免疫印迹法检测高温作业工人血清中热应激蛋白70ku抗原和抗体方法的研究

热应激蛋白70ku（heatstressprotein，HSP70）是主要的热应激蛋白。用已纯化的HSP70抗原和已制备好的HSP70抗体，采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨率和抗原抗体反应的特异性相结合的免疫印迹法（westernblot）检测17名高温作业工人和17名对照组人群血清中HSP70抗原和抗体。结果，与对照组相比，高温作业工人血清中HSP70含量增加，HSP70抗体阳性率为23.5％。结果表明westernblot法用于检测工人血清中HSP70抗原和抗体是可行的。     

系统性红斑狼疮患者抗热休克蛋白9O抗体的检测

目的通过对系统性红斑狼疮（SLE）患者抗热休克蛋白90抗体（HSP90-Ab）的检测,探讨其在SLE发病中的作用。方法采用Westernblot法检测45例SLE患者抗HSP90抗体的表达情况,并分析其与HSP90蛋白表达间的相关性。另取15例健康血样进行正常对照。结果45例SLE患者血浆中HSP90IgG抗体阳性表达23例（51．11％）,HSP90IgM抗体阳性表达12例（26．67％）。并且HSP90蛋白与HSP90IgG抗体间呈显著的正相关关系（X2=4．15,P〈0．05）。15例正常对照组中未见HSP90IgG／IgM抗体阳性表达。结论SLE患者体内高表达的HSP90可诱导产生抗HSP90自身抗体,其在SLE的自身免疫损伤机制中可能发挥重要作用。     

高温和一氧化碳联合作用对应激反应的影响

采用mRNA斑点杂交和免疫蛋白印迹方法，探讨了高温、一氧化碳（CO）以及它们联合作用对大鼠肝脏热应激蛋白70ku（HSP70）mRNA、HSP70蛋白合成的影响；使用纯化的HSP27、HSP60、HSP70、热应激同源蛋白70ku（HSC70）、HSP89α和HSP89β，调查了接触高温、CO工人血浆中相应的抗体，也调查了这些工人中血浆游离氨基酸浓度。结果：在应激处理之后，大鼠肝脏HSP70mRNA、HSP70蛋白明显增加，高温和CO联合作用对HSP70mRNA、HSP70诱导表现为协同作用，但高温起主要作用。接触高温、CO工人血浆中HSP27和HSP70抗体阳性率明显增高（P＜0．05），但在CO组是最高的。尽管以前的调查结果表明这些工人摄入蛋白质不足，但他们血浆中游离氨基酸却趋向增高，特别是蛋氨酸、色氨酸，因为主要HSP70几乎不含这两种氨基酸。结果提示了这些工人所面临的主要问题是如何促进这些氨基酸的利用，减轻职业有害因素应激时正常蛋白的抑制。     

血浆热应激蛋白抗体与高血压及其新旧标准之间的关系

应用改进的酶联免疫反应技术测定血浆中热应激蛋白抗体的滴度，探讨血浆热应激蛋白（HSP）60、70、90α和90β抗体与高血压及新旧标准之间的关系。结果发现：随机180名人群中以18．67／12．00kPa为标准，高血压组血浆HSP70抗体1：10阳性率比对照组显著升高（P＜0．05）；以21．33／12．67kPa为标准，高血压组4种热应激蛋白抗体阳性比例也轻度升高，但无显著意义（P＞0．05）；按年龄分组，随年龄的增加，高血压比例和HSP70抗体阳性比例均增加，二者呈一定的相关性（r＝0．9284）。提示血浆HSP70抗体的产生可能参与了高血压的发病机理。以18．67／12．00kPa为标准，更能准确地划分高血压与正常血压。     

系统性红斑狼疮患者抗热休克蛋白90抗体的检测

目的 通过对系统性红斑狼疮(SLE)患者抗热休克蛋白90抗体(HSP90-Ab)的检测,探讨其在SLE发病中的作用.方法 采用Western blot法检测45例SLE患者抗HSP90抗体的表达情况,并分析其与HSP90蛋白表达间的相关性.另取15例健康血样进行正常对照.结果 45例SLE患者血浆中HSP90 IgG抗体阳性表达23例(51.11%),HSP90 IgM抗体阳性表达12例(26.67%).并且HSP90蛋白与HSP90 IgG抗体间呈显著的正相关关系(χ2=4.15,P<0.05).15例正常对照组中未见HSP90 IgG/IgM抗体阳性表达.结论 SLE患者体内高表达的HSP90可诱导产生抗HSP90自身抗体,其在SLE的自身免疫损伤机制中可能发挥重要作用.     

