氧化低密度脂蛋白通过激活内皮细胞受体诱发一氧化氮的产生

目的：探讨氧化低密度脂蛋白内皮受体LOX1在氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein, ox-LDL）对内皮细胞产生一氧化氮（nitric oxide, NO）影响中的作用。方法：反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测LOX1mRNA的表达,酶法检测NO含量。结果：ox-LDL可上调内皮细胞LOX1mRNA的表达,同时诱发内皮细胞产生NO,且呈浓度依赖效应,应用LOX1抑制剂可抑制这一作用。结论：ox-LDL可诱发内皮细胞NO的产生,呈浓度依赖效应,LOX1介导了这一作用。     

阿魏酸钠对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮的影响

目的研究阿魏酸钠(SF)对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮(NO)的影响。方法用NO试剂盒分别测定氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)、VitE以及SF对培养的人脐静脉内皮细胞产生NO的影响。结果OX-LDL对培养的人脐静脉内皮细胞NO有明显的抑制作用,并且随着浓度的增加及作用时间的延长,抑制作用逐渐增强;SF和抗氧化剂VitE可明显减弱OX-LDL对内皮细胞NO产生的抑制作用。结论SF具有与抗氧化剂VitE相似的保护内皮细胞释放NO的作用。     

P21在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中的表达及依那普利对其表达的调节

目的：观察黄花倒水莲皂苷C抑制氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipopprotein，ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体（oxidized low desity lipoprotein receptor-1，LOX-1）表达的作用。方法：培养人脐静脉内皮细胞株（HUVEC-12），随机分为：对照组、ox-LDL（50mg／L）组和氧化型低密度脂蛋白（50mg／L）＋黄花倒水莲皂苷C（1，3，10μmol／L）组，通过RTPCR和Western blot蛋白印迹分析检测LOX-1 mRNA和蛋白的表达。结果：ox-LDL上调LOX-1 mRNA和蛋白的表达，黄花倒水莲皂苷C明显抑制ox-LDL诱导的LOX-1 mRNA和蛋白的表达，且呈浓度依赖性。结论：黄花倒水莲皂苷C明显抑制ox-LDL诱导的内皮细胞LOX-1 mRNA和蛋白的表达。     

天然及氧化型低密度和极低密度脂蛋白诱导培养的内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1 α和血管细胞粘附分子

为探讨天然及氧化修饰脂蛋白对培养的内皮细胞MIP-1α及VCAM-1mRNA表达的作用，取正常人新鲜血液，用超速梯度离心法分离出LDL和VLDL后，加Cu2+使之氧化，成为OX-LDL和OX-VLDL。培养人脐静脉内皮细胞(EC)，待其汇合后分别加入LDL、OX-LDL、VLDL、OX-VLDL，使其终浓度为25μg／m1，对照组不加脂蛋白。培养24h后，收集EC，用异硫氰酸胍法提取其总RNA，用地高辛标记的MIP-1α和VCAM-1cDNA探针进行斑点杂交。结果显示，培养的EC能表达MIP-1α和VCAM-1mRNA，当其暴露于LDL和VLDL后，其MIP-1α和VCAM-1mRNA表达轻度增加，而当EC暴露于OX-LDL和OX-VLDL后，其MIP-1αmRNA表达水平明显增高，分别为对照组的3．2倍和2．5倍；VCAM-1mRNA的表达分别为对照组的2．6倍和2．17倍。提示脂蛋白，特别是氧化修饰的脂蛋白，可促进EC表达MIP-1α和VCAM-1mRNA，在动脉内膜单核细胞的募集中起重要作用。     

