酪氨酸羟化酶基因修饰的神经干细胞脑内移植PD模型动物旋转行为及神经生化研究

目的探讨TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对PD模型动物旋转行为和神经生化的影响.方法构建pN2ATH逆转录病毒载体质粒,用PA317细胞包装,G418筛选阳性克隆,病毒上清感染神经干细胞,将神经干细胞和表达TH的神经干细胞植入PD大鼠纹状体内,测定移植后不同时间PD大鼠旋转行为改善以及DA和DOPAC含量变化.结果 TH基因修饰的神经干细胞移植8周后能显著降低PD大鼠旋转行为,增加纹状体DA和DOPAC含量,疗效好于单纯神经干细胞移植组和对照组.结论 TH基因修饰的神经干细胞脑内移植能增加纹状体DA和DOPAC含量,降低PD大鼠旋转行为,从而对PD大鼠有明显的治疗作用,也为PD的治疗开辟了新途径.     

酪氨酸羟化酶基因修饰的神经干细胞脑内移植PD模型动物旋转行为及神经生化研究

目的 探讨TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对PD模型动物旋转行为和神经生化的影响。方法 构建pN2ATH逆转录病毒载体质粒，用PA317细胞包装，G418筛选阳性克隆，病毒上清感染神经干细胞，将神经干细胞和表达TH的神经干细胞植入PD大鼠纹状体内，测定移植后不同时间PD大鼠旋转行为改善以及DA和DOPAC含量变化。结果 TH基因修饰的神经干细胞移植8周后能显著降低PD大鼠旋转行为，增加纹状体DA和DOPAC含量，疗效好于单纯神经干细胞移植组和对照组。结论 TH基因修饰的神经干细胞脑内移植能增加纹状体DA和DOPAC含量，降低PD大鼠旋转行为，从而对PD大鼠有明显的治疗作用，也为PD的治疗开辟了新途径。     

神经干细胞联合胶质细胞源性神经营养因子脑内移植治疗帕金森病的实验研究

目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）对脑内移植神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的存活、分化及对帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）模型大鼠的治疗作用.方法：采用原代培养胚胎14.5天的胎鼠腹侧中脑NSCs,单独或经GDNF预处理后移植入PD模型大鼠的纹状体,观察NSCs在纹状体的分化情况,以及PD模型大鼠旋转行为的变化.结果：联合GDNF移植NSCs比单纯移植的NSCs较多的转化为多巴胺能神经元,并能够改善PD模型大鼠的旋转行为.结论：GDNF可以促进中脑来源的NSCs向多巴胺能神经元转化,并对PD模型大鼠有较好的治疗作用.     

羊膜细胞移植于帕金森病鼠纹状体的实验研究

目的　探讨非多巴胺能组织 -羊膜细胞移植治疗帕金森病 (PD)的作用机制。方法通过 6 -羟基多巴胺 (6 -OHAD)立体定向注射破坏一侧黑质 ,制成PD大鼠模型 ,然后将鼠成活羊膜细胞悬液植入受损侧纹状体 ,与死羊膜细胞移植及生理盐水假移植对照。结果发现活羊膜细胞移植可抑制大鼠的异常旋转行为 ,酪氨酸羟化酶 (TH)免疫组化结果显示在活羊膜细胞移植靶点周围出现了TH阳性物质。结论活羊膜细胞诱导了宿主纹状体残存多巴胺 (DA)神经纤维的再生 ,提示羊膜细胞能够分泌对在体DA神经元具有营养作用的物质。     

胚胎神经上皮干细胞PD大鼠模型脑内移植的比较

目的观察胚胎神经上皮干细胞分别植入PD大鼠模型两侧纹状体内的存活、分化及对疾病的治疗情况。方法将GFP转基因鼠的胚胎神经上皮干细胞体外克隆增殖后,分别立体定向移植到PD模型鼠的毁损侧纹状体和健康侧纹状体内,术后观察动物的行为改变,分期取材后检测移植细胞的存活与分化状况,比较两种移植方式的治疗作用。结果移植后实验动物的旋转行为明显改善,移植细胞在宿主脑内存活良好,并分化出TH阳性神经元,损伤侧移植组效果更好。结论神经上皮干细胞植入损伤侧纹状体内的治疗效果更好。     

