miR-21对宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性的影响

目的：探讨miR-21与宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性之间的关系,阐明miR-21对细胞凋亡和自噬改变的可能作用机制。方法：人宫颈癌HeLa细胞分为假照组和4 Gy照射组,分别转染miR-21 NC（阴性对照）、miR-21 mimics、miR-21 inhibitor NC和miR-21 inhibitor。实时荧光定量PCR检测照射前和照射后miR-21的表达水平;集落形成实验观察miR-21对HeLa细胞辐射敏感性的影响;流式细胞术检测细胞凋亡和自噬细胞百分率;采用生物信息学方法预测miR-21的靶基因;荧光素酶报告基因分析验证miR-21与靶基因3′UTR的结合;Western blotting法检测相关蛋白beclin1表达水平。结果：与假照组比较,4 Gy照射组miR-21表达水平明显增加(P<0.05）;集落形成实验,与miR-21 NC组比较,miR-21 mimics组HeLa细胞辐射敏感性无明显变化(P>0.05）;与miR-21 inhihitor NC组比较,miR-21 inhibitor 组HeLa细胞辐射敏感性无明显变化(P>0.05）;与miR-21 NC+4 Gy组比较,miR-21 mimics+4 Gy组HeLa细胞凋亡率明显增加(P<0.05）;与miR-21 inhibitor NC组比较,miR-21 inhibitor组HeLa细胞凋亡率明显减少（P<0.05）。与miR-21 NC组比较,miR-21 mimics组自噬率升高（P<0.05）。与miR-21 NC+4 Gy组比较,miR-21 mimics+4 Gy组自噬率升高（P<0.05）;与miR-21 NC+4 Gy组比较,miR-21 mimics+4 Gy组beclin1蛋白表达水平增加（P<0.05）。
结论：发现了miR-21新的靶基因beclin1。过表达miR-21促进辐射诱导的凋亡和自噬,但对于宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性无直接影响。
［关键词］ miR-21;宫颈肿瘤;HeLa细胞;辐射敏感性;细胞凋亡;自噬     

miR-18b增强乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂化疗敏感性的作用及其机制

目的:探讨miR-18b在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂(DDP)化疗敏感性中的作用,阐明其可能的机制。方法:乳腺癌MDA-MB-231细胞根据转染条件分为MDA-MB-231组、MDA-MB-231+DDP组、MDA-MB-231-NC组、MDA-MB-231-NC+DDP组、MDA-MB-231 mimic组和MDA-MB-231 mimic+DDP组。采用生物信息学方法预测的miR-18b的靶基因;荧光素酶报告基因分析验证miR-18b与靶基因3'UTR的结合;应用qRT-PCR法检测各组MDA-MB-231细胞中miR-18b的表达水平;Western blotting法检测MDA-MB-231细胞中ATM蛋白表达水平;CCK-8法检测各组细胞的生长抑制率。结果:荧光素酶实验报告验证ATM为miR-18b的靶基因,并与ATM 3'UTR序列部分结合;与MDA-MB-231-NC组比较,MDA-MB-231 mimic组和MDA-MB-231 mimic+DDP组细胞中miR-18b的表达水平升高(P<0.05);Western blotting法检测,与MDA-MB-231组比较,MDA-MB-231+DDP组细胞中ATM蛋白表达水平升高(P<0.05);与MDA-MB-231-NC组比较,MDA-MB-231 mimic组细胞中ATM蛋白表达水平降低(P<0.05);与MDA-MB-231-NC+DDP组比较,MDA-MB-231 mimic+DDP组细胞中ATM蛋白表达水平降低(P<0.05);CCK-8法检测,与MDA-MB-231 NC组比较,经不同浓度DDP作用后,MDA-MB-231 mimic组细胞生长抑制率均升高。结论:miR-18b通过靶向调控ATM蛋白增强乳腺癌MDA-MB-231细胞对DDP的化疗敏感性。     