脂多糖和氧化型低密度脂蛋白协同促进人内皮细胞表达细胞间黏附分子-1

目的探讨脂多糖(LPS)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达(HU-VEC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA以及p38蛋白激酶是否参与此过程。方法将生长至汇合的HUVEC分为对照组、LPS组、LPS+SB203580组、ox-LDL组、HUVEC+SB203580组、LPS+ox-LDL组。采用原位杂交检测其细胞间黏附分子-1 mRNA的表达。用免疫细胞化学法检测正常对照组、脂多糖组和氧化型低密度脂蛋白组p38蛋白激酶蛋白的表达。结果培养的HUVEC能表达较低水平的ICAM-1 mRNA。原位杂交显示各实验组的ICAM-1 mRNA明显高于对照组(P<0.01)。免疫细胞化学显示,p38蛋白激酶蛋白在对照组的细胞核阳性表达率为8.3%,当HUVEC暴露于LPS或ox-LDL后,细胞核阳性表达率升至38.5%或48.6%。结论LPS和ox-LDL能诱导HUVEC表达ICAM-1 mRNA,p38蛋白激酶可能参与了该过程。     

天然和氧化极低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞VCAM-1表达的影响

目的 探讨天然和氧化极低密度脂蛋白(n-VLDL，ox-VLDL)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达血管细胞粘附分子1(VCAM-1)的影响。方法 将n-VLDL和ox-VLDL作用于培养的HUVEC，用细胞酶联免疫吸附试验(cell ELISA)和单核细胞粘附试验检测VCAM-1蛋白在HUVEC的表达，用原位分子杂交检测VCAM-1 mRNA的表达。结果 正常培养的HUVEC表达VCAM-1，n-VLDL和ox-VLDL促进HUVEC表达VCAM-1，尤以ox-VLDL作用更强。单核细胞粘附试验显示，n-VLDL和ox-VLDL促进单核细胞向HUVEC粘附。结论 天然和氧化极低密度脂蛋白可能通过增强血管内皮细胞表达VCAM-1而促进血液单核细胞粘附于血管壁，从而在动脉粥样硬化的早期病变中起重要作用。     

2型糖尿病患者血清氧化型低密度脂蛋白和血液抗氧化能力分析

目的　通过对 5 0例 2型糖尿病患者血清甘油三酯 (TG)、胆固醇 (Chol)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL c)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL c)、氧化型低密度脂蛋白 (OX LDL)、载脂蛋白 (ApoA1、ApoB10 0 )及血液抗氧化能力 (AOC)分析 ,探讨2型糖尿病患者OX LDL与血液抗氧化状态的关系 ,寻找评价 2型糖尿病患者发生冠心病危险性的有效血液生化指标。方法　收集 5 0例经临床确诊的 2型糖尿病患者及 5 0例无心血管疾病、无糖尿病及无肾病人群的空腹血清 ,对血脂和血液AOC进行分析。结果　TG、Chol、HDL c、LDL c、ApoA1、ApoB10 0 两组比较无差异 (P >0 0 5 ) ;OX LDL 2型糖尿病组明显高于对照组 (P <0 0 1) ,血液AOC 2型糖尿病组明显低于对照组 (P <0 0 1)。结论　血清OX LDL及血液AOC分析有望成为评价 2型糖尿病患者发生冠心病危险性更灵敏、更有效的血液生化指标。     

活血注射液对ox-LDL诱导的单核-内皮细胞黏附作用的影响

目的观察活血注射液对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达及与人单核细胞黏附作用的影响。方法以培养HUVEC作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入ox-LDL制备细胞损伤模型。采用蛋白定量法检测HUVEC与单核细胞的黏附率;RT-PCR检测HUVEC中ICAM-1的mRNA表达;用流式细胞仪测定HUVEC中ICAM-1的蛋白表达。结果ox-LDL作用HUVEC后12、24h时,人单核细胞与HUVEC的黏附率显著升高,HUVEC中ICAM-1的mRNA和蛋白表达水平也均明显升高,均明显高于正常对照组(P<0.01),而活血注射液可明显降低人单核细胞与HUVEC的黏附率,以及显著降低ICAM-1的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01),这种作用随着剂量的增加而增强。结论活血注射液能通过下调内皮细胞表面黏附分子的表达抑制单核-血管内皮细胞黏附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,有利于减少或抑制动脉粥样硬化的形成。     

