加味芍药甘草汤及含药血清对子宫腺肌病E2、ER及芳香化酶P450的影响

目的探讨加味芍药甘草汤及其含药血清治疗子宫腺肌病的深层作用机制。方法选取6例行全宫切除术的子宫腺肌病患者子宫病灶组织进行体外原代细胞培养,所培养病灶细胞采用免疫细胞化学法鉴定。将实验分为加味芍药甘草汤高浓度(20 g/L)及低浓度(10 g/L)组、加味芍药甘草汤含药血清组(简称含药血清组)、空白血清组、米非司酮组及空白对照组6组,各组药物分别干预病灶细胞24 h和48 h后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清雌激素(E2)的表达,采用免疫细胞化学法检测各组细胞雌激素受体(ER)及芳香化酶P450(P450arom)的表达。结果经免疫细胞化学法鉴定:共收集及培养成功的6例细胞均为子宫腺肌病病灶细胞。与空白对照组及空白血清组相比,含药血清组可明显降低细胞E2水平(P0.05);加味芍药甘草汤高低浓度组、含药血清组、米非司酮组24 h均可明显降低细胞ER水平(P0.05),其中米非司酮组总体降ER效果劣于加味芍药甘草汤高低浓度组及含药血清组(P0.05),加味芍药甘草汤高浓度组24 h降ER作用优于48 h(P0.05)。与空白血清及空白对照组相比,加味芍药甘草汤高低浓度组、含药血清组、米非司酮组24 h细胞P450arom水平明显降低(P0.05),且加味芍药甘草汤高浓度、低浓度24 h及含药血清24 h作用较米非司酮好(P0.05),加味芍药甘草汤低浓度组24 h作用优于48 h(P0.05)。总之,加味芍药甘草汤降ER及P450arom作用较米非司酮好,效果呈时效性,24 h优于48 h,无浓度依赖性。结论通过中药复方水提液及动物含药血清两种方式证实加味芍药甘草汤能降低子宫腺肌病病灶细胞ER、P450arom水平,阻断E2、P450arom正反馈环、弱化E2效应,可能是其治疗子宫腺肌病的机制之一。     

加味芍药甘草汤对人子宫腺肌病病灶细胞超微结构及细胞凋亡的影响

【目的】观察加味芍药甘草汤对人子宫腺肌病病灶细胞超微结构及凋亡率的影响。【方法】采用胶原酶消化法培养人子宫腺肌病病灶细胞,采用免疫细胞化学方法鉴定子宫腺肌病病灶细胞,将加味芍药甘草汤分为高、中、低浓度组(浓度分别为40、20、10 mg/mL),另设空白对照组及米非司酮组(浓度为1×10-5mol/L),各组药物作用于子宫腺肌病病灶细胞24、48 h后,采用透射电镜观察细胞超微结构,流式细胞术检测细胞凋亡率。【结果】电镜下加味芍药甘草汤及米非司酮干预后的细胞出现细胞核形态改变,胞浆中溶酶体增多,线粒体及内质网扩张等细胞凋亡早期特点。各组药物干预24、48 h后细胞凋亡率显著升高,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P0.05);米非司酮组、加味芍药甘草汤高浓度组细胞凋亡率与加味芍药甘草汤中、低浓度组比较差异均有统计学意义(P0.05);加味芍药甘草汤各浓度组干预后24 h与48 h比较,差异均有统计学意义(P0.05),具有一定的量效与时效关系。【结论】加味芍药甘草汤治疗子宫腺肌病的作用机制可能与改变人子宫腺肌病病灶细胞超微结构以提高细胞凋亡率有关。     

输卵管组织LIF及其受体LIFR的表达与输卵管妊娠的关系

目的:探讨白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)与输卵管异位妊娠的关系?方法:采用免疫组化技术检测11例非孕组和36例输卵管异位妊娠组输卵管组织中LIF和LIFR的表达水平,半定量分析其在各组间的表达差异?结果:无论是在输卵管腺上皮还是间质中,LIF在非孕组和异位妊娠组间的表达无明显差别;但是在输卵管腺上皮中,LIFR的表达异位妊娠组高于非孕组(P < 0.05);而在间质中,LIFR的表达输卵管妊娠组明显低于非孕组(P < 0.01)?结论:LIFR的异常表达可能与输卵管异位妊娠的发生密切相关?     