某钢铁企业不同作业环境工人HSP70抗体水平的血清流行病学调查

探讨血清热应激蛋白70（HSP70）抗体作为工人长期经历某些环境应激后健康监测指标的可行性。采用Westernblot免疫印迹法检测接触不同有害作业环境因素和相对无有害接触的某钢铁企业795名职工的血清主要热应激蛋白70抗体水平。多种有害接触均可使工人血清HSP70抗体水平升高，特别是高温和粉尘的联合暴露，以及粉尘（石灰）暴露和噪声暴露工人血清HSP70抗体水平均明显高于对照组（P＜0．05）。毒物接触（锰）工人血清HSP50抗体也高于对照组，但差异无显著性（P＞0．05）。血清HSP70抗体水平有可能作为评价工人经历某些环境应激（如高温、粉尘、噪声）的血清学标记物或环境危害监测指标。     

噪声作业工人血浆热休克蛋白60、70抗体滴度分析

目的 探讨噪声作业工人血浆热休克蛋白(HSPs)60、70抗体滴度及其与累积噪声暴露量(CNE)的关系。方法 用Westem blot免疫印迹法对391名工人(噪声暴露207名，对照184名)的血浆HSP60、70抗体水平进行测定，用趋势X^2检验和多因素Logistic回归模型分析HSP60、70抗体水平与噪声暴露的关系。结果 除HSP60抗体滴度1：80外，其他滴度观察组HSP60、70抗体阳性率与对照组间差别均有显著性意义；HSP70抗体滴度为1：10阳性率随累积噪声暴露量(CNE)增大而升高；用Logistic回归分析控制了混杂因素的作用后，血浆HSP60、HSP70抗体检出率与CNE呈正相关关系。结论 血浆HSP60、70抗体滴度与工人CNE有密切的关系。     

热休克蛋白70抗体与慢性阻塞性肺疾病的关系

目的探讨热休克蛋白(HSP)70抗体与慢性阻塞性肺疾病(COPD)的关系。方法采用Western-ELISA方法检测了88例COPD与87例正常对照者血浆HSP70抗体,同时用免疫发光法检测血浆IgE的含量。结果在COPD与正常对照组中,HSP70抗体的阳性率分别为13.6%(12/88)和6.9%(6/87),两者之间差异无显著性意义(P>0.05);排除近1年使用过激素的COPD患者,未使用过激素的COPD患者HSP70抗体的阳性率为19.3%(11/57),与正常对照组之间差异有显著性意义(P<0.05)。另外,吸烟指数在HSP70抗体阳性和阴性两组之间分别为(768±485)和(798±493),差异无显著性意义(P>0.05);而IgE在两组分别为(252.8±458.7)和(73.9±131.5)U/ml,HSP70抗体阳性组明显高于HSP70抗体阴性组(P<0.05)。结论HSP70抗体可能在COPD的发病过程中起一定的作用,但尚需进一步研究并排除激素等干扰因素。     

热休克蛋白70在高温致神经管畸形发生中的表达

目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）与高温致神经管畸形发生的关系。方法：用免疫组织化学和图像分析技术对HSP70在各期高温致畸组和相应正常对照组鼠胚神经管中的表达进行定性、定位和定量研究。结果：HSP70在各期对照组鼠胚神经上皮细胞中稳定表达，各组间无明显差异，高温处理后0.5h，高温组和对照组鼠胚神经上皮细胞的平均光密度（OD）值差异无统计学意义。高温处理后1h和2h，HSP70表达较对照组明显增强，OD值差异十分显著，2h后逐渐降低，24h降至对照组水平。结论：HSP70在高温致神经管畸形中有明显的应激性表达，这种应激性表达可以保护胚胎存活而不能避免畸形的发生。     