Akt联合电离辐射对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡、自噬和增殖的影响

目的: 通过检测Akt联合电离辐射对乳腺癌MCF-7细胞凋亡、自噬和增殖的影响,探讨以Akt为靶点的乳腺癌放射治疗作用。方法: 选择人乳腺癌MCF-7细胞、Akt过表达MCF-7(Akt-MCF-7)细胞和Akt低表达(Akt-RNAi-MCF-7) 细胞,实验分为MCF-7组、MCF-7+4 Gy组、Akt-MCF-7+4 Gy组和Akt-RNAi-MCF-7+ 4 Gy组 。3种细胞经4 Gy照射后,Western blotting法检测Akt蛋白表达,AnnexinⅤ-FITC和PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率,MDC染色荧光显微镜观察细胞自噬百分比,MTT法检测细胞增殖活性。结果: 与MCF-7 细胞比较,Akt-MCF-7细胞中Akt蛋白表达强度增加,Akt-RNAi-MCF-7细胞中Akt蛋白表达强度降低。与MCF-7组比较,MCF-7+4 Gy、Akt-MCF-7+4 Gy和Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞凋亡率和自噬百分比均明显增加(P<0.05或P<0.01),且以Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组增加最明显;与MCF-7+4 Gy组比较,Akt-MCF-7+4 Gy组细胞凋亡率和自噬百分比明显降低(P<0.05或P<0.01),而Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞凋亡率和自噬百分比明显增加(P<0.05或P<0.01)。与MCF-7组比较,MCF-7+4 Gy组、Akt-MCF-7+4 Gy组和Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞增殖活性在不同时间点均明显降低(P<0.05或P<0.01),Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞增殖活性降至最低。与MCF-7+4 Gy组比较,Akt-MCF-7+4 Gy组细胞增殖活性在24 h时明显升高(P<0.05),而Akt-RNAi-MCF-7+4 Gy组细胞增殖活性在不同时间点均明显降低(P<0.01)。结论: Akt过表达可以显著降低电离辐射诱导的MCF-7细胞凋亡、自噬和增殖,而Akt低表达作用则相反。     

电离辐射对Beclin1过表达和低表达MCF-7细胞模型细胞自噬和凋亡的影响及其调控机制

目的:建立Beclin 1过表达和低表达MCF-7细胞模型,检测4 Gy照射后细胞自噬和凋亡的变化,探讨Beclin 1的分子调控作用机制。方法:实验分为MCF-7组、MCF-7+4Gy组、MCF-7-Beclin1+4Gy组和MCF-7-Belin1 RNAi+4Gy组。利用分子生物学方法构建Beclin 1过表达载体pcDNA3.1-Beclin 1,并建立Beclin 1过表达和低表达细胞模型。细胞经4 Gy照射后,采用MDC染色荧光显微镜观察自噬细胞百分比,AnnexinⅤ-FITC和PI染色流式细胞术检测凋亡细胞百分比,Western blotting法检测Beclin 1、P53、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:与MCF-7组比较,MCF-7+4 Gy组、MCF-7-Beclin 1+4 Gy组和MCF-7-Beclin 1 RNAi+4 Gy组自噬和凋亡细胞百分比均明显升高(P<0.05 或 P<0.01),以MCF-7-Beclin 1+4 Gy组升高最明显,且高于MCF-7+4 Gy组 (P<0.05);各组坏死细胞百分比无明显差异。4 Gy照射后,MCF-7组和MCF-7-Beclin 1组细胞中Beclin 1、P53和Bax蛋白表达水平均升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,且以MCF-7-Beclin 1组最为明显。结论:成功建立Beclin 1过表达和低表达MCF-7细胞模型,电离辐射能够诱导其细胞自噬和凋亡,且对Beclin 1过表达细胞作用更明显。Beclin1通过激活P53,进而抑制Bcl-2和激活Bax,从而形成以P53为中心的自噬与凋亡分子调控机制。     

