P53 gene mutations in non-Hodgkin’s lymphoma

Summary To understand P53 gene change of non-Hodgkin’s lymphoma (NHL) and human malignant lymphoma cell lines, the exons 5–7 of 29 patients with NHL and 9 kinds of human malignant lymphoma cell lines were studied by silver staining PCR-SSCP technique. Three cases of P53 gene point mutation was found in 29 cases of NHL. Mutation developed in exon 5 in 2 cases, and in exon 6 in 1 case. They were all diffuse lymphoma. In mutation cases, B-cell lymphoma accounted for 2 cases and the other one was T-cell lymphoma. There was no P53 gene mutation in low-grade follicular lymphoma. Seven strains out of 9 kinds of lymphoma cell lines had P53 gene point mutation. One strain had the mutation in exon 5; 5 strains in exon 6 and 1 strain in exons 5, 6, 7. There was a high mutation rate in lymphoma cell lines and low mutation rate in NHL patients. P53 gene plays an important role in lymphoma cell line establishment, cell regeneration and disease evolution. This project was supported by national initiative programs for scholars coming back from other countries (No. 95–135).     

淋巴细胞性白血病／淋巴瘤bcl—2基因重排的研究

目的：探讨ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排的临床意义。方法：应用多聚酶链反应技术检测９种恶性淋巴瘤细胞系和不同类型淋巴系统恶性肿瘤临床标本中ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排情况。结果：２种细胞系,１例慢性淋巴细胞白血病及６例非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）有ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排,其中,３６．４％滤泡型ＮＨＬ及１８．２％弥漫性ＮＨＬ有重排。ｂｃｌ－２基因断裂点绝大多数（８／９）位于主要断裂区（ＭＢＲ）。结论：ｂｃ     

非霍奇金淋巴瘤中p53基因突变情况研究

目的探讨非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin′s Lymphoma,NHL)中p53基因第5~8外显子突变情况。方法采用PCR-SSCP法对47例NHL进行p53基因第5~8外显子的点突变研究。结果p53基因第5~8外显子总突变率为48.94%(23/47)。其中第6外显子的突变率最高为17.02%,其次为第8外显子,突变率为12.87%;高度恶性组和低度恶性组突变率分别为50.00%(12/24)、34.78%(8/23)(P>0.05);T细胞和B细胞突变率分别为39.29%(11/28)、47.37%(9/19)(P>0.05)。结论NHL中存在较高p53基因突变率,提示其突变可能参与了NHL的发生发展。高度恶性组p53基因突变倾向于高发。     

食管癌前病变P53肿瘤抑制基因突变分析

利用聚合酶链反应－单链构型－ＤＮＡ序列测定技术对食管癌高发区河南辉县和林县居民食管癌前病变和癌组织进行Ｐ５３肿瘤抑制基因第５，６，７和８外显子突变分析。在３７例非癌患者活检组织中共发现８例突变。其中１例发生在正常上皮，３例发生在基底细胞增生，４例发生在间变。突变均发生在第５外显子。３例在１７５密码子，２例在１７６密码子，其余３例分别在１５９，１３２和１３５密码子，２９例鳞癌组织检查发现１６例Ｐ５３基因突变（５５％）。突变多分布在第５和７外显子。点突变中，７５％为碱基转换，２５％为碱基颠换。结果提示Ｐ５３基因突变在食管癌的早期阶段已发生。     

肺癌组织 p53 基因突变的研究

目的：探讨肺癌发生的分子遗传学机理，了解肺癌中ｐ５３基因突变的情况。方法：采取聚合酶链反应（ＰＣＲ）及聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）结合银染技术，对２０例肺癌组织中ｐ５３基因外显子５～８进行了突变分析。结果：ｐ５３基因突变１２例，占总人数６０％（１２／２０），分布于外显子５～８。其中第７外显子６例，第８外显子４例，第５、６外显子各１例。鳞癌突变率５０％（３／６），腺癌突变率６０％（６／１０），小细胞肺癌突变率７５％（３／４）。结论：ｐ５３基因突变与肺癌的发生发展有关。     

