晚期糖基化终产物通过调控F-actin/YAP抑制小鼠胚胎成骨细胞成骨分化

目的 考察晚期糖基化终产物（AGE）对小鼠胚胎成骨细胞系MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响及其作用机制。方法 用不同质量浓度（100、200、300 mg/L）AGE作用于MC3T3-E1细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用碱性磷酸酶（ALP）染色检测细胞成骨能力,采用qPCR检测成骨相关基因（骨钙素、ALP和Runx2）及Yes相关蛋白（YAP）和β-联蛋白的mRNA表达,采用蛋白质印迹法检测YAP和β-联蛋白的蛋白质表达,采用免疫荧光法观察YAP和β-联蛋白的细胞核内含量及细胞骨架蛋白纤丝状肌动蛋白（F-actin）的表达。结果 MC3T3-E1细胞在200、300 mg/L AGE处理后增殖活性降低、凋亡率增加（P均＜0.05）,100 mg/L AGE对细胞增殖和凋亡无明显影响,故选取100 mg/L AGE进行实验。在成骨诱导培养条件下,与对照组相比,MC3T3-E1细胞经100 mg/L AGE处理后ALP染色较浅,骨钙素、ALP和Runx2的mRNA表达均较低（P均＜0.05）。在常规培养条件下,与对照组相比,MC3T3-E1细胞经100 mg/L AGE处理后F-actin形态和分布发生明显改变;YAP的mRNA和蛋白质表达均无明显变化,但其细胞核内含量减少;β-联蛋白的mRNA和蛋白质表达均降低（P均＜0.05）,但其细胞核内含量无明显变化。结论 AGE能抑制MC3T3-E1细胞的增殖活性,诱导细胞凋亡,降低成骨分化能力,F-actin、YAP和β-联蛋白参与其调控过程。     

雷奈酸锶改善成骨不全症模型oim小鼠代谢失衡的双向机制

目的 探讨雷奈酸锶对成骨不全症（OI）模型oim小鼠成骨细胞和破骨细胞的双重作用。方法 取1周龄OI模型纯合子oim/oim小鼠及野生型（wt/wt）小鼠的颅骨,采用Ⅰ型胶原酶通过连续消化法获取成骨细胞;取5～7周龄oim/oim小鼠和wt/wt小鼠的长骨,获取骨髓单核细胞诱导分化成破骨细胞。给予不同浓度（1、10 mmol/L）的雷奈酸锶进行干预,采用实时定量PCR（qRT-PCR）及蛋白质印迹法分别在mRNA及蛋白水平检测成骨细胞分化相关基因Runt相关转录因子2（Runx2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨钙蛋白（OCN）,破骨细胞分化相关基因降钙素受体（Calcr）、抗酒石酸磷酸酶（Trap）、组织蛋白酶K（CTSK）,以及破骨分化相关转录因子c-fos、活化T细胞核因子c1（NFATc1）的表达;采用ALP染色及茜素红S染色观察成骨分化及矿化情况;采用Trap染色及骨片陷窝实验评估破骨细胞形成数量及骨吸收活性;采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）比色法检测雷奈酸锶对成骨细胞和破骨细胞活性的影响。结果 qRT-PCR及蛋白质印迹法检测结果显示,雷奈酸锶在mRNA及蛋白水平均可促进oim/oim小鼠成骨细胞分化相关基因（Runx2、ALP、OCN）的表达增加,同时抑制破骨细胞分化相关基因及转录因子（Calcr、Trap、CTSK、c-fos、NFATc1）的表达（P均<0.05）,且随浓度增加作用增强。ALP染色及茜素红S染色结果显示,雷奈酸锶可促进oim/oim小鼠成骨细胞分化及矿化（P均<0.05）。Trap染色及骨片陷窝实验结果显示,雷奈酸锶可降低oim/oim小鼠破骨细胞形成数量和破骨细胞骨吸收活性（P均<0.05）。MTT结果显示,1 mmol/L、10 mmol/L雷奈酸锶对oim/oim小鼠成骨细胞和破骨细胞无细胞毒性。结论 雷奈酸锶可有效改善OI模型oim小鼠的骨代谢失衡,其机制可能是促进成骨细胞分化及矿化,同时抑制破骨细胞的形成及骨吸收活性。     

