急性重症胰腺炎并发肺损伤时内皮素和一氧化氮变化的实验研究

目的：探讨急性重症胰腺炎并发肺损伤时内皮素（endothelins,ET）和一氧化氮（nitric oxide,NO）的作用。方法：胰胆管逆行注药法制备大鼠急性重症胰腺炎并发肺损伤模型，检测血浆ET、NO、淀粉酶（amylase,AMY)、脂肪酶（lipase,LIP)水平；胰腺、肺脏系数和胰腺、肺脏病理形态变化。结果：急性重症胰腺炎并发肺损伤模型中血浆ET、NO、AMY、LIP水平，胰腺、肺脏系数均明显升高；胰、肺病理形态改变明显。结论：ET、NO在急性重症胰腺炎并发肺损伤发病中起重要作用。     

欧前胡素对小鼠急性肺损伤的影响及其机制研究

目的 探讨欧前胡素对小鼠急性肺损伤的影响及其作用机制。方法 将32只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、欧前胡素30?mg/kg组、欧前胡素60?mg/kg组。用欧前胡素预处理,脂多糖诱导进行模型复制,7?h后收集小鼠肺组织。测量肺湿/干重比,采用苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠肺组织病理学改变,检测小鼠肺组织中髓过氧化物酶（MPO）活力及活性氧类（ROS）的水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）,Western blotting检测小鼠肺组织中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、核转录因子κB（NF-κB）p65及基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）蛋白表达水平。结果 与正常对照组比较,模型组小鼠肺组织损伤评分、肺组织ROS水平及PI3K、Akt、NF-κB p65蛋白磷酸化水平升高（P?<0.05）,TNF-α、IL-1β的释放及MMP-9蛋白表达水平升高（P?<0.05）;与模型组比较,欧前胡素组能够减轻肺组织损伤,降低肺损伤评分（P?<0.05）,降低小鼠肺组织中ROS水平及PI3K、Akt、NF-κB p65蛋白磷酸化水平（P?<0.05）,降低TNF-α、IL-1β的释放及MMP-9蛋白表达水平（P?<0.05）;与欧前胡素30?mg/kg组比较,欧前胡素60?mg/kg组小鼠肺损伤评分、肺组织ROS水平、Akt及NF-κB p65蛋白磷酸化水平、TNF-α的释放及MMP-9蛋白表达水平降低（P?<0.05）,PI3K蛋白磷酸化水平及IL-1β的释放差异无统计学意义（P?>0.05）。结论 欧前胡素对脂多糖诱导的急性肺损伤有保护作用,其作用机制可能与脂多糖诱导的急性肺损伤中ROS被抑制,以及ROS介导的PI3K/Akt/NF-κB通路被抑制有关。     

热休克蛋白60和胰蛋白酶在胰腺组织中的表达及意义

目的通过复制离体和在体不同程度的急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）动物模型,动态观测胰腺组织中热休克蛋白60（heat shock protein60,HSP60）和胰蛋白酶（Trypsin）表达的变化。探讨它们在AP发病机制中的可能作用。方法采用雨蛙肽（cerulein,Cer）50μg·kg~（-1）·h~（-1）,连续6次腹腔注射复制小鼠轻型急性胰腺炎（mild acute pancreatitis,MAP）模型,正常对照组小鼠以等体积生理盐水（normal saline,NS）替代雨蛙肽腹腔注射,其他操作同MAP组。于造模后3 h麻醉处死动物,留取各组小鼠胰腺组织标本。重型急性胰腺炎（severe acutepancreatitis,SAP）大鼠模型用3%去氧胆酸钠（1ml·kg~（-1）体质量）胰胆管逆行推注而复制,造模后1、5、10 h分别处死动物,取各大鼠胰腺组织标本。大鼠离体胰腺组织块参照Jaffrey等的方法分离培养,用不同浓度的脂多糖（1ipopolysaccharide,LPS）（10、20μg·ml~（-1））、雨蛙肽（10~（-11）、10~（-5）mol·L~（-1））刺激,以NS作为对照,在刺激后的4 h收集组织标本。采用HE染色观察AP时胰腺组织病理学改变。通过双重免疫荧光技术检测HSP60和胰蛋白酶在胰腺组织中表达的变化。结果 MAP小鼠胰腺组织呈现轻度充血水肿性病理改变,组织中HSP60和胰蛋白酶表达在造模组表达明显升高（P〈0.01）。SAP大鼠的胰腺组织出血坏死性改变明显,HSP60在造模后1 h即明显升高,在造模后5、10h一直持续在一定的高水平,与正常对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,但在这几个时间点之间,HSP60的表达无明显差异（P〉0.05）;而胰蛋白酶表达水平在SAP大鼠1h组稍有升高,与对照组比较,差异有统计学意义（P〉0.05）,但随着造模时间延长,其水平呈不断升高的趋势,与对照组的比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。离体胰腺组织在LPS高、低浓度和雨蛙肽低浓度刺激下HSP60和胰蛋白酶的表达明显降低（P〈0.05）。结论在本实验条件下,实验性急性胰腺炎无论轻、重型,胰腺组织中的胰蛋白酶表达升高的同时,HSP60也增高,但HSP60和胰蛋白酶升高的幅度在不同严重程度胰腺损伤时是不同的,表明AP时HSP60和胰蛋白酶的失衡可能参与该病的发生发展。LPS等刺激因子损伤离体胰腺组织,HSP60和胰蛋白酶的表达均降低。     