miR-18a对A549细胞的放射增敏作用及其机制

目的 观察miR-18a对A549肺腺癌细胞放射敏感性的影响.方法 qRT-PCR检测2 GyX线照射A549细胞后miR-18a的变化；将人工合成的miR-18a模拟物(mimics)转染A549细胞,测定不同剂量照射后A549细胞的克隆形成能力,描记细胞存活曲线,测算2 Gy时存活分数(SF2)等指标,判断miR-18a对A549细胞放射敏感性的影响；同时检测过表达miR-18a的A549细胞中共济失调-毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)蛋白,探讨miR-18a对A549细胞放射敏感性影响的分子机制.结果 与照射前(1.00±0.04)相比,2 Gy剂量照射后A549细胞miR-18a水平[(0.18±0.04)～(0.31±0.09)]显著降低(P＜0.05).miR-18a过表达后A549细胞放射敏感性增强,miR-18a过表达组、空白对照组SF2分别为0.34,0.48;同时miR-18a过表达的A549细胞中ATM、磷酸化ATM(ATM phospho S1981)水平下降.结论 miR-18a上调A549细胞放疗敏感性,可能与miR-18a下调ATM有关.     

三重靶向介导的Smac过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和周期进程的影响

目的：利用基因重组技术获得三重靶向性Smac过表达的条件复制型腺病毒,探讨其对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和周期的影响。方法：利用重组技术构建Smac过表达载体pShuttle-Egr1-Smac-HRE-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K,与骨架载体pAdEasy在BJ5183（AdEasy-1+）菌中进行重组,获得Smac过表达的条件复制型腺病毒CRAd.pE-Smac,感染MDA-MB-231细胞后,利用化学试剂氯化钴模拟肿瘤细胞乏氧状态,设立对照组、CARd.pE-Smac组、乏氧组和CARd.pE-Smac+乏氧组,并根据是否进行4 Gy照射,每组分为未照射组和照射组,共8个实验组。利用Western blotting法检测各组细胞Smac蛋白的表达,利用流式细胞术检测细胞凋亡率和不同周期进程细胞百分率。结果：Western blotting法检测,经条件复制型腺病毒CRAd.pE-Smac感染、乏氧和照射后,Smac蛋白表达水平增加,CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组Smac蛋白表达水平最高。流式细胞术检测,与对照组比较,CARd.pE-Smac组、乏氧组和CARd.pE-Smac+乏氧组细胞凋亡率均明显升高（P<0.05或P<0.01）;与相应未照射组比较,4 Gy照射后CARd.pE-Smac+4Gy组、乏氧+4Gy组和CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组细胞凋亡率均明显升高（P<0.05或P<0.01）,CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组升高最为明显,且S期和G₂/M期细胞百分率明显增加（P<0.05或P<0.01）,与诱导凋亡的结果有相似的趋势。结论：在条件复制型腺病毒CRAd.pE-Smac感染MDA-MB-231细胞、并经乏氧和辐射处理后,实现了三重靶向介导的Smac过表达,其具有促进肿瘤细胞凋亡和诱导G₂/M期细胞阻滞的作用。     

消癌平联合X射线照射对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的：通过检测消癌平（XAP）联合X射线照射后肝癌HepG₂细胞增殖、周期和凋亡的变化,阐明二者联合抗肿瘤作用的相关机制。方法：选取处于对数生长期的人肝癌HepG₂细胞,分为对照组、XAP组、2 Gy照射组和XAP+2 Gy照射组。采用75 mg·L^-1终浓度XAP注射液处理细胞,12 h后给予2 Gy X射线照射。采用CCK8试剂盒检测细胞增殖活性,采用PI单染和Annexin Ⅴ-FITC双染流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,采用Western blotting法检测凋亡蛋白caspase-3的表达。结果：经药物处理后,在12、24和48 h时,与对照组比较,XAP组、2 Gy照射组和XAP+2 Gy照射组细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）,S期和G₂/M期细胞周期百分率明显增加（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）;且与XAP组和2 Gy照射组比较,XAP+2 Gy照射组变化更明显（P<0.05或P<0.01）;Western blotting法检测,caspase-3被切割成相对分子质量为17000和19000的片段,与对照组比较其表达水平升高。结论：XAP联合X射线照射可以抑制肝癌细胞增殖、诱导G₂/M期细胞阻滞和凋亡,二者联合应用具有协同抗肿瘤作用。     