GDNF基因修饰神经干细胞移植治疗大鼠帕金森病

目的探讨孕14~15 d胎鼠中脑来源神经干细胞（mNSCs）被胶质源性神经营养因子（GDNF）基因修饰并移植于帕金森病
模型大鼠纹状体区的治疗作用。方法取孕14~15 d胎鼠解剖显微镜下分离中脑腹侧组织进行mNSCs培养,培养5 d后行GFP/
GDNF基因修饰。PD大鼠模型的建立参照大鼠脑立体定向图谱,立体定向中脑背盖腹侧区、内侧前脑束注射6-羟多巴胺。将
PD大鼠随机分组,将基因修饰的干细胞以及无基因修饰干细胞移植到帕金森病大鼠纹状体区,建立空白mNSCs（PBS替代）移
植组、GFP基因修饰mNSCs移植组、GDNF基因修饰mNSCs移植组3个实验组。移植细胞前后进行行为学评估,以腹腔注射阿
朴吗啡（APO 0.5 mg/kg）诱导PD大鼠旋转圈数作为细胞移植的治疗作用评估手段。免疫荧光组织化学鉴定移植细胞存活、迁
移和分化。结果GDNF基因修饰神经干细胞移植组较对照组和GFP基因修饰神经干细胞移植组有明显的行为改善;移植56 d
后,GDNF基因修饰mNSCs移植组较其他两组检测到更多细胞存活,向多巴胺能神经元分化较其他两组都有增加趋势。结论
GDNF基因修饰mNSCs移植可显著改善PD大鼠的运动障碍,其分子机制有待进一步研究。
     

神经干细胞移植对帕金森大鼠的疗效观察

目的观察神经干细胞移植对帕金森大鼠脑内多巴胺含量的影响。方法采用6-羟基多巴胺定点注射毁损黑质纹状体的方法构建帕金森大鼠模型;向造模成功的大鼠纹状体内分别移植1×106（共计20μl）的第3代胚鼠神经干细胞或等量生理盐水。结果与结论神经干细胞移植后3周,免疫组化检测发现帕金森大鼠脑黑质部位酪氨酸羟化酶阳性细胞数明显增多,纹状体内可见酪氨酸羟化酶阳性细胞。干细胞移植后8周,高效液相色谱检测显示大鼠纹状体内多巴胺含量明显增高（P〈0.01）。说明神经干细胞脑内移植能够减轻由6-羟基多巴胺引起的大鼠中脑黑质多巴胺能神经元的损伤,改善大鼠的帕金森症状。     

XBP-1稳转神经干细胞移植对PD大鼠模型的治疗作用

目的:通过测定XBP1-NSCs移植对帕金森大鼠模型黑质内单胺类递质水平的影响,研究XBP1-NSCs移植对PD的治疗作用。方法:将18只PD大鼠模型随机分为3组,每组6只大鼠。对照组侧脑室内移植入20μl的PBS,NSCs组移植空白神经干细胞悬液20μl,XBP1-NSCs组移植XBP-1基因修饰神经干细胞悬液20μl。于移植后第28天对各组大鼠进行神经功能评分,并取黑质脑组织高效液相色谱法测定单胺类递质多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸的含量。结果:XBP1-NSCs组大鼠黑质内多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸水平明显增加,且移植后大鼠行为学评分明显改善。结论:XBP1-NSCs移植可通过增加黑质内多巴胺和3,4-二羟基苯乙酸水平从而改善帕金森症状起到治疗目的。     

Nurr1基因修饰人脐血间充质干细胞源性多巴胺能 神经元移植治疗帕金森病

 【目的】 探讨Nurr1基因修饰的人脐血间充质干细胞(HUCB-MSC)源性的多巴胺能神经元移植对帕金森病(PD)模型鼠的治疗作用.【方法】 SD大鼠PD模型随机分为假手术组(A组)?单纯HUCB-MSC组(B组)、Nurr1基因修饰HUCB-MSC组(C组)。将HUCB-MSC及Nurr1基因修饰后的HUCB-MSC体外分化为多巴胺能神经元,并通过立体定向的手段将其移植入毁损侧纹状体,观察移植前后PD模型大鼠旋转行为的变化和脑内多巴胺(DA)含量的改变,以及纹状体区酪氨酸羟化酶 (TH) 表达的变化。【结果】 B?C两组在移植后第2周?4周和8周时旋转行为及脑内DA含量均较A组有所改善(P < 0.05,P < 0.01),且B、C组间比较C组改善明显(P < 0.05),这种差异以第8周时最为明显。移植后B、C两组TH表达较A组明显增高,并随着时间的增加而逐渐增高,且C组在各时间点上TH表达较B组含量高(P < 0.05),并在移植后第8周时最为明显。【结论】 Nurr1基因修饰HUCB-MSC来源的多巴胺能神经元移植治疗PD模型鼠,能有效地增加鼠脑内多巴胺含量和纹状体区TH的表达,改善PD模型鼠的症状,为细胞移植治疗PD提供了一种崭新的手段。     

