复方鳖甲软肝片对输尿管结扎大鼠肾组织TGF-β1蛋白及其mRNA表达的影响

目的探讨复方鳖甲软肝片对大鼠单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白及其mRNA表达的影响.方法建立UUO肾间质纤维化模型,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝片低、中、高剂量等7组.手术后4周处死大鼠,无菌取肾,制作冰冻切片,采用免疫组织化学和原位杂交方法,分别检测肾组织TGF-β1蛋白及其mRNA表达,使用图像分析系统对结果进行处理,采用SPSS11.5统计软件统计分析.结果模型组肾小管上皮细胞和肾间质其他细胞浆内,有少量的TGF-β1蛋白及其mRNA棕黄色颗粒状阳性反应物;苯那普利对照组细胞浆中棕黄色颗粒状阳性反应物明显减少,与模型组比,P＜0.01;复方鳖甲软肝片治疗组细胞浆中棕黄色颗粒状阳性反应物明显减少,不同剂量组呈剂量依赖关系,与模型组比,P＜0.01.结论 TGF-β1是导致肾间质纤维化的重要因素,复方鳖甲软肝片可以通过下调TGF-β1蛋白及其mRNA的表达,对UUO肾间质纤维化大鼠肾脏起一定的保护作用.     

复方鳖甲软肝片对5/6肾切除大鼠肾组织FN表达的影响

目的:探讨复方鳖甲软肝片对5 / 6肾切除(5 / 6nephrectomize,5 / 6NT)大鼠肾组织纤维粘连蛋白(fi bronectin ,FN)表达的影响。方法:选用SD雄性大鼠,建立5 / 6NT大鼠肾纤维化模型。随机分为8组,正常组、假手术组、模型组、苯那普利组、尿毒清组和复方鳖甲软肝片低、中、高剂量组。采用免疫组织化学方法,以苯那普利、尿毒清为实验对照,检测复方鳖甲软肝片对肾组织FN表达的影响。结果:模型组肾组织FN强阳性表达,在系膜基质和肾小管基底膜出现大量棕黄色颗粒;苯那普利组、尿毒清组FN中等量表达,在系膜基质和肾小管基底膜出现中等量棕黄色颗粒;复方鳖甲软肝片低、中、高剂量组肾组织FN轻度表达明显少于模型组,在系膜基质和肾小管基底膜出现少量棕黄色颗粒,并呈剂量依赖关系。结论:复方鳖甲软肝片抑制5 / 6NT大鼠肾组织FN的表达,可能是该方减缓肾小球硬化和肾纤维化发展的作用机制之一。     

复方鳖甲软肝方防治阿霉素肾病模型大鼠作用机制的实验研究

目的:探讨复方鳖甲软肝方防治阿霉素肾病模型大鼠肾小球硬化的作用机制。方法:将45只Wistar雄性大鼠,适应性喂养1周,测尿蛋白阴性后,随机分为正常组、假手术组、模型组、苯钠普利组、复方鳖甲软肝方组,每周测大鼠体重,每2周1次收集大鼠24h尿量,测24h尿蛋白定量,10周后处死大鼠,分离血清观察血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、胆固醇(Cho)、三酰甘油(TG)、总蛋白(TP)和清蛋白(Alb),应用HE、六胺银染色及Mallory染色,观察肾组织病理学改变,数据用SPSS11.0进行统计学处理。结果:复方鳖甲软肝方能够减轻阿霉素肾病模型大鼠肾组织病理损害,增加阿霉素肾病模型大鼠体重,减少尿蛋白排泄,提高血TP和Alb水平,降低BUN和SCr,改善肾功能。结论:复方鳖甲软肝方能减轻阿霉素肾病模型大鼠的肾脏病理损害,对阿霉素肾病模型大鼠肾小球硬化有一定的保护作用。     

海昆肾喜对阿霉素肾病大鼠肾组织PDGF-BB蛋白及mRNA表达的影响

目的:研究海昆肾喜对阿霉素肾病大鼠肾组织血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)蛋白及mRNA表达的影响。方法:将54只阿霉素肾病模型大鼠随机分为6组:正常组、假手术组、模型组、苯那普利组、海昆肾喜低剂量组及高剂量组。实验第10周观察各组大鼠24 h尿蛋白定量,肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平及肾组织形态学变化;应用免疫组化及原位杂交方法分别观察PDGF-BB蛋白及mRNA在肾组织中的表达。结果:海昆肾喜低剂量组及高剂量组24 h尿蛋白定量和SCr、BUN水平较模型组均明显降低。PDGF-BB蛋白及mRNA的表达见于肾小管上皮细胞胞浆及肾小球系膜细胞,其表达较模型组显著减少。结论:海昆肾喜能抑制阿霉素肾病大鼠肾组织PDGF-BB蛋白及mRNA的表达,这可能是该药物防治肾小球硬化的作用机制之一。     

