TGF- β 1/SMAD SIGNALING PATHWAY MEDIATES p5 3 -DEPENDENT APOPTOSIS IN HEPATOMA CELL LINES

HEPATOCELLULARcarcinoma(HCC)isoneofthemostcommonanddevastatingmalignanttumors,withanestimatedannualincidenceofonemillioncases,mainlyinAfricanandAsianregions.Inrecentyears,importantadvanceshavebeenmadeinunder standingthemolecularpathogenesisofHCC,butonlyli…     

EFFECTS OF TGF-β_1 ON THE EXPRESSION OF PLASMINOGEN ACTIVATOR INHIBITOR TYPE 1 IN CULTURED HUMAN RENAL INTERSTITIAL FIBROBLASTS

ffeSllm6 Objectif POur studier ies effets de facteur gi transfonnant de croimnce (tranSforming growth factor-ac,~ ) sur l' exPlession de nzARN de l' inhibiteur d' activateur de Plermi~ne type 1 (PAl-1 ) dens la fibrose interstitiellerdnale in vitro. met~ bofibroblastes rdnaux humans ~t iSOIds et cultivds in yi irc. ac cellules ~t stimuldes per TGFPI de diverses concentrations differenteS (de 0 d 10ng/ml ) et dens une durde diffhente (de 0 d 48h ). L' expression de ~ dePAl-1 est exclude…     

The Role of TGF-β_1 in Mice Hepatic Fibrosis by Schistosomiasis Japonica

lthasalreadybeenestab1ishedthatthehepaticfibrosisischaracterizedbyhyperplasiaandabnormaldepositofextrahepatocellularmatrix,especiallycolla-gen.Transforminggrowthfactor--5,(TGF--5,)isre-gardedasanimportantmodulationfactorinprocessofhepaticfibrosisformation.Tofurthere1ucidatetheroleofTGF--P,inhepaticfibrosisformationcausedbySchistosomiasisiaponl/a,weusedELISAandVGstainingtostudythechangeofthelevelofserumTGF--0,andlivercollagenfiberandreticularfiberinmlce.1MATERIALSANDMETHODS1.1Expe…     

Construction of recombinant adenovirus co-expression vector carrying the human transforming growth factor-β1 and vascular endothelial growth factor genes and its effect on anterior cruciate ligament fibroblasts

Background  Remodeling of the anterior cruciate ligament (ACL) graft usually takes longer than expected. Gene therapy offers a radical different approach to remodeling of the graft. In this study, the internal ribosome entry site (IRES) sequence was used to construct a new recombinant adenovirus which permits co-expression of transforming growth factor-β1 (TGFβ1) and vascular endothelial growth factor 165 (VEGF165) genes (named Ad-VEGF165-IRES-TGFβ1). We investigated the effects of the new adenovirus on the migration of and matrix synthesis by ACL fibroblasts.
Methods  Adenoviral vector containing TGFβ1 and VEGF165 genes was constructed. ACL fibroblasts were obtained from New Zealand white rabbits. After ACL fibroblasts were exposed to Ad-VEGF165-IRES-TGFβ1, the expression of VEGF165 and TGFβ1 proteins were assessed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Western blotting analysis. Bioassay of VEGF165 and TGFβ1 proteins were assessed by Western blotting analysis. Proliferation and migration of ACL fibroblasts were assessed by in vitro wound closure assay. Gene expression of collagen type I, collagen type III, and fibronectin mRNA among matrix markers were assessed by real-time PCR.
Results  The results showed the successful construction of a recombinant co-expression adenovirus vector containing TGFβ1 and VEGF165 genes. Co-expression of TGFβ1 and VEGF165 can induce relatively rapid and continuous proliferation of ACL fibroblasts and high gene expression of collagen type I, collagen type III, and fibronectin mRNA among matrix markers.
Conclusion  Co-expression of TGFβ1 and VEGF165 genes has more powerful and efficient effects on the migration of and matrix synthesis by ACL fibroblasts.

