体外模拟CO2、He气腹对胃癌细胞增殖的影响

目的 研究体外建立模拟CO2、He气腹环境对胃癌MKN-45细胞增殖的影响,初步探讨CO2气腹腹腔镜胃癌手术的安全性.方法 体外建立模拟CO2、He气腹环境,全自动气腹机维持压力为12 mmHg,作用3 h并没对照组.处理后0、0.5、1、1.5、2、2.5、3 h,用pH计检测细胞培养液pH值变化;用MTT法检测第1、2、3、4、5、6、7天细胞增殖情况.结果 处理结束后CO2气腹组细胞培养液pH值呈弱酸性,与对照组比下降非常显著(P<0.01),处理后2 h pH值恢复正常;He气腹组pH值呈弱碱性,与对照组比升高显著(P<0.05),1.5 h恢复止常.MTT法检测细胞增殖结果 显示,CO2气腹组和He气腹组人胃癌MKN-45细胞的增殖与对照组比无统汁学差异(P>0.05).结论 体外模拟12 mmHg CO2气腹和He气腹持续作用3 h时,均不促进胃癌细胞增殖.     

Bcl-2蛋白表达在人肾细胞癌株多药耐药中的作用

目的探讨Bcl-2基因在人肾细胞癌株多药耐药中的作用。方法应用流式细胞仪(AnnexinV染色)检测及免疫组织化学技术,分别对阿霉素诱导的GRC-1和RCC-925的细胞凋亡及其Bcl-2蛋白表达进行研究。结果阿霉素浓度为0.1及1.0mg/L时,GRC-1细胞凋亡百分数(12.3±4.4)%及(35.9±1.9)%与RCC-925细胞凋亡百分数(35.7±11.9)%及(66.9±14.9)%之间存在显著性差异(P<0.01),高度耐药细胞株GRC-1的细胞凋亡明显受到抑制;GRC-1中Bcl-2蛋白表达水平明显高于低度耐药细胞株RCC-925(P<0.001)。结论Bcl-2蛋白在人肾细胞癌株多药耐药中高表达,可能是导致其细胞凋亡受抑制的原因,与人肾细胞癌株多药耐药的产生相关。     

模拟CO2气腹在体外对胃癌细胞生长、凋亡和nm23H1、CD44v6表达的影响

目的 通过体外对胃癌细胞系的培养,探讨体外建立的CO2气腹模拟环境对胃癌细胞系SGC-7901的生长、凋亡和nm23H1、CD44v6表达的影响.为腹腔镜用于治疗消化道恶性肿瘤的安全性作初步评价,并提供相关的实验室证据.方法 收集对数生长期SGC-7901细胞,胰酶消化制成细胞悬液,根据不同实验的需要以不同的细胞浓度接种于不同的培养板,培养24h细胞贴壁后,随机分为4组:对照组、CO2气腹作用1h组、CO2气腹作用2h组、CO2气腹作用3h组,其中作为对照组的细胞始终置于细胞培养孵箱中培养,而实验组在纯CO214mm Hg压力下培养1、2、3h,然后再置于37℃细胞孵箱内培养.48h后收获细胞用MTT法检测各组细胞的增殖情况;用流式细胞技术检测各组细胞周期分布情况和凋亡比例;RT-PCR检测各组细胞nm23H1、CD44v6 mRNA转录水平;免疫细胞化学检测各组细胞中nm23H1、CD44v6的表达情况.结果 各CO2作用组经过模拟CO2气腹环境培养后,除1h作用组较对照组吸光度差异无统计学意义外,2h和3h作用组吸光度较对照组均显著上升(P<0.05);流式细胞仪检测各组细胞周期,对照组和各CO2作用组在培养48h后随CO2作用时间增加,增殖指数上升幅度变大,但1h作用时间组和对照组增殖指数差异无统计学意义(P>0.05),2h和3h作用组增殖指数和对照组比较显著上升(P<0.05);凋亡细胞比例随CO2作用时间的延长而下降,CO2作用1h时,凋亡细胞比例与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),1h后,凋亡细胞比例差异更显著(P<0.01);PCR电泳结果经凝胶成像自动分析系统分析发现实验组nm23H1-mRNA表达与对照组比较差异不具有统计学意义(P>0.05),而CD44v6-mRNA表达2h和3h组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);免疫细胞化学结果显示CO2气腹可使CD44v6的表达上调,其中2～3h组差异有统计学意义(P<0.01),但CO2气腹对nm23H1表达的影响无统计学意义(P>0.05).结论 在体外实验中模拟CO2气腹环境促进了恶性肿瘤细胞的增殖、抑制了其凋亡,使CD44v6的表达上调,而对nm23H1的表达无影响;尽管CO2气腹促进肿瘤细胞生长、增加肿瘤细胞播散转移的机制未明,但其可使CD44v6的表达上调,有可能通过CD44v6基因的功能机制增加恶性肿瘤细胞侵袭和转移的潜在风险.     