lncRNA NEAT1过表达促进破骨细胞分化并抑制 成骨细胞分化诱发骨质疏松

目的:研究长链非编码RNA NEAT1在骨质疏松症中的表达及对成骨细胞和破骨细胞分化的作用。方法:收集正常人和骨质疏松症患者的骨组织,运用Real-time PCR检测NEAT1的表达水平。在卵巢去势（OVX）和鼠尾悬吊（TS）诱导的小鼠疏松股骨中,在小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1和人间充质干细胞hMSC向成骨分化过程中以及小鼠巨噬细胞系RAW264.7向破骨分化过程中,检测NEAT1的表达水平。利用敲低Neat1的慢病毒感染MC3T3-E1和RAW264.7细胞,分别采用碱性磷酸酶（ALP）染色确定成骨细胞活性以及抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察破骨细胞活性变化。结果:NEAT1在患者疏松的骨组织中、小鼠的疏松股骨组织中以及RAW264.7细胞破骨分化过程中表达明显增多;而在MC3T3-E1和hMSC成骨分化过程中表达明显降低。ALP染色显示敲低Neat1显著加重成骨细胞活性,TRAP染色显示敲低Neat1显著抑制破骨细胞活性。结论:长链非编码RNA NEAT1在成骨分化过程中低表达,在破骨分化过程中过表达,并通过促进破骨细胞分化及抑制成骨细胞分化诱发骨质疏松。     

磷酸肌酸对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及矿化的影响

目的 探讨磷酸肌酸(phosphocreatine,PCr)对体外培养的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的增殖、成骨分化及矿化的影响.方法 在体外培养的MC3T3-E1细胞中,分别加入含不同浓度(5,10,20 mmol·L-1)的PCr进行培养,并以不给予PCr药物处理的组为空白对照组.采用MTT法检测MC3T3-E1细胞的增殖情况;使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性试剂盒检测MC3T3-E1细胞内ALP的活性;采用Western Blot法检测MC3T3-E1细胞内ALP、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)的蛋白表达情况;利用茜素红染色法检测MC3T3-E1细胞形成矿化的能力.结果 PCr可以促进MC3T3-E1细胞的增殖且具时间依赖性,当处理12 h时,PCr对细胞无明显促增殖作用(P＞0.05);然而当处理48 h时,PCr(5,10,20mmol·L-1)对细胞的促增殖作用可分别达到137％、146％、153％.PCr(10,20 mmol·L-1)使MC3T3-E1细胞内ALP的活性分别增加到空白对照组的1.37和2.14倍(P ＜0.05,P＜0.01),并且显著上调ALP蛋白表达(P＜0.01,P＜0.01).PCr(5,10,20 mmol·L-1)还可明显上调MC3T3-E1细胞内BMP-2的蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),并使MC3T3-E1细胞形成的矿化结节数增加(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 PCr可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化,具有促成骨作用.     

胶体金对MC3T3-E1增殖、分化及RUNX2基因表达的影响

目的研究30nm胶体金对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。方法体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,在仪-MEM培养液中加入不同体积的胶体金处理细胞,利用M1Tr法检测胶体金对成骨细胞增殖活性的影响,碱性磷酸酶活性测定及RT—PCR法分别检测其对成骨细胞分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。结果浓度为10^（-10）、10^（-11）、10^（-12）mg／L的胶体金均促进成骨细胞的增殖,且ALP相对活性及RUNX2基因表达也均高于阳性对照组。结论30nm胶体金能促进小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2的表达,进而促进成骨。     