     

二氢杨梅素通过TGF-β1/Smad信号通路抑制肝星状细胞活化的作用研究

目的 观察二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化的影响,并探讨TGF-β1/Smad信号通路在其中的作用及机制.方法 以大鼠肝星状细胞株HSC-T6为研究对象,TGF-β1(5 ng/mL)处理2h后,再以不同浓度的DHM处理24h.CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,ELISA法检测细胞分泌MMP-1、TIMP-1和COL-Ⅰ的水平,免疫荧光细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,qRT-PCR法检测MMP-1、TIMP-1和COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7的mRNA表达,Western blot检测Smad2/3、p-Smad2/3、Smad7、AMPK、p-AMPK蛋白表达.结果 CCK-8法检测结果显示,40 μmol/L以上DHM单独处理能明显抑制HSC-T6细胞增殖活力,并能显著抑制活化的HSC-T6细胞增殖活力的增加,流式细胞仪检测结果表明,DHM能够明显促进活化的HSC-T6细胞凋亡,TGF-β1能够促进HSC-T6细胞G0/G1期的比例降低、S期和G2/M期的比例增加(P＜0.05),而DHM能够抑制TGF-β1对细胞周期的影响,ELISA检测结果表明,DHM能够显著抑制活化的HSC-T6细胞上清液中TIMP-1和COL-Ⅰ水平增高及MMP-1水平下降(P＜0.05),免疫荧光细胞化学法检测显示,HSC-T6细胞表达HSC活化特定抗原α-SMA,TGF-β1处理后表达增加,而DHM能够抑制α-SMA表达,qRT-PCR结果显示,DHM能够显著影响活化的HSC-T6细胞的细胞外基质相关基因MMP-1、TIMP-1和COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7等的mRNA表达,Western blot检测结果提示,DHM抑制活化的HSC-T6细胞AMPK磷酸化下降、Smad2/3的磷酸化水平升高及Smad7的蛋白表达下降,而AMPK抑制剂Compound C处理后,DHM的作用被显著抑制.结论 DHM能够显著抑制HSC-T6细胞的活化,该作用可能通过促进AMPK的磷酸化并抑制TGF-β1/Smad信号通路介导的细胞外基质产生而实现.     

阻断肾素-血管紧张素系统对肾小球硬化大鼠肾TGFβ1的影响及意义

目的探讨阻断肾素-血管紧张素系统(RAS)对肾小球硬化大鼠肾组织转化生长因子β1(TGF β1)基因及蛋白表达的影响及其意义.方法SD大鼠40只,其中30只单侧肾切除加阿霉素(6 mg/kg)尾静脉注射制作肾小球硬化大鼠模型,大鼠随机分成肾小球硬化组(D组),肾小球硬化苯那普利治疗组(DB组)和肾小球硬化芦沙坦治疗组(DL组),每组各10只;另10只为假手术(对照)组(C组),尾静脉注射生理盐水.DB组每日苯那普利(10 mg/kg.d)灌胃,DL组每日芦沙坦(40mg/kg.d)灌胃,C组及D组每日用相应量生理盐水灌胃.治疗6周后应用逆转录聚合酶链反应在基因水平检测肾皮质TGFβ1mRNA和Ⅳ型胶原(ColⅣ)mRNA的表达,Western蛋白质印迹检测TGFβ1蛋白的表达,免疫组织化学方法测定肾组织ColⅣ的含量,并分析肾脏的病理改变,测定血白蛋白、胆固醇、尿素氮和肌酐以及24h尿蛋白的含量.结果D组出现大量蛋白尿、低蛋白血症及高胆固醇血症,与C组比较有显著性差异(P＜0.05),血尿素氮及肌酐也上升,肾小球系膜细胞增生,细胞外基质沉积,肾皮质TGFβ1mRNA和蛋白的表达分别比对照组增加3.59倍和2.60倍,ColⅣmRNA和蛋白表达分别比对照组增加2.57倍和1.40倍.应用苯那普利及芦沙坦治疗6周后,DB组及DL组的血、尿生化改变明显改善,病理改变减轻.肾皮质TGFβ1mRNA和蛋白表达分别下调46%,53%,55%和59%,ColⅣ表达也降低.TGFβ1表达与肾小球细胞外基质Ⅳ型胶原,肾小球硬化指数和肾小管间质损伤指数存在明显的正相关(P＜0.05).结论应用苯那普利和芦沙坦阻断RAS,可能通过对TGFβ1mRNA及蛋白的下调作用减少肾小球细胞外基质的沉积.     