噪声作业工人血浆热应激蛋白60抗体与高血压的关系研究

目的探讨噪声作业工人血浆热应激蛋白（HSP）60抗体与高血压之间的关系。方法用Western blot免疫印迹法测定噪声作业工人血浆HSP60抗体水平。用多因素Logistic回归模型分析HSP60抗体水平与高血压的关系。结果高血压组调查对象HSP60抗体阳性率为13．86％，血压正常组为6.55％，差别有显著性意义（P〈0．05）；在排除了常见高血压病危险因素的影响后，高血压与HSP60抗体之间仍然存在着较强联系（P〈0．05）。结论血浆HSP60抗体可能是噪声作业工人高血压的危险因素。     

动脉粥样硬化性心脑血管疾病患者血浆高敏 C反应蛋白及同型半胱氨酸检测的临床意义

目的：通过观察心脑血管疾病患者血浆高敏C反应蛋白（High sensitivity C-reactive protein ,hsCRP）、同型半胱氨酸（Homocysteine ,HCY）的水平变化,探讨hsCRP、HCY的发生发展与动脉粥样硬化性心脑血管疾病的相关性。方法：选取我院内科因冠心病（Coronary heart disease ,CHD）住院患者23例,因缺血性脑血管病（Ischemic cerebrovascular disease , ICVD）住院的患者42例,共65例作为观察组,另选取同期来我院体检的101例健康者作为对照组,比较两组患者的hsCRP及HCY检测水平。结果：（1）观察组患者血浆hsCRP、HCY水平均高于对照组（P＜0．01）。（2）观察组患者血浆hsCRP与HCY呈正相关（r＝0．128,P＜0．05）。（3）Logistic逐步回归分析显示hsCRP、HCY是动脉粥样硬化性心脑血管疾病的独立影响因素。结论：血浆hsCRP、HCY高水平与动脉粥样硬化性心脑血管疾病密切相关。     

热休克蛋白（HSP70—2）基因与氯氮平所致粒细胞减少症关联研究

目的：探讨中国人群中氯氮平所致粒细胞减少症与HSPT0—2mRNA表达及HSP70—2基因多态的关系。方法：将符合精神分裂症诊断标准的广州医学院附属精神病医院住院或门诊患者,根据单一使用氯氮平后外周血白细胞及中性粒细胞绝对计数分为氯氮平所致粒细胞减少症组（简称减少组）、服用氯氮平粒细胞正常组（简称正常组）及氯氮平所致粒细胞增多组（简称增多组）。三组精神分裂症研究组均于抽血做检测时同时抽血做氯氮平血药浓度检查,采用自行设计的调查表收集临床病史及人口学资料。采用聚合酶链反应一限制性长度片段多态性（PCR—RFLP）分析HSP70—2G1267A多态,采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测三组患者的HSP70—2mRNA表达。结果：减少组、正常组与增多组间氯氮平使用剂量、血药浓度无显著性差异（P〉0．05）;三组中性粒细胞的HSP70—2mRNA表达水平有统计学显著性差异（P〈0．01）,粒细胞增多组患者中性粒细胞的HSP70—2mRNA表达增强;HSP70—2基因1267位点各基因型及等位基因频率在三组人群的分布无显著性差异（P〉0．05）;HSP70—2G1267A三种基因型的HSP70—2mRNA表达水平无显著性差异（P〉0．05）。结论：氯氮平所致的粒细胞减少症与氯氮平使用剂量及血药浓度关无;氯氮平所致的粒细胞增多患者中性粒细胞的HSP70—2mRNA表达增强,可能由于HSP70蛋白独特的抗凋亡保护作用及其使用氯氮平后表达的增强,造成了使用氯氮平后出现的粒细胞增多现象;氯氮平所致的粒细胞减少症与HSP70—2mRNA表达无关;中国人群中的氯氮平所致的粒细胞减少症可能与HSPT0—2G1267A多态无关;HSP70—2G1267A突变对中性粒细胞中HSP70—2mRNA表达影响不大。     

HSP70和MGMT在乳腺肿瘤中的表达和意义

目的：探讨乳腺肿瘤组织中热休克蛋白HSP70和DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methyguanine-DNA methytransferase,MGMT）的表达及临床意义。方法：采用免疫组织化学SABC法检测65例乳腺肿瘤组织中HSP70和MGMT的表达情况。结果：乳腺肿瘤中HSP70的阳性率为80.00%（52/65）,MGMT的阳性率为60.00%（39/65）,二者呈中度相关性（r=0.46）。其中,有淋巴结转移组的阳性率高于无转移组（P〈0.05）。结论：HSP70和MGMT的表达率与淋巴结转移情况有关。检测HSP70与MGMT对乳腺肿瘤预后和化疗方案的选择有指导意义。     