模拟CO_2气腹对腹膜间皮细胞功能及其对胃癌细胞黏附的影响

目的 通过体外模拟CO_2气腹环境,观察其对腹膜间皮细胞损伤、增殖、分泌功能及对人胃腺癌细胞AGS、MKN-45与间皮细胞黏附的影响.方法 以体外原代培养腹膜间皮细胞为实验对象.实验分为对照组和CO_2处理组,其中CO_2处理组又按照压力不同分为10、12、15 mm Hg组.问皮细胞经不同压力CO_2处理后用乳酸脱氢酶法检测细胞损伤,氯化硝基四氮唑蓝法检测细胞增殖活性,免疫组化法检测细胞分泌功能,流式细胞仪检测胃腺癌细胞与间皮细胞黏附率.结果 lO、12mm Hg组LDH水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),15 mm Hg组较对照组高(122.79±4.28比100.89 ±1.22,P<0.05).10、12 mm Hg组间皮细胞增殖活性与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);15 mm Hg组前48 h内与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),72 h时较对照组低(1.08±0.05比1.21±0.05,P<0.05).各CO_2气腹组白细胞介素6(IL-6)表达水平较对照组高(P<0.05),且15 mm Hg组IL-6表达水平持续升高(P<0.05).各CO_2气腹组AGS、MKN-45细胞与腹膜间皮细胞黏附率与对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 模拟10、12 mm HgCO_2气腹环境对腹膜间皮细胞的损伤、增殖活性无明显影响,而15 mm Hg CO_2气腹环境抑制腹膜间皮细胞增殖并造成间皮细胞损伤.CO_2气腹环境使间皮细胞IL-6表达水平升高,可能有利于腹膜间皮细胞发挥免疫功能.CO_2气腹环境并不促进胃癌细胞与腹膜间皮细胞黏附.     

miR-425调控PDL-1通路调节肾上皮细胞增殖、凋亡作用的实验研究

目的:探讨miR-425通过调控PDL-1通路调节肾上皮细胞的增殖及凋亡作用。方法:肾上皮细胞HRCEpiC分别转染miR-425模拟物及对照模拟物,采用qRT-PCR方法检测miR-425表达水平,采用MTT法与Tunel试验测定细胞增殖及凋亡作用,采用Western blot实验测定PDL-1表达水平。结果:qRT-PCR结果显示转染后实验组miR-425的表达水平较空白组、阴性对照组升高约37.82倍。转染48h后实验组、阴性对照组与空白组的活细胞比例分别为(75.22±3.19)%、(98.29±2.11)%和(100±0.00)%,细胞凋亡率分别为(17.20±2.49)%、(4.29±1.44)%和(0.52±0.11)%,组间对比差异有统计学意义(P<0.05);转染48h后Western blot检测显示实验组的PDL-1表达水平都明显低于阴性对照组与空白组(P<0.05)。结论:miR-425可通过激活PDL-1通路,降低肾上皮细胞增殖能力,提高其凋亡能力,从而介导肾上皮细胞的生物学行为。     

模拟二氧化碳气腹对人肾癌786-O细胞体外增殖的影响

目的:通过建立体外模拟CO2:气腹环境,研究CO2气腹对人肾癌786-O细胞增殖的影响.方法:建立体外模拟CO2气腹环境.以14mmHg气压对人肾癌786-O细胞作用不同时间(2、4 h),以培养于常规条件下肾癌细胞为对照,用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和Survivin蛋白表达水平.结果:与对照组比较,CO2气腹处理后的两组人肾癌786-0细胞增殖速度明显加快(P<0.05).且48 h后细胞增殖速度的加快与气腹作用时间呈直线相关(R2=1,P<0.01);细胞周期中处于增殖期的细胞比例显著增高(P<0.01);PCNA表达明显增强(P<0.01);细胞凋亡率亦显著减少(P<0.05),且凋亡率的减少与气腹作用时间呈直线相关(R2=1,P<0.01);Survivin表达显著增强(P<0.01)结论:体外模拟CO2气腹环境,可促进人肾癌786-O细胞增殖,且随着接触CO2时间的延长,肾癌786-O细胞增殖速度加快.     