TGF-β1与Smad4在大肠癌组织中的表达及意义

目的：探讨TG-β1与Smad4在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌发生发展的关系。方法：应用免疫组织化学SABC法检测67例大肠癌组织中TGF-β1与Smad4蛋白表达。并选择24例正常人大肠黏膜组织作为正常对照组。结果：大肠癌组织中TGF-β1蛋白的阳性表达率为67．2％，较正常对照组（4．2％）明显增高（P〈0．05）；大肠癌组织中Smad4蛋白的阳性表达率为44．8％，较正常对照组（95．8％）明显（P〈0．05）降低；TGF-β1和Smad4在大肠癌组织中的表达呈负相关（r=-O．521；P〈O．01）。结论：高表达的TGF-β1和低保留表达的Smad4在大肠癌发生发展中起重要作用，且二者作用具有相关性。     

TGF-β1、TGF-βR1、Smad4在乳腺癌发生、发展中的作用及其相互关系

目的:探讨TGF-β1、TGF-βR1及Smad4三者在乳腺癌中的表达与其发生、发展、转移等生物学行为以及预后的关系,为乳腺癌发病和治疗机制提供理论和实验依据。方法:提取30例乳腺癌临床标本(经液氮、研磨等处理)和MCF-7、T47D、SKBR-3三种乳腺癌细胞(取指数增长期细胞)总RNA,反转录cDNA第一链,克隆TGF-βR1、Smad4基因片段,测定质粒浓度,制备标准样品,并作出标准曲线,探针法荧光定量PCR(FQ-PCR)检测TGF-βR1和Smad4基因mRNA表达。结果:FQ-PCR检测发现恶性程度高的SKBR-3细胞,其TGF-βR1和Smad4的基因拷贝数明显低于恶性程度低的MCF-7细胞(P均<0.01),T47细胞两种基因拷贝数介于两者之间。结论:随着乳腺癌细胞病理类型恶性程度增加,TGF-βR1和Smad4 mRNA表达逐步下降,表明TGF-β1和Smad4可能具有类似乳腺癌抑癌基因的作用。     

转化生长因子β-Smad信号转导通路在肿瘤发生中的作用

转化生长因子β(TGF-β)-Smad信号转导途径在肿瘤发生机制中发挥重要作用。近年来，大量研究已经揭示了。TGF-β超家族配体、受体、Smad蛋白、上游和下游调节因子及多种信号通路间的交互对话在消化系统恶性肿瘤、肺癌及其他肿瘤中的作用机制。作者比较和整理近年关于TGF-β-Smad信号通路及Smad4在肿瘤领域的体内外研究报道，并就此作一综述。     

转化生长因子-β信号通路与糖尿病肾病

转化生长因子β(TGF-β)信号通路在糖尿病肾病(DN)发病中起着重要的作用,包括诱导肾小球及肾小管细胞肥大,细胞外基质(ECM)积聚,促进肾小球硬化和肾间质纤维化等方面的作用.Smad是新近发现介导TGF-β超家族胞内信号转导过程的一族蛋白质.因此,本文就该信号通路目前研究的一般概况、在DN时激活的因素、发病作用及针对其治疗方面研究现状作一综述,期望能对DN的治疗和研究提供一些参考.     

转化生长因子β1通过Smad2途径调节足细胞结缔组织生长因子表达

目的　研究肾脏足细胞是否表达结缔组织生长因子 (CTGF)以及TGFβ1对CTGF表达调控的信号途径。方法　以肾小球足细胞为对象 ,应用Western印迹分析技术 ,观察了 3种促进肾脏纤维化的蛋白因子 ,转化生长因子 β1(TGFβ1)、血小板源生长因子 (PDGF)和血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对体外培养的足细胞CTGF蛋白表达的影响 ,以及ERK、Smad两条信号途径在TGFβ1调节CTGF蛋白表达中的影响 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测CTGFmRNA的变化。结果　体外培养的足细胞表达基础水平CTGF蛋白 ,2 0ng/mlPDGF和 10 -6mol/LAngII刺激 2 4小时后细胞内CTGF蛋白水平与对照相比差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ,而 1ng/mlTGFβ1刺激 2 4h足细胞CTGF蛋白水平显著高于对照 (P <0 0 5 ) ,且增加呈TGFβ1剂量依赖趋势 ;1ng/mlTGFβ1刺激 12h可以使细胞CTGFmRNA表达增加。1ng/mlTGFβ1使足细胞Smad2 和细胞外信号调节激酶 (ERK1/ 2 )磷酸化 ,在刺激 30min达高峰 ;应用丝 /苏氨酸激酶抑制剂Staurosporine抑制Smad2 磷酸化可以消减TGFβ1刺激的CTGF蛋白增加 ,但ERK1/ 2 活化抑制剂PD 980 5 9阻断ERK1/ 2 磷酸化不能减弱TGFβ1刺激CTGF蛋白表达的效应。结论　在足细胞上 ,TGFβ1刺激CTGF表达依赖于Smad2 信号通路的活化 ,而不依赖于ERK1/     