间充质干细胞体外培养移植治疗帕金森病大鼠的实验研究

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）体外培养后移植治疗帕金森病（PD）大鼠的作用及机制。方法采用全骨髓贴壁培养法分离、体外培养大鼠骨髓MSCs,采用免疫细胞化学法鉴定第3代MSCs,将第3代MSCs作为移植实验组,磷酸盐缓冲液（PBS）作为对照组,分别注射到6-OHDA制备的PD大鼠模型损毁侧纹状体内,观察移植术后PD大鼠不同时间段的行为变化,并检测PD大鼠黑质酪氨酸羟化酶（TH）的表达变化。结果骨髓MSCs定向移植术后,PD大鼠旋转行为从移植前的（11.08±2.47）r/min,降到移植后4周（3.75±0.96）r/min,移植后1周,2周,4周分别较移植前和对照组行为明显改善（P〈0.05）,注射PBS后,大鼠在1周,2周,4周旋转行为无明显改善,MSCs移植术后2周黑质TH阳性细胞表达较PBS对照组明显增多（P〈0.05）。结论骨髓间充质干细胞移植后可能影响黑质多巴胺功能的神经元的改变,有助于改善PD大鼠的旋转行为。     

培高利特对帕金森病大鼠保护作用的初步研究

目的 初步观察培高利特对大鼠黑质多巴胺神经元的保护作用，并探讨其可能的机制。方法 通过立体定位注射6—羟基多巴胺(6-OHDA)制作帕金森病大鼠模型，观察预先注射培高利特对阿朴吗啡诱发的旋转行为及受损侧黑质病理变化的影响。结果 大鼠持续注射培高利特7d后可明显减轻PD大鼠的旋转行为，并对抗6-OHDA所致只质多巴胺神经元的减少。而选择性D2受体桔抗剂氨黄酰基苯甲酰胺化合物(Sulpiride)可阻断培高利特的保护效应。结论 培高利特对多巴胺神经元具有保护作用，其机制可能与刺激多巴胺D2受体有关。     

胚胎大鼠海马源性神经干细胞的分离、培养、分化和鉴定

目的:探讨胚胎大鼠海马源性神经干细胞(N SC)的分离、培养、分化和鉴定的方法。方法:机械分离出胚胎大鼠海马区细胞,以无血清培养基培养,再以血清培养基诱导其分化;在显微镜下观察其形态学特征,逆转录PCR(RT-PCR)和免疫荧光化学法检测神经干细胞和其诱导后细胞的表面标志物。结果:无血清培养基条件下培养的细胞在光镜下可见呈悬浮生长,易聚集成神经球,RT-PCR和免疫荧光化学法可检测到N SC表面标志物N estin的表达;经血清培养基诱导分化后,光镜下可见细胞呈贴壁生长,可见胞体呈树突状突起或呈梭形,RT-PCR和免疫荧光化学法可检测到星形胶质细胞的表面标志物GFAP和神经元细胞的表面标志物N SE的表达。结论:胚胎大鼠海马区分离的细胞具有N SC的特性,并能在含特定生长因子的无血清培养基保持其分化潜能,为进一步针对N SC的研究奠定了基础。     

GM1对帕金森病治疗作用的实验研究

研究单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)对帕金森病(PD)的治疗作用。运用选择性偏侧(右侧)PD大鼠模型,观测正常对照组、PD组(造模后14d)、PD生理盐水(NS)治疗组和GM1治疗组(10mg／kgIPqd、连续14d),阿朴吗啡(APO)诱发的旋转行为改变和纹状体线粒体钙(MCa)、钙调素(CaM)含量改变。PD组表现明显的APO诱发的旋转行为(≥6r／min),黑质损伤侧(右侧)纹状体MCa、CaM含量与正常对照组比较显著性升高(P<0．01);GM1治疗组APO诱发的旋转行为明显好转,黑质损伤侧纹状体MCa、CaM含量与PD组比较无显著差异性(P>0．05)。GM1能改善实验性PD的部分行为、生化改变,对PD具有治疗作用。     

