MiRNA-26a通过调控结缔组织生长因子缓解血管平滑肌细胞的钙化

目的 探究miRNA-26a调控结缔组织生长因子对血管平滑肌细胞钙化的作用。方法 将细胞分为对照组、模型组、模型+AR234960组、AR234960+miR-26a mimic组和miR-26a mimic组。对照组细胞正常培养基培养,模型组VSMC细胞诱导钙化,模型+AR234960组的VSMC细胞诱导钙化后加入AR234960激动剂干预,AR234960+miR-26a mimic组的VSMC细胞诱导钙化后用AR234960激动剂和miR-26a mimic处理,miR-26a mimic组的VSMC细胞诱导钙化后转染miR-26a mimic。茜素红染色测定各组细胞钙化沉积;试剂盒检测各组细胞碱性磷酸酶（ALP）活性;荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞miR-26a、OPG、OPN、BMP-2、Collagen II基因和蛋白表达情况。双荧光素酶基因验证miR-26a与CTGF的结合。结果 平滑肌A7r5细胞钙化后,miR-26a的表达随着钙化时间的增加而降低（P<0.05）,而CTGF的表达随钙化时间的增加而增加（P<0.05）。茜素红染色结果显示,AR234960能够增加细胞的钙化程度,而miR-26a mimic能够减轻细胞钙化。与对照组相比,模型组ALP活性、OPN、BMP-2、Collagen II mRNA和蛋白的表达显著升高（P<0.05）,OPG mRNA和蛋白的表达显著降低（P<0.05）;与模型组相比,模型+AR234960组上述指标均无显著差异（P>0.05）,而miR-26a mimic组ALP活性、OPN、BMP-2、Collagen II mRNA和蛋白的表达显著降低（P<0.05）,OPG mRNA和蛋白的表达显著升高（P<0.05）;与miR-26a mimic组相比,AR234960+miR-26amimic组ALP活性、OPN、BMP-2、Collagen II mRNA和蛋白的表达显著升高（P<0.05）,OPG mRNA和蛋白的表达显著降低（P<0.05）。双荧光素酶基因检测结果显示,miR-26a-inhibitor组CTGF 3'-UTR野生型中相对荧光素酶活性较miR-26a-mimic组显著升高（P<0.05）。结论 miRNA-26a能够有效降低细胞中ALP活性及OPN、BMP-2、Collagen II的表达,同时增加钙化细胞中OPG水平,为miRNA-26a通过调控CTGF水平进而对缓解血管平滑肌细胞钙化提供了理论依据。     

瘦素对主动脉瓣膜间质细胞表型转化的影响

目的：探讨瘦素对主动脉瓣膜间质细胞（valvular interstitial cells,VICs）表型转化的影响,揭示瘦素在钙化性主动脉瓣疾病（calcific aortic value disease,CAVD）发生发展中所扮演的角色。方法：胶原酶消化法分离并培养猪主动脉瓣膜间质细胞,采用含不同浓度的瘦素分别刺激细胞24 h,检测细胞裂解液碱性磷酸酶（ALP）活性,并确定最佳刺激浓度。用最佳刺激浓度的瘦素刺激细胞24 h,提取细胞RNA以及蛋白,通过RT-PCR以及Western blot分别测定肌动蛋白（α-SMA）、骨桥蛋白（OPN）的表达情况。结果：瘦素刺激导致ALP表达上调且最大刺激浓度为100 ng/mL。相较于对照组,瘦素刺激组 OPN mRNA及蛋白表达增高,而α-SMA表达无明显变化。结论：瘦素能够诱导VICs向成骨细胞分化,从而促进VICs钙化。     