卵巢恶性肿瘤p53基因5—7外显子突变及蛋白阳性的生物学意义

目的比较研究卵巢恶性肿瘤p53基因第5,6,7外显子突变与p53基因蛋白的过度表达和临床生物学行为的相关性.方法对50例卵巢恶性肿瘤及10例良性肿瘤石蜡切片进行p53蛋白免疫组化检测,其中23例卵巢恶性肿瘤的新鲜标本进行了p53基因第5,6,7外显子PCRSSCP检测.结果50例卵巢恶性肿瘤中12例p53蛋白阳性表达24%(12/50).上皮癌29%(9/28)生殖细胞肿瘤10%(1/10)间质细胞瘤25%(2/8),转移瘤25%(1/4)在23例标本PCRSSCP检测中突变率为35%(8/23)第5,6,7外显子突变率分别为9%(2/23).9%(2/23).17%(4/23).两者均阳性者为2例,即PCR-SSCP检测和蛋白表达均阳性第6,7外显子各1例.结论①卵巢恶性肿瘤存在p53基因突变蛋白的过度表达,但突变与蛋白阳性表达并非完全一致;②p53基因突变及其蛋白过度表达与卵巢恶性肿瘤组织类型和临床分期无明显相关件.     

应用非同位素PCR-SSCP方法检测乳腺癌p53基因点突变

目的　探讨乳腺癌组织中p53基因点突变。方法应用非同位素PCR -SSCP技术检测 4 8例石蜡包埋乳癌组织中p53基因点突变。结果　 4 8例乳腺癌中 2 0例出现异常电泳 ,表明这些病例相应DNA片段中发生了点突变 ,其中 8例位于第 5- 6外显子 ,9例位于第 7外显子 ,3例位于第 8外显子。免疫组化检测突变p53蛋白的表达 2 5例为阳性 ( 52 % ) ,其中 5例SSCP未发现基因突变 ,突变可能发生在所检测的基因片点以外。结论　非同位素PCR -SSCP是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法 ,特别适用于大量标本基因点突变的筛选 ;p53基因点突变与突变型蛋白表达呈相关关系     

食管癌多中心起源理论的分子学基础研究

采用免疫组化选择性ＤＮＡ序列分析方法，对来自河南省林州市２１例原发性食管鳞癌患者食管癌组织和癌旁基底细胞增生、间变和原位癌病灶的肿瘤抑制基因Ｐ５３进行比较研究。结果：２１例原发食管癌病灶中发现１４例Ｐ５３基因突变（６７％）。突变部位分别为第５外显子（４例，占２９％）、第６外显子（１例，占７％）、第７外显子（２例，占１４％）和第８外显子（６例，占４２％）。１例突变发生在第４内显子（７％）。对１４例癌旁上皮基底细胞增生、间变和原位癌病灶的Ｐ５３基因分析发现均有不同数量的基因突变。间变及原位癌组织的Ｐ５３基因突变与癌组织极为相似，但是基底细胞增生病变的Ｐ５３基因突变与癌组织不同，其突变部位均发生在第５外显子。提示：食管上皮不同部位的孤立病灶出现相似的分子学改变，支持食管癌多中心起源的理论，随着病变从基底细胞增生到间变到原位癌和早期浸润癌的发展，这些分子学变化可能在癌变的不同阶段起重要作用。     

青石棉诱发的转化细胞p53基因突变分析

为探讨青石棉与Ｐ５３基因突变之间的关系，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析方法，对８株青石棉衣发的ＢＡＬＢ／ｃ ３Ｔ３转化细胞进行Ｐ５３基因的突变检测和分析。结果：从８株转化细胞Ｐ５３基因上的１１个显子中共发现７处突变，其中２个位于外显子４－６，５个位于外显子９－１１；大多数检出的异常表现为比野生型多１条带；突变随机地分布于各个青石棉剂量组。     

p53基因结构和表达的改变与慢性粒细胞性白血病急变的关系

应用PCR- SSCP、Northern blot和免疫细胞化学方法,对30例临床各期慢性粒细胞性白血病(CML)和K562、HL-60细胞系进行p53基因突变与表达的研究。结果发现,17例慢性期CML中仪1例有外显子6的突变和细胞内P53蛋白的聚积,所有病例均可检测到p53的mRNA表达。而4例加速期和9例急变期CML中各有2例分别在外显子5、6、7上发现突变,有p53表达的仅7例,1例加速期患者的P53蛋白呈强阳性。K562和HL-60细胞系中P53蛋白和mRNA均呈阴性。CML恶化进程中p53基因突变和表达频率的改变表明P53基因的改变至少在部分CML急变中起着重要作用。     

Alterations of FHIT gene and P16 gene in nickel transformed human bronchial epithelial cells

INTRODUCTION Nickel is a widely distributed occupational and environmental pollutant. Epidemiological studies demonstrated that the incidence of respiratory tract cancer is correlated with worksite exposure to nickel. Nickel is also a potent carcinogen in laboratory animals. The International Agency for Research on Cancer (IARC) has classified nickel compounds as confirmed human carcinogens[1]. However, the mechanism of nickel carcinogenesis remains unknown. Insoluble nickel compounds…     