热休克蛋白-70对急性肺损伤的保护作用

热休克蛋白（HSP）对急性肺损伤（ALI）具有保护作用,其中已知的热休克蛋白HSP-70与肺脏的生物学关系最为密切,它通过分子伴侣、抗炎、抗氧化以及抗细胞凋亡等机制对ALI起保护作用。本文就HSP-70对急性肺损伤的保护作用及其机制做一综述。     

急性胰腺炎患者胰腺外损害的临床特征

目的 探讨急性胰腺炎（AP）患者胰腺外损害的临床特征。方法 回顾性分析168例急性胰腺炎患者的病历资料,分析其病因、胰腺外损害的临床特征以及与预后的关系。结果 急性胰腺炎的病因以胆道疾病最常见,占61.9%。68.4%的AP患者合并有胰腺外损害,胰腺外受损组织和器官最常见为肝脏（59.5%）、呼吸系统（25.0%）和胃肠道（10.2%）。20.9%AP患者合并2种或以上组织和器官损害。胆源性AP易并发肝脏损害。伴有胰腺外损害的AP患者其病死率、转重症发生率高于无胰腺外损害组,平均住院时间比无胰腺外损害组长,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 急性胰腺炎是一种可累及多系统的疾病,容易合并胰腺外损害,合并胰腺外损害的AP患者预后较差。     

全氟异丁烯诱发大鼠急性肺损伤的初步观察

目的建立大鼠吸入全氟异丁烯（perfluoroisobutylene,PFIB）染毒致急性肺损伤实验模型,并进行血液和组织中细胞因子和组织形态学改变观察。方法制作大鼠吸入PFIB诱发急性肺损伤动物模型,测定动物染毒后肺灌洗液（BALF）中总蛋白含量和肺含水量变化,血清和肺组织中白介素-1（IL-1）、白介素-8（IL-8）、白介素-10（IL-10）、白介素-18（IL-18）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量改变,以及肺组织病理学观察。结果（1）模型大鼠肺含水量和BALF蛋白含量较空白对照组明显增加;（2）PFIB染毒诱发急性肺损伤动物血清和肺组织中IL-1,8、10、18和TNF—α细胞因子可见特征性改变;（3）形态学观察可见肺组织水肿和明显的炎症反应。结论研究和探讨PFIB吸入诱发急性肺损伤的变化规律和特点可提供更多的急性肺损伤预防和治疗信息。     

藻蓝素对脓毒性急性肺损伤大鼠血红素氧合酶-1表达的影响及分子机制

目的观察藻蓝素（CPC）对脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠血红素氧合酶-1（HO-1）表达的影响及分子机制。方法 SD大鼠根据不同实验目的随机分为对照组、模型组和CPC干预组。其中模型组采用盲肠结扎穿刺建立脓毒症急性肺损伤大鼠模型。 CPC干预组在模型组基础上分别给予浓度为20、40、60 mg/kg CPC腹腔注射。术后72 h后获肺组织标本,观察CPC处理前后HO-1蛋白的表达,比色法检测HO-1酶活性改变情况。提取组织总蛋白和核蛋白,Western blot检测蛋白激酶B（Akt）磷酸化以及转录因子E2相关因子2（Nrf2）核转位情况。化学发光法检测超氧化物的含量。结果 CPC处理可明显促进ALI的肺组织中HO-1的表达,并能增强其酶活性。同时,CPC也可促进Akt磷酸化,并能诱导转录因子Nrf2核转位。同时,CPC也可显著减少大鼠肺组织中过氧化物产生,而HO-1抑制剂锡原卟啉御（ SnPP）能明显降低CPC对超氧化物的抑制作用。结论 CPC诱导HO-1表达可能与Akt磷酸化以及Nrf2的激活有关。     