黄芪对糖尿病肾病大鼠肾组织CTGF 蛋白及其mRNA 表达的影响

目的 探讨黄芪对糖尿病肾病大鼠肾组织结缔组织生长因子 ( CTGF ) 蛋白及其 mRNA 表达的影响. 方法采用一侧肾切除、高糖高脂饮食和链脲佐菌素 ( STZ ) 腹腔注射法建立大鼠糖尿肾病模型.将大鼠随机分为 4 组,假手术组、模型组、黄芪组、厄贝沙坦组,黄芪组、厄贝沙坦组大鼠给予相应药物治疗.实验12 周处死动物,常规病理学检查,免疫组化法检测肾组织 CTGF 表达,RT-PCR 法检测肾皮质 CTGF mRNA 表达水平.结果 与假手术组比较,模型组大鼠肾组织 CTGF 表达增加,CTGF mRNA 表达增加 ( P<0.01 );与模型组比较,黄芪组大鼠肾组织 CTGF 表达明显降低,CTGF mRNA 表达显著减少 ( P<0.05 ).结论 :黄芪可治疗糖尿病肾病,其机制可能与降低肾组织 CTGF 蛋白及其 mRNA 的过度表达有关.     

三七总皂苷对阿霉素肾病大鼠肾组织ET-1蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨三七总皂苷对阿霉素肾病大鼠肾组织内皮素-1蛋白及mRNA表达的影响。方法将45只大鼠随机分为5组,正常组、假手术组、模型组、苯那普利组和三七总皂苷组,手术切除大鼠右侧肾脏并腹腔注射阿霉素建立模型,10周末处死大鼠,无菌取肾脏,进行肾组织HE染色及masson染色,观察肾组织病理形态学改变,采用免疫组织化学及原位杂交方法分析肾组织内皮素-1蛋白及mRNA的表达。结果模型组大鼠肾组织肾小管上皮细胞(TEC)、肾小球系膜细胞(GMC)及肾小球上皮细胞(GEC)胞浆中ET-1蛋白及mRNA表达强阳性,三七总皂苷组大鼠肾组织ET-1蛋白及mRNA表达较模型组显著减少,有统计学意义(P<0.05)。结论三七总皂苷能够减少阿霉素肾病大鼠肾小管上皮细胞、肾小球系膜细胞及肾小球上皮细胞胞浆中内皮素-1蛋白及mRNA的表达,进而起到保护肾功能、延缓慢性肾衰竭的病程进展。     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝脏Smad2/3表达的影响

目的观察银杏叶提取物(GbE)对肝组织Smad2/3表达的影响,探讨GbE抗肝纤维化的作用机制。方法采用CCl4诱导大鼠肝纤维化,同时分别以200、100、50mg/(kg.d)的GbE进行干预,并设复方鳖甲软肝片为对照组,6周后取肝组织,原位杂交及免疫组化技术分别检测肝组织Smad2/3mRNA及蛋白的表达。结果模型组大鼠肝组织Smad2/3mRNA及蛋白的表达正常组明显增高,应用不同剂量的GbE及复方鳖甲软肝片干预后肝组织Smad2/3mRNA及蛋白较模型组显著下降。结论 GbE降低Smad2/3mRNA及蛋白表达可能是其抗肝纤维化作用的重要机制之一。     

鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏的保护作用

目的观察鳖甲煎丸对肾间质纤维化实验大鼠肾脏的保护作用并探讨其作用机理。方法采用单侧输尿管结扎的方法复制大鼠肾梗阻模型,将其随机分为缬沙坦组、鳖甲煎丸组与模型组,并设假手术组。观察梗阻侧肾脏肾上腺髓质素(ADM)在蛋白及基因水平的表达,并测定其在肾组织中蛋白含量。结果模型组及各治疗组大鼠肾脏中肾上腺髓质素组织蛋白含量、蛋白表达以及mRNA的基因表达较假手术组明显降低,鳖甲煎丸组、缬沙坦组的含量及表达均高于模型组(P<0.05?,但两组之间比较无显著性差异。结论鳖甲煎丸能够明显上调肾间质纤维化大鼠肾脏ADM的蛋白及mRNA的表达,对肾脏起到保护作用。     