48例非霍奇金淋巴瘤中的p53基因突变

采用ＡＢＣ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法在４８例ＮＨＬ中研究ｐ５３基因外显子５～８中发生突变的类型、频率与突变型ｐ５３蛋白的表达以及它们与病理分型、恶性程度的相关性。结果：突变型ｐ５３蛋白在ＮＨＬ中的阳性率为４１．７％，其中在弥漫型大细胞性淋巴瘤（ＤＬＣＬ）为７５％，在非ＤＬＣＬ为３５％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５）；在ｐ５３蛋白表达阳性的ＮＨＬ中ＰＣＲＳＳＣＰ阳性主要见于ＤＬＣＬ，检出率为１５％，在非ＤＬＣＬ中ＰＣＲ－ＳＳＣＰ均为阴性（Ｐ＜０．０５）。表明国人ＮＨＬ，尤其在恶性程度很高的ＤＬＣＬ中存在ｐ５３基因突变，各型ＮＨＬ都有不同程度的突变型ｐ５３蛋白表达     

人喉癌P_（53）、Rb基因突变的PCR－SSCP检测

应用聚合酶链式反应一单链构象多态分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析）技术，检测了喉癌中抗癌基因Ｐ５３第５～８和１１外显子及Ｒｂ基因第２０外显子的突变。结果表明：Ｐ５３、Ｒｂ基因突变与癌组织病理分化程度有关，中、低分化癌的突变例数明显多于高分化癌；Ｐ５３、Ｒｂ基因突变失活与喉癌发生、发展及恶性度有关。应用上述快速敏感的检测方法检测Ｐ５３、Ｒｂ基因突变，对判断喉癌恶性度及估计预后有一定的实用价值。     

食管鳞癌TP53基因突变及其瘤内异质性分析

目的 探讨食管鳞癌瘤内多个取材位点中TP53基因突变异质性状态及其与临床病理特征的相关性。 方法 对食管鳞癌原发肿瘤及其配对的手术切端组织,采用聚合酶链式反应(PCR)法和直接测序法检测TP53基因第2～11号外显子突变状态,评估各病例瘤灶内4个不同位点TP53基因突变与临床病理参数的相关性及其在瘤内的异质性。 结果 在30例被测食管鳞癌肿瘤中,发现18例患者存在TP53基因突变,占60%(18/30)。16例为点突变,其中3例为无义突变,13例为错义突变;另2例为导致移码的缺失突变。大部分突变集中于TP53基因5～8号外显子,其中5号外显子的突变率最高,为23.3%(7/18)。在2例肿瘤中检测到第282位密码子突变(R282W),3例检测到第175位密码子突变(R175H)。观察每例肿瘤各位点突变等位基因峰高与正常等位基因峰高之比(relative intensity,RI值),发现在有点突变的16例中,12例的4个肿瘤位点的RI之间存在很大差异,其余4例瘤内各位点RI值也不一致。 结论 食管鳞癌存在较高频率的TP53基因突变,而且每例肿瘤均存在不同程度的瘤内异质性。      

p53和ras基因突变及HPV感染与喉鳞癌的关系

①目的　探讨人乳头瘤病毒 16 ,18型 (HPV16 ,18)感染 ,抑癌基因p5 3和癌基因ras突变与喉鳞癌的关系 ,并初步分析 3种致癌因素的相互关系。②方法　应用聚合酶链反应 (PCR)和限制性片段长度多态性 (RFLP)分析技术 ,检测 40例喉鳞状细胞癌组织中 p5 3基因第 5 ,7外显子及ras基因 (N ras ,K ras,H ras)第 12密码子的突变情况 ,同时用PCR技术检测 40例标本中HPV16 ,18的感染情况。③结果　 40例标本检出HPV16阳性标本 14例 ,HPV18阳性标本 4例。 4例标本 p5 3基因第 5外显子第 143密码子发生突变 ,其中 1例HPV16阳性 ,p5 3基因第 7外显子未发现突变。 9例标本ras基因发生突变 (N ras 6例 ,K ras 2例 ,H ras 1例 ) ,其中 2例HPV16阳性 ,但未见 p5 3与ras基因同时发生突变者。HPV阳性和阴性标本中p5 3基因突变率、ras基因突变率的差异均无显著性(χ2 =0 .10 1,1.392 ,P >0 .0 5 )。④结论　HPV感染、p5 3和ras基因突变与喉鳞癌的发生密切相关 ,三者之间的关系尚待进一步探讨。     