miR-485-5 p介导SOX5基因表达对肝细胞肝癌细胞活力及迁移侵袭的影响

目的 研究微小RNA(miR)-485-5 p靶向性别决定区Y框蛋白5(SOX5)对肝细胞肝癌(HCC)细胞活力和迁移侵袭能力的影响及作用机制.方法 采用Targetscan 7.1预测软件及双荧光素酶报告基因试验检测miR-485-5 p对SOX5基因的靶向调控作用.qRT-PCR检测HCC组织中miR-485-5 p和SOX5 mRNA的表达水平,并分析两者的相关性.常规培养HCC细胞Huh7,将其分为NC、miR-485-5p mimic和miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组,采用lip2000进行各组质粒的转染.CCK-8实验检测各组细胞的活力,Transwell实验检测各组细胞的迁移侵袭能力.Western blot检测各组细胞中pAkt和pGSK3β蛋白的表达.结果 Targetscan 7.1预测软件、双荧光素酶报告基因试验表明miR-485-5 p靶向调控SOX5.与HCC癌旁组织相比,miR-485-5 p在HCC组织中低表达,SOX5 mRNA在HCC组织中高表达,两者的表达呈负相关性.与NC组相比,miR-485-5 p mimic组和miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组HCC细胞活力和迁移侵袭能力降低.而与miR-485-5 p mimic组相比,miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组HCC细胞活力和迁移侵袭能力增加,过表达SOX5减弱了miR-485-5 p mimic对HCC细胞活力和迁移侵袭能力的抑制作用.与NC组相比,miR-485-5 p mimic和miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组细胞中pAkt和pGSK3β蛋白表达降低.而与miR-485-5 p mimic组相比,miR-485-5 p mimic+oe-SOX5组pAkt和pGSK3β蛋白表达增加,过表达SOX5减弱了miR-485-5 p mimic对Akt/GSK3β信号通路活性的抑制作用.结论 miR-485-5 p靶向调控SOX5表达抑制HCC细胞活力及迁移侵袭能力.     

微RNA-141靶向Dlx5基因对骨形态发生蛋白2诱导人主动脉瓣钙化的调控作用

目的 研究微小核糖核酸141（miRNA-141）调控骨形成蛋白-2（Bone morphogenetic protein 2, BMP-2）诱导人主动脉瓣钙化的机制。方法 收集24例人退行性主动脉瓣,用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）及蛋白免疫印迹（Western Blot）检测miRNA-141和BMP-2 mRNA及蛋白的表达水平。人原代主动脉瓣膜间质细胞（human aortic valve interstitial cells, HAVIC）中上/下调miRNA-141表达,Von Kossa染色比较细胞钙化,并比较远端缺失同源盒5（Distal-less Homeobox 5, Dlx5）的mRNA以及BMP-2蛋白表达;双荧光素酶法验证Dlx5为miRNA-141的靶基因。在主动脉瓣钙化小鼠和Dlx5基因敲除主动脉瓣钙化小鼠中,上/下调miRNA-141表达,Von Kossa染色比较主动脉瓣钙化,并检测BMP-2蛋白表达。结果 与正常主动脉瓣膜组织相比,人退行性主动脉瓣miRNA-141的表达降低（1.00±0.02 vs 0.35±0.06, P=0.01）,BMP-2的mRNA及蛋白表达增加（P均=0.01）。在HAVICs中,上/下调miRNA-141可抑制/促进钙化（P=0.02或P=0.01）,并降低/升高Dlx5的mRNA表达（P均=0.01）以及BMP-2蛋白表达。双荧光素酶法验证Dlx5为miRNA-141的靶基因。上/下调主动脉瓣钙化小鼠miRNA-141可抑制/促进钙化（P<0.05）,并降低/升高Dlx5及BMP-2表达（P<0.05）;Dlx5基因敲除小鼠中,上/下调miRNA-141不影响瓣膜钙化和BMP-2的表达。结论miRNA-141靶向Dlx5基因调控BMP-2蛋白,诱导人主动脉瓣钙化。     