芍药甘草汤对哮喘大鼠STAT6与IL-13水平的影响

目的观察芍药甘草汤对哮喘大鼠信号传导和转录激活因子6(STAT 6)与白介素-13(IL-13)水平的干预作用,探讨其防治支气管哮喘的作用机制。方法 60只SD雄性大鼠随机分为正常对照组(NULL组)、模型组(OVA组)、地塞米松组(DXM组)及芍药甘草汤高(SG10组)、中(SG5组)、低(SG2.5组)剂量组,每组10只。除正常对照组外均行支气管哮喘造模,相应药物灌胃。检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞和嗜酸性粒细胞计数,免疫组化法测肺组织中STAT 6蛋白表达,ELISA法检测血浆中IL-13含量。结果与NULL组比较,OVA组哮喘大鼠肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数、嗜酸性粒细胞计数及气道上皮STAT 6表达和血浆IL-13水平均明显升高(P0.01)。DXM组及各剂量芍药甘草汤组BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞计数、气道上皮STAT 6表达和血浆IL-13水平较OVA组降低(P0.01),但仍高于NULL组(P0.01)。结论芍药甘草汤防治大鼠支气管哮喘的作用机制可能与抑制哮喘大鼠肺组织STAT 6表达,降低血浆IL-13水平,降低哮喘大鼠BALF中白细胞总数及嗜酸性粒细胞计数有关。     

食管鳞癌中转录信号传导子与激活子3活化及其表达的意义

目的探讨转录信号传导子与激活子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)及STAT3 mRNA表达在食管鳞癌中的可能作用。方法采用免疫组化和原位杂交方法检测60例食管鳞癌组织中STAT3、p-STAT3在蛋白及mRNA水平的表达情况,并与正常食管黏膜组40例进行比较。结果食管鳞癌组组织中STAT3、p-STAT3蛋白和STAT3 mRNA的表达均明显高于正常食管黏膜组(P<0.01);随着细胞的不断活化STAT3呈高表达,STAT3蛋白与p-STAT3蛋白表达具有一致性(r=0.735,P<0.05);STAT3蛋白与STAT3 mRNA的表达存在一致性(r=0.564,P<0.05)。结论 STAT3的持续性活化可能在食管鳞癌发生过程中起一定的作用。     

过表达白血病抑制因子增强子宫内膜癌细胞对化疗药物的耐受

摘要：目的 探讨在体外环境中,子宫内膜癌细胞高表达白血病抑制因子（LIF）后,对顺铂及紫杉醇的敏感性变化。方法 利用慢病毒在子宫内膜癌细胞（HEC-1B和RL95-2）中建立稳定过表达LIF的细胞模型,以空载体慢病毒感染细胞作为对照组,用逆转录荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和酶联免疫吸附试验验证LIF的表达。利用CCK-8观察LIF过表达对癌细胞活性的影响,利用Annexin V-FITC/PI法和JC-1法观察LIF过表达后,顺铂及紫杉醇诱导癌细胞凋亡及线粒体膜电位下降的情况。利用免疫印迹观察LIF过表达后,癌细胞中Bcl-2家族及STAT3通路蛋白的表达。利用荧光素酶报告基因活性检测观察LIF过表达后,癌细胞STAT3转录活性的变化。在过表达LIF的两子宫内膜癌细胞中沉默STAT3,以无义小干扰RNA序列转染细胞为对照组,观察顺铂及紫杉醇对细胞的杀伤作用。结果 过表达组的子宫内膜癌细胞（HEC-1B和RL95-2）较对照组表达更高水平的HLFmRNA及分泌更多的HLF蛋白（P<0.05）。LIF的过表达不影响两子宫内膜癌细胞的体外增殖活性（P>0.05）,但能增加癌细胞在顺铂及紫杉醇作用下的存活率和线粒体膜电位（P<0.05）。过表达 LIF 能增加两子宫内膜癌细胞中 Bcl-2、Bcl-xL 和p-STAT3的水平,降低Bax和Bad的水平,而不影响STAT3的水平;同时STAT3的转录活性增强（P<0.05）。在稳定表达LIF的两子宫内膜癌细胞中,沉默STAT3能显著增加顺铂及紫杉醇对细胞的杀伤作用（P<0.05）。结论 在体外环境中,稳定高表达LIF能增强宫内膜癌细胞对顺铂及紫杉醇的抵抗。     

