支气管哮喘患者血浆热应激蛋白60、70抗体表达及与发病的关系

当机体接触高温或其他应激因素如感染、缺氧、生理紧张等时可大量合成热应激蛋白（Hsps），而其中的一些应激因素常见于支气管哮喘（简称哮喘）的发生中。哮喘的发生与外界环境刺激和遗传因素有关，外界环境的刺激可诱导支气管上皮细胞Hsps（主要是Hsp60和Hsp70）的表达，而当机体由于病毒或支原体等感染导致免疫异常时，机体可产生针对Hsps的抗体。但Hsps抗体在哮喘患中是否存在，以及它们与哮喘发病的关系，目前国内、外尚少见报道。我们的研究拟探讨Hsp60、70抗体在哮喘发病中的作用。     

蛋白激酶Cα对哮喘患者白细胞介素-2、-4、-5mRNA表达的调节及银杏叶提取物对其的影响

早在1000多年前，我国民间就使用银杏治疗支气管哮喘（以下简称哮喘）和支气管炎。本研究通过观察银杏叶提取物的有效成分之一——BN52021作用于体外培养的哮喘患者外周血T淋巴细胞后，蛋白激酶Cα（PKCα）及IL-2mRNA、IL-4mRNA、IL-5mRNA的变化，探讨银杏叶制剂治疗哮喘的部分作用机制。     

联合检测支气管肺泡灌洗液中DPC4和LKB1突变诊断肺部孤立块影的价值

目的 探讨联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中DPC4和LKB1突变对鉴别肺部X线孤立块影良恶性的价值.方法 选择X线检查有肺部孤立块影的患者49例,其中非小细胞肺癌(NSCLC)患者39例,非癌对照组10例,用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)法检测BALF中DPC4第8～11外显子、LKB1第1～9外显子的突变情况.结果 39例NSCLC患者中DPC4缺失3例,突变12例,LKB1突变10例,1例NSCLC患者同时发生DPC4和LKB1突变,非癌对照组均未检测出抑癌基因缺失或突变.联合检测DPC4和LKB1诊断NSCLC的灵敏度(61.5%,24/39)较单独检测DPC4或LKB1显著增高(P ＜0.05).结论 用PCR-SSCP技术检测BALF中DPC4或LKB1基因突变可作为鉴别肺部孤立块影良恶性的辅助指标之一,有助于肺癌的早期诊断和分期,可能具有一定的临床应用价值,联合检测两种基因较单独检测灵敏度更高.     

白细胞介素-18和腺苷脱氨酶联合检测鉴别结核性与恶性胸腔积液的价值

结核性胸腔积液和恶性胸腔积液的细胞学检查一般都以淋巴细胞占优势，有时两者难以鉴别，因此，寻找敏感性和特异性更高的辅助诊断方法鉴别结核性和恶性胸腔积液有着重要意义。白细胞介素-18（IL-18）是一种Th1细胞因子，可以促进Th1免疫应答，在分枝杆菌感染宿主时起着保护宿主的作用。我们收集了2005年11月至2006年10月在华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科住院的结核性和恶性胸腔积液患者共86例，检测其胸腔积液中IL-18的浓度和腺苷脱氨酶活性，并比较IL-18和腺苷脱氨酶在鉴别诊断结核性和恶性胸腔积液中的价值。     

survivin基因在非小细胞肺癌中的表达及与P53、c-myc、k-ras蛋白表达的关系

目的：探讨survivin基因在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达,及与P53、c-myc、k-ras蛋白表达的相互关系。方法：逆转录PCR法检测了76例NSCLC肿瘤组织,20例良性瘤样病变和21例病灶旁正常肺组织survivin mRNA表达,免疫组织化学法检测P53,c-myc,k-ras蛋白表达,并将结果进行了相关分析。结果：61％NSCLC癌组织表达survivin mRNA基因,而良性瘤样病变和正常组织则分别为30％和19％（P＜0．001）。survivin基因表达与肺癌组织细胞类型,分化程度,TNM分期及淋巴结转移无明显相关关系。P53蛋白,c-myc与survivin基因表达显著相关,k-ras蛋白表达与survivin基因表达未见明显相关。结论：（1）survivin基因在肺癌组织中表达上调,提示该基因对NSCLC发生发展起重要作用。Survivin基因有望成为肺癌基因治疗的新靶点。（2）抑癌基因P53的失活和癌基因c-myc的上调与survivin基因的表达可能在NSCLC癌变中起协同作用。survivin和k-ras基因则可能通过各自不同的机制参与NSCLC的发病机制。     

核因子κB在肺泡巨噬细胞源性基质金属蛋白酶9表达中的作用

核因子κB（NF-κB）是一种与多种基因表达调控有关的核转录因子。基质金属蛋白酶9（MMP-9）对明胶和弹性蛋白有高度的亲和性，在细胞外基质损伤与修复中起重要作用。近年来MMP-9在慢性阻塞性肺疾病（COPD）中的作用受到关注，但其表达调控机制仍未阐明，因此本课题研究了NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）和N-乙酰半胱氨酸（NAC）对肺泡巨噬细胞（AM）源性MMP-9表达的影响，从而探讨NF-κB在肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的AM源性MMP-9表达中的作用。     