趋化细胞因子MIP-2在急性胰腺炎大鼠胰外脏器损伤中的作用

目的探索趋化细胞因子MIP-2在急性胰腺炎（AP）大鼠胰腺病变和胰外脏器损伤中的意义。方法免疫组化（S-P法）观察和分析制模后3、6 h胰腺、肺和肝组织中MIP-2的表达。结果模型组制模后3、6 h时,MIP-2的表达均明显高于对照组（均P〈0.05）;模型组制模后6 h时MIP-2在胰腺、肺和肝脏中的表达均明显高于模型组制模后3 h时的MIP-2表达（均P〈0.05）。结论大鼠AP并发肺损伤时,血清中的MIP-2可能来源于胰腺组织;AP时MIP-2在大鼠肝脏高表达,在肝脏损伤中起重要的上调作用;AP时MIP-2在肺的表达明显增加,趋化中性粒细胞,造成肺部的损害。     

褪黑素对急性胰腺炎大鼠胰腺组织中趋化因子表达的影响

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）在急性胰腺炎（AP）早期发病中的作用,观察褪黑素（MT）对趋化因子MCP-1及MIP-2表达的影响。方法35只SD大鼠随机分为假手术（SO）组,AP 3、6、12 h组和MT 3、6、12 h干预组。采用4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射制备AP动物模型,MT组在诱导AP前0.5 h给予腹腔注射MT 20 mg/kg。观察胰腺病理组织学改变,采用实时定量RT-PCR方法检测各组胰腺组织中MCP-1 mRNA、MIP-2 mRNA表达水平。结果AP大鼠胰腺组织中MCP-1 mRNA、MIP-2 mRNA表达显著高于SO组（P〈0.01）,且表达水平与胰腺病理严重程度成正相关（P〈0.05）。经MT干预后,胰腺组织中MCP-1 mRNA、MIP-2 mRNA表达下调（P〈0.05）,胰腺组织损伤得到改善。结论MCP-1及MIP-2在AP大鼠发病过程中具有重要作用,MT可能通过下调其在胰腺组织的表达,对AP具有一定的保护作用。     

热休克蛋白70在百草枯诱导的肺部炎性反应中的表达

目的 探讨百草枯中毒致急性肺损伤中热休克蛋白70(HSP70)的表达.方法 72只健康Wistar大鼠随机平均分成3组,分别腹腔注射生理盐水(A组)、20 mg/kg百草枯(B组)和40 mg/kg百草枯(C组).分别于1,2,3,6,12和24 h留取标本,应用免疫组织化学染色、Western blot方法测定肺组织中HSP70的蛋白表达.结果 B组和C组大鼠肺组织发生急性肺损伤.B组大鼠2 h后HSP70表达与A组相比开始增强,6 h为表达高峰,12 h表达减少,24 h表达水平与A组相当.C组1 h后HSP70表达与A组相比明显增强,3 h达到高峰,24 h后与A组水平一致.结论 百草枯诱导的急性肺损伤可引起支气管、细支气管和肺泡上皮细胞HSP70应激性表达,提示HSP70对肺损伤起保护作用.     

胰腺癌组织中HSP60、HSP70和P53的表达及意义

[目的]了解HSP60、HSP70及P53在慢性胰腺炎组织及胰腺癌组织中的表达及其意义。[方法]应用免疫组织化学ABC法检测HSP60、HSP70及P53在慢性胰腺炎12例、癌旁组织及胰腺癌63例（其中高、中、低分化各为14、23、26例）中的表达，结果进行卡方检验及相关性分析。[结果]在慢性胰腺炎、癌旁组织及胰腺癌中，HSP60的过表达率17％、10％、70％（P〈0．01）；HSP70的过表达率25％、13％、75％（P〈0．01）。在高、中、低分化胰腺癌中，HSP60的过表达率43％、70％、85％（P〉0．05〉；HSP70的过表达率36％、78％、92％（P〈0、01）。HSP70的过表达率与是否发生淋巴结转移有显著关系（P〈0．05）；P53在胰腺癌中的表达率59％，与HSP60、HSP70在胰腺癌中的表达呈正相关（P〈0．01）。[结论]胰腺癌是HSP60、HSP70高表达肿瘤，HSP70与胰腺癌临床病理特征和生物学行为有更密切的关系。P53与HSP60、HSP70在肿瘤中的表达密切相关。     