MicroRNA-210对卵巢癌细胞生长及放射敏感性的影响

目的：探讨MicroRNA-210（miR-210）在卵巢癌细胞生长过程中的作用及其与放射治疗敏感性的关系,阐明miR-210对卵巢癌发展和治疗的影响及可能的分子机制。方法：体外培养人卵巢癌细胞株OVCAR3和SKOV3,应用细胞转染法分别将miR-210 mimic和抗miR-210抑制剂转染至OVCAR3和SKOV3细胞中,并利用Real-time PCR法进行鉴定,得到miR-210过表达和低表达卵巢癌细胞模型。将2种细胞分别分为对照组、miR-210过表达组和miR-210低表达组,采用MTT法检测各组细胞增殖活性;采用不同剂量（30、50和100 Gy）电离辐射照射对照组和miR-210过表达组细胞,采用MTT法检测各组细胞增殖活性;采用Western blotting法检测50Gy照射剂量组卵巢癌细胞中凋亡相关蛋白表达水平。所有实验细胞培养采用3复孔,并重复3次。结果：与对照组比较,miR-210过表达组细胞增殖活性升高,miR-210低表达组细胞增殖活性降低（P<0.05）;在给予电离辐射照射后,与对照组比较,miR-210过表达组细胞增殖活性升高（P<0.05）;且凋亡相关蛋白BAX在2株细胞中表达水平均明显下降,而BCL-2表达水平均明显升高。结论：miR-210可促进卵巢癌细胞的生长,同时通过抑制凋亡作用降低卵巢癌细胞对放射治疗的敏感性。     

咖啡因联合电离辐射对沉默Chk-1肝癌干细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：利用咖啡因联合X射线照射处理沉默检查点激酶1（Chk-1）的肝癌干细胞,通过检测细胞增殖、周期和凋亡,探讨二者对肝癌干细胞的协同杀伤效应。方法：沉默Chk-1的慢病毒载体转染293T细胞,慢病毒感染肝癌HepG₂细胞后,Western blotting检测Chk-1蛋白表达,确定沉默效果,同时设非靶对照,分别命名为HepG₂-Chk-1和HepG₂-control。利用悬浮培养法获得CD133高表达的肝癌干细胞,命名为S-HepG₂-Chk-1和S-HepG₂-control,分为对照组、咖啡因组、4 Gy组和咖啡因+4 Gy组,咖啡因作用后给予4 Gy X射线照射,分别利用MTT法检测细胞增殖活性,利用PI单染和Annexin Ⅴ-FITC双染流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡率。结果：Western blotting法检测,慢病毒感染HepG₂细胞后Chk-1蛋白表达明显降低,而非靶对照组则无明显变化,表明成功获得沉默Chk-1的HepG₂细胞模型HepG₂-Chk-1和非靶对照模型HepG₂-control。将HepG₂-Chk-1和HepG₂-control细胞悬浮培养后,细胞内的CD133蛋白表达水平均升高,表明存在高比例的CD133⁺细胞,即肝癌干细胞。与对照组比较,咖啡因组和4 Gy组细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）,G₁/M期细胞百分率和凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）,且咖啡因组S期细胞百分率明显升高（P<0.05）,4 Gy组G₀/G₁期细胞百分率明显升高（P<0.05或P<0.01）,咖啡因+4 Gy组协同作用更强。与S-HepG₂-control细胞比较,咖啡因组和4 Gy组S-HepG₂-Chk-1细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）,且G₁/M期细胞百分率明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论：成功获得沉默Chk-1且CD133⁺的肝癌干细胞,咖啡因和X射线照射均能抑制细胞增殖和诱导凋亡,并增强G₂/M期阻滞,且二者具有协同增强作用。     