还原型谷胱甘肽上调β-catenin蛋白表达促进MC3T3-E1细胞成骨分化

目的:探讨还原型谷胱甘肽(GST)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的影响,并从Wnt/β-catenin信号通路角度初步探讨其可能的机制。方法:通过碱性磷酸酶(ALP)染色以及细胞外钙化结节来检测成骨细胞MC3T3-E1的分化情况;GST干预MC3T3-E1成骨细胞株7 d、14 d和21 d后,利用Real-time PCR检测成骨相关因子RUNX2、OSX、COLⅠ、OCN基因及Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、LRP5和GSK-3β的表达;通过Western blot检测β-catenin蛋白表达。结果:ALP染色观察到MC3T3-E1细胞外基质存在钙质沉积,且MC3T3-E1 ALP活性阳性。GST能明显提高MC3T3-E1细胞成骨相关基因以及Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达。Western blot结果提示GST可以明显促进β-catenin蛋白的表达。结论:MC3T3-E1细胞本身具有一定的成骨细胞特性,有效浓度的GST能促进小鼠MC3T3-E1细胞成骨分化,Wnt/β-catenin信号转导通路在成骨分化过程中起一定的调节作用。     

木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3 T3-E1增殖、分化、矿化和Wnt通路的影响

目的:探讨木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化及Wnt通路的影响.方法:在体外培养的MC3T3-E1s培养基中加入木犀草素0.25~8.00μmol/L培养12、24和48 h,以洛伐他汀0.04μmol/L作为阳性对照,采用细胞计数试剂盒法检测细胞增殖情况;用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞内ALP的活性;茜素红S染色法检测细胞矿化能力;采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞Ⅰ型胶原、骨钙素、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(Lrp5)、β-连环素、护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达水平.结果:木犀草素可以剂量依赖性和时间依赖性地促进成骨细胞MC3T3-E1增殖(P<0.05~P<0.01);木犀草素(2.00、4.00和8.00μmol/L)可以剂量依赖性地促进MC3T3-E1成骨细胞ALP活性,增强MC3T3-E1成骨细胞矿化能力并上调MC3T3-E1成骨细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素、Lrp5、β-连环素和护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达.结论:木犀草素2.00、4.00和8.00μmol/L可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化及Wnt通路中Lrp5和β-连环素mRNA的表达.     

苦味酸类成分蛇麻酮和葎草酮对大鼠成骨细胞和破骨细胞的干预作用

目的 研究苦味酸类成分蛇麻酮和葎草酮对大鼠成骨细胞及破骨细胞活性的干预作用。方法 以新生24 h的Wistar大鼠所分离的成骨细胞和破骨细胞为研究对象,设置对照组,蛇麻酮处理低（10^-15 mol/L）、中（10^-14 mol/L）、高（10^-13 mol/L）剂量组,以及葎草酮处理低（10^-15 mol/L）、中（10^-14 mol/L）、高（10^-13 mol/L）剂量组。药物处理后,分别用MTT法、碱性磷酸酶（ALP）活性检测以及茜素红染色法评价蛇麻酮和葎草酮对成骨细胞增殖、分化及骨矿化水平的影响。采用破骨细胞计数以及抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）活性检测评价蛇麻酮和葎草酮对破骨细胞活性的影响。采用试剂盒法检测骨钙素（OCN）水平,采用蛋白质印迹法检测骨形成相关蛋白骨桥蛋白（OPN）、骨涎蛋白（BSP）、骨形成蛋白（BMP-2）以及骨吸收相关蛋白组织蛋白酶K（CK）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达,评价蛇麻酮和葎草酮在骨代谢调控方面的作用。结果 在大鼠成骨细胞水平上,与对照组相比,蛇麻酮在10^-15、10^-14 mol/L浓度下可促进成骨细胞增殖（P<0.05）,在10^-14、10^-13 mol/L浓度下可提高ALP活性以及骨矿化水平（P<0.05,P<0.01）,在10^-13 mol/L浓度下可促进OCN的表达（P<0.01）,在10^-14、10^-13 mol/L浓度下可提高骨形成相关蛋白BSP和BMP-2的表达（P<0.05）;葎草酮在10^-15~10^-13 mol/L浓度下可促进成骨细胞增殖、提高ALP活性以及骨矿化水平（P<0.01）、提高骨形成相关蛋白OCN、OPN的表达（P<0.05,P<0.01）,在10^-14、10^-13 mol/L浓度下可促进BSP和BMP-2的表达（P<0.05）。在大鼠破骨细胞水平上,与对照组相比,蛇麻酮和葎草酮在10^-15~10^-13 mol/L浓度下均可降低破骨细胞数目（P<0.01）,抑制CK的表达（P<0.05,P<0.01）;葎草酮在10^-15~10^-13 mol/L浓度下可抑制MMP-9的表达（P<0.05,P<0.01）。结论 本研究在细胞水平上初步明确了蛇麻酮和葎草酮可通过促进成骨细胞骨形成、抑制破骨细胞骨吸收来防治骨丢失,为骨质疏松药物的开发提供了新资源。     

