过表达白血病抑制因子增强子宫内膜癌细胞对化疗药物的耐受

摘要：目的 探讨在体外环境中,子宫内膜癌细胞高表达白血病抑制因子（LIF）后,对顺铂及紫杉醇的敏感性变化。方法 利用慢病毒在子宫内膜癌细胞（HEC-1B和RL95-2）中建立稳定过表达LIF的细胞模型,以空载体慢病毒感染细胞作为对照组,用逆转录荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和酶联免疫吸附试验验证LIF的表达。利用CCK-8观察LIF过表达对癌细胞活性的影响,利用Annexin V-FITC/PI法和JC-1法观察LIF过表达后,顺铂及紫杉醇诱导癌细胞凋亡及线粒体膜电位下降的情况。利用免疫印迹观察LIF过表达后,癌细胞中Bcl-2家族及STAT3通路蛋白的表达。利用荧光素酶报告基因活性检测观察LIF过表达后,癌细胞STAT3转录活性的变化。在过表达LIF的两子宫内膜癌细胞中沉默STAT3,以无义小干扰RNA序列转染细胞为对照组,观察顺铂及紫杉醇对细胞的杀伤作用。结果 过表达组的子宫内膜癌细胞（HEC-1B和RL95-2）较对照组表达更高水平的HLFmRNA及分泌更多的HLF蛋白（P<0.05）。LIF的过表达不影响两子宫内膜癌细胞的体外增殖活性（P>0.05）,但能增加癌细胞在顺铂及紫杉醇作用下的存活率和线粒体膜电位（P<0.05）。过表达 LIF 能增加两子宫内膜癌细胞中 Bcl-2、Bcl-xL 和p-STAT3的水平,降低Bax和Bad的水平,而不影响STAT3的水平;同时STAT3的转录活性增强（P<0.05）。在稳定表达LIF的两子宫内膜癌细胞中,沉默STAT3能显著增加顺铂及紫杉醇对细胞的杀伤作用（P<0.05）。结论 在体外环境中,稳定高表达LIF能增强宫内膜癌细胞对顺铂及紫杉醇的抵抗。     

自拟九味茶治疗代谢综合征临床观察

目的观察自拟九味茶治疗代谢综合征的临床疗效。方法将60例代谢综合征患者随机分为治疗组和对照组（各30例）,治疗组予自拟九味茶治疗,对照组予卡托普利片治疗,疗程均为3个月。观察两组治疗前后体质量指数、血压、空腹血糖（FBG）、血胆固醇（TG）、三酰甘油（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）及中医证候积分等变化。结果治疗组治疗后体质量指数、收缩压、舒张压均较治疗前降低（P〈0.01）,而对照组治疗后仅收缩压降低（P〈0.05）。治疗组体质量指数下降幅度大于对照组（P〈0.01）。治疗组治疗后总胆固醇、三酰甘油较治疗前降低（P〈0.01）,且三酰甘油低于对照组（P〈0.05）。治疗组治疗后头晕、乏力、胸闷、心悸、口干、头痛等积分及总积分减少（P〈0.01）,且除失眠外,两组各项指标积分及总积分均低于对照组（P〈0.05,P〈0.01）。结论自拟九味茶具有改善代谢综合征的作用。     

补骨脂定对骨髓间充质干细胞向癌相关成纤维细胞分化的抑制作用

目的探讨不同来源的间充质干细胞(MSCs)在癌细胞诱导下分化成癌相关成纤维细胞(CAFs)的情况,观察补骨脂定对人骨髓间充质干细胞(h BMSCs)和人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)向CAFs分化的影响。方法利用Transwell小室,建立h BMSCs和h UCMSCs与4种女性特发恶性肿瘤细胞(BT-549、HEC-1B、Hela和SK-OV-3)共培养模型。梯度浓度的补骨脂定处理h BMSCs和h UCMSCs后,用Compu Syn软件计算半数抑制浓度(IC50),后续用10μmol·L-1补骨脂定处理各组细胞。用细胞增殖毒性(CCK-8法)检测细胞的增殖活性;流式细胞术分析细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;用免疫印迹检测细胞中p-JAK2和p-STAT3表达水平。结果补骨脂定对h BMSCs和h UCMSCs的IC50分别是477.34和364.83μmol·L-1;在10μmol·L-1浓度下,对两种细胞活性的抑制率分别为(3.77±1.65)%和(3.70±2.11)%,均小于5%。h BMSCs与4种癌细胞共培养后,h BMSCs中α-SMA表达阳性率上升,肿瘤细胞的增殖活性增强,其p-JAK2和p-STAT3的表达水平上升;补骨脂定能显著抑制共培养体系中的上述现象。在共培养体系中,h UCMSCs中α-SMA表达阳性率不变,癌细胞的增殖活性却受抑制,其p-JAK2和p-STAT3的表达下降;补骨脂定不影响h UCMSCs中α-SMA、p-JAK2和p-STAT3的表达,但能增强h UCMSCs对癌细胞活性的抑制作用。结论在Transwell共培养环境中,补骨脂定可抑制h BMSCs向CAFs分化,降低癌细胞恶性增殖活性。     

补骨脂定破坏LIF自分泌增强子宫内膜癌细胞对顺铂敏感

目的探讨补骨脂定对耐顺铂子宫内膜癌细胞LIF自分泌的影响,判断补骨脂定与顺铂联用的效应。方法利用梯度顺铂诱导,在子宫内膜癌细胞(HEC-1B和RL95-2)中,建立耐顺铂细胞(HEC-1B-CisR和RL95-2-CisR),用逆转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和酶联免疫吸附试验验证LIF的表达。在耐顺铂细胞中沉默LIF,利用Annexin V-FITC/PI法观察顺铂对细胞的杀伤作用。利用RT-qPCR检测,54种香豆素化合物处理耐顺铂细胞后,LIF的表达情况,筛选出对LIF表达抑制最为显著的化合物(补骨脂定)。利用CCK-8法结合CompuSyn软件计算并评价,补骨脂定与顺铂对两耐药细胞联合用药的效应。结果耐顺铂细胞(HEC-1B-CisR和RL95-2-CisR)对顺铂的耐药指数(RI)分别是6.30和5.76,相对于亲代细胞(HEC-1B和RL95-2),耐顺铂细胞表达并分泌更多LIF;沉默LIF能显著增强顺铂对两耐顺铂细胞的杀伤作用。在54种香豆素化合物中,10μmol·L^-1补骨脂定能显著抑制两耐顺铂细胞中LIF的表达与分泌,但并不显著抑制两耐顺铂细胞的活性。补骨脂定与顺铂联用,对耐顺铂细胞的两药联合用药指数(CI)分别为0.53和0.39。结论在体外环境中,补骨脂定破坏LIF自分泌增强子宫内膜癌细胞对顺铂敏感。