复方鳖甲软肝方防治肺纤维化大鼠自由基损伤作用的实验研究

目的研究复方鳖甲软肝方防治肺纤维化大鼠自由基损伤的作用和机制。方法SD雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、强的松(0.56 m g/kg)组、复方鳖甲软肝方高、中、低剂量(1.4、0.7、0.35 g/kg)组,每组10只。除正常组、假手术组外,其余各组大鼠气管滴注盐酸博莱霉素制备大鼠肺纤维化模型。造模后第2天,各组分别ig给药,连续给药4周。测定各组大鼠肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(G SH-Px)、诱导型一氧化氮合酶(iNO S)活性和丙二醛(M DA)水平;采用W estern b lotting实验研究肺组织蛋白中核因子κB(NF-κB)和核因子κB抑制剂(IκBα)的表达。结果复方鳖甲软肝方能提高肺纤维化大鼠体内的G SP-Px和SOD活性,降低M DA水平和iNO S活性,减弱肺纤维化大鼠肺组织核蛋白中NF-κB表达,增强胞浆蛋白中IκBα的表达。结论复方鳖甲软肝方能调节肺纤维化大鼠体内自由基水平,减轻自由基对肺组织结构的氧化损伤,调节肺组织蛋白IκBα的表达,进而抑制NF-κB表达,是该方防治肺纤维化的作用机制。     

氯沙坦对糖尿病肾病大鼠肾小球硬化的影响

目的:探讨氯沙坦对糖尿病肾病大鼠细胞外基质降解作用的机制.方法:采用链脲霉素(streptozotozin,STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠模型,将大鼠随机分为正常组、模型组和氯沙坦组,16周后测血肌酐、尿素氮.对肾组织进行HE和Masson染色,计算肾小球硬化指数.Western免疫印迹测定肾脏Ⅳ型胶原和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的蛋白表达量,real time-PCR方法检测肾组织Ⅳ型胶原mRNA,转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)mRNA和CTGF mRNA的表达水平.结果:氯沙坦组血尿素氮、肾小球硬化指数及肾组织Ⅳ型胶原、CTGF蛋白表达均低于模型组(均P<0.05);Ⅳ型胶原mRNA,TGF-βJ mRNA及CTGF mRNA的表达水平均低于模型组(均P<0.05).结论:氯沙坦可能通过抑制TGF-βl和CTGF,减少Ⅳ型胶原积聚,减轻肾小球硬化.     

氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效观察

目的：观察氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效,探讨氟非尼酮对肾间质纤维化大鼠肾 组织中I型胶原(collagen type I,Col I),III型胶原(collagen type III,Col III),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA),结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和血小板源性生长因子(platelet derived growth factor, PDGF)表达的影响。方法：将15只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和氟非尼酮组(n=5)。对模型组和氟非尼酮 组大鼠行左侧输尿管结扎术建立单侧输尿管梗阻模型。氟非尼酮组从造模前24 h开始以氟非尼酮[125 mg/(kg.d)]溶于 0.5%羧甲基纤维素钠(sodium carboxyl methyl cellulose,CMC-Na)中灌胃,模型组和假手术组以等体积0.5% CMC-Na灌 胃。于术后14 d处死大鼠,取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变;用免疫组织化学检测 Col I,Col III,α-SMA,PDGF,CTGF的蛋白表达;用RT-PCR检测Col I,Col III,PDGF,CTGF mRNA表达。结果：模 型组肾间质损伤指数、胶原相对面积评分及Col I,Col III mRNA和蛋白表达均较假手术组增高(P<0.05),氟非尼酮治 疗后明显改善(P<0.05)。模型组肾组织α-SMA,PDGF,CTGF蛋白表达及PDGF,CTGF mRNA表达均较假手术组明显 增加(P<0.05),氟非尼酮治疗后表达均明显减少(P<0.05)。结论：氟非尼酮(125 mg/kg.d)能够显著改善单侧输尿管梗阻 大鼠肾间质纤维化,其作用机制与抑制肌成纤维细胞的活化及关键促纤维化因子PDGF和CTGF的表达有关。     

结缔组织生长因子在阿霉素肾病中表达的变化及霉酚酸酯干预作用研究

目的分析阿霉素肾病中结缔组织生长因子(CTGF)的变化,研究霉酚酸酯对其干预作用及机制。方法24只SD大鼠随机分为对照组、阿霉素肾病模型组、阿霉素肾病霉酚酸酯治疗组。大鼠尾静脉一次注射阿霉素75mg·kg-1,治疗组第6周开始霉酚酸酯粉末20mgkg-1d-1混悬于1ml蒸馏水中灌胃,10周时处死所有大鼠,观察肾组织病理变化,应用免疫组织化学方法和原位杂交技术检测CTGF在肾组织中的表达。结果阿霉素肾病组大鼠较对照组肾小球系膜及基质明显增生,免疫组织化学染色及原位杂交显示肾小球和肾小管区CTGF蛋白及CTGFmRNA表达量明显上升(P<005),霉酚酸酯治疗组肾小球系膜及基质的增生程度较阿霉素肾病组明显减轻,肾小球和肾小管区CTGF蛋白及CTGFmRNA表达量明显低于阿霉素肾病组(P<005)。结论阿霉素肾病动物CTGF表达增加,观察到间质纤维化表现;霉酚酸酯可以减轻间质纤维化,延缓慢性肾病发展,其机理可能是通过下调CTGF的表达。     