实验性牙周改建中LIF和LIFR的表达变化

目的观察大鼠牙周改建中白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)与白血病抑制因子受体(leukemia inhibitory factor receptor,LIFR)的表达变化。方法选用24只6—7周龄雌性Wistar大鼠,每只大鼠上颌左右两侧分别为实验侧和对照侧,建立大鼠实验性牙移动的模型。将大鼠随机分成3组,分别在加力后3、7、14d处死动物。制备标本,用免疫组化染色法检测LIF和LIFR在大鼠牙周组织中的表达,并采用计算机图像分析软件Image J对各组LIF和LIFR在牙周组织中的表达强度进行定量分析。结果 LIF和LIFR在正常牙周膜中表达较弱,且主要分布在成纤维细胞、血管内皮细胞、破骨细胞、成骨细胞之中,加力后,实验组表达显著增加。且LIF和LIFR各天之间表达强弱各不相同。在压缩侧,LIF和LIFR的表达在第14天最强,其中LIF第14天的表达显著高于第7天(P<0.05);LIFR在第14天的表达亦显著高于第3天(P<0.01)和第7天(P<0.01)。在牵张侧,LIFR在第14天表达最强,且比第3天和第7天表达显著增高(均P<0.01),而LIF表达在各天之间无明显的统计学差异。结论 LIF和LIFR的表达呈规律性的变化,参与了牙齿移动过程中的牙周组织改建。     

芍药甘草汤对帕金森病大鼠脑内神经递质及肌强直的影响

目的:探讨芍药甘草汤对帕金森病大鼠脑内神经递质及肌强直的影响。方法:将76只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组12只,6-OHDA造模组64只(按照既往实验结果成模率约67%)。采用单侧纹状体损毁术建立帕金森病(Parkinson′s disease,PD)大鼠模型,随机分为模型组、美多芭组、芍药甘草汤组,每组各12只,分别予以美多巴(20 mg·kg~(-1))、芍药甘草汤(芍药62.5 g+甘草62.5 g)灌胃4周。治疗后4周进行大鼠自主活动度检测,采用肌电图记录PD大鼠腓总神经电生理改变,观察大鼠脑内神经递质多巴胺(dopamine,DA)、高香草酸(homovaniilic acid,HVA)、乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)含量的变化,并检测黑质酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞的表达情况。结果:美多芭组与芍药甘草汤组自由活动度比较无显著差异(P0.05),但两组自主活动度均显著高于模型组,且均低于正常对照组,差异均具有统计学意义(P0.05);治疗前,模型组、美多芭组、芍药甘草汤组近端、远端肌肉动作电位传导速度(motor conduction velocity,MCV)均显著低于正常对照组(P0.05),治疗后,美多芭组、芍药甘草汤组近端、远端肌肉动作电位MCV逐渐增高,至治疗第4周,美多芭组、芍药甘草汤、正常对照组的近端MCV比较无显著差异(P0.05),但3组均显著高于模型组(P0.05);芍药甘草汤组远端MCV高于美多芭组,美多芭组高于模型组(P0.05),但芍药甘草汤组与正常对照组比较无显著差异(P0.05);正常对照组脑黑质内神经元排列整齐,核仁清楚,模型组神经元部分肿胀,且核仁不明显,神经纤维排列紊乱,结构疏松;美多芭组相对模型组,其神经元肿胀减轻,排列较为整齐,芍药甘草汤组神经元则明显减轻,排列整齐。结论:芍药甘草汤可有效改善帕金森病大鼠脑内神经递质水平,并缓解肌强直,提高PD大鼠自主活动度。     