内皮细胞 miR-27b-3调控YAP信号参与脓毒症中的机制研究

【摘要】目的 探究miR-27b-3p对YAP信号的调控及其在脓毒症发生发展中的作用。方法 将小鼠按照随机数列法均分为4组,分别为对照组, CLP（盲肠结扎穿孔）组,mimic NC组,miR-27b-3p mimic组。利用CLP（盲肠结扎穿孔）法构建小鼠脓毒症模型, miR-27b-3p组小鼠通过尾静脉注射miR-27b-3p mimic,对mimic NC组小鼠尾静脉注射mimic NC阴性对照物。分离小鼠原代肺内皮细胞,qRT-PCR（荧光定量PCR）检测细胞中YAP（是相关蛋白1）、ICAM（细胞间粘附分子）、E-selectin（选择素）miR-27b-3p mRNA水平;数据库PITA预测调控YAP的miRNA;WB检测细胞中YAP、ICAM、E-selectin表达及p65活化水平;ELISA检测细胞上清中TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、IL-6(白介素-6)水平。 结果 与对照组相比,CLP组小鼠原代肺内皮细胞中YAP、ICAM、E-selectin mRNA表达明显升高（P＜0.05）,miR-27b-3p表达明显下调（P＜0.05）;数据库PITA预测miR-27b-3p与YAP mRNA 3’ UTR序列存在6个完全互补配对碱基UGUGAA;WB结果显示,与对照组相比,CLP组YAP、ICAM、E-selectin等蛋白水平明显升高,同时p-p65磷酸化活化水平明显升高;与mimic NC组相比,miR-27b-3p mimic组YAP表达量明显下调,ICAM、E-selectin表达水平明显升高,同时p65磷酸化水平升高;ELISA结果显示,与对照组相比,CLP组小鼠内皮上清中TNF-α、IL-6水平升高（P＜0.05） ;与mimic NC组相比,miR-27b-3p mimic组小鼠内皮上清中TNF-α、IL-6的含量明显升高（P＜0.05）。结论 miR-27b-3p在脓毒症血管内皮细胞中低表达,而YAP在内皮中高表达。脓毒症诱导内皮低表达miR-27b-3p,促进YAP在脓毒症内皮细胞中进一步高表达,从而抑制负向反馈调控内皮炎症信号活化。     

miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及其机制研究

背景 miR-324-3P在多种恶性肿瘤中发挥着重要作用,调控Wnt/β-catenin信号通路可能是其参与肿瘤进展的重要途径,miR-324-3P在宫颈癌中的具体作用尚不清楚.目的 研究miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及其机制.方法 收集入住我院宫颈癌患者的宫颈癌组织和正常宫颈组织各40例,TargetScan7.1预测软件及双荧光素酶报告基因试验检测miR-324-3P对WNT3a基因的靶向调控作用.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测宫颈癌组织和正常宫颈组织中miR-324-3P、WNT3a mRNA的表达水平.Pearson法分析宫颈癌组织中miR-324-3P与WNT3a表达的相关性.常规培养宫颈癌细胞(HeLa细胞),将其分为对照组(NC组)、miR-324-3P mimic组和miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组,采用Lipofectamine 2000转染试剂进行各组质粒的转染.四唑盐比色法(MTT)检测各组细胞的增殖能力,Boyden实验检测各组细胞的侵袭能力,Transwell实验检测各组细胞的转移能力.Western-blot法检测各组细胞中WNT3a和β-catenin的表达.结果 宫颈癌组织中miR-324-3P、WNT3a的相对表达量分别为0.79±0.39、1.46±0.53,与正常宫颈组织相比,miR-324-3P表达降低、WNT3a表达升高.Targetscan7.1预测软件、双荧光素酶报告基因试验及qRT-PCR表明miR-324-3P靶向调控WNT3a,且Pearson分析显示二者呈负相关.与NC组相比,miR-324-3P mimic组和miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力降低.与miR-324-3P mimic组相比,miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力增加,WNT3a削弱miR-324-3P对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力的抑制作用.与NC组相比,miR-324-3P mimic组和miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组细胞中WNT3a和β-catenin表达降低.而与miR-324-3P mimic组相比,miR-324-3P mimic+oe-WNT3a组WNT3a和β-catenin蛋白表达增加.WNT3a削弱miR-324-3P对β-catenin的抑制作用.结论 miR-324-3P靶向调控WNT3a表达,抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移能力.     

二叶式主动脉瓣中miRNA-195调控瓣膜钙化的机制研究

目的：探究二叶式主动脉瓣中miRNA-195调控瓣膜钙化的可能机制。方法：收集35例接受主动脉瓣置换术患者狭窄的二叶式或三叶式主动脉瓣,通过PCR及Western blot分别检测miRNA-195的表达量、果蝇母源抗皮肤生长因子（drosophila mothers against decapentaplegic 7,SMAD7）的mRNA及蛋白表达量。双荧光素酶法预测miRNA-195的靶基因。在猪瓣膜间质细胞中分别沉默和过表达miRNA-195,检测SMAD7的mRNA表达水平并探究两者的相互关系。在人类瓣膜组织上通过免疫组化染色检测基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2、MMP-9蛋白水平,通过天狼星红染色检测胶原蛋白水平,通过Von Kossa染色比较钙化程度差异,进而研究钙化相关的功能改变。结果：与狭窄的三叶式主动脉瓣相比,狭窄的二叶式主动脉瓣中miRNA-195表达降低,SMAD7的mRNA和蛋白水平升高。双荧光素酶实验提示SMAD7是miRNA-195的直接靶标。在猪瓣膜间质细胞中沉默miRNA-195引起SMAD7 mRNA水平升高,过表达miRNA-195引起SMAD7 mRNA水平降低。狭窄钙化的二叶式主动脉瓣组织中MMP-2、MMP-9及胶原的表达较狭窄钙化的三叶式主动脉瓣升高。结论：在二叶式主动脉瓣中,下调的miRNA-195促进了SMAD7表达,进而促进细胞外基质的纤维化并最终促进其钙化。     