罗格列酮对糖尿病肾病大鼠肾脏结缔组织生长因子表达的影响

目的:探讨罗格列酮(RGZ)对糖尿病肾病大鼠肾组织结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法:大鼠随机分成治疗组、模型组、正常组(n=9)。治疗组、模型组大鼠用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病模型,均造模成功7只。治疗组大鼠于造模前24h行RGZ灌胃,模型组和正常组以等体积蒸馏水灌胃。12周后处死动物,观察肾小球病理学变化及细胞外基质(ECM)相对面积,用免疫组织化学法检测肾皮质CTGF的表达。结果:治疗组及模型组肾小球ECM相对面积及肾皮质CTGF表达水平均较正常组升高,但治疗组2指标均较模型组低(P<0.01);治疗组肾脏病理学改变较模型组减轻。结论:RGZ能改善糖尿病时肾脏的病理变化,延缓肾纤维化的发生,其作用可能与抑制肾组织中CTGF的表达有关。     

益气活血方对肾间质纤维化大鼠肾脏TGF—β／smad信号通路及结缔组织生长因子的影响

目的：观察益气活血方对肾间质纤维化大鼠肾脏TGF-β／smad信号通路及结缔组织生长因子（connectivetissue growthfactor,CTGF）的影响。方法：健康雄性Wistar大鼠30只诱导建立单侧输尿管梗阻（unilateralureteralobstruction,UUO）致肾小管间质纤维化模型,模型成功后随机分为模型组,益气活血方大、中、小剂量组和西药组,另取健康雄性Wistar大鼠6只设为假手术组。3周后处死大鼠,称取体质量;取血清检测肌酐（creatinine,Cr）、尿素氮（bloodureanitrogen,BUN）水平;取肾脏组织采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法和免疫印迹法检测各组转化生长因子G（transforminggrowthfactor—B,TGF-β）、smad2、smad7、CTGFmRNA和蛋白表达水平;苏木精一伊红染色和Masson染色检测各组肾间质纤维化指数。结果：模型组大鼠血清Cr和BUN值较假手术组偏高;与模型组比较,大剂量益气活血方可以降低Cr和BUN值,但差异无统计学意义。苏木精-伊红染色和Masson染色显示模型组肾小管上皮细胞萎缩,大部分肾小管管腔扩张,间质纤维组织增生,大量炎性细胞浸润,肾小球数目明显减少,胶原成分显著增加。益气活血方大剂量组、中剂量组和西药福辛普利钠组大鼠肾间质炎性细胞浸润、纤维组织增生、肾小管扩张情况较模型组明显减轻,胶原成分明显减少。与假手术组比较,模型组大鼠肾脏组织中TGF—D、smad2和CTGFmRNA以及蛋白表达水平明显升高（P〈0．05）,smad7的表达水平则明显降低（P〈0．05）。与模型组比较,益气活血方大剂量组和中剂量组大鼠TGF-β、smad2、CTGFmRNA和蛋白表达明显下降（P〈0．01,P〈0．05）,smad7表达明显升高（P〈0．01,P＜0．05）。结论：UUO大鼠肾组织中CTGFmRNA的表达可能通过TGF-β／smad信号通道进行调节;益气活血方可以通过下调TGF—β、smad2和上调smad7的表达来抑制CTGF表达,进而遏制肾纤维化的进展。     