转化生长因子-β1通过活化ERK途径和上调Ets-1蛋白刺激基质金属蛋白酶-9产生

目的　探讨转化生长因子 -β1(TGF -β1)调节基质金属蛋白酶- 9(MMP -9)生成的分子机理。方法　选用小鼠肾小球足突细胞系,以细胞因子TGF -β1为刺激物,建立炎症细胞模型,分别应用明胶酶谱法和逆转录 PCR方法观察TGF -β1刺激细胞后培养上清MMP- 9活性及细胞MMP- 9mRNA变化;应用Western蛋白印迹检测TGF β1调节MMP-9中对ERK信号途径和转录因子Ets 1蛋白的影响。结果　对照组细胞上清有微弱MMP- 9活性, TGF β1刺激细胞 24h后培养上清MMP 9活性较对照组明显升高 (P<0 01),并呈TGF -β1刺激剂量依赖趋势; TGF- β1刺激 6h细胞MMP 9mRNA较对照组明显增加 (P<0 01),并且维持高水平至 24h;TGF- β1刺激细胞 4h转录因子Ets- 1蛋白增加(P<0 01),持续高水平至 24h。TGF- β1可以刺激细胞ERK-1 /2活化; ERK-1 /2活化阻断剂PD98059预处理细胞,可以阻断TGF β1刺激引起的Ets 1蛋白、MMP -9活性、MMP -9mRNA增加的效应。结论　以上结果提示TGF β1是通过活化细胞内ERK信号途径和上调转录因子Ets -1蛋白刺激足突细胞MMP- 9mRNA表达,继而蛋白活性增加。     

肾康丸对糖尿病肾病大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨肾康丸对糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）大鼠TGF-β1／Smad信号通路影响。方法用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射法诱导建立大鼠糖尿病（diabetes mellitus，DM）模型，模型成功后随机分为3组：模型对照组、开搏通组、肾康丸组，另设正常对照组，治疗8周后，取大鼠肾脏，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法观察各组大鼠肾脏组织纤连蛋白（fibronetin，FN）和TGF-β1mRNA基因表达情况；采用免疫组化法观察各组大鼠肾脏组织Smad2、Smad3蛋白表达的情况。结果在治疗的8周里，模型组大鼠血糖均维持在16．7mmol／L以上；出现多饮、多食、多尿、消瘦的DM症状；8周后，DN模型组大鼠与正常大鼠比较，肾脏组织中FN和TGF-β1mRNA基因表达显著上调（P〈0．01），Smad2、Smad3蛋白表达明显增加。肾康丸和开搏通都可以抑制DN大鼠肾脏组织中FN和TGF-β1mRNA基因表达，差异具有统计学意义（P〈0．01），都可以减少Smad2、Smad3蛋白的表达。结论肾康丸可以抑制DN大鼠肾脏中TGF-β1／Smad信号转导通路的激活，减少细胞外基质合成和分泌，从而延缓DN进程。     

转化生长因子β1与Smad3信号传导在肺移植术后闭塞性细支气管炎中的作用

目的探讨肺移植术后闭塞性细支气管炎的发生机理及转化生长因子（TGF）β1／Smad3信号传导途径在此病理过程中的意义。方法闭塞性细支气管炎动物模型采用Smad3野生型和基因敲除小鼠进行的同种异体气管异位移植,免疫组织化学检测肌纤维母细胞分化的标志物——仅平滑肌肌动蛋白（αSMA）的存在及差异。采用原代培养Smad3野生型和敲除型气管纤维母细胞,经TGF-β1处理,通过免疫荧光、Western印迹和DNA凝胶电泳迁移率检测手段,检测Smad3蛋白的激活。并用免疫荧光染色检测细胞骨架聚合能力和αSMA分子的不同表达;Western印迹和RT-PCR法检测αSMA在转录和蛋白水平的差异。结果在发生闭塞性细支气管炎的受累气道中,发现有肌纤维母细胞的存在,且其在Smad3野生型中的数量明显多于敲除型（t=2．125,P=0．040）。对纤维母细胞进行的离体研究发现,TGF-β1诱导Smad3激活,表现为蛋白磷酸化、细胞核转位和DNA结合增加。在Smad3野生型的纤维母细胞,TGF-β1引起细胞骨架聚合能力增强、αSMA在转录和蛋白水平的表达增强,即向肌纤维母细胞的分化增加;而在缺乏Smad3的纤维母细胞中,TGF-B1诱导的肌纤维母细胞分化明显减少（t=2．080,P=0．027;t=1．982,P=0．032）。结论TGF-β1主要通过激活Smad3依赖性信号传导途径,来促使纤维母细胞向肌纤维母细胞的转化和αSMA蛋白的增加,最终导致闭塞性细支气管炎的发展。     