基于lncRNA DGCR5介导miR-1180/SFRP1/Wnt通路对结直肠癌细胞生长转移的影响

目的分析长链编码RNA(lncRNA)DiGeorge综合征临界区基因5(DGCR5)对结直肠癌细胞生长转移的影响,并基于miR-1180/分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)/Wnt通路分析其中的机制。方法选取人结直肠癌细胞系SW480进行培养。将SW480细胞分为对照组(C组,正常培养SW480细胞)、DGCR5 NC组(SW480细胞+转染DGCR5 NC载体)、DGCR5 mimic组(SW480细胞+转染DGCR5 mimic载体)以及DGCR5 inhibitor组(SW480细胞+转染DGCR5 inhibitor载体)。转染完成后采用qPCR检测各组细胞中DGCR5的表达,验证细胞是否转染成功;分别采用CCK8法、克隆形成实验、平板划痕实验以及Transwell实验检测细胞活力、增值、迁移以及侵袭情况。荧光素酶报告测定lncRNA DGCR5与miR-1180的靶向关系;qPCR检测转染后各组细胞miR-1180/SFRP1的表达;WB检测各组细胞SFRP1、Wnt和β-catenin蛋白表达水平。结果与DGCR5 NC组比较,DGCR5 inhibitor组细胞的lncRNA DGCR5表达水平下降;DGCR5 mimic组细胞的lncRNA DGCR5表达水平上升(P<0.05)。与DGCR5 NC组比较,DGCR5 mimic组细胞相对增值率显著下降,DGCR5 inhibitor组显著上升(P<0.05)。与C组、DGCR5 NC组比较,DGCR5 mimic组细胞的克隆数目、细胞愈合率、细胞侵袭数量均明显降低,而DGCR5 inhibitor组均明显升高(P<0.05)。荧光酶素报告结果证实miR-1180是lncRNA DGCR5的靶基因。与DGCR5 NC组比较,DGCR5 mimic组miR-1180、Wnt mRNA及蛋白、β-catenin蛋白表达水平均明显降低,SFRP1 mRNA及蛋白表达水平明显升高;而DGCR5 inhibitor组miR-1180、Wnt mRNA及蛋白、β-catenin蛋白表达水平均明显升高,SFRP1 mRNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论lncRNA DGCR5可通过抑制miR-1180/SFRP1/Wnt通路的表达来抑制SW480细胞的增殖、转移与侵袭。     

过表达lncRNA HCG18调控miR-107/CDKN2B轴对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控miR-107/周期蛋白依赖激酶抑制因子2B(CDKN2B)轴对甲状腺乳头状癌(PTC)细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测60例PTC患者癌组织、癌旁组织及人正常甲状腺上皮细胞TEC及人PTC细胞WRO、TPC-1、SW579中HCG18、miR-107、CDKN2B蛋白表达;将WRO细胞分为CK组、si-NC组、si-HCG18组、pcDNA组、pcDNA-HCG18组、pcDNA-HCG18+mimic NC组、 pcDNA-HCG18+miR-107 mimic组,qRT-PCR检测各组细胞HCG18、miR-107表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;Western blot检测CDKN2B、细胞周期素D1 (CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶实验验证HCG18和miR-107、miR-107和CDKN2B的关系。结果 在PTC组织和P...     