模拟低氧对舌鳞癌SCC-15细胞系中SOX2和OCT4表达的影响

目的 研究模拟低氧条件对舌鳞癌SCC-15细胞增殖、周期、凋亡的影响,及SOX2和OCT4蛋白、mRNA的表达变化.方法 体外培养舌鳞癌SCC-15细胞,加入模拟低氧物去铁胺(desferrioxamine,DFO)模拟低氧环境,为模拟低氧组,同时设置不加DFO的常氧组为对照,采用CCK-8法检测SCC-15细胞的增殖率;流式细胞技术检测SCC-15细胞的周期和细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测常氧组和模拟低氧组SCC-15细胞中低氧诱导因子1α(HIF-1α)、SOX2及OCT4蛋白的表达;qPCR检测常氧组和模拟低氧组SCC-15细胞中HIF-1α、SOX2及OCT4mRNA的表达.结果 与常氧组相比,模拟低氧组SCC-15细胞的增殖受到抑制(P＜0.05),G1期细胞所占比例上升、S+G2期细胞所占比例下降(P＜0.05),细胞凋亡率未见明显变化(P＞0.05);蛋白质印迹法结果显示,与常氧组比较,模拟低氧组SCC-15细胞中HIF-1α、SOX2、OCT4蛋白的表达均升高,且HIF-1α、OCT4蛋白的升高幅度大于SOX2蛋白,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜o.01);qPCR结果显示,两组SCC-15细胞中HIF-1α mRNA水平差异无统计学意义(P＞0.05),而模拟低氧组SCC-15细胞中SOX2、OCT4 mRNA的表达水平高于常氧组(P＜0.05).结论 DFO可以有效模拟低氧环境,促进SOX2和OCT4的蛋白和mRNA表达水平升高.     

FK506对肾脏保存中肾细胞凋亡的影响

目的探讨肾脏保存中肾细胞凋亡及FK506的作用。方法建立离体大鼠肾脏模型,采用细胞凋亡原位末端标记技术(TUNEL),分别检测肾脏保存2、4、8、16h组肾细胞凋亡及FK506对其表达的影响。结果FK506保存组8、16h组肾细胞凋亡指数明显低于对照组(P<0.05)。结论FK506使肾脏保存中肾细胞凋亡减少。FK506对肾脏保存过程中的损伤具有保护作用。     

2-DG对体外培养人食管癌细胞周期及凋亡的影响

目的:研究2-脱氧葡萄糖(2-Deoxy-D-glucose,2-DG)对体外培养人食管癌Eca109细胞周期及凋亡的影响。方法:建立体外低氧模型,实验分常氧组和低氧组,利用体外细胞培养及流式细胞分析术等方法,测定不同浓度的2-DG对Eca109细胞周期、凋亡和增殖指数(PI)的影响。结果:常氧条件下2-DG浓度为0 mmol/L、80 mmol/L作用食管癌细胞24 h后,G1期细胞的比例分别为(44.87±0.99)%、(64.60±2.17)%,凋亡细胞的比例分别为(3.90±1.61)%、(7.23±1.43)%;低氧条件下G1期细胞的比例分别为(54.23±1.42)%、(87.74±2.19)%,凋亡细胞的比例分别为(38.02±1.42)%、(68.72±1.47)%,两组间比较有统计学差异(P<0.05)。结论:2-DG能剂量依赖性地导致细胞周期阻滞及细胞凋亡,使G1期细胞增多,同时伴有S期、G2/M期细胞比例的相应减少,且在低氧条件下作用更加明显。     