趋化因子CINC在急性胰腺炎大鼠肺组织中的表达

目的探讨细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子(CINC)在急性胰腺炎大鼠肺损伤中的作用。方法大鼠胰胆管逆行注射3.5%牛磺胆酸钠,制作大鼠重症急性胰腺炎并发肺损伤模型。分别对胰腺损伤、肺损伤程度进行病理学评分,酶显色法测定血清脂肪酶水平,并测定肺组织湿/干质量比;反转录聚合酶链反应技术检测各组大鼠肺组织CINCmRNA的表达。结果造模后1 h,大鼠即出现较明显的胰腺损伤,伴有血清脂肪酶升高,12 h时,胰腺损伤最为严重。造模后1 h,肺损伤评分即有升高,但肺组织湿/干质量比无明显变化,此后,肺损伤程度逐渐增加,以24 h时最为严重。正常大鼠肺组织内CINCmRNA呈低水平表达。造模1 h后,大鼠肺组织内CINCmRNA表达明显增加,至24 h达最高水平;大鼠肺组织内CINCmRNA表达与胰腺损伤程度、肺损伤程度成正相关。结论大鼠肺组织内CINC参与胰腺炎肺损伤过程。抑制肺组织内中性粒细胞的趋化,可能成为治疗胰腺炎肺损伤的新途径。     

Beneficial effects of hydrocortisone in induced acute pancreatitis of rats

Background  Little is known of the effects of hydrocortisone on cell adhesion molecules such as intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and its counterreceptors (LFA-1, Mac-1) in acute pancreatitis (AP). We investigated the effects of prior treatment with hydrocortisone on the production of ICAM-1 and its counterreceptors (LFA-1 and Mac-1) in AP of rats to clarify the effect of hydrocortisone on induced acute pancreatitis.
Methods  Acute pancreatitis was induced by infusion of 5% chenodeoxycholic acid into the pancreatic duct, followed by ligation of pancreatic duct. Before induction of acute pancreatitis, rats were treated with hydrocortisone (n=20) or 0.9% saline (n=20). Blood and specimens from pancreas and lung were obtained from 5 rats from each treatment euthanized at 1 hour or 3 hours, 6 hours, 12 hours.  Expression of ICAM-1 was assessed by immunohistochemistry and Western blot analysis of pancreas and lungs. The expression of LFA-1 and Mac-1 on neutrophils was detected by flow cytometer.  The therapeutic effect of hydrocortisone was assessed from injuries to pancreas and lung.
Results  ICAM-1 expression in the pancreas of hydrocortisone group was significantly less than in control group at 3 hours and 6 hours. In the lungs of hydrocortisone group, ICAM-1 expression was significantly less than in control group at 3 hours, 6 hours and 12 hours. The expression of LFA-1 and Mac-1 on neutrophils in blood increased significantly in control group over hydrocortisone group. Increased expression of ICAM-1, LFA-1 and Mac-1 preceded leukocyte infiltration. Compared to untreated animals with acute pancreatitis, rats pretreated with hydrocortisone had significantly reduced histological lung injury and output of ascitic fluid.
Conclusions   Prior treatment with hydrocortisone before the induction of acute pancreatitis ameliorates pulmonary injury and the output of ascitic fluid and reduces the expression of ICAM-1 and its counterreceptors (LFA-1, Mac-1) in acute pancreatitis.

