤作用,有望成为治疗AD的新药。