MicroRNA-27b在高血压脑出血大鼠脑组织中的表达及对星形胶质细胞生物学功能的影响

目的 探讨microRNA-27b（miR-27b）在高血压脑出血（HICH）大鼠脑组织中的表达及对星形胶质细胞生物学功能的影响。方法 选取15只健康WKY大鼠作为对照组,15只自发性高血压大鼠作为HICH组。HICH组通过自体血脑内注射法复制HICH大鼠模型,对照组进行假手术但不注射自体血。HE染色和TUNEL染色检测大鼠脑组织损伤和凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-27b mRNA相对表达量。将星形胶质细胞分为NC组、miR-27b mimic组及miR-27b inhibitor组,分别转染miR-27b mimic和miR-27b inhibitor质粒,过表达和抑制miR-27b水平。qRT-PCR检测各组细胞miR-27b mRNA相对表达量,CCK-8法检测各组细胞增殖及凋亡情况。结果 HICH组大鼠出血脑组织出现显著损伤,凋亡指数（35.91±3.24）高于对照组（2.75±0.36）（P <0.05）;HICH组miR-27b mRNA相对表达量（3.45±0.48）高于对照组（1.00±0.12）（P <0.05）;miR-27b mimic组的miR-27b mRNA相对表达量高于NC组,增殖活力低于NC组,凋亡率高于NC组（P <0.05）。miR-27b inhibitor组的miR-27b mRNA相对表达量低于NC组,增殖活力高于NC组,凋亡率低于NC组（P <0.05）。结论 miR-27b mRNA相对表达量在HICH大鼠脑组织中显著升高,并抑制星形胶质细胞的增殖,促进星形胶质细胞凋亡。     

miR-338-3p通过靶向RUNX2负调控人骨髓间充质干细胞成骨分化且促进骨质疏松

目的:探讨miRNA-338-3p在骨质疏松症进展中的作用及其对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响.方法:选择60例骨质疏松症患者为研究对象,另选同期60名非骨质疏松者作为对照组.检测两组血清miR-338-3p表达水平.采用RT-qPCR检测miR-338-3p、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)水平.Western blot检测miR-338-3p对RUNX2蛋白表达的影响;采用碱性磷酸酶(ALP)测定法和茜素红染色评估miR-338-3p和RUNX2对成骨分化和矿化能力的影响;采用生物信息学和荧光素酶报告基因检测验证miR-338-3p和RUNX2之间的关系.结果:骨质疏松患者血清miR-338-3p水平相比对照组表达量明显上升(P<0.05),且其表达随着成骨诱导时间的延长而逐渐降低(P<0.05).与对照组比较,miR-338-3p表达情况影响OCN、OPN和Collagen Ⅰ mRNA的水平(P<0.05).与对照组相比,miR-338-3p过表达削弱了hBMSCs矿化能力和ALP活性(P<0.05).双荧光素酶报告基因检测证实,RUNX2是miR-338-3p的直接靶点,miR-338-3p过表达降低了RUNX2蛋白及其mRNA的表达水平(P<0.05).RUNX2过表达可逆转miR-338-3p对hBMSCs成骨分化的抑制作用.结论:miR-338-3p通过靶向RUNX2负调控hBMSCs的成骨分化,从而促进骨质疏松的进展.     