Rg1、Rb1对糖尿病肾病大鼠肾结缔组织生长因子的影响

目的:探讨Rg1、Rb1对糖尿病肾病(DN)大鼠肾结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达的影响。方法:雄性SD大鼠75只,按体质量随机分为正常组10只,模型组65只。模型组大鼠按55 mg/kg体质量腹腔一次性注射链脲佐菌素,72 h后血糖≥16.7 mmol/L,尿糖≥4"+"者为糖尿病造模成功。将造模成功的大鼠按血糖高低随机分为模型组、厄贝沙坦组、Rg1大剂量组、Rg1小剂量组和Rb1组。用药12周,处死大鼠无菌取肾,行肾组织HE、Mallory染色,观察各生化指标和肾组织病理形态学改变,采用免疫组化方法分析肾组织CTGF蛋白的表达情况。结果:模型组肾组织表现为DN病理改变;正常组及用药组肾小管上皮细胞、肾间质细胞胞浆有轻度CTGF表达,模型组CTGF则呈强阳性表达,Rg1、Rb1组CTGF表达较模型组明显减少(P<0.05)。结论:Rg1、Rb1可通过对肾组织CTGF蛋白表达下调而发挥治疗和预防糖尿病肾病的作用。     

α-硫辛酸对糖尿病肾病模型大鼠肾组织转化生长因子-β1和结缔组织生长因子表达的影响

目的:通过α-硫辛酸对糖尿病肾病模型大鼠肾组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响,研究其延缓肾脏纤维化的作用及机制,为临床防治糖尿病肾病提供实验依据。方法:将50只健康SD大鼠随机分为正常对照组,糖尿病模型组和α-硫辛酸低、中、高剂量组。采用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)以60 mg/kg于左下腹腔一次性注射建立大鼠糖尿病模型。α-硫辛酸低、中、高剂量组分别按15、30、60 mg/(kg.d)灌胃12周。检测各组大鼠的血糖、肾重指数,制备肾脏石蜡切片,测定肾小球平均截面积(MGA)并计算肾小球平均体积(MGV)。用SureStep Plus型血糖仪于实验结束前检测空腹血糖;经HE染色,光镜下观察肾小球体积,肾小球基底膜变化,用免疫组化法检测肾组织TGF-β1、CTGF的表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠血糖明显升高;与模型组相比,α-硫辛酸各剂量组大鼠血糖显著降低;糖尿病模型组大鼠肾重指数明显增加,光镜显示糖尿病模型组大鼠的肾小球体积明显增大,系膜区增宽,毛细血管管腔受压,肾小球基底膜增厚,肾组织TGF-β1、CTGF蛋白表达明显降低;糖尿病模型组MGA和MGV明显扩大,与其相比,α-硫辛酸各剂量组有不同程度的缩小。结论:α-硫辛酸通过抑制肾组织TGF-β1、CTGF的表达而发挥其抗纤维化的作用,从而延缓STZ糖尿病大鼠肾脏纤维化的发展。     

PAX2小干扰RNA在UUO大鼠体内的筛选与鉴定

目的梗阻性肾病是由于泌尿道机构和（或）功能改变,阻碍尿液的排出,导致肾实质病理和功能损害的临床综合征。病理学特征主要表现为肾小管萎缩和间质纤维化。文中通过RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术,筛选及鉴定有效抑制肾间质纤维化大鼠肾组织PAX2基因表达的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）序列。方法制作单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruction,UUO）模型,光镜下观察肾组织病理形态学变化;针对大鼠PAX2 mRNA序列全长（mRNA:NM₀01106361）,设计合成4对siRNA干扰序列和阴性对照序列,为了观察体内转染同时合成FAM标记的阴性对照,以invivo jetPEI体内转染试剂为载体转染至UUO大鼠肾被膜下,利用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测肾组织PAX2 mRNA及蛋白表达。结果通过HE和Masson染色观察到UUO模型3 d后肾纤维化表现;UUO模型转染3 d后,荧光显微镜观察到肾小管周围存在绿色荧光,4对干扰序列均有不同程度的抑制肾皮质PAX2 mRNA及蛋白的表达,其中siRNA3位点对PAX2干扰效果最强,mRNA及蛋白抑制分别达到55%和81%。结论成功筛选出1对有效抑制肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞PAX2表达siRNA,为深入研究肾纤维化的发病机制提供新的手段。     

VEGF及CTGF在糖尿病大鼠肾脏中表达及作用的观察

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)及结缔组织生长因子(CGTGF)在糖尿病肾脏中的表达,探讨其在糖尿病肾病发展中的作用.方法 建立STZ糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组(CON组)、糖尿病模型组(DM组).12 w后分别检测血清中血糖、尿素及肌酐水平、尿蛋白排泄率、肾脏质量指数,免疫组化法检测肾组织(VEGF)及结(CTGF)的蛋白表达.结果 与CON组比较,DM组尿蛋白排泄率明显增加(P<0.01),血清中血糖、尿素、肌酐水平升高(P<0.05),肾脏质量指数增加(P<0.01),肾组织中VEGF及CTGF表达水平明显升高(P<0.05).结论 糖尿病大鼠肾脏损伤可能与VEGF及CTGF的过度表达有关.