蚕蛹水解氨基酸对人肝癌细胞 HepG2．2．15的体外抑制作用的研究

目的：探讨蚕蛹水解氨基酸对HepG2．2．15（人肝癌细胞株）在体外的抑制作用。方法运用MTT比色法测定蚕蛹水解氨基酸对人QSG-7701（正常肝脏细胞株）的毒性后,计算蚕蛹水解氨基酸的安全浓度。将蚕蛹水解氨基酸溶液分别配制成0．001 mg／ml、0．01 mg／ml、0．1 mg／ml、1 mg／ml和10 mg／ml的浓度,与HepG2．2．15细胞共同培养,实验同时设置空白对照和细胞对照组。每组设置4个复孔,每孔加入100μl的5×104个／ml的细胞悬液,于培养的24、48、72小时后,用MTT比色法测定OD值,评定蚕蛹水解氨基酸对HepG2．2．15细胞株的抑制作用。结果蚕蛹水解氨基酸的最大无毒浓度（TC0）为12 mg／ml。梯度浓度的蚕蛹水解氨基酸与HepG2．2．15细胞共同培养24、48和72 h后,与细胞对照组相比,OD值的差异有显著性（P＜0．05）,并有时间和浓度的线性关系。结论蚕蛹水解氨基酸对人肝癌细胞HepG2．2．15具有显著的抑制作用,且毒性较低。     

猫人参注射液体外抗肝癌实验研究

目的:观察单味猫人参注射液在体外对肝癌细胞的抑制作用.方法:噻唑蓝还原法(MTT法)检测猫人参注射液对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721、小鼠肝癌细胞株H22、大鼠肝癌细胞株CBRH-7919的生长抑制作用.结果:体外实验结果表明:250mg/ml浓度猫人参注射液对H22、CBRH-7919、SMMC-7721肝癌细胞株均有抑制作用,抑制率分别63.68%、41.51%、32.92%,IC50分别为:107.70mg/ml、519.49mg/ml、667.56mg/ml;在24h,48h,72h三个时相,对小鼠H22肝癌细胞的生长抑制作用存在较明显的时效关系,在72h内16.88mg/ml～250mg/ml浓度内药物浓度与抑制作用有正相关趋势,其相关系数为0.91.结论:猫人参注射液对不同肝癌细胞株有一定的抑制作用.     

己酮可可碱对人肝癌细胞株Hep3b的放射增敏作用

目的观察己酮可可碱(PTX)对人肝癌细胞株Hep3b的放射增敏作用。方法以Hep3b人肝癌细胞株为研究对象,应用MTT法检测PTX的药物毒性;应用克隆形成实验(colony forming assay)观察PTX对Hep3b细胞株的放射敏感性的影响;流式细胞仪(FCM)技术测定照射后Hep3b细胞株细胞周期的再分布并观察PTX能否去除放射引起的细胞周期阻滞。结果不同浓度的PTX作用于人肝癌Hep3b细胞株48 h后,其细胞毒性呈剂量依赖性,最适浓度为2 mmol/L。PTX能明显降低放射后Hep3b细胞的克隆形成率,其放射增敏比为2.68±0.24(P>0.05)。FCM实验结果显示,照射明显导致Hep3b细胞株G2期阻滞,Hep3b细胞在照射后20 h G2/M期比例分别为86.8%和14.8%(P<0.05),PTX能够去除放射引起的Hep3b细胞G2期阻滞。结论PTX对Hep3b细胞株有放射增敏作用,其作用机制可能与PTX去除放射引起的G2期阻滞有关。     

三根祛瘤方对人卵巢癌细胞HO-8910抑制作用的研究

目的：研究三根祛瘤方对人卵巢癌细胞株HO－8910的体外生长影响。方法：用含三根祛瘤方125mg/ml,62.5mg/ml,31.3mg/ml,15.6mg/ml,7.8mg/ml不同浓度培养液,分别培养HO－8910细胞24小时,48小时,72小时,应用MTT[四甲基偶氮唑蓝]比色法观察HO－8910细胞生长情况。结果：三根祛瘤方对人卵巢癌细胞HO－8910的体外生长有抑制作用,并呈现出时间和剂量依赖关系,最佳抑制浓度为62．5mg/ml,最佳作用时间为48小时。结论：三根祛瘤方对人卵巢细胞HO－8910的体外增殖有抑制作用。     