体外模拟二氧化碳气腹环境对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的通过建立体外模拟二氧化碳(CO2)气腹的手术环境,研究CO2气腹环境对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响,对腹腔镜用于宫颈癌手术的安全性作出初步评价。方法体外建立模拟CO2气腹环境,流式细胞仪PI染色分析宫颈癌细胞株Hela细胞周期和凋亡,比较不同CO2灌注压力(0～16mmHg)和作用时间(1～4h)对细胞增殖程度和凋亡的影响,MTT比色法测定活细胞数量。结果Hela细胞在不同的CO2气腹环境中培养48h后,实验组与对照组一样均呈增殖性生长。但随压力增加和作用时间的延长,实验组细胞增殖的速率变慢;48h后,各压力实验组之间的细胞增殖指数(PI)和对照组之间的PI值出现显著性差异(P<0.05)。实验组不同CO2压力作用的凋亡细胞指数随作用时间的增加呈上升趋势,并且随CO2压力的增高,凋亡细胞比例也随之增加,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。MTT比色法显示,Hela细胞随着CO2作用时间的延长和压力的增大,细胞增殖受抑制程度增大,其中4h作用组抑制程度最为显著(P<0.05)。结论体外模拟CO2环境对宫颈癌细胞(Hela)的生长均有明显的抑制作用,其抑制程度与CO2气体的压力和作用时间显著相关;CO2的压力和作用时间,均与宫颈癌细胞凋亡过程有关。     

阿魏酸钠对高糖诱导肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的观察阿魏酸钠（sodiumferulate,SF）对高糖培养的人近端肾小管上皮细胞（humanproximaltubularepithelialcells,HKC）增殖和凋亡的影响。方法选用对数期生长的肾小管上皮细胞,分为对照组、高糖组、高糖加阿魏酸钠组。四甲基偶氮唑盐（microculturetetrazolium,MTT）法观察细胞增殖能力的变化,测定细胞培养液中的乳酸脱氢酶（1actatedehydrogenase,LDH）的含量以判断细胞损伤情况,Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡。结果与对照组比较,高糖组MTT吸光度值（OD值）随培养时间延长明显降低,而高糖加阿魏酸钠组OD值与高糖组比较有明显升高（P〈O．05）。随培养时间的延长,高糖组培养基中LDH水平明显升高,在12h和24h分别为（17．55±2．45）和（28．72±3．11）U／L,而高糖加阿魏酸钠组12h和24hLDH水平降至（11．84±2．18）和（19．984-3．67）U／L,和同时间点高糖组比较均有明显降低（P〈0．05）。高糖处理组培养液中的丙二醛（malondiadehycle,MDA）水平较对照组明显增加（P〈0．01）,超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）活性明显降低（P〈0．01）,阿魏酸钠组培养液中MDA水平明显降低（P〈0．01）,SOD活性明显增加（P〈0．05,P〈0．01）。Hoechst33258荧光染色显示,对照组和高糖加阿魏酸钠组仅见个别凋亡形态细胞,高糖组典型凋亡形态细胞明显增多,细胞凋亡率为34．17％,显著高于正常对照组（5．20％）和高糖加阿魏酸钠组（7．39％,P〈0．01）。结论高糖培养可诱导人近端肾小管上皮细胞的损伤和凋亡,并抑制其增殖。阿魏酸钠对人肾小管上皮细胞系（humankidneycell,HKC）的保护作用可能是通过抑制HKC的损伤和凋亡,以及提高增殖能力实现的。     

二氯化钴所致缺氧对A549细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的:探讨CoCl2作用不同时间所致缺氧对体外培养的人肺腺癌A549细胞株增殖、凋亡和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响。方法:对肺腺癌细胞A549分别进行常氧和氯化钴模拟缺氧培养,采用MTT法检测CoCl2作用不同时间所致缺氧对A549细胞增殖的影响;半定量RT-PCR法测定缺氧不同时间HIF-1αmRNA表达水平的变化。AnnexinV-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测CoCl2作用不同时间缺氧肿瘤细胞凋亡情况。结果:CoCl2对A549细胞增殖抑制作用表现出时间依赖性抑制作用。常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1αmRNA的表达,随着CoCl2作用时间的延长,HIF-1αmRNA水平呈升高趋势,与正常对照组比较,各缺氧组差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,正常对照组、CoCl2作用4、12、24、48 h组细胞凋亡率分别为(0.60±0.10)%、(1.10±0.10)%、(8.63±0.75)%、(12.80±0.85)%和(19.33±0.80)%。结论:CoCl2对A549细胞具有上调HIF-1αmRNA表达作用,可抑制细胞的增殖和一定的凋亡诱导作用,这些说明HIF-1α可能在肺癌的发展中扮演着重要的作用。     