加味黄芪桂枝五物汤抑制线粒体凋亡预防奥沙利铂周围神经毒性机制

探讨加味黄芪桂枝五物汤对奥沙利铂诱导的周围神经毒性（OIPN）的预防作用及作用机制。方法 选取40只健康WISTA雌鼠,随机分为空白组、模型组、谷胱甘肽（GSH）组、加味黄芪桂枝五物汤组,每组各10只。模型组、加味黄芪桂枝五物汤组和GSH组在第1、2、8、9、15、16、22、23 d时重复腹腔注射奥沙利铂溶液(2.5 mg/kg,5%葡萄糖溶液稀释)进行OIPN大鼠造模,空白组给予相同体积5%葡萄糖溶液腹腔注射,GSH组在化疗当天及前后2 d 给予谷胱甘肽1.5 g/m 2/d尾静脉注射。加味黄芪桂枝五物汤组予加味黄芪桂枝五物汤灌胃 (10 mL/kg,每日1次),空白组、模型组、GSH组予0.9%生理盐水灌胃(10 mL/kg,每日1次)。第0、7、14、21、28 d运用VonFrey试验检测大鼠机械缩足反射阈值,第28 d处死大鼠分离大鼠脊髓及L4.5背根神经节,检测脊髓过氧化酶活性、背根神经节细胞的ROS荧光以及p53-Bax通路相关线粒体凋亡蛋白表达水平。结果 与空白组相比,模型组大鼠机械性缩足阈值持续降低（P＜0.01）,SOD、GSH-Px活性显著降低（P＜0.01）,MDA含量显著升高（P＜0.01）,背根神经节（DRG）细胞ROS荧光强度显著增强（P＜0.01）;与模型组相比,加味黄芪桂枝五物汤组及GSH组在机械性缩足阈值、过氧化酶活性及ROS荧光强度方面均优于模型组（P＜0.05）,且在机械性缩足阈值及过氧化酶活性方面加味黄芪桂枝五物汤组优于GSH组（P＜0.05）;加味黄芪桂枝五物汤组较模型组可以显著降低DRG细胞P53、Bax及Caspase-3蛋白的表达,提高Bcl-2蛋白的表达（P＜0.01）。结论 加味黄芪桂枝五物汤可通过抗氧化应激及抑制P53-Bax通路诱导的DRG细胞线粒体损伤来预防OIPN     

大承气汤对重症急性胰腺炎大鼠回肠组织JAK2/STAT3信号通路的影响

【目的】基于Janus激酶2(JAK2)/信号传导及转录激活因子3(STAT3)信号通路探讨大承气汤对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠道的保护作用。【方法】采用3.5%牛磺胆酸钠逆行胆胰管内注射制备SAP大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、JAK2抑制剂组(术前2 h给予鲁索替尼灌胃)、STAT3抑制剂组(术前2 h给予Stattic腹腔注射)、大承气汤组(术前2 h给予大承气汤灌胃),另设假手术组(逆行胆胰管内注射生理盐水);再将各组大鼠分为造模后3、6、12、18 h亚组。采用苏木素—伊红染色观察末端回肠组织的病理改变,逆转录—定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测回肠组织JAK2 mRNA、STAT3mRNA表达,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测回肠组织p-JAK2蛋白、p-STAT3蛋白表达。【结果】SAP大鼠肠组织病理损害严重,JAK2 mRNA、STAT3 m RNA、p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白过度表达;大承气汤、JAK2抑制剂和STAT3抑制剂可明显保护肠道结构,抑制JAK2 m RNA、STAT3 m RNA、p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白过度表达。【结论】活化的JAK2/STAT3通路在SAP肠损害中起重要作用。大承气汤可能通过抑制活化的JAK2/STAT3通路保护SAP大鼠肠道。     

电针促进加味芍药甘草汤缓解大鼠脑卒中痉挛状态的疗效及作用机制

目的 探讨电针联和加味芍药甘草汤对脑卒中痉挛状态(SCA)大鼠神经营养因子及突触可塑性相关蛋白的影响.方法 通过两次随机分组,分为空白组、假手术组、模型组、针药组、加味芍药甘草汤组、电针组、巴氯芬组,遴选合格的SD大鼠入组,每组9只.采用改良Zea-Longa线栓法联合内囊注射N-甲基-D-天冬氨酸受体法制备脑卒中肢体痉挛大鼠模型,行为学评分确认模型成功后,分别对电针组(双侧阳陵泉、曲池行电针,1次30 min,1次/d,持续5 d)、加味芍药甘草汤组(加味芍药甘草汤水煎剂1 d/次,1次100 g/kg体质量,持续5 d)、巴氯芬组(巴氯芬片水溶液1 d/次,1次2.7 g/kg体质量,持续5 d)、针药组(加味芍药甘草汤灌服,再行电针治疗,持续5 d)进行干预.通过动物实验观察电针治疗对脑卒中痉挛状态SD大鼠的神经损伤情况,皮质运动区突触超微形态变化以及大脑皮质内神经营养因子(BDNF、Trkb)、突触可塑性相关蛋白(SYN、PSD95)表达的影响,干预后行为学检测的神经损伤情况,电镜观察突触神经元的超微结构,采用逆转录-聚合酶链反应检测和蛋白免疫印迹法检测皮质中BBDNF、Trkb、SYN、PSD95相关mRNA与蛋白的表达.结果 与正常组相比,模型组Zealonga神经功能评分增高(P＜0.01);镜下观察突触数量减少明显,囊泡数量减少密度不均,前后膜及间隙发生融合界限模糊,突触后细胞终末胞质变性溶解显著,突触后致密带的密度也下降,BDNF、Trkb、SYN、PSD95 mRNA与蛋白的表达降低(P＜0.01).与模型组比较,各治疗组评分降低(P＜0.05),各治疗组突触结构明显缓解,BDNF、Trkb、SYN、PSD95 mRNA与蛋白的表达升高(P＜0.05,P＜0.01).各治疗组比较,评分无差异(P＞0.05),针药组突触细胞囊泡明显成形,界限清晰,间隙规则.针药组与巴氯芬组BDNF、Trkb、SYN、PSD95 mRNA与蛋白的表达升高明显(P＜0.05,P＜0.01).结论 电针联合加味芍药甘草汤能下调SCA大鼠神经营养因子(BDNF、Trkb)及突触可塑性相关蛋白(SYN、PSD95)的表达,从而更大程度上调节脑卒中痉挛状态的恢复.     