叶下珠复方Ⅱ号对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡作用

目的探讨叶下珠复方Ⅱ号（CPUⅡ）对体外培养的人肝癌细胞Hep劬增殖和凋亡的作用。方法采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）,比较不同浓度的叶下珠复方在不同作用时间对体外培养的HepG2细胞增殖的影响;应用流式细胞术（FCM）结合AnnexinV—FITC,PI荧光双染法观察CPUⅡ诱导24h后人肝癌Hep晚细胞的凋亡率。结果MTT结果显示,人肝癌HepG2细胞经叶下珠复方Ⅱ号处理一定时间后,增殖比率明显下降,2．60mg／ml以上的叶下珠Ⅱ号对人肝癌HepG2细胞株的增殖有抑制作用（P〈0．01;48hP〈0．05）,且呈一定的量效关系;FCM结果显示,随着叶下珠复方Ⅱ号浓度的增加（2．6、26．0、130．0mg／ml）,细胞的凋亡率也逐渐增加,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论叶下珠复方Ⅱ号能够抑制人肝癌HepG2细胞生长和增殖,诱导人肝癌Hep岛细胞凋亡,呈明显的量效关系。     

槲寄生碱对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制作用的研究

目的:研究槲寄生碱对人肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制作用.方法:取对数生长期的人肝癌SMMC-7721细胞接种96孔板,待细胞生长良好后加入含不同浓度槲寄生碱培养液,取3个时间点(作用24h、48h、72h)采用MTT比色法观察槲寄生碱对人肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制作用,抑制率(%)=(1-实验组A值/对照孔A值)×100%.结果:0.1mg/mL和0.2mg/mL浓度组在24h、48h、72h均表现出抑制SMMC-7721细胞生长作用,且作用强于5-Fu.0.05mg/mL组在3个时间点也表现出抑制SMMC-7721细胞生长作用,但作用弱于5-Fu.0.025mg/mL组在作用48h后才表现出对SMMC-7721细胞生长抑制作用.结论:槲寄生碱对人肝癌SMMC-7721细胞生长有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖方式.     

LPS刺激对肝细胞YAP和p-YAP表达的影响

目的检测3种肝细胞系(L02、Hep G2和Hep G2.2.15细胞)中Yes相关蛋白(YAP)和磷酸化Yes相关蛋白(p-YAP)的表达,并探讨经脂多糖(LPS)刺激后对其表达的影响。方法实验选取3种不同肝细胞系(L02、Hep G2和Hep G2.2.15细胞)培养48 h,采用荧光定量PCR检测YAP1/2基因的表达、蛋白印迹(Western blot)检测YAP/p-YAP蛋白的表达;用不同浓度LPS分别刺激上述3种肝细胞系12 h,采用流式细胞术检测LPS刺激对YAP/pYAP表达的影响。结果 YAP在Hep G2和Hep G2.2.15细胞中的表达明显高于其在L02细胞中的表达(P0.05),且在Hep G2.2.15细胞中增加的幅度更为显著(P0.05);p-YAP在Hep G2和Hep G2.2.15细胞中表达显著高于其在L02细胞中的表达(P0.05)。LPS处理3种肝细胞系后,与对照组相比,YAP/p-YAP的表达在L02细胞中明显增加(P0.05),在Hep G2和Hep G2.2.15细胞中明显降低(P0.05)。结论 YAP在肝癌细胞中的表达高于正常肝细胞,LPS刺激对L02、Hep G2和Hep G2.2.15 3种肝细胞系中YAP的表达有一定的影响。     

柴胡注射液对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖及凋亡的影响

目的:探讨柴胡注射液对人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响及相关机制。方法:将人肝癌SMMC-7721细胞株(由西安交通大学医学院第一附属医院临床分子试验中心提供)分为空白对照组(加10%小牛血清的1640培养液)、氟尿嘧啶阳性对照组(10μg/ml)及实验组(分别为5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、50mg/ml柴胡注射液)。采用噻唑蓝比色法(即MTT)检测人肝癌细胞株SMMC-7721对柴胡注射液药物和氟尿嘧啶注射液的敏感性;应用流式细胞术(FCM)检测柴胡注射液对人肝癌细胞株(SMMC-7721细胞)周期的影响。结果:柴胡注射液对SMMC-7721的生长有明显的抑制作用,抑制率与柴胡注射液浓度呈正相关。不同浓度柴胡注射液处理肝癌细胞时,药物浓度与凋亡细胞且呈剂量依赖关系。结论:柴胡提取物可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,诱导其凋亡,作用机制可能与调控细胞周期有关。     