长链非编码RNA Linc00658在结直肠癌中的表达及其与西妥昔单抗抵抗的关系

目的：探究长链非编码RNA（LncRNA）Linc00658 在结直肠癌（CRC）中的表达及其与西妥昔单抗抵抗的关系。方法：采用生物信息学方法预测与miR-19a-3p及PTEN表达密切相关的LncRNA，分别用西妥昔单抗和DMSO诱导处理人CRC细胞CaCo2 作为抵抗组和对照组，并利用细胞转染过表达抵抗组细胞的Linc00658作为过表达组，分别转染miR-19a-3p mimic及NC于CaCo2细胞中，作为mimic组及NC组。qRT-PCR检测Linc00658、miR-19a-3p及PTEN mRNA在对照组、抵抗组和过表达组细胞中的表达水平，Western blot检测PTEN及其下游基因磷酸化AKT（p-AKT）及磷酸化mTOR（p-mTOR）的表达，CCK-8 实验检测各组细胞西妥昔单抗的半数抑制浓度（IC50），荧光素酶报告基因实验验证Linc00658与miR-19a-3p的结合及其对miR-19a-3p与PTEN结合作用的影响。结果：相比对照组，抵抗组细胞Linc00658、PTEN mRNA及蛋白表达显著降低，miR-19a-3p、p-AKT及p-mTOR表达显著升高，西妥昔单抗IC50 显著增高（均P ＜0.01）；相比抵抗组，过表达组细胞Linc00658、PTEN mRNA及蛋白表达显著升高，miR-19a-3p、p-AKT及p-mTOR表达显著降低，西妥昔单抗IC50 显著降低（P ＜0.05）；相比NC组，mimic组西妥昔单抗IC50显著升高（P ＜0.01）；miR-19a-3p mimic可显著抑制pGL3-basic-Linc00658荧光素酶活性，提示miR-19a-3p与Linc00658存在结合作用，过表达Linc00658可使miR-19a-3p mimic对pGL3-basic-PTEN的荧光抑制作用恢复。结论：Linc00658通过吸附miR-19a-3p促进PTEN的重新表达及CRC细胞对西妥昔单抗的敏感性。     

miRNA-221在EMS组织及间质细胞中的表达及对细胞增殖的影响

目的 探讨microRNA-221（miRNA）在子宫内膜异位症（endometriosis,EMS）患者组织及细胞中的表达及对EMS间质细胞增殖的影响。 方法 收集非EMS患者在位内膜（正常子宫内膜）及EMS患者卵巢异位内膜,分离培养及鉴定子宫内膜间质细胞,采用茎环法实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测在位、异位内膜组织及间质细胞中miRNA-221的表达;雌激素（17β-E₂,终浓度为10-8mol/L）刺激间质细胞48 h后检测miR-221-3p表达变化;异位间质细胞转染miR-221-3p inhibitor和inhibitor阴性对照（NC）后,观察其对miR-221-3p、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）表达和增殖的影响。 结果 miR-221-3p在EMS组织中的表达为正常子宫内膜组织的4.2倍（P=0.039）,在EMS间质细胞中的表达为正常子宫内膜间质细胞的2.66倍（P=0.029）。与正常子宫内膜组织及间质细胞相比,miR-221-5p在EMS组织及间质细胞中表达差异均无统计学意义（P>0.05）。雌激素处理正常及异位间质细胞48 h后miR-221-3p表达差异无统计学意义。抑制miR-221-3p功能后,异位间质细胞增殖抑制（P=0.018）,PTEN基因表达上调（P=0.021）。 结论 miRNA-221在EMS组织及间质细胞中表达上调,抑制miR-221-3p功能可促进PTEN表达从而抑制EMS间质细胞增殖。     

miR-18a对结直肠癌SW116细胞辐射敏感性的影响

目的:探讨miR-18a与结直肠癌SW116细胞辐射敏感性之间的关系,阐明miR-18a影响细胞凋亡和自噬的可能机制。方法:人结直肠癌SW116细胞分为miR-18a NC组、miR-18a mimic组、miR-18a NC+4Gy组和miR-18a mimic+4Gy组。qRT-PCR法检测照射前后SW116细胞中miR-18a的表达;集落形成实验观察miR-18a对SW116细胞辐射敏感性的影响;GFPLC3形态学方法检测SW116细胞自噬率;流式细胞术检测SW116细胞凋亡率;采用生物信息学方法预测miR-18a的靶基因,以荧光素酶报告基因验证miR-18a与靶基因3'UTR结合;Western blotting法检测SW116细胞中共济失调-毛细血管扩张突变基因(ATM)蛋白表达。结果:与照射前比较,照射后SW116细胞中miR-18a表达水平明显降低(P<0.05)。集落形成实验,与miR-18a NC组比较,miR-18a mimic组SW116细胞辐射敏感性增强(P<0.05),细胞凋亡率和自噬率明显增加(P<0.05)。与miR-18a NC+4Gy组比较,miR-18a mimic+4Gy组SW116细胞中ATM蛋白表达减少。结论:miR-18a的靶基因为ATM;miR-18a mimic可促进辐射诱导的细胞凋亡和自噬,且能增加结直肠癌SW116细胞辐射敏感性。     