补肾调经方在种植窗期经STAT3信号通路改善超促排卵小鼠胚胎着床的作用及机制

目的观察补肾调经方对控制性超促排卵(COH)小鼠种植窗期子宫内膜信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号通路的影响,探讨其改善胚胎着床的作用及机制。方法昆明小鼠60只,随机分为模型组、补肾调经方组和正常组,每组20只。妊娠第4天每组处死10只小鼠,放射免疫法检测血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)水平,Western blot法检测子宫内膜白血病抑制因子(LIF)、磷酸化信号转导和转录活化因子3(P-STAT3)蛋白的含量,免疫组化法检测子宫内膜瘦素及瘦素受体(OB-R)的表达。妊娠第8天处死各组剩余小鼠,观察平均胚胎着床数。结果与正常组比较,模型组小鼠血清E_2降低(P0.05),P升高(P0.01);子宫内膜LIF、P-STAT3的含量下降(P0.01),内膜上皮细胞瘦素及OB-R蛋白的表达降低(P0.01);平均胚胎着床数减少(P0.01)。与模型组比较,补肾调经方组小鼠血清P降低(P0.05);子宫内膜LIF、P-STAT3蛋白的含量升高(P0.01),内膜上皮细胞瘦素表达增加(P0.05);平均胚胎着床数增多(P0.01)。结论补肾调经方可改善COH小鼠胚胎着床,其机制可能与调控种植窗期子宫内膜STAT3信号通路相关蛋白有关。     

AZD9291与STAT3抑制剂对肺癌细胞H1975的协同效应及机制

目的 探讨AZD9291作用于H1975肺癌细胞后细胞内细胞外调节蛋白激酶(ERK)、蛋白激酶B(AKT)和信号传导及转录激活因子3(STAT3)信号通路变化,联合STAT3抑制剂后效应及其可能机制.方法 同浓度单药AZD9291作用于H1975后,Western blot检测磷酸化及非磷酸化STAT3、 ERK、AKT蛋白的表达.MTT法检测AZD9291与STAT3抑制剂单药及联合对细胞增殖的影响.流式细胞术检测单药及联合对细胞凋亡的影响.Western blot检测AZD9291联合 STAT3抑制剂后磷酸化及非磷酸化STAT3蛋白变化情况.结果 单药AZD9291作用细胞后,p-ERK、p-AKT表达降低, p-STAT3增高.两药联合可显著抑制H1975细胞的增殖,强于单药组(P<0.05),表现为协同作用(联合指数<1).双药联合显示出更强的诱导凋亡的作用.联合组与单药组相比下调p-STAT3蛋白作用.结论 AZD9291和STAT3抑制剂联合用药对H1975的增殖有明显抑制作用并可以促进其凋亡的发生,具有协同作用,主要机制为下调p-STAT3蛋白表达.     