川芎嗪对小鼠Lewis细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨中药川芎嗪对小鼠Lewis细胞的增殖和凋亡作用的影响。方法采用噻唑蓝法检测川芎嗪对Lewis细胞增殖的抑制作用,倒置显微镜观察药物作用前后细胞形态学的变化情况,流式细胞术(FCM)观察Lewis细胞凋亡指标的变化。结果川芎嗪能够抑制Lewis细胞的体外增殖,12.5、25.0、50.0 mg·L-1组的抑制率分别为29.8%、50.5%、61.3%,其48 h半数抑制浓度(IC50)为33.504 mg·L-1。实验组Lewis细胞经12.5、25.0和50.0 mg·L-1的川芎嗪处理48 h后,其凋亡率分别为(19.23±0.17)%、(30.81±0.46)%、(55.26±0.19)%;对照组为(0.64±0.37)%,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论川芎嗪能够抑制Lewis细胞增殖,其作用可能是通过诱导Lewis细胞凋亡和分化实现的。     

低氧对人骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的 探讨二氯化钴(CoCl2)诱导的化学性低氧对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)增殖的影响.方法 采用密度梯度离心法分离、培养hBMSC;用流式细胞仪检测其表面标志物;用CoCl2建立化学性缺氧模型,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪检测hBMSC在不同CoCl2浓度(0、100、150、300 μmol/L)和不同时间(0,12 h及1、2、4、6、7 d)的增殖情况,0 μmol/L CoCl2组为常氧组,后3个浓度组为低氧组.结果 化学缺氧12 h内,hBMSC增殖被抑制;1、2、4 d时各低氧组细胞增殖均高于常氧组,但300 μmol/L CoCl2组与常氧组比差异无统计学意义(P＞0.05);而100μmol/L CoCl2组(0.139±0.003、0.178±0.005、0.224±0.005)和150 μmol/L CoCl2组(0.202±0.020、0.224±0.019、0.263±0.004)增殖明显高于常氧组(0.134±0.005、0.167±0.004、0.206±0.005),其中150μmol/L CoCl2组1 d时增殖最显著(均P＜0.05).6 d时100、150 μmol/LCoCl2组细胞增殖(0.258±0.020、0.264±0.008)仍高于常氧组(0.248±0.004),但优势逐渐减弱(P＜0.05).7 d时这种低氧促增殖的效应消失.结论 CoCl2诱导的化学性缺氧可以促进hBMSC增殖.     

SSAT2通过抑制HIF-1α表达增强肾癌Caki-1细胞化疗敏感性

目的探讨转染精脒/精胺N1乙酰基转移酶2(spermidine/spermine N1-acetyltransferase 2,SSAT2)在低氧条件下对肾癌Caki-1细胞增殖、凋亡和阿霉素敏感性的影响及机制。方法经X-treme GENE HP介导将真核表达质粒pcDNA3.1(D)/V5-His-SSAT2转入肾癌Caki-1细胞,细胞在1%氧浓度下培养,Western blot法检测SSAT2蛋白和低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)蛋白表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡率、死亡率;MTT法检测细胞的增殖,以及不同浓度阿霉素对细胞的抑制率。结果 SSAT2成功转入肾癌Caki-1细胞,与空白细胞组及空载体组比较,转染SSAT2组HIF-1α蛋白表达明显下调(P<0.01),细胞增殖受到明显抑制(P<0.01),细胞凋亡率和死亡率均增加(P<0.05)。阿霉素浓度为2μg/ml时,转染组细胞抑制率可达(67.5±3.7)%,对空白细胞和空载体细胞的抑制率为(54.7±8.4)%、(56.8±7.7)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论转染SSAT2可以通过下调HIF-1α蛋白表达,减少肾癌细胞的增殖,增加肾癌Caki-1细胞的凋亡率、坏死率和对阿霉素的敏感性,针对SSAT2的基因治疗可能成为逆转肾癌耐药的方法之一。     

丙戊酸钠抑制肺癌细胞株A549增殖的研究

目的研究丙戊酸钠（sodium valproate,VPA）对肺癌细胞株A549细胞增殖的影响。方法体外不同浓度VPA不同作用时间处理人肺癌细胞株A549,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞技术分析细胞周期与细胞凋亡的改变。结果2.0 mmol/L VPA作用72 h细胞形态明显改变、细胞数明显减少。1.0mmol/L VPA作用72 h后,细胞增殖被抑制,抑制率为（15.8±2.8）%,与同期对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0.05）;提高处理浓度或延长作用时间,抑制作用有加强趋势。1.0 mmol/L VPA作用72 h后可改变细胞周期分布,G1期细胞比例为（72.2±3.4）%,与同期对照组相比差异显著;2.0 mmol/LVPA处理24～72 h后G1细胞比例由（64.5±3.7）%增加至（79.8±4.4）%,而S期细胞由（30.7±5.17）%降低至（14.2±3.37）%;提高处理浓度或延长作用时间均使G1期细胞比例增高,S期细胞比例减少。2 mmol/L VPA作用24～72 h可提高细胞凋亡率,由（7.30±1.87）%增加到（19.85±2.40）%。结论VPA可抑制肺癌A549细胞生长,改变细胞周期分布、促进细胞凋亡。     