Role of Connective Tissue Growth Factor in Extracellular Matrix Degradation in Renal Tubular Epithelial Cells

In order to investigate the effects of connective tissue growth factor (CTGF) antisense oligodeoxynucleotide (ODN) on plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) expression in renal tubular cells induced by transforming growth factor β1 (TGF-β1) and to explore the role of CTGF in the degradation of renal extracellular matrix (ECM), a human proximal tubular epithelial cell line (HKC) was cultured in vitro. Cationic lipid-mediated CTGF antisense ODN was transfected into HKC. After HKC were stimulated with TGF-β1 (5 μg/L), the mRNA level of PAI-1 was detected by RT-PCR. In-tracellular PAI-1 protein synthesis was assessed by flow cytometry. The secreted PAI-1 in the media was determined by Western blot. The results showed that TGF-β1 could induce tubular CTGF and PAI-1 mRNA expression. The PAI-1 mRNA expression induced by TGF-β1 was significantly inhib-ited by CTGF antisense ODN. CTGF antisense ODN also inhibited intracellular PAI-1 protein syn-thesis and lowered the levels of PAI-1 protein secreted into the media. It was concluded that CTGF might play a crucial role in the degradation of excessive ECM during tubulointerstitial fibrosis, and blocking the biological effect of CTGF may be a novel way in preventing renal fibrosis.     

福辛普利对肾间质纤维化大鼠转化生长因子β激活激酶表达的下调作用

目的观察福辛普利对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏转化生长因子β激活激酶(TGF-activated kinase1,TAK1)表达的影响,及其对肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的保护作用。方法采用单侧输尿管结扎术致RIF大鼠模型。72只大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、UUO模型组及福辛普利治疗组,每组24只。治疗组于术后2d给予福辛普利10mg/(kg.d)灌胃,假手术组与模型组每天给予等量生理盐水灌胃。各组分别于术后7、14、21d处死8只大鼠,采用HE及Masson染色观察梗阻侧肾脏病理变化,原位杂交、RT-PCR及Western blot检测肾组织TAK1的表达。结果模型组大鼠梗阻侧肾脏肾小管间质损伤指数明显高于同期假手术组(P0.05),福辛普利干预后肾小管间质损伤指数明显降低(P0.05);TAK1mRNA和蛋白表达情况:模型组各时间段TAK1表达升高,且随着病理损害的进展呈现下降趋势,但表达量仍显著高于同期假手术组(P0.05),经福辛普利干预后表达显著下降(P0.05)。结论福辛普利可能通过下调TAK1表达,从而减轻UUO术后肾组织间质纤维化的病程进展。     

Effects of heparin on transforming growth factor-β1 and extracellular matrix components in the glomeruli of diabetic rats

Summary The effects of heparin on the expression of transforming growth factor-β₁ (TGF-β₁) and two extracellular matrix components laminin (LN) and fibronectin (FN) in diabetic rat glomeruli were investigated. Twenty-six rats were randomly divided into control group (C,n=8), diabetic group (D,n=9), and diabetes+heparin group (DH,n=9). After 8-week therapy of heparin (200 U once daily by abdominal injection), TGF-β₁, LN and FN expression in glomeruli was detected by immunohistochemical method. The results showed that the expression levels of TGF-β₁, LN and FN were higher in group D than in group C. It was found that heparin could reduce 24-h urinary albumin excretion and inhibit overexpression of TGF-β₁, LN and FN in glomeruli of diabetic rats. It suggested that the inhibitory effect of heparin on diabetic glomerular sclerosis was at least partly related with the inhibition of TGF-β₁ expression. LI Yuanhong, female, born in 1973, Resident