基于IL-6/STAT3信号通路研究清热排毒胶囊对急性痛风性关节炎模型大鼠淋巴细胞增殖的影响

目的基于IL-6/STAT3信号通路研究清热排毒胶囊对急性痛风模型大鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响。方法将60只大鼠随机分为空白组、模型组、双氯芬酸钠缓释片组,清热排毒胶囊低、中、高组。各组给与相应药物灌胃7天,于第5日灌胃给药1 h后采用MSU溶液踝关节腔注射制备大鼠急性痛风性关节炎模型。各组大鼠于造模后48 h处死并取材。通过酶联免疫吸附法(Elisa)检测各组大鼠踝关节液中IL-6的表达水平;通过CCK8检测脾脏淋巴细胞增值率;通过Western blot检测STAT3及p-STAT3表达水平。结果与模型组比较,清热排毒胶囊各剂量组和戴芬组大鼠踝关节浸出液中IL-6表达水平均显著降低(P0.05或P0.01),脾脏淋巴细胞增殖率降低(P0.05),STAT3、p-STAT3表达水平降低(P0.05)。结论清热排毒胶囊通过抑制IL-6/STAT3通路激活水平降低大鼠踝关节组织中淋巴细胞增殖来发挥抗炎作用。     

芍药甘草汤对哮喘大鼠辅助性T细胞17及其细胞因子白细胞介素-17的影响

[目的]观察芍药甘草汤对支气管哮喘SD大鼠辅助性T细胞(T helper cells,Th)17及白细胞介素-17(interleukin17,IL-17)的干预情况,探讨芍药甘草汤防治哮喘的作用机制。[方法]雄性SD大鼠40只,随机均分为正常对照组、模型组、芍药甘草汤组、地塞米松组、中西医结合组,每组8只。除正常对照组外其余各组大鼠以卵白蛋白致敏并诱发哮喘以制作模型。正常对照组和模型组生理盐水灌胃,其余各组给予对应药物。实验结束后对大鼠左肺行肺泡灌洗术,肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)细胞计数后离心取细胞进行瑞氏染色细胞分类计数。用酶联免疫法测定肺匀浆中IL-17的水平,用流式细胞仪检测脾脏单个核细胞液中Th17细胞含量。[结果]与模型组比较,芍药甘草汤组、地塞米松组及中西医结合组均可显著降低BALF细胞总数和嗜酸性粒细胞(P0.01),同时能显著降低Th17和IL-17水平(P0.01),地塞米松组大鼠IL-17表达较芍药甘草汤组及中西医结合组降低(P=0.049和0.006),地塞米松组大鼠Th17表达与芍药甘草汤组比较差异无统计学意义(P0.05)。[结论]芍药甘草汤防治哮喘的作用机制可能与其调节哮喘大鼠Th17细胞及其IL-17的作用有关。     

白头翁汤对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠组织mTORC1-STAT3-COX-2信号通路的影响

  目的  探讨白头翁汤治疗溃疡性结肠炎(UC)的可能作用机制。  方法  40只C57BL/6雌鼠随机分为空白组、模型组、白头翁汤给药组及雷帕霉素给药组。采用3.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液构建小鼠UC模型。造模同时进行给药处理。白头翁汤组每日给予6.83 g·kg-1白头翁汤灌胃, 雷帕霉素组每日用2 mg·kg-1雷帕霉素药液进行腹腔注射, 空白组和模型组每日给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。记录小鼠每日体质量变化及粪便性状, 7 d后处死小鼠。测量结肠长度并观察结肠组织病理学变化。采用流式细胞术检测小鼠血清炎症因子含量, 采用免疫印迹法检测结肠组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、转录激活因子3(STAT3)、核糖体S6蛋白激酶(P70S6K)及其磷酸化蛋白表达, 免疫组化法检测结肠组织中磷酸化P70S6K的表达, qPCR检测结肠组织环氧化酶(COX-2) mRNA表达水平。  结果  与空白组相比, 模型组小鼠体质量减轻, 结肠长度缩短、疾病活动指数(DAI)和组织病理学评分升高(P < 0.001), 血清中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量升高(P < 0.001), 结肠组织中COX-2 mRNA表达水平、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/P70S6K、p-STAT3/STAT3均升高(P < 0.01,P < 0.001)。与模型组相比, 白头翁汤组和雷帕霉素组小鼠上述表型症状均得到改善, 血清中IL-6和TNF-α含量下降(P < 0.01,P < 0.001), 结肠组织中p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/P70S6K、p-STAT3/STAT3和COX-2 mRNA表达减少(P < 0.05,P < 0.01,P < 0.001)。  结论  白头翁汤能有效预防DSS诱导的小鼠结肠炎症, 其作用机制可能与抑制mTORC1-STAT3-COX-2信号通路有关。      