     

热休克蛋白70在鼠脑缺血/再灌注损伤的表达

目的:为了加深了解热休克蛋白70(HSP70)与脑缺血/再灌注损伤的关系,探讨HSP70的表达与细胞形态学变化。方法:24只SD大鼠通过左颈总动脉灌注生理盐水形成轻度左侧脑缺血。其中12只大鼠为单纯缺血组,另12只为缺血30分钟后再灌注30分钟组。两组切片分别进行免疫细胞化学和病理组织学观察。结果:我们发现脑缺血30分钟HSP70在顶叶皮层表达,分布在细胞膜,轴突和树突中。再灌注30分钟无HSP70表达。结论:局灶性脑缺血可诱导HSP70表达,恢复血循环无HSP70表达。     

Phospholipase A_2 and Its Relationship with Acute Lung Injury in Acute Pancreatitis in Dogs

Acute fulminant pancreatitis was produced in dogs by injection of autobile into the mainpancreatic duct.After injection the phospholipase A_2(PLA_2)activities in serum,lung lymph andbronchoalveolar lavage fluid(BAL)were elevated significantly,lung lymph flow and pulmonarytransvascular potein clearance increased progressively,protein content and cell numbers in BAL inthe experimental animals were significantly higher than those in the control animals.Furthermore thelung index,wet to dry lung weight ratio,extravascular lung water to bloodless dry lung weight ra-tio,extravascuar lung water to bloodless dry lung weight ratio increased significantly as comparedto control animals.Pretreatment with PLA_2 inhibitor,chloroquine,blocked the changes mentionedabove.This experiment suggests:1.PLA_2 activity in lung lymph fluid as well as in serum andBAL is elevated in acute hemorrhagic pancreatitis.2.Elevated PLA_2 activity may increase thepulmonary vascular permeability.3.PLA_2 is the major factor leading to pulmonary edema in acutehemorrhagic pancreatitis.4.Phagocytes contribute to the lung injury induced by PLA_2 to some ex-tent.     

FAK通过和EGFR的相互作用调节MAPK和Akt之间的相对平衡

目的研究上皮生长因子受体和FAK的相互作用以及对下游信号的影响。方法建立聚集粘连激酶(FAK)缺失突变和绿色荧光蛋白(GFP)融合基因del1-693FAK-GFP、del1-100FAK-GFP和FAK-GFP稳定表达细胞系。结果同野生型FAK-GFP相比,N-端1-100氨基酸残基的缺失突变体,缺失1-693氨基酸残基的突变体结合在黏附点的能力被完全抑制。应用等电聚焦和SDS-PAGE双向电泳证明,EGF和纤维连接蛋白诱导FAK磷酸化的位点不同,进一步证实del1-693FAK-GFP、del1-100FAK-GFP,抑制MAPK的磷酸化,增强Akt的磷酸化;而FAK-GFP增强MAPK磷酸化,抑制Akt磷酸化。结论FAK通过和EGFR的相互作用调节MAPK和Akt之间的相对平衡。     

炎调方对脓毒症大鼠肺热休克蛋白70和核因子-κB的调控作用

目的：探讨炎调方对脓毒症大鼠肺热休克蛋白70（HSP70）和核因子-κB（NF-κB）的调控作用。方法：将清洁级健康雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和炎调方组,采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型。用RT-qPCR法、SABC免疫组化方法、凝胶迁移电泳EMSA法测定大鼠肺组织HSP70 mRNA及蛋白表达、NF-κB活性,并用HE染色观察肺组织病理学改变。结果：炎调方组肺组织HSP70基因相对表达水平高于假手术组和模型组（P〈0.05）,HSP70蛋白表达量高于正常组、假手术组和模型组（P〈0.05）;正常组、假手术组、炎调方组大鼠肺组织NF-κB/P65相对灰度值均低于模型组（P〈0.01）;病理切片显示炎调方组肺组织损伤轻于模型组。结论：炎调方能上调肺HSP70表达,降低肺NF-κB活性,改善肺组织病理形态学改变,减轻脓毒症导致的肺组织损伤。     

热休克蛋白70在急性百草枯中毒大鼠肺脏中的表达

目的检测百草枯(PQ)诱导急性肺损伤(ALI)中肺组织热休克蛋白70(HSP70)的表达情况。方法健康雄性SD大鼠36只,随机分为对照组(n=18),ALI组(n=18)。ALI组用PQ灌胃(200 mg/kg)染毒建立大鼠ALI模型。对照组用等量生理盐水灌胃。采用RT-PCR检测大鼠肺组织HSP70的表达,比色法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)、伊文蓝(EBD),观察肺组织病理变化。结果 ALI组大鼠肺组织HSP70的表达在染毒后12 h明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),24 h达高峰。MPO及EBD水平显著增高(P<0.01)。肺组织病理检查可见PQ中毒后肺泡壁充血、炎性细胞浸润,并有局灶性出血。结论 HSP70在PQ中毒后的表达增多,可能参与了PQ诱导的ALI后的组织保护作用。