miR-138通过靶向LCN2在七氟醚诱导的大鼠认知障碍中的作用及机制

目的 探讨miR-138通过靶向LCN2在七氟醚诱导的大鼠认知障碍中的作用及机制。 方法 将90只7周龄SD大鼠随机分为对照组(n=20)、七氟醚组(n=20)、七氟醚+NC mimic组(n=20)、七氟醚+miR-138 mimic组(n=20)、七氟醚+miR-138 mimic组+vector组(n=5)、七氟醚+miR-138 mimic+pcDNA-LCN2组(n=5)。构建七氟醚诱导的大鼠认知障碍模型,七氟醚诱导的大鼠分别注射10 μL miR-138 mimic、NC mimic慢病毒悬液。采用Morris水迷宫实验分析潜伏期、跨台时间和游泳速度;HE染色检测海马神经元的病理变化;TUNEL染色检测海马神经元凋亡情况;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR)检测miR-138、脂质运载蛋白2（LCN2）的mRNA水平表达;双荧光素酶报告基因系统用于检测miR-138和LCN2之间的关系;Western blotting 检测海马组织中LCN2、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bax、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3蛋白水平;ELISA实验检测海马组织中IL-6、TNF-α、IL-1β。 结果 与对照组比较,七氟醚组中miR-138表达水平显著降低（P<0.05）;大鼠逃避潜伏期显著增加,穿越平台次数显著减少,海马神经元损伤,海马神经元凋亡数量显著增加,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2显著降低,IL-1β、TNF-α、IL-6水平升高,p-JAK2和p-STAT3蛋白水平降低（均P<0.05）。与七氟醚+NC mimic组比较,七氟醚+miR-138 mimic组中大鼠逃避潜伏期减少,穿越平台次数增加,神经元病理损伤减轻,海马神经元凋亡数量显著减少,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白水平降低,Bcl-2水平升高,IL-1β、TNF-α、IL-6水平降低,p-JAK2和p-STAT3蛋白水平升高（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因结果显示LCN2 是miR-138的靶基因,过表达LCN2可显著逆转miR-138对七氟醚诱导的认知障碍大鼠凋亡的作用（P<0.05）。 结论 miR-138靶向LCN2通过JAK2/STAT3通路对七氟醚诱导的认知障碍具有神经保护作用。     

miR-9-5p通过SIRT1/NF-κB通路促进胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨miR-9-5p通过调控SIRT1及NF-κB表达对胰腺癌细胞(PANC-1)凋亡相关基因Caspase-3表达的影响。方法 使用miR-9-5p mimic慢病毒转染人胰腺癌PANC-1细胞建立稳转株(mimic组),空载体转染作为阴性对照组(NC组),以未处理的PANC-1细胞作为空白对照组(空白组)。采用qRT-PCR检测PANC-1细胞中miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA的表达水平；Western Blot检测SIRT1、NF-κB通路相关蛋白及Caspase-3蛋白表达量；ELISA检测细胞裂解液中SIRT1及Caspase-3蛋白表达；双荧光素酶报告基因实验明确miR-9-5p和SIRT1的靶向关系；Pearson相关分析确定miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA表达的相互关系。结果 mimic组miR-9-5p mRNA表达较对照组明显升高，结果有统计学意义，提示转染成功。与空白组及NC组相比，mimic组SIRT1 mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.01),p-NF-κB p65与NF-κB p65上调(P&...     