6,8-二-三氟甲基-7-乙酰基白杨素抗肝癌作用实验研究

目的:研究6,8-二-三氟甲基-7-乙酰基白杨素(dFMAChR)体内外抗肝癌作用。方法:MTT比色法测定dFMAChR对体外培养人肝癌细胞Hep G2细胞和人胚肝细胞L-02细胞增殖的影响;平皿克隆形成法及软琼脂克隆形成法测定dFMAChR对体外培养Hep G2细胞的锚定依赖性及非锚定依赖性生长作用;PI染色流式细胞术(FCM)分析dFMAChR对Hep G2细胞周期的影响;人肝癌裸鼠异种移植瘤模型治疗实验评价dFMAChR治疗人肝癌的有效性。结果:dFMAChR抑制体外培养人肝癌Hep G2细胞增殖和生长,其效价强度高于先导化合物白杨素(ChR),而对人胚肝(L-02)细胞的毒性小,其选择指数为42.96。PI染色FCM结果显示3.0μM,10.0μM,30.0μM的dFMAChR作用于Hep G2细胞48h后,其G1期累积细胞百分率分别为64.5%、69.1%、78.4%,较溶媒对照组和ChR 30.0μM的58.2%和68.3%有显著提高,呈现G1期阻滞现象。人肝癌裸鼠异种移植瘤模型治疗实验结果显示:dFMAChR对人肝癌异种移植瘤生长具有显著抑制作用,20,40,80 mg/kg的dFMAChR对移植瘤的瘤重抑制率分别为40.17%,47.41%和66.81%。结论:dFMAChR具有人肝癌治疗作用。     

灵芝萃取物对人类肝癌细胞株Hep3B增殖及细胞周期的影响

目的 探讨灵芝萃取物中是否存在影响人类肝癌细胞增殖及细胞周期的有效成份.方法 以甲醇为萃取液,提取灵芝有效成分.人类肝癌细胞Hep 3B(5×103 个/100 μL DMEM/孔,96孔板)经由灵芝萃取物处理48及72 h,灵芝萃取物最终浓度设置为5、10、20及40 μg/mL.以MTT比色分析法评估对细胞增殖的影...     

土贝母皂甙对HBV转染的HepG2 2.2.15细胞分泌HB-sAg和HBeAg的抑制作用

目的观察土贝母皂甙对乙型肝炎病毒(HBV)基因转染的人肝癌细胞系2215细胞的毒性及其分泌的HBsAg和HBeAg的抑制作用.方法以MTT比色法观察药物的细胞毒性,以酶联免疫吸附(ELISA)法检测培养上清中HBsAg和HBeAg的表达.结果不同浓度的土贝母皂甙对HBsAg和HBeAg的分泌均有一定的抑制作用,药物作用到48h时对HBsAg和HBeAg的抑制作用最强(P＜0.01),且对HBeAg的抑制作用强于拉米夫定;在0.01ug/ml浓度下无明显细胞毒性作用.结论体外细胞培养表明,土贝母皂甙对HBV有抑制作用.     

苦参碱脂质体抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的评价苦参碱脂质体的体外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。方法通过苦参碱脂质体、苦参碱作用于体外培养的2.2.15细胞,观察和比较二者对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的影响及药物的细胞毒性,初步评价苦参碱脂质体的抗HBV作用。结果苦参碱脂质体、苦参碱作用于2.2.15细胞11 d后,对细胞的半数毒性浓度(TC50)分别为7.29mg/ml和1.33rage/ml,对HBsAg和HBeAg抑制的半数有效浓度(IC50)分别为0.078 mg/ml、3.35mg/ml、<0.078mg/ml和>10mg/ml,苦参碱脂质体对HBsAg和HBeAg的治疗指数(TI)分别为93.46和2.17,高于苦参碱的治疗指数。结论苦参碱脂质体在体外细胞培养中对HBsAg和HBeAg的分泌有较好的抑制作用,可以提高苦参碱的抗HBV作用。     

芬维A胺对人肝癌细胞株HepG2增殖与细胞凋亡的影响

目的探讨分子靶向药物芬维A胺(Fenretinide)在体外对人肝癌细胞株Hep G2的细胞增殖与细胞周期的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,实验组在培养液中加入不同浓度的芬维A胺(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L),对照组培养液中不加芬维A胺,分别孵育48 h后,采用MTT法检测芬维A胺对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果芬维A胺能明显抑制HepG2细胞增殖,呈时间和剂量依赖性;芬维A胺处理HepG2细胞72 h,可使G0~G1期细胞比例升高,G2~M、S期比例明显下降,凋亡率明显上升(P<0.05)。结论芬维A胺对体外人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制作用,主要表现为抑制增殖和促进凋亡。     