凉膈散对内毒素致急性肺损伤大鼠信号转导与转录激活子1 表达的影响

目的观察凉膈散对内毒素致急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中的信号转导与转录激活子1(STAT1)的影响及其作用机制。方法静脉注射内毒素脂多糖(LPS)制作大鼠急性肺损伤模型。将实验动物随机分为空白组、LPS组、LPS+凉膈散高、中、低剂量组、LPS+地塞米松组,LPS组又分为致伤后1、2、4、8、16h不同时间点组,用蛋白免疫印迹法测定大鼠肺组织STAT1及磷酸化STAT1的表达。结果与空白组比较,LPS组STAT1蛋白在4h、p-STAT1蛋白在2h表达最显著(P<0.01),凉膈散各组及地塞米松组在2、4、8h能显著下调STAT1及p-STAT1蛋白的表达,与LPS组比较,有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论内毒素致急性肺损伤中存在STAT1异常表达,凉膈散各组通过下调STAT1及p-STAT1的表达,从而减轻LPS所致的急性肺损伤,这可能是凉膈散治疗急性肺损伤的机制之一。     

2型糖尿病大血管病变患者血清诱导的人脐静脉内皮细胞中JAK2/STAT3信号通路的表达

目的 探讨Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在2型糖尿病大血管病变发病机制中的作用.方法 取健康志愿者、单纯2型糖尿病患者和2型糖尿病大血管病变患者的血清孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24 h,通过给予JAK2特异性抑制剂AG490阻断JAK2/STAT3信号通路,并将细胞按不同处理方式分为对照组(NC组)、单纯糖尿病组(DM组)、糖尿病大血管病变组(DV组)、单纯糖尿病+AG490组(DM+AG490组)及糖尿病大血管病变+AG490组(DV+AG490组),各30例.采用实时定量PCR技术检测各组细胞JAK2、STA T3、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体(FLT1)mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测JAK2、STAT3和磷酸化STAT3 (p-STAT3)蛋白表达量.结果 与NC组比较,DM组和DV组HUVEC细胞内JAK2、STA T3mRNA和JAK2、p-STAT3的蛋白表达水平均上调(P＜0.05),且DV组JAK2、STA T3 mRNA和JAK2、p-STAT3蛋白表达水平均高于DM组(P＜0.05).DM+AG490组和DV+AG490组的JAK2、STA T3 rnRNA和JAK2、p-STAT3蛋白表达水平分别低于DM组、DV组(P＜0.05).与NC组和DM组比较,DV组VEF和FLT1 mRNA的表达水平上调(P＜0.05);而与DV组比较,DV+AG490组VEGF和FLT1 mRNA的表达水平均下调(P＜0.05).结论 JAK2/STAT3信号通路可能参与2型糖尿病大血管病变的发病过程.     

miR-93-5p对非小细胞肺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的研究miR-93-5p对非小细胞肺癌A549细胞增殖和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养非小细胞肺癌细胞和正常肺细胞,检测细胞中miR-93-5p、P53表达水平,将A549细胞分为miR-93-5p低表达(miR-93-5p inhibitor)组、阴性对照(NC)组和空白对照(CK)组,转染48 h后,CKK-8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移能力,生物信息学预测P53是miR-93-5p的直接靶标,进一步采用双荧光素酶实验进行验证,蛋白免疫印迹(Western Blot)检测miR-93-5p低表达对P53蛋白表达及STAT3信号通路相关蛋白表达的影响。结果与正常肺细胞比较,H1299、HCC827、A549肺癌细胞中miR-93-5p表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05),P53表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);转染miR-93-5p inhibitor后,A549细胞中miR-93-5p、p-STAT3、JAK、STAT3表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05),P53相对表达量增加,差异有统计学意义(P0.05);与CK组、NC组相比,A549细胞的增殖、迁移能力均下降,差异有统计学意义(P0.05);TargetScan数据库预测显示P53是miR-93-5p的直接靶标,双荧光素酶报告基因试验证实二者存在靶向关系。Western Blot结果显示:过表达P53后,与CK组、NC组相比,A549细胞中P53蛋白相对表达量增加,差异有统计学意义(P0.05),p-STAT3、JAK、STAT3蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 MiR-93-5p可通过靶向P53调控STAT3信号通路的激活,进而调控肺癌A549细胞的增殖与迁移。