演习人员外周血淋巴细胞热休克蛋白70的表达及相关因素分析

目的观察军事演习与热休克蛋白70表达的关系,并分析影响演习人员热休克蛋白（heat shock protein 70,HSP70）表达的因素。方法某次演习期间,选取参演官兵137人为演习组,观摩演习官兵50名为对照组。问卷调查一般情况和心理应激状况,进行身体测量和血乳酸测定,采用Western blotting法检测外周血淋巴细胞中HSP70的表达水平。组间比较采用t检验,采用多元线性回归分析考察相关影响因素。结果与对照组比较,演习组外周血淋巴细胞HSP70水平显著增加（0.39±0.06vs0.60±0.09）（P〈0.01）,这种表达与年龄、受教育程度、家庭人口、吸烟、血乳酸和心理应激状况自评得分相关（P〈0.05,P〈0.01）,与体质量指数（body mass index,BMI）、收缩压、白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HGB）等无明显相关（P均〉0.05）;多元线性回归分析显示血乳酸、心理应激状况和受教育程度是影响演习人员HSP70表达的最显著的因素。结论演习人员外周血淋巴细胞HSP70表达水平升高,这种升高与血乳酸、心理应激状况自评得分和受教育程度等相关。     

不同糖耐量人群血清HSP70水平及其相关因素分析

目的检测不同糖耐量人群中空腹血清热激蛋白70(HSP70)水平的变化,探讨HSP70在2型糖尿病发生、发展中的可能作用。方法选取2012年9月至12月在南京市第一医院就诊并行口服葡萄糖耐量试验的患者152例,根据世界卫生组织(WHO)1999年糖尿病诊断标准,分为2型糖尿病(T2DM组)67例、糖调节受损(IGR组)32例和正常糖调节(NGR组)53例,检测各组血压、血糖、血脂、空腹胰岛素(FINS)和HSP70等指标,计算体质量指数(BMI)、腰臀比、体内脂肪含量(BF%)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),分析HSP70与相关代谢指标的关系。结果T2DM组血清HSP70水平显著低于IGR组[(535.98±144.69)ng/L vs(623.20±146.99)ng/L,P<0.05)],IGR组血清HSP70水平显著低于NGR组[(623.20±146.99)ng/L vs(722.08±246.24)ng/L,P<0.05];血清HSP70水平与BMI、BF%、腰围、收缩压、舒张压、空腹血糖、口服葡萄糖耐量试验2 h血糖、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、胰岛素抵抗指数呈负相关(均P<0.01),与高密度脂蛋白胆固醇呈正相关(P<0.01);低密度脂蛋白胆固醇是血清HSP70的独立相关因素。结论血清HSP70水平随着糖耐量水平的升高逐渐降低,且与血压、血脂、体脂等指标相关,提示血清HSP70水平的变化可能与2型糖尿病的发病机制有关。     

云母对NSAIDs相关性小肠黏膜损伤COX-2及HSP70表达的影响

目的：研究NSAIDs相关性小肠黏膜损伤COX-2及HSP70表达,探讨云母对小肠黏膜的保护机制。方法：24只SD大鼠,随机分为对照组、模型组、云母组,每组8只。模型组和云母组每天予双氯酚酸钠溶液7.8mg/（kg·d）剂量灌胃,制备大鼠NSAIDs相关性小肠黏膜损伤模型,云母组每天造模前予云母液120mg/（kg·d）剂量灌胃。灌胃给药5天后处死大鼠,进行大体形态观察,肠黏膜损伤指数（CMDI）及病理Chiu氏评分;免疫组化法检测小肠黏膜COX-2及HSP70表达。结果：与对照组比较,模型组CMDI、Chiu氏评分及COX-2、HSP70表达水平明显升高（P＜0.01）。而云母组CMDI、Chiu氏评分及COX-2表达水平较模型组有明显下降（P＜0.01）,HSP70水平更进一步升高（P＜0.01）。结论：NSAIDs相关性小肠黏膜损伤与COX-2及HSP70表达有关,云母可抑制损伤小肠黏膜COX-2表达,同时增强HSP70表达,从而对小肠黏膜起到保护作用。     