新型稀土杂多化合物对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

目的：研究稀土杂多化合物(PTW-6)体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的活性。方法：MTT法检测PTW-6对Hep G2 2.2.15细胞的毒性,乙型肝炎病毒e（s）抗原诊断试剂盒检测上清液中HBeAg、HBsAg的含量,Southern blotting 法检测PTW-6对细胞内HBV DNA复制的抑制作用。荧光定量PCR分析PTW-6对细胞内HBV mRNA和上清液中HBV DNA含量的影响。结果：PTW-6对2.2.15细胞的半数中毒浓度为1590.46 mg•L^-1, PTW-6各浓度实验组对HBeAg和HBsAg的抑制率均高于对照组（P<0.05）;随着PTW-6浓度的增高,PTW-6对2.2.15细胞内外HBV DNA的抑制率增加,PTW-6对2.2.15细胞外HBV DNA和细胞内HBV mRNA半数抑制浓度分别为51.1和63.6 mg•L^-1。结论：PTW-6体外毒性较低, 且对HBV复制有较好的抑制作用。     

汉防己碱对肝癌Hep3b细胞生长的双向作用

目的考察汉防己碱(tetrandrine,Tet)对肝癌Hep3b和Hep3b/5-Fu细胞生长的影响。方法采用体外细胞培养,结合流式细胞术、MTT和Western blot方法研究Tet(0.33～1.0μg/ml)对肝癌Hep3b及Hep3b/5-Fu细胞生长的作用特点。结果 Tet在0.33～1.0μg/ml时呈浓度依赖性降低Hep3b细胞存活率;0.5和1.0μg/ml显著提高5-Fu对Hep3b细胞的IC50,但降低5-Fu对Hep3b/5-Fu细胞的IC50;0.33μg/ml的Tet明显增加cDDP对Hep3b/5-Fu细胞的IC50,而0.5和1.0μg/ml显著降低cDDP对Hep3b/5-Fu细胞的IC50(P<0.01)。1.0μg/ml的Tet作用48 h后使Hep3b细胞中的P-gp和MRP1表达明显上调(P<0.05)。Tet单用对Hep3b细胞生长有一定抑制作用,高浓度Tet逆转Hep3b/5-Fu细胞对5-Fu耐药和增强cDDP对Hep3b/5-Fu细胞生长的抑制作用,但低浓度分别促进Hep3b细胞和Hep3b/5-FU细胞对5-Fu和cDDP耐药。结论 Tet对Hep3b和Hep3b/5-Fu细胞生长呈浓度相关的双向作用,其促进耐药细胞发展的机制至少与提升P-gp和MRP1表达有关。     

蒙药梅花草不同提取部位体外抑制肿瘤细胞增殖的作用研究

目的研究蒙药梅花草的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇等不同提取物的体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用,为进一步研究梅花草提供理论依据。方法采用MTT法对梅花草的各个部位提取物进行抗肿瘤细胞活性筛选,主要培养的细胞有人宫颈癌细胞(Hela)、人胃癌细胞(MKN-45)、人乳腺癌细胞(MCF-7)和人肝癌细胞(Hep G2)。结果梅花草的石油醚提取物浓度在0.25~1.00mg/m L范围内,对Hep G2、MKN-45细胞的增殖有抑制作用(P0.01),浓度在1.00mg/m L时,对Hela细胞有增殖抑制作用(P0.01);梅花草的二氯甲烷萃取物浓度在0.25~1.00mg/m L范围内,对Hela和Hep G2细胞的增殖均有抑制作用(P0.01),浓度在0.25~1.00mg/m L范围内,对MKN-45细胞的增殖有抑制作用(P0.05),浓度在1.00mg/m L时,对MCF-7细胞有增殖抑制作用(P0.05);梅花草的乙酸乙酯萃取物浓度在2.08~8.33mg/m L时,对Hela细胞有增殖抑制作用(P0.05),浓度在8.33 mg/m L时,对Hep G2细胞的增殖有抑制作用(P0.05);梅花草的正丁醇萃取物浓度在1.00 mg/m L时,对Hela、MKN-45细胞的增殖均有抑制作用(P0.05)。结论梅花草的抗肿瘤细胞增殖作用的有效成分主要富集在石油醚和二氯甲烷部位。     