建立类似于绝经期妇女帕金森病大鼠模型的实验研究

目的探讨利用6-羟基多巴(6-OHDA)制备模拟绝经期妇女帕金森病的大鼠模型。方法应用6-OHDA制备OVX PD模型大鼠,应用免疫组织化学染色、高效液相色谱法等技术对大鼠黑质(SN)的酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目、纹状体多巴胺(DA)及其代谢物二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)含量进行考察并评价。结果阿朴吗啡可诱导出明显的PD大鼠旋转行为;大鼠损伤侧黑质TH阳性神经元数量较健侧显著减少(P<0.01),纹状体DA及其代谢物DOPAC和HVA含量也较健侧明显减少(P<0.01)。结论本模型具有绝经期妇女帕金森病的基本的病理特点。     

移植诱导中脑NSCs分化的多巴胺能神经元对PD大鼠治疗作用的实验研究

目的研究移植诱导中脑神经干细胞分化出的多巴胺能神经元对PD大鼠的治疗作用.方法利用纹状体提取液诱导大鼠胚胎中脑神经干细胞,使其部分分化为酪氨酸羟化酶(TH)阳性的多巴胺能神经元,继而把分化后的细胞移植到PD大鼠的纹状体内,免疫组化法证实移植细胞的存活并以诱发旋转行为的改善来观察其治疗作用.结果纹状体提取液能够诱导中脑神经干细胞分化出多巴胺能神经元而且这种经诱导后产生的细胞能够在PD大鼠体内长期存活并改善阿卟吗啡诱导的旋转行为.结论诱导中脑神经干细胞分化出的多巴胺能神经元对PD有一定的治疗作用.     

止颤汤对帕金森病作用机制的实验研究

目的:探讨止颤汤治疗帕金森病的作用机制.方法:采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)微量注射损毁右侧黑质致密区建立帕金森病(PD)大鼠模型.将模型大鼠随机分为两组,分别用止颤汤(中药组)和生理盐水(模型组)治疗6周,并观察各组大鼠治疗前后旋转行为及脑内黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数变化.结果:与模型组比较,止颤汤组大鼠治疗后旋转行为有明显改善(P<0.01).脑内黑质TH阳性细胞数有一定增加(P<0.05).结论:止颤汤能改善帕金森病大鼠旋转行为,促进受损脑黑质细胞修复.其机制可能在于减少自由基损害和多巴胺(DA)分解代谢,为该药临床治疗帕金森病提供了实验依据.     

Therapeutic effect of human amniotic epithelial cell transplantation into the lateral ventricle of hemiparkinsonian rats

Background Human amniotic epithelial cells （HAECs） are able to secrete biologically active neurotrophins such as brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3, both of which exhibit trophic activities on dopamine neurons. Previous study showed that when human amniotic epithelial cells were transplanted into the striatum of 6-hydroxydopamine （6-OHDA）-induced Parkinson disease rats, the cells could survive and exert functional effects. The purpose of this study was to investigate the survival and the differentiation of human amniotic epithelial cells after being transplanted into the lateral ventricle of Parkinson＇s disease （PD） rats, and to investigate the effects of grafts on healing PD in models. Methods The Parkinson＇s model was made with stereotactic microinjection of 6-hydroxydopamine （6-OHDA） into the striatum of a rat. The PD models were divided into two groups： the HAECs group and the normal saline （NS） group. Some untreated rats were taken as the control. The rotational asymmetry induced by apomorphine of the HAECs group and the NS group were measured post cell transplantation. The expression of nestin and vimentin in grafts were determined by immunohistology. Ten weeks after transplantation the density of tyrosine hydroxylase positive cells in the substantia nigra of the HAECs group, NS group and the untreated group was determined. The differentiation of grafts was determined by TH immunohistology. High performance liquid chromatography （HPLC） was used to determine monoamine neurotransmitter levels in the striatum. Results The rotational asymmetry induced by apomorphine of the HAECs group was ameliorated significantly compared to the NS group two weeks after transplantation （P 〈0.01）. The grafts expressed nestin and vimentin five weeks after transplantation. TH immunohistochemistry indicated that the TH positive cells in the substantia nigra of the HAECs group increased significantly compared to the NS group （P 〈0.01）. Tyrosine hydroxylase （TH） positive cells in the substantia nigra of the HAEC group and the NS group were decreased compared to the untreated group （P 〈0.01）. Dopamine and DOPAC levels in the striatum of the HAECs group increased significantly compared to the NS group （P 〈0.05）. Homovanillic acid （HVA） levels in the striatum of the HAECs group increased significantly compared to the NS group （P 〈0.01）. In addition dopamine, DOPAC, and HVA levels in the striatum and dopamine levels in the cerebrospinal fluid of the HAECs group and the NS group were decreased compared to the untreated group （P 〈0.05）. Conclusions Human amniotic epithelial cells could be used to ameliorate the rotational asymmetry induced by apomorphine of the PD models. This could have been due to the increased content of dopamine and its metabolic products, DOPAC and HVA, in the striatum in the PD models.     