电针腧穴“胃病方”对胃黏膜损伤大鼠热休克蛋白70的影响

目的:探讨电针腧穴"胃病方"抗胃黏膜氧化损伤的作用机制。方法:将健康SD雄性大鼠24只随机分为正常组、模型组和治疗组,每组8只。采用阿司匹林灌胃制备胃黏膜损伤模型。正常组和模型组只抓取,不做其他处理;治疗组取"内关""、中脘"和"足三里",电针20 min,每天1次,连续3 d。治疗结束后,按GUTH法计算胃黏膜损伤指数(UI),取大鼠胃黏膜组织,HE染色,光学显微镜观察,免疫组织化学法检测胃黏膜组织中热休克蛋白70(HSP70)的表达。结果:与正常组比较,模型组UI升高(P<0.05);与模型组比较,治疗组UI降低、HSP70表达上调(P<0.01),炎细胞浸润减少(P<0.05)。结论:电针腧穴"胃病方"保护黏膜、减轻炎症反应,其机制可能与诱导HSP70表达上调有关。     

血浆 Hcy 与心脑血管疾病的关系研究

目的：探讨血浆同型半胱氨酸（Hcy）与心脑血管疾病发生的相关性。方法选择本院100例心脑血管疾病患者和100例健康体检人群作对照,采用循环酶法测定血浆同型半胱氨酸水平及其他生化指标,比较两组人群之间的差异。结果心脑血管疾病组 Hcy 平均水平[（27.80±15.14）μmol/ L]显著高于对照组[（12.10±4.41）μmol/ L],差异有统计学意义（P ﹤0.01）。结论血浆 Hcy 水平升高可能是心脑血管疾病的独立危险因素。     

热休克蛋白70在人冠状动脉粥样硬化中的表达及意义

目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）在人冠状动脉粥样硬化中的表达及其意义。方法：采用免疫组化法检测30例人尸检冠状动脉石蜡标本HSP70的表达。结果：正常动脉组织HSP70呈阴性表达,粥样硬化动脉中HSP70呈阳性表达。结论：HSP70可能与冠状动脉粥样硬化的发展有关。     

慢性问歇性低压低氧对发育大鼠心肌热休克蛋白表达的影响

目的观察慢性间歇性低压低氧（chronic intermittent hypobaric hypoxia,CIHH）处理对发育大鼠HSP27、HSP70和HSP90蛋白表达的影响,探讨心肌热休克蛋白在发育大鼠CIHH心脏保护中的作用。方法新生雄性Sprague—Dawley（SD）大鼠20只,随机分为2组,CIHH处理组（CIHH）和对照组（CON）。CIHH发育大鼠（连同母鼠）置于低压氧舱中,接受56d相当于海拔3000m的低压低氧处理（5h／d）。股动脉插管记录动脉血压,左心室插管描记左心室功能,包括左室峰压（left ventrieular systolic pressure,LVSP）、左室压力最大变化速率（left ventricular pressure,±LVdp／dtmax）。应用Western blot技术定量分析各组发育大鼠心肌热休克蛋白27（heat shock protein 27,HSP27）、热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）和热休克蛋白90（heat shock protein 90,HSP90）表达。并观察急性低氧／复氧对左心室功能、动脉血压和热休克蛋白（heat shock protein,HSPs）表达的影响。结果基础状态下,CIHH组与CON组发育大鼠的LVSP、±LVdp／dtmax及平均动脉压（mean artery blood pressure,MABP）差异无统计学意义（P〉0．05）,但CIHH组发育大鼠心肌HSP27、HSP70和HSP90蛋白表达显著高于CON组发育大鼠;急性低氧／复氧导致发育大鼠LVSP、±LVdp／dtmax及MABP降低,表达增加,而CIHH组发育大鼠心功能参数及MABP降低幅度明显小于CON组发育大鼠,且3种HSPs蛋白表达明显高于CON组发育大鼠（P〈0．05）。结论CIHH可通过增强发育大鼠心肌HSPs蛋白表达发挥心脏保护作用。