香烟烟雾提取物对哮喘大鼠气道平滑肌细胞蛋白激酶C活性的影响

目的：研究香烟烟雾提取物（CSE）对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）蛋白激酶C（PKC）活性的影响。 方法： 24只Wistar大鼠随机分为哮喘干预组（A组）、单纯哮喘组（B组）、对照干预组（C组）及对照组（D组），用5％ 浓度的CSE干预A、C两组ASMC，分别于干预0、1、2、3和6 h后，分离ASMC，提取胞浆及胞膜PKC，然后用［γ-32P］-ATP催化活性测定法检测PKC的活性。结果:（1）ASMC胞膜、胞浆PKC活性及两者比值：在1 h及2 h时，A组显著强于B、C、D组（均P<0.01）；B、C组显著强于D组（P<0.01，P<0.05）；B组与C组在1 h、2 h时均无显著差异。而B组与C组在1 h、2 h时差异均无显著(P＞0.05)。（2）组内ASMC胞膜、胞浆PKC活性比值：A、B、C 3组：1 h显著高于0 h、2 h（均P<0.01）；B组：2 h显著高于0 h（P<0.05）。 结论:CSE可能通过改变PKC的活性而进一步影响哮喘及其它呼吸系统疾病的发生、发展。     

rIL-18对肺炎链球菌肺炎小鼠Th1/Th2免疫应答的影响

目的 研究重组白细胞介素18(rIL-18)对肺炎链球菌肺炎小鼠Th1/ Th2免疫应答的影响.方法 鼻腔接种肺炎链球菌建立小鼠肺炎链球菌肺炎模型,将Balb/c小鼠24只随机分为3组,分别为对照组,肺炎组和肺炎rIL-18干预组(n=8 ),RT-PCR法检测各组小鼠肺组织中IFN-γ、IL-4 mRNA 的表达,同时支气管肺泡灌洗液(BALB)进行活菌计数,有核细胞分类计数.结果 ①肺炎rIL-18干预组BA LF中性粒细胞和巨噬细胞计数显著高于肺炎组和对照组(P＜0.001);②肺炎rIL-18 干预组BALF活菌计数显著低于肺炎组(P＜0.001);③肺炎rIL-18干预组肺组织IFN- γ mRNA表达上调而IL-4 mRNA表达下调(P＜0.001).结论 在小鼠肺炎链球菌肺炎早期给予rIL-18可诱导IFN-γ的合成,促进Th1免疫应答,使Th1/ Th2免疫平衡向Th1免疫偏移、促进宿主对肺炎链球菌的防御.     

选择性扩增外周血和支气管肺泡灌洗液中γδT细胞的研究

目的 :探讨选择性扩增外周血和支气管肺泡灌洗液 (BALF)中γδT细胞的方法 ,以获得高纯度的γδT细胞亚群。方法 :应用梯度离心法分离大鼠 (n =10 )外周血和BALF中的单个核细胞 ,经贴壁除去单核 /巨噬细胞后 ,用补体攻击αβT细胞 ,再用抗TCRγδ单克隆抗体 (mAb)通过固相法加IL 2刺激选择性培养扩增γδT细胞 (简称“攻击洗淘法”) ;通过细胞生长曲线观察细胞增殖变化 ,采用免疫组化法和流式细胞仪检测鉴定γδT细胞纯度。结果 :PBMC和BALF中的γδT细胞在抗TCRγδmAb和IL 2存在下 ,无须再用抗原刺激 ,能维持较长时间增殖 ;经“攻击洗淘法”纯化后扩增的γδT细胞纯度达到 81%～99%。结论 :“攻击洗淘法”能高度纯化扩增外周血和BALF中的γδT细胞     

端粒酶逆转录酶、RNA成分和相关蛋白1基因在肺癌组织中的表达及其临床意义

用逆转录PCR（RT－PCR）法对手术切除的40例肺癌组织，9例肺部良性实质性病变和22例癌旁正常组织的端粒酶逆转录酶（hTERT)、RNA成分（hTR)和相关蛋白1（hTEP1)mRNA表达进行了检测，并与肺癌的病理分型、TNM分期进行了比较。发现肺癌组织、肺部良性实质性病变、癌旁正常组织的hTR、hTEP1普遍呈阳性表达，3组间阳性率比较差异无显著性（P＞0.05)，而hTERT基因表达肺癌组织（32/40,80%)高于良性实质性病变（5／9，56％），也高于癌旁正常组织（3/22,13%)，3组间差异有极显著性（P＜0.001)。hTERT在肺癌组织中的表达率Ⅲ期（14／14，100％）高于Ⅱ期（11／14，78％）,Ⅱ期高于Ⅰ期（7／12，58％）。鳞、腺癌间hTERT mRNA表达无显著差异。结果表明：端粒酶基因表达上调在肺癌发生发展中起重要作用，端粒酶也参与部分肺说良性实质性病变发病机制；用RT－PCR检测hTERT mRNA表达有助于肺癌恶性程度的判断和肺部良、恶性病变的鉴别。