心脉神口服液对氧化型低密度脂蛋白介导的内皮细胞ICAM-1表达变化的影响

目的：探讨中成药制剂心脉神口服液对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)致血管内皮细胞（VEC）表面ICAM－1表达升高的保护作用。方法：以原代培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为研究对象，采用细胞培养，免疫荧光染色，中药血清药理学方法，免疫荧光细胞化学染色法等技术，观察ox-LDL对培养的VEC细胞间粘附分子－1（ICAM－1）表达的影响并研究心脉神口服液的保护作用。结果：培养液中加有ox-LDL的内皮细胞ICAM－1表达明显升高，预先或同时加入心脉神口服液可使ICAM－1表达降低，结论：心脉神口服液能浓度依赖性地拮抗ox-LDL致内皮细胞ICAM－1表达升高。     

不同类型维生素E对人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的:观察不同类型维生素E(α、γ、mixed-tocopherols)对氧化型低密度脂蛋白 (oxLDL)及重组人C反应蛋白 (rhCRP)诱导的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)表达的影响,以探讨不同类型维生素E的抗炎、抗动脉粥样硬化机制及不同效果. 方法: 体外培养HUVECs,分别加oxLDL、oxLDL α-tocopherol、oxLDL γ-tocopherol、oxLDL mixed-tocopherols、rhCRP、rhCRP α-tocopherol、rhCRP γ-tocopherol、rhCRP mixed-tocopherols孵育 24 h,采用细胞酶联免疫吸附(ELISA)、流式细胞、RT-PCR技术分别测定ICAM-1蛋白和mRNA表达水平. 结果: oxLDL和rhCRP均可诱导HUVECs的ICAM-1蛋白和mRNA表达增加,不同类型维生素E均可抑制oxLDL诱导的HUVECs的ICAM-1蛋白和mRNA表达,并呈浓度依赖性(50～200 μmol/L).与相同浓度的α、γ-tocopherol相比, mixed-tocopherols抑制作用最强.不同类型维生素E均不能抑制 rhCRP诱导的HUVECs的ICAM-1蛋白和mRNA表达.结论: 不同类型维生素E均可抑制oxLDL诱导的HUVECs的ICAM-1蛋白和mRNA表达,与α、γ-tocopherol相比,mixed-tocopherols对oxLDL诱导HUVECs表达ICAM-1的抑制作用最强.     

三七总皂苷对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞CD40, VCAM-1表达的影响

目的    探讨三七总皂苷(TPNS)对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）白细胞分化抗原40（CD40）、血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）表达的影响。方法    原代培养HUVECs。细胞分为空白组、刺激组、小剂量（100mg/L）TPNS组、大剂量（200mg/L）TPNS组及辛伐他汀组并予相应处理。采用MTT法测定HUVECs活性,实时定量RT-PCR检测VCAM 1的基因表达,Western blot 分析CD40蛋白表达量。结果    TPNS及辛伐他汀均可以升高HUVECs的活性（P＜0.05, P＜0.001）,下调HUVECs表达免疫炎症因子CD40 (P＜0.05, P＜0.01)及VCAM-1（P均＜0.001）的水平。且大剂量TPNS作用优于小剂量TPNS（P＜0.05）。结论    TPNS能够减轻oxLDL对内皮细胞的损伤,降低内皮细胞免疫炎症因子的表达,在防治动脉粥样硬化中具有重要作用。     

糖尿病性血管病变与血浆氧化低密度脂蛋白及细胞间黏附分子-1水平变化的关系

①目的 探讨糖尿病性血管病变与血浆低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）及可溶性细胞间黏附分子－１（ｓＩＣＡＭ－１）水平变化的关系。②方法 采用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）,检测了６０例２型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）病人和４８例健康人血浆ＯＸ－ＬＤＬ和ｓＩＣＡＭ－１水平变化。③结果 ＮＩＤＤＭ病人血浆ＯＸ－ＬＤＬ,ｓＩＣＡＭ－１水平明显增高,与对照组比较差异有极显著性（ｔ＝７．０２１,１１．２０３,Ｐ〈０．００１     