MicroRNA-122介导Mex3a表达抑制膀胱癌细胞恶性生物学行为的机制研究

目的 探究miR-122介导Mex3a表达抑制膀胱癌细胞增殖、迁移，促进细胞凋亡的发生机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-122和Mex3a在正常人膀胱上皮细胞SVHUC-1和人膀胱癌细胞系T24和HT1376中的表达。构建过表达miR-122和低表达Mex3a的T24细胞，并通过CCK-8法、细胞划痕实验和流式细胞术评估miR-122和Mex3a对膀胱癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。双萤光素酶实验验证miR-122和Mex3a的靶向关系。在过表达miR-122的细胞中进一步过表达Mex3a，检测细胞增殖、迁移、凋亡和PI3K/Akt信号通路的变化。结果 SVHUC-1细胞miR-122相对表达量较T24、HT1376细胞高（P <0.05）,Mex3a mRNA相对表达量较T24、HT1376细胞低（P <0.05）。miR-122 mimic组miR-122相对表达量较mimic NC组高（P <0.05）。mimic NC组与miR-122 mimic组在0、24、48、72 h的T24细胞吸光度值比较，经重复测量设计的方差分析，结果：(1)不同时间...     

MiR-21对香烟烟雾提取物诱导的巨噬细胞自噬、增殖及凋亡的影响

目的：探讨微小RNA(micro RNA,miR)-21对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的巨噬细胞 自噬、增殖和凋亡的影响。方法：实验分为对照组、CSE干预巨噬细胞组(CSE组)、miR-21抑制剂+CSE干预巨噬细胞 组(miR-21抑制剂+CSE组)。采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测3组巨噬细胞miR-21表达水平,Western印迹、 MTT试验及流式细胞术检测miR-21抑制剂对巨噬细胞自噬、增殖及凋亡的影响。结果：与对照组相比,CSE组miR- 21表达和自噬水平均增加,差异有统计学意义(均P<0.05)。MiR-21抑制剂+CSE组miR-21的表达量较CSE组明显降低 (P<0.05)。Western印迹显示：与正常组比较,CSE组的微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3 alpha,LC3)和自噬相关蛋白7(autophagy related 7,ATG7)表达增加,而miR-21抑制剂可减少LC3与ATG7的表达。MTT 试验显示：与对照组比较,CSE组的巨噬细胞增殖减少,而miR-21抑制物+CSE组2,3,4 d的增殖率分别为CSE组的 1.41,1.54和1.70倍(均P<0.05)。流式细胞术显示：对照组凋亡率为(2.57±1.35)%,CSE组为(18.70±2.16)%,miR-21抑制 剂+CSE组为(6.28±1.08)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：CSE可通过影响巨噬细胞miR-21的表达及自噬 水平而使巨噬细胞的自噬和凋亡增加,增殖减少。     

miR-150-5p与NCAPG的靶向关系及其对肝细胞肝癌Huh7细胞的抑制作用

目的 探究miR-150-5p与非SMC凝聚体Ⅰ复合物亚基G（NCAPG）的靶向关系及其对肝细胞肝癌（HCC）细胞生物学功能的影响，为HCC的临床诊断和治疗提供潜在靶点。 方法 通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与NCAPG的靶向关系。将HCC Huh7细胞根据转染质粒不同分为模拟物阴性对照（mimic NC）组、miR-150-5p模拟物（miR-150-5p mimic）组、miR-150-5p模拟物+过表达阴性对照（miR-150-5p mimic+ovNC）组和miR-150-5p模拟物+过表达NCAPG（miR-150-5p mimic+ovNCAPG）组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中NCAPG mRNA表达水平，Western blotting法检测各组细胞中NCAPG蛋白表达水平，5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷（EdU）实验检测各组细胞EdU阳性率，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，Transwell实验检测各组细胞中迁移和侵袭细胞数。将裸鼠分为agomiR-NC组、agomiR-150-5p组、agomiR-150-5p+过表达阴性对照（agomiR-150-5p+ovNC）组和agomiR-150-5p+过表达NCAPG（agomiR-150-5p+ovNCAPG）组，Huh7细胞皮下成瘤，检测各组裸鼠肿瘤体积和质量。 结果 双荧光素酶报告基因实验证实NCAPG是miR-150-5p的靶基因。与mimic NC组比较，miR-150-5p mimic组Huh7细胞中NCAPG mRNA和蛋白表达水平及EdU阳性率明显降低（P<0.05），细胞凋亡率明显升高（P<0.05），迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）；与miR-150-5p mimic+ovNC组比较，miR-150-5p mimic+ovNCAPG组Huh7细胞中NCAPG mRNA和蛋白表达水平及EdU阳性率明显升高（P<0.05），细胞凋亡率明显降低（P<0.05），迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加（P<0.05）。与agomiR-NC比较，agomiR-150-5p组裸鼠Huh7细胞移植瘤体积和质量明显减少（P<0.05）；与agomiR-150-5p+ovNC组比较，agomiR-150-5p+ovNCAPG组裸鼠Huh7细胞移植瘤体积和质量明显增加（P<0.05）。 结论 miR-150-5p通过靶向结合抑制NCAPG表达进而抑制HCC细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长，促进细胞凋亡。     

miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的探究miR-28-5p对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用qRT-PCR检测miR-28-5p在正常结肠细胞NCM460与结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620中表达量的差异。将HCT116、SW480、SW620各分为三组:对照组,过表达组,沉默组。对照组不予特殊处理,其余两组分别转染miR-28-5p mimic和miR-28-5p inhibitor,采用qRT-PCR验证转染效率,采用CCK8法检测三组细胞的增殖能力,采用划痕实验检测三组细胞的的迁移能力。结果miR-28-5p在结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620中低表达,与正常结肠细胞NCM460比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,过表达组细胞增殖和迁移能力均降低(P<0.05),沉默组细胞增殖和迁移能力均增强(P<0.05)。结论miR-28-5p在结肠癌细胞中低表达且有调控结肠癌细胞增殖和迁移的作用。     

miRNA-145调控靶基因c-Myc抑制胃癌增殖、侵袭

目的 探索microRNA145（miR-145）对胃癌细胞增殖活性的影响,及与其靶基因c-Myc的调控关系。方法 选取人胃癌细胞株SGC-7901作为研究对象,并向细胞株内转染miR-145模拟物和miR-145阴性对照物,荧光显微镜观察、Q-PCR检测转染后细胞株miR-145的变化,并通过细胞软琼脂克隆增殖实验和MTT实验检测转染后SGC-7901细胞株的增殖能力、Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力。Western blot法检测转染后SGC-7901细胞株中c-Myc蛋白的表达情况。结果 转染后,miR-145模拟物组中miR-145的表达明显高于miR-145阴性对照和空白组,转染miR-145模拟物后SGC-7901细胞增殖能力显著降低（P<0.05）,c-Myc蛋白表达也明显较低（P<0.05）。结论 miR-145能通过抑制靶基因c-Myc的表达,抑制胃癌细胞的增殖与侵袭能力。总之,miR-145可能在胃癌中发挥抑癌基因的作用,是胃癌潜在的早期诊断指标和治疗靶点。     

过表达miR-18a靶向ATM对结肠癌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究miR-18a通过靶基因共济失调-毛细血管扩张突变基因 (ataxia telangiectasia mutated gene, ATM)调控结肠癌细胞的生物学特性。方法 通过软件预测miR-18a其中一个靶基因。设计合成miR-18a的模拟剂（mimics）和抑制剂（inhibitor）,通过转染不同组分上调或下调内源性miR-18a在结肠癌细胞株HCT116中的表达。采用实时荧光定量（qRT）-PCR、Western blot、 MTT法、克隆形成实验、Transwell等方法,检测过表达miR-18a调控ATM基因的表达对体外结肠癌细胞增殖及迁移能力的影响。结果 软件预测发现miR-18a的其中一个靶基因是ATM。通过瞬时转染,过表达内源性miR-18a,可降低HCT116细胞内靶基因ATM蛋白的表达水平。 转染miR-18a mimics后能够下调HCT116细胞的增殖活力,同时显著降低HCT116细胞的克隆形成能力、横向迁移能力及纵向侵袭能力,以上各项改变均与miR-18a过表达有关。结论 证实了miR-18a通过负向调控ATM的表达,抑制结肠癌细胞HCT116的增殖和迁移能力。