人大肠腺癌组织P^53基因突变与表达

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术和免疫组织化学方法检测１８例人大肠腺癌和腺瘤变组织Ｐ＾５３基因第５－８外显子的突变和Ｐ＾５３蛋白的表达，另对９７例大肠腺瘤和腺瘤癌变组织Ｐ５３蛋白表达进行了检测。１８例大肠腺癌中８例Ｐ＾５３基因，第５－６外显子中存在突变。１０例（５６％）Ｐ＾５３表达阳性。     

85例非小细胞肺癌中p53基因异常的预后价值

目的：探讨ｐ５３蛋白表达和基因突变在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中的预后价值。方法：利用免疫组化方法检测８５例ＮＳＣＬＣ的ｐ５３蛋白表达，聚合酶链式反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法检测３１例肺腺癌ｐ５３基因５、６、７、８外显子突变，研究结果进行单因素生存分析。结果：本组ＮＳＣＬＣ病人的平均年龄为５５．６±８．４岁（中位数５５岁），随访时间的中位数为４７个月，３年、５年总体生存率分别为６６％和６１％。ｐ５３蛋白表达与预后无关（χ２＝１．００，Ｐ＝０．８），而ｐ５３基因突变组病人的生存率显著低于无ｐ５３基因突变组（χ２＝４．８１，Ｐ＝０．０３）。同时，ｐ５３蛋白表达与ＰＣＲ－ＳＣＰ检测的ｐ５３基因突变的一致率仅为５２％。结论：在ＮＳＣＬＣ中ｐ５３蛋白表达和基因突变可能有不同的预后意义，ｐ５３基因突变可作为肺腺癌的辅助预后指标。     

抑癌基因p53第5～8外显子突变与喉鳞癌关系的研究

为探讨抑癌基因ｐ５３基因突变与喉鳞癌之间的关系,应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染系统,检测６０例喉鳞癌新鲜组织中抑癌基因ｐ５３基因第５￣８外显子的突变情况。结果：６０例喉鳞癌组织中,发生４７例第５￣８外显子迁移率异常的ＳＳＣＰ区带,总的突变率为７８．３％。ＳＳＣＰ阳性病例在外显子５、６、７、８中的突变率由高到低依次为Ｅｘｏｎ５、Ｅｘｏｎ７、Ｅｘｏｎ８、Ｅｘｏｎ６。提示第     

溃疡性结肠炎及伴发癌的p53改变和微卫星不稳定性

目的:探讨溃疡性结肠炎和不典型增生、癌变组织的p53基因改变和微卫星不稳定性状况.方法:采用SP法检测21例70个手术切除的溃疡性结肠炎标本和25例正常人的P53蛋白表达;人工微切割-PCR-SSCP/HA-克隆测序技术检测溃疡性结肠炎标本p53基因第5-8外显子的点突变;SSLP-测序技术检测10个微卫星位点的改变情况.结果:P53蛋白免疫组化发现25例正常人全部阴性;溃疡性结肠炎患者4例阳性,其中炎症性、低度不典型增生(LGD)、高度不典型增生(HGD)与癌变阳性标本分别为0/5例、1/7例、2/7例和1/2例.SSCP/HA、SSLP结果各有2例阳性,其中1例癌变病例癌组织 p53基因第6外显子及Bat26微卫星位点均阳性,其LGD区Bat26也阳性;1例LGD病例Bat26位点阳性;另1例HGD病例p53基因第8外显子阳性,后者经测序证实发生了移码突变.21例标本在TGFβRII(A)10、IGFIIR(G)8、IGFIIR(CT)5、TGFβRII(GT)3、BAX(G)8、hMSH3(A)8、hMSH6(C)8、TCF4(A)9和DPC4(CA)179个微卫星位点都阴性.结论:溃疡性结肠炎和癌变黏膜的早期就存在P53蛋白的过表达和微卫星不稳定性,前者部分是基因突变的结果.     

应用非同位素PCR—SSCP方法检测甲状腺癌p53基因的突变

目的 探讨甲状腺癌组织中p53基因点突变。方法 应用非同位素PCR－SSCP技术检测39例不同类型甲状腺癌石蜡包埋组织中p53基因点突变。结果 10例分化甲状腺癌中4例（40％）、9例未分化甲状腺癌中6例（67％）出现异常电泳,表明这些病例相应DNA片段中发生了点突变,而5例乳头状癌和5例滤泡型癌均未见该基因的突变。10例出现异常电泳的甲状腺癌中9例（90％）同时呈现p53蛋白的表达。结论 非同位素PCR－SSCP是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法,p53基因点突变率与蛋白表达率基本相一致,p53基因的突变是分化型癌向间变型癌转化的关键性遗传改变。