大黄素通过BMP-9途径促进前体成骨细胞的分化

目的 研究大黄素对前体成骨细胞MC3T3-E1增殖与分化的影响及其作用机制。方法 采用不同浓度（0.05、0.1、0.5、2.0和5.0 μmol/L）大黄素处理MC3T3-E1细胞（给药组）,以不加大黄素为对照组。分别采用MTT法检测细胞的增殖率;对硝基苯基磷酸二钠（PNPP）法定量检测碱性磷酸酶（ALP）活性;茜素红染色观察矿化结节数目;RT-PCR法检测骨形态发生蛋白（BMPs）途径相关信号分子的表达。采用BMPs抑制剂（Noggin）处理细胞后检测ALP活性,观察BMP-9在大黄素促成骨分化中的作用。结果 大黄素对MC3T3-E1细胞的增殖无影响,大黄素浓度为0.5~5.0 μmol/L时可促进细胞ALP表达及矿化结节形成,其中浓度为5 μmol/L时效果最显著。大黄素可增强细胞BMP-9的表达,与BMP-9信号途径相关的上下游信号分子mRNA的表达亦有相应改变;Noggin预处理后,大黄素促成骨分化的功能受到明显抑制。结论 大黄素可通过激活BMP-9信号通路促进前体成骨细胞的分化。     

不同浓度锶与淫羊藿苷联合应用对MC3T3-E1细胞增殖及骨向分化的影响

通过体外培养前成骨细胞MC3 T3-E 1细胞,加入不同浓度锶(Sr)与淫羊藿苷(ICA)处理,在第1、4、7和11天时,通过荧光显微镜观察细胞形态并对细胞计数,通过CCK-8法检测不同浓度Sr与ICA对前成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖活性的影响.通过碱性磷酸酶(ALP)活性检测(第4和7天)及茜素红S染色(第21天),分析不同浓度Sr与ICA对MC3 T3-E 1细胞骨向分化的影响.结果显示,与其他组比较,S1I2组(80 mg/L Sr+7×10-2 mg/L ICA)在荧光显微镜下细胞数量最多,细胞增殖活性最强,并显示出最高的ALP活性和更多地红染的矿化结节.说明适宜浓度的Sr与ICA联合应用可有效促进前成骨细胞MC3 T3-E 1细胞增殖及骨向分化.     

骨科固定及植入器材的应用与发展

介绍了常用骨科固定及植入器材,并对其发展历史、作用及特点作简要概述.     

方药离合今论

通过对方剂配伍规律的研究,阐述了配伍在遣药组方及方中药性发挥中的重要作用,指出如配伍得当,可选择发挥方中之药的某一药性,可使方剂直达病位,亦可解毒增效,体现了方药离合之妙。     

基于"毛脉合精"与"毛脉失和"探讨脉的功能实现与脉病机理证治

脉是气血运行的通道.痰浊、瘀血等有形实邪停聚脉道,气血运行失常,脉道结构因而改变甚则闭塞不通,引起所支配脏腑失去气血濡养的一系列疾病称为"脉病"."毛脉合精"是脉通行气血、濡养脏腑官窍的重要前提,"毛脉失和"是脉病发生发展的初始阶段.论述从以下方面进行:首先,结合《黄帝内经》相关条文,拓展"毛脉合精"理论内涵,论证了其结构应包括皮毛、腠理、分肉、三焦等,功能应包含通行营卫、津液和调、津血渗化等核心内容;其次,在"毛脉合精"基础上结合玄府学说,论证了玄府通利是"毛脉合精"的重要条件;最后,探讨在"毛脉失和"的影响下,脉病痰瘀证之痰浊、痰结、痰瘀病机演变过程,为继承和发展中医脉病理论提供新的思路.     