氨氯地平对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达的影响

目的观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（hUVEC-12）单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）mRNA表达的影响,以进一步探讨氨氯地平抗动脉粥样硬化的作用机制。方法筛选ox—LDL与hUVEC-12细胞孵育合适的处理浓度与时间,然后用不同浓度氨氯地平（0、0．1、1．0、10．0μmol／L）预孵育hUVEC-12后,与ox—LDL共同孵育,RT—PCR检测细胞MCP-1 mRNA表达的变化情况。结果筛选出ox—LDL与hUVEC-12共同孵育的合适浓度为50mg／L,时间为24h。氨氯地平可下调MCP-1 mRNA的表达,并且对其表达的影响呈现浓度依赖性。结论氨氯地平可下调ox—LDL诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA的表达。     

脱氢表雄酮对血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响

目的脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)是成人体内最为丰富的来源于肾上腺的甾体激素,文中探讨DHEA对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)所致血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响。方法以培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入ox-LDL或在试验体系中加入不同浓度的DHEA,测定人单核细胞系U937与HUVEC的黏附,检测内皮细胞条件培养基中一氧化氮(nitric oxide,NO)及单个核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)的含量,应用流式细胞仪检测内皮细胞表面黏附分子细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascularcell adhesion molecule-1,VCAM-1)及E-选择素的表达。将内皮细胞条件培养基作用于U937细胞,应用RT-PCR检测U937细胞CCR2、LFA-1以及VLA-4 mRNA的表达。结果 DHEA可明显抑制单核U937细胞与内皮细胞之间的相互黏附,明显促进内皮细胞NO合成,抑制MCP-1分泌,降低内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1的表达,且经DHEA作用后的内皮细胞条件培养基可明显抑制单核U937细胞CCR2、淋巴细胞功能相关抗原(lymphocyte function-associated antigen,LFA)-1以及非常晚期抗原(very late antigen,VLA)-4 mRNA的表达。结论 DHEA可通过抑制内皮细胞分泌趋化因子、下调内皮细胞表面黏附分子的表达,抑制内皮细胞对单核细胞的趋化及相互黏附,据此认为DHEA可能对血管内皮细胞具有保护作用。     

高密度脂蛋白对内皮细胞胆固醇流出的影响

目的 研究高密度脂蛋白(HDL)和氧化高密度脂蛋白(OX-HDL)对人脐静脉内皮细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达和胆同醇流出的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,并分别与100μg/ml HDL或100μg/ml ox-HDL温育24 h.设PBS为对照组.采用RT-PCR、液体闪烁计数法分别检测人脐静脉内皮细胞ABCA1的mRNA水平及细胞内胆固醇流出功能.结果 HDL组及ox-HDL组的ABCA1 mRNA表达水平分别较埘照组增高58%和23%.差异有统计学意义(P<0.05);ox-HDL组较HDL组的胆同醇流出率显著降低(P<0.01).结论 HDL可显著上凋人脐静脉内皮细胞的ABCA1表达并介导内皮细胞胆固醇流出;HDL经氧化修饰后对ABCA1表达的上调作用减弱.引起内皮细胞胆同醇外排障碍,是HDL氧化修饰后促进动脉粥样硬化发展的可能机制之一.

Abstract：

Objective To study the effects of high-density lipoprotein (HDL) and oxidized high-density lipoprotein (ox-HDL) on the expression of ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) and cholesterol efflux in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Methods In vitro cultured HUVECs were incubated in the presence of 100 μg/ml HDL or 100 μg/ml ox-HDL for 24 h, using PBS as the negative control. ABCA1 mRNA level and cholesterol efflux rate were determined using RT-PCR and a liquid scintillator, respectively. Results HDL and ox-HDL significantly elevated the level of ABCA1 mRNA by 58% and 23% relative to the control level, respectively (P<0.05). The cholesterol efflux rate in ox-HDL group was significantly lower than that in HDL group (P<0.01). Conclusion HDL increases ABCA1 expression and cholesterol efflux in HUVECs. Oxidative modification of HDL decrease cholesterol efflux by inhibiting the expression of ABCA1, suggesting a possible mechanism of ox-HDL in the pathogenesis of atherosclerosis.     