甘氨酸对华法林诱导的瓣膜间质细胞钙化的保护作用

目的：探究甘氨酸对华法林诱导的瓣膜间质细胞（aortic valve interstitial cells,AVICs）钙化是否有保护作用。方法：提取猪AVICs,通过钙浓度测定、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性测定、茜素红染色等方法检测不同浓度甘氨酸对钙化的作用;real?time PCR探究甘氨酸对成骨分化的作用;Western blot、流式细胞学及TUNEL（TdT?mediated dUTP Nick?End Labeling）染色研究甘氨酸对华法林引起的AVICs凋亡的作用。结果：甘氨酸抑制华法林引起的AVICs钙化,抑制mRNA水平成骨分化标志物的表达,抑制Smad1、5/RUNX2通路,并且抑制华法林引起的AVICs凋亡。结论：甘氨酸可能抑制Smad1、5/RUNX2通路,并且抑制钙化早期凋亡,因此对华法林引起的AVICs钙化具有保护作用。     

miR0-34a通过调控SESN2表达促进耳蜗毛细胞凋亡的机制

目的 探讨miR-34a通过调控SESN2的表达促进耳蜗毛细胞（HEI-OC1）凋亡的机制。方法 双萤光素酶报告基因实验检测miR-34a与SESN2靶向相关性;分别构建对照组（NC组）、SESN2过表达组（SESN2组）、共转染SESN2过表达载体及miR-34a mimic组细胞（SESN2+miR 34a mimic组）。应用CCK-8、Annexin V-FITC/PI流式细胞术和ELISA实验分别检测各组HEI-OC1细胞增殖、凋亡及细胞内氧化应激因子表达的变化,WB检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax与caspase-3及AMPK信号通路中AMPK磷酸化及SIRT1蛋白表达的变化。结果 共转染miR-34a mimic与pGL3-PIK3CA-SESN2-WT后,细胞内萤光素酶活性受到显著抑制;与NC组相比,SESN2组细胞的增殖能力明显增加,而凋亡率显著降低,而SESN2+miR-34a mimic组细胞的增殖及凋亡均无明显变化,提示过表达miR-34a会削弱SESN2对HEI-OC1细胞的保护作用。同时,与NC组相比,SESN2组细胞中凋亡抑制蛋白Bcl-2与SIRT1、p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量增加,抑制凋亡蛋白Bax、caspase-3表达,同时细胞内抗氧化应激因子SOD、CAT及GSH-Px表达量随SESN2增加而升高,MDA表达量减少,反之共转染miR-34a mimic能够逆转上述分子表达变化。结论 miR-34a可能通过靶向抑制SENS2表达,促进AMPK/SIRT1信号通路激活、加速细胞内氧化损伤发挥对HEI-OC1细胞凋亡的促进作用。     

MicroRNA-381 靶向调控KLF-4 抗肾纤维化的机制研究

目的 探究MicroRNA-381（miR-381）通过靶向调控KLF-4 抑制肾纤维化病理进程的作用机制。 方法 选取2014 年2 月—2017 年12 月山东大学附属千佛山医院收治的106 例肾纤维化患者;另取同期该院 健康体检者100 例作为对照组。采用microRNA（miRNA）靶基因数据库筛选出miR-381 潜在靶基因KLF-4 并使用荧光素酶进行验证;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肾纤维化患者血清miR-381。将 NRK49F 细胞分为miR-381 组、NC 组、Ang Ⅱ组及空白组。使用qRT-PCR 和Western blotting 检测miR-381 组、 NC 组中KLF-4 表达变化;使用qRT-PCR 检测miR-381 组和NC 组中多种肾纤维化因子mRNA 表达变化。 检测Ang Ⅱ组和空白组细胞中miR-381 表达变化,miR-381 组、NC 组及Ang Ⅱ组细胞中α-SMA 表达变化。 将小鼠随机分为单侧输卵管梗阻（UUO）组、UUO+miR-381 组及假手术组,检测UUO 组和假手术组小鼠 肾脏组织miR-381 表达变化,并使用Masson 染色观察miR-381 对肾纤维化的作用。结果 qRT-PCR 结果 显示,肾纤维化患者血清miR-381 相对表达量低于对照组（P <0.05）。相比NC 组,miR-381 组肾纤维化因子 α-SMA、CTGF、COL1A1 及COL3A1 mRNA 相对表达量降低（P <0.05）;Ang Ⅱ刺激NRK49F 细胞后,相 比空白组miR-381 相对表达量降低,而Ang Ⅱ组α-SMA 相对表达量升高,过表达miR-381 后α-SMA 相对 表达量降低（P <0.05）。KLF-4 是miR-381 靶基因,miR-381 可以负调控KLF-4 mRNA 和蛋白的表达（P <0.05）。 UUO 组小鼠肾脏组织中miR-381 相对表达量低于假手术组,相比UUO 组,UUO+miR-381 组肾纤维化区域 减小,细胞外基质沉积变少,COL1A1 和COL3A1 mRNA 相对表达量降低（P <0.05）。结论 miR-381 通过抑 制KLF-4 抗肾纤维化的发展进程,可能成为肾纤维化诊断及治疗的新靶点。     