增强法律意识 加强病案质量监控

病案作为重要的医学信息源,不仅可为医疗、教学、科研提供宝贵资料,而且在法律、保险和医院管理等方面发挥着重要作用。尤其是在解决医疗纠纷、进行医疗事故鉴定、判定医务人员和医疗活动有无医疗过错等方面是一个最具法律效力的书证。为确保病案质量的正确性、可靠性和完整性,防止医疗纠纷的发生,增强法律意识,加强病案质量监控尤为重要。     

文学消费与中国古代小说、戏剧的盛衰

任何文学样式的产生、发展、流变和盛衰，都与其本身所具有的消费功能有着直接的关系。中国古代小说从产生时的“不登大雅之堂”到逐渐成为人们文学消费的主体，在这一过程中，读者的消费需求起着相当大的作用。中国古代戏剧也经历了从幼稚到成熟的过程，但由于其自身形式的局限，戏剧的消费群体随着社会的发展而逐渐萎缩，戏剧走向衰微。从文学消费角度看中国古代小说与戏剧的盛衰趋势是明显的。     

英语词义与语境的关系及词义教学的方法

词汇是语言的建筑材料，词汇教学是英语教学的重要内容之一。而词义教学是词汇教学的核心。传统的词汇教学往往简单罗列词义。强调词的字面意义。而忽视词在实际使用中的意义。主要通过翻译和对比的方法进行。难以达到理想的效果。为了探讨更有效的词义教学方法。采取讨论词义理解与语境的关系。及以语境理论和深层认知优势为指导的情景法和推断法进行词义教学，认为词义的理解与语境密切相关，依据语境才能正确理解和掌握词义。语境理论指导下的情景法和推断法发挥了深层认知的优势。是词汇教学的有效方法。     

病案影像存储与传输系统的设计与实现

传统纸质病案的数字化是整个医院信息化进程中的重要步骤。本文针对病案数字化采集和管理的需求特点,介绍了一个实用的病案影像存储服务系统的设计和实现。该系统实现了对扫描得到的病案影像的存储、传输、浏览、打印和管理。且有界面友好、可靠性高、易于现有医疗信息系统集成等特点。通过较长时间的实际使用,该系统运行稳定,有效发挥了病案在医、教、研方面的真正价值和作用。     

肝硬化门静脉高压症大鼠脾切除术后高凝状态与血小板数量和功能的变化

目的 研究肝硬化门脉高压症脾切除术后血小数量和功能的变化,探讨术后高凝状态原因。方法 以四氯化碳所致肝硬化门脉高压症大鼠模型为研究对象,随机分为9组：P组为术前对照组;a、b、c、d组行部分大网膜切除术,相应于术后第3、7、14、21天采血检测;A、B、C、D组行脾切除术,也于术后第3、7、14、21天采血检测。检测项目包括：D-二聚体浓度、血小板计数、血小板聚集率（PAgT）、α颗粒膜蛋白-140（GMP-140）血浆浓度等。结果 ①脾切除术组D-二聚体含量术后即显著上升,至术后第14天显著高于对照组,至术后第21天仍未见下降;②脾切除术组血小板计数、GMP-140含量术后长时间维持在高水平,至术后第21天仍显著高于术前和对照组,而PAgT手术前后无显著变化。结论 肝硬化门脉高压症大鼠脾切除术后血液处于高凝状态,血小板持续增多和功能活跃可能是重要原因之一。     

我校医学检验系学生专业思想和在校成绩的调查分析

本文选取我校医学检验系93～96年级170余名本科在校学生作为调查研究对象(第一专业志愿与非第一专业志愿考生比例约为1:2),通过对这两部分学生专业志愿与在校专业思想,学习成绩及政治表现等综合素质方面的关系调查分析,结果表明：专业志愿不是影响学生专业思想、学习成绩和综合素质的主要因素,学生在校专业思想受在校教育和多种因素影响。提示招生录取新生时不应歧视非第一专业志愿考生。