缺血性脑血管病病人血浆氧化修饰低密度脂蛋白的检测

①目的　探讨氧化修饰低密度脂蛋白 (OX LDL)与缺血性脑血管病的关系。②方法　应用酶联免疫吸附试验测定了 10 6例缺血性脑血管病病人血浆OX LDL含量。③结果　短暂性脑缺血发作 (TIA)组和脑梗死组血浆OX LDL水平均高于对照组 (F =14.6 7,q =5 .339.85 ,P <0 .0 1) ,且脑梗死急性期较恢复期明显升高(q =4.0 7,P <0 .0 5 )。④结论　血浆OX LDL水平增高可能与缺血性脑血管病的发生发展有密切关系。     

糖化LDL对人脐静脉血管内皮细胞SOD活性及基因表达的影响

目的 观察糖化低密度脂蛋白(gly-LDL)对人血管内皮细胞生长及抗氧化相关因子的影响,探讨糖尿病患者血管内皮损伤与gly-LDL的相关性及可能机制。方法 用完全培养基及不同浓度(G1组 0.06mg/L, G2组0.12mg/L, G3组0.24mg/L)的gly-LDL处理人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)24h、48h及72h,设对照组(Ctr),取细胞培养上清液检测SOD和MDA水平,同时用细胞划痕实验观察gly-LDL对内皮细胞迁移功能的影响,用实时半定量PCR(realtime quantitative PCR,RT-qPCR)方法测定Mn-SOD和eNOS的mRNA的表达情况。结果 与对照组相比不同浓度的gly-LDL均可抑制血管内皮细胞的迁移功能。较低或较高浓度的gly-LDL作用于人脐静脉内皮细胞时,随时间的增加SOD的活性及MDA的含量是升高的;中间浓度的gly-LDL作用于人脐静脉内皮细胞时,随时间的增加SOD活性是逐渐下降的,MDA含量是先增高后降低的。各组Mn-SOD的mRNA表达水平48h和72h均下调,eNOS的表达水平于24h和48h均下调,72h时上调。结论 Gly-LDL与糖尿病患者血管并发症可能存在一定的相关性,但不能肯定其是恶化因素之一。     

阿魏酸钠对氧化低密度脂蛋白所致的内皮细胞释放NO的影响

目的：分析阿魏酸钠的抗动脉粥样硬化作用机制，为临床治疗提供理论依据。方法：首先在体外进行低密度脂蛋白的氧化，然后分别与加有不同浓度的阿魏酸钠的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共同孵育，测定培养基上清液中NO的含量，从而观察阿魏酸钠对氧化低密度脂蛋白所致HUVEC释放NO的影响。结果：阿魏酸钠能明显抑制UVEC所致的NO下降作用，这种抑制作用无剂量依赖性。结论：阿魏酸钠的抗动脉粥样硬化作用机制可能通过NO发挥作用。     

血凝素样氧化低密度脂蛋白受体与内皮细胞p38丝裂素活化蛋白激酶关系的研究

目的探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)活化人脐静脉内皮细胞p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路中的作用。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用不同浓度的ox-LDL孵育,通过W estern印迹检测LOX-1、p38MAPK蛋白水平,逆转录聚合酶链法观察LOX-1 mRNA表达,并以LOX-1特异阻断性抗体(JTX92)预处理内皮细胞,检测p38MAPK蛋白水平。四氮唑蓝法观察ox-LDL对细胞活力的影响。结果ox-LDL引起内皮细胞形态结构的改变,而且抑制内皮细胞的生长(P<0.05);ox-LDL呈浓度依赖性地上调LOX-1蛋白和mRNA表达(均P<0.05),并呈浓度依赖性激活p38MAPK通路,不同浓度ox-LDL(25μg/m l,50μg/m l,100μg/m l)组p-p38MAPK蛋白质表达水平均明显高于对照组(48±7,79±15,113±14 vs 24±5,P<0.01);JTX92+ox-LDL(100μg/m l)组p-p38MAPK蛋白水平明显低于ox-LDL(100μg/m l)组,(58±13 vs 113±14,P<0.01)。结论ox-LDL通过LOX-1途径激活p38MAPK信号通路,LOX-1上调是ox-LDL致动脉粥样硬化的重要环节。