依达拉奉、神经节苷酯对帕金森病模型大鼠的神经保护作用

目的 探讨依达拉奉(edaravone,Ed)、神经节苷酯(GW1)对帕金森病(PD)大鼠模型的神经保护作用.方法 采用立体定向一侧黑质致密部(SNC)、中脑腹侧被盖部(VTA)两点注射6-OHDA的方法 ,建立单侧PD大鼠动物模型.将老年大鼠分为正常组、生理盐水组(NS)、帕金森病模型组(PD)、PD+GM1组、PD+Ed组、PD+GM1+Ed组.14d后观察大鼠阿朴吗啡(APO)诱导的行为学改变及黑质多巴胺能神经元凋亡的情况.结果 正常组、NS组APO未诱导出大鼠旋行为,SNC未见细胞凋亡.PD各组APO诱导的旋转实验＞7 r/min,旋转次数(次)PD+GM1+Ed组(8.0±0.3)＜PD+Ed组(12.0±0.6)＜PD+GM1组(17.0±1.0)＜PD组(23.0±1.3)(P＜0.01);6-OHDA可诱导细胞凋亡,毁损侧SNC细胞凋亡数(个)PD+GM1+Ed组(27.63±2.38)＜PD+Ed组(38.42±3.54)＜PD+GM1组(49.36±3.12)＜PD组(62.61±4.03)(P＜0.01).结论 6-OHDA可导致大鼠行为改变,诱导SNC神经细胞凋亡,GM1、依达拉奉降低了这种损害,依达拉奉作用强于GM1,联合治疗作用最佳.     

稳定表达GDNF的MN9D/GDNF工程细胞可明显改善帕金森病模型大鼠的旋转行为

目的：观察稳定表达ＧＤＮＦ的ＭＮ９Ｄ／ＧＤＮＦ工程细胞对６羟基多巴胺损毁所致帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）模型大鼠旋转行为有无治疗作用。方法：用６羟基多巴胺损毁大鼠单侧中脑黑质多巴胺能神经元、２周后腹腔注射阿朴吗啡诱导大鼠出现偏侧旋转行为的方法制备ＰＤ模型大鼠。通过脑立体定位技术，将稳定表达ＧＤＮＦ的ＭＮ９Ｄ／ＧＤＮＦ工程细胞注入模型鼠损毁侧纹状体，１周后观察阿朴吗啡诱导的旋转行为有无改善。结果：稳定表达ＧＤＮＦ的ＭＮ９Ｄ／ＧＤＮＦ工程细胞可明显降低ＰＤ模型大鼠的异常旋转行为，治疗作用达１０周之久。结论：运用ｅｘｖｉｖｏ方法和防治兼顾的策略对于ＰＤ基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。     

脐血干细胞移植对帕金森病大鼠神经功能恢复的影响

目的:观察脐血干细胞移植对帕金森病(PD)大鼠神经功能恢复的影响.方法:PD大鼠模型分成实验组(n=10)和对照组(n=10).将第三代脐血间充质干细胞(MSCs)用Hoechst33258标记后植入实验组大鼠纹状体内,对照组注射PBS.此后每周腹腔注射阿朴吗啡以观察神经功能恢复情况,并在2周,4周,8周用免疫荧光双标法检测MSCs的存活,迁移以及胶质纤维酸性蛋白(GFAP),神经元特异性烯醇化酶(NSE),酪氨酸羟化酶(TH)和突触素的表达.利用高效液相色谱-电化学检测仪(HPLC-ECD)检测纹状体多巴胺含量.结果:脐血MSCs移植后大鼠的旋转行为与对照组相比有明显改善(P＜0.05);MSCs可在大鼠脑内存活,随时间延长,迁移范围扩大,分布于纹状体,胼胝体和皮质;GFAP,NSE,TH都有表达,突触素无表达.多巴胺水平与对照组相比有明显提高(P＜0.05).结论:脐血MSCs有望成为治疗PD的种子细胞,为神经退行性变提供一种治疗方法.