黄连-大黄-肉桂复方对肝癌细胞增殖及PTEN-PI3K-AKT/SGK1信号通路的影响

目的:观察黄连-大黄-肉桂复方对肝癌细胞增殖的抑制作用,并探索其作用机制。方法:采用醇提法提取黄连-大黄-肉桂复方药液,观察药物作用24 h后SMMC-7721人肝癌细胞株细胞形态的改变;通过MTT法检测不同浓度药物作用24 h、48 h和72 h对肝癌细胞增殖的影响;采用RTq PCR法检测肝癌细胞PTEN、AKT和SGK1基因的mRNA表达。结果:较低浓度的黄连-大黄-肉桂复方作用24 h对肝癌细胞的形态影响较小,而浓度增至2.1 mg/ml可使肝癌细胞部分固缩,大多细胞凋亡,其对肝癌细胞的恶性增殖具有显著抑制作用,并存在时效和量效关系,0.5 mg/ml药物作用48 h即可致肝癌细胞增殖半数得到抑制;药物作用后AKT mRNA表达明显降低,PTEN mRNA表达上调、SGK1 mRNA表达降低。结论:黄连-大黄-肉桂复方能有效抑制肝癌细胞的恶性增殖,且具有时效和量效关系;其抑制作用可能与调节细胞PTEN-PI3K-AKT/SGK1信号转导通路有关。     

华蟾素注射液对人肝癌肿瘤细胞HepG_2增殖抑制作用观察及其作用机制研究

目的探讨华蟾素注射液对人肝癌肿瘤细胞Hep G2增殖抑制作用观察及其作用机制研究。方法 MTT法测定华蟾素注射液对Hep G2细胞增殖抑制作用,高内涵活细胞成像系统检测华蟾素注射液对Hep G2细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blot蛋白印迹法检测华蟾素注射液凋亡相关蛋白的表达。结果华蟾素注射液不同浓度作用于24h和48h抑制率均明显高于阴性对照组(P0.05),且随着浓度的增加,抑制率越为明显;华蟾素注射液不同浓度作用于48h抑制率明显高于24h抑制率(P0.05);华蟾素注射液不同浓度G0/G1期百分率高于阴性对照组(P0.05),S期细胞百分率低于阴性对照组(P0.05);华蟾素注射液不同浓度凋亡率高于阴性对照组(P0.05);随着华蟾素注射液浓度增加细胞凋亡率增加;随着华蟾素注射液浓度的减少,Bcl-2蛋白表达不断增加,而Bax蛋白表达不断下降。结论华蟾素注射液可明显抑制人肝癌肿瘤细胞Hep G2增殖,阻滞细胞于G0/G1期,可能通过上调bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达相关。     

他莫昔芬对人肝癌细胞增殖及ER、Smad4表达的影响

目的：研究他莫昔芬对人肝癌HepG2细胞增殖、雌激素受体（ER）、Smad4表达的影响。方法：根据他莫昔芬的不同浓度分为3组，即7.5、15、30μmol/L组，对照组不加他莫昔芬，每组设6个平行对照孔，每孔加入细胞浓度为1×105个/ml的细胞悬液0.1ml，培养24、48、72h。采用MTT法测定OD值，然后计算抑制率；免疫组化染色观察他莫昔芬对人肝癌HepG2细胞ER、Smad4表达的影响。结果：他莫昔芬抑制人肝癌细胞增殖，随浓度的增加及处理时间的延长，抑制率增加；他莫昔芬抑制肝癌细胞ER表达，促进Smad4的表达，具有时间－浓度依赖。结论：他莫昔芬可通过影响肝癌细胞ER、Smad4的表达来抑制肝癌细胞增殖。     

磁小体对大鼠成纤维细胞的生长抑制研究

目的:探讨磁小体对大鼠成纤维细胞的生长抑制作用。方法:通过培养大鼠L929细胞,并在培养液中加入0.1mg/ml,0.5mg/ml,1.0mg/ml,1.3mg/ml不同浓度的磁小体继续培养,观察作用24、48、72h细胞生长情况,通过MTT检测细胞吸光度,判断活细胞的含量,从而判断磁小体对细胞的生长抑制作用。结果:由MTT法得到细胞生长抑制率,除有一组达到7.97%外,其余皆为负值。结论:实验结果表明磁小体对细胞生长没有明显的抑制作用。抑制率出现负值的原因可能与磁小体最外层脂质成分与MTT和DMSO发生反应,被DMSO溶解从而产生吸光度有关。