两种方法建立人肾透明细胞癌裸鼠原位移植转移模型及其比较

目的建立人肾癌裸小鼠原位移植转移模型,并比较两种不同方法的结果.方法将肾癌完整组织块和肿瘤细胞悬液种植于裸小鼠肾包膜形成原位移植瘤,并观察和比较两种方法所建立模型的肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率.结果肾癌完整组织块接种的原位成瘤率达75.0%,肾、肺门淋巴结转移率均73.3%,肺转移发生率53.3%;细胞悬液种植的原位成瘤时间较组织块法延迟10 d,成瘤率为40.0%,肺、肾门淋巴结转移率均12.5%,肺脏无转移.结论两种原位移植转移模型均具有人肾细胞癌自然生长过程的特点,肾癌完整组织块原位移植模型优于细胞悬液原位接种模型,为研究人肾细胞癌转移机制和抗转移实验治疗提供了有力工具.     

补骨脂乙素对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用和凋亡诱导作用及其机制

目的：观察补骨脂乙素（IBC）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：将体外培养的Tca8113细胞分为对照组（0 μmol·L^-1）和不同浓度IBC组（10、20、40及80 μmol·L^-1）。通过MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中Akt、p-Akt、Erk、p-Erk、Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平。结果：MTT法检测,随着IBC浓度的增加和作用时间的延长,Tca8113细胞的增殖抑制率逐渐增加,12、24和48h半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（285.13±8.97）、（132.40±7.76）和（58.56±5.93） μmol·L^-1,不同时间点IC₅₀比较差异有统计学意义（P < 0.05）。流式细胞术检测,与对照组（1.69%±0.65%）比较,作用48h后20和40 μmol·L^-1 IBC组细胞凋亡率（分别为8.21%±2.32%和22.45%±1.18%）明显升高（P < 0.05）。Western blotting法检测,与对照组比较,作用48h后20和40 μmol·L^-1 IBC组细胞中Bcl-2、p-Akt和p-Erk表达水平明显降低（P < 0.05）,Bax表达水平明显升高（P < 0.05）;Akt和Erk蛋白表达水平无明显变化（P > 0.05）;与对照组比较,作用48h后40 μmol·L^-1 IBC组Tca8113细胞中Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P < 0.05）。结论：IBC可抑制Tca8113细胞的增殖并诱导细胞凋亡,Akt和Erk通路可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径。     

替普瑞酮对胃上皮细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的：观察替普瑞酮对人正常胃上皮细胞增殖、迁移及凋亡等生物学现象的影响。方法体外培养人正常胃上皮细胞,M T T法检测不同浓度替普瑞酮对胃上皮细胞的增殖作用并确定替普瑞酮最佳作用浓度。T ransw ell实验、划痕实验检测替普瑞酮最佳作用浓度对胃上皮细胞运动能力及迁移作用的影响。流式细胞法检测替普瑞酮最佳作用浓度对胃上皮细胞凋亡的影响。结果替普瑞酮作用于胃上皮细胞24 h后,开始出现促进胃上皮细胞增殖的现象,从10～80μmol／L随着浓度增加,促进作用越明显,而＞80～320μmol／L随着浓度增加,促进作用无明显改变,据此确定药物最佳作用浓度为80μmol／L。80μmol／L浓度替普瑞酮处理胃上皮细胞24 h后,T ransw ell实验显示,对照组的迁移率为1．328±0．208,加药组为3．338±0．293,小室膜下蓝染的细胞加药组明显高于对照组（P＜0．01）;划痕实验显示加药组划痕区域细胞迁移率1．00±0．18,对照组0．72±0．08,加药组迁移率明显高于对照组（P＜0．05）。80μmol／L浓度替普瑞酮处理胃上皮细胞48 h后,加药组细胞凋亡率（11．90±1．53）％低于对照组（25．61±0．15）％,差异有统计学意义（ P＜0．01）。结论替普瑞酮能够促进人胃上皮细胞增殖及迁移,抑制人胃上皮细胞凋亡。