miR-593通过调控PLK1基因的表达抑制结肠癌细胞的增殖

目的探讨miR-593在结肠癌细胞增殖中的作用及分子机制。方法利用生物信息学分析筛选miR-593可能结合的靶基 因为PLK1;利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-593 和PLK1 基因的结合;通过qRT-PCR、Western blotting 验证PLK1 为 miR-593直接作用的靶基因;通过CCK-8实验证明miR-593通过调控PLK1基因的表达抑制结肠癌细胞的增殖。结果运用三 种生物信息学软件对PLK1可能结合的miRNA进行了预测与分析,发现miR-593可能结合PLK1基因;双荧光素酶报告基因实 验证明miR-593 与PLK1 基因发生了结合;Western blotting 结果表明,PLK1 在miR-593 mimic 转染组表达量显著下降,而在 miR-593 inhibitor 组明显升高,相对于对照组均具有统计学差异（P<0.05）;qRT-PCR结果表明,PLK1 RNA水平在各组中表 达水平差异无统计学意义（P>0.05）;细胞增殖实验表明,miR-593与PLK1对结肠癌细胞增殖的影响为相反关系,且共转染miR-593 mimic与PLK1过表达质粒组对细胞增殖的影响介于单独转染miR-593 mimic组与PLK1过表达质粒组之间。结论miR-593通 过调控PLK1基因的表达抑制了结肠癌细胞的增殖,并发挥抑癌miRNA的作用。     

MiR-92a-3p靶向KLF4促进肝细胞癌恶性进程

目的:探究微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)对肝细胞癌(HCC)的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR检测人肝细胞癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B和人正常肝细胞系HL-7702中miR-92a-3p和Krüppel样因子4(KLF4)的表达。将SMMC-7721、Bel-7402细胞分组为Inhibitor NC组、miR-92a-3p Inhibitor组、mimic NC组、miR-92a-3p mimic组、mimic NC+oe-NC组、mimic NC+oe-KLF4组、miR-92a-3p mimic+oe-NC组、miR-92a-3p mimic+oe-KLF4组。qRT-PCR检测细胞中miR-92a-3p和KLF4的mRNA表达水平。Western blot检测KLF4蛋白表达水平。MTT增殖实验检测细胞活力。划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。通过TargetScan分析miR-92a-3p与KLF4的靶向关系,并通过双荧光素酶实验验证。结果:相比于正常细胞,miR-92a-3p在H...     

MiR-744-5p通过靶向 CCND1 抑制肾透明细胞癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨miR-744-5p/CCND1轴在肾透明细胞癌(ccRCC)中的作用及机制。方法 qRT-PCR检测ccRCC组织和细胞系中miR-744-5p 的表达水平。实验分组：miR-744-5p 模拟物（miR-744-5p mimic）、阴性对照（NC mimic）、CCND1 模拟物（CCND1 mimic）及其阴性对照（NC mimic）。CCK-8实验、划痕愈合实验和transwell实验验证miR-744-5p对ccRCC细胞增殖、迁移及侵袭功能的影响。通过生物信息学预测miR-744-5p的下游靶分子,qRT-PCR和Western blot验证CCND1在786-O及OSRC2细胞中的表达水平,双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-744-5p和CCND1的关系,最后通过回复实验验证miR-744-5p/CCND1轴在ccRCC中的作用。结果 MiR-744-5p在ccRCC组织和细胞系中显著下调（P<0.05）,过表达miR-744-5p可以抑制ccRCC细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）。生物信息学分析结果和双荧光素酶报告基因实验结果显示,CCND1是miR-744-5p的下游靶标。回复实验结果显示,上调CCND1可以部分逆转上调miR-744-5p对ccRCC细胞增殖、迁移以及侵袭的抑制作用（P<0.05）。结论 miR-744-5p通过靶向CCND1抑制ccRCC细胞的恶性表型,miR-744-5p/CCND1轴可能是ccRCC诊断和治疗的一个新的靶点。