广西壮族人群CCR5等位基因多态性的研究

目的:了解广西壮族人群中HIV-1辅助受体趋化因子受体5(CCR5)及其突变体CCR5Δ32等位基因的频率.方法:以60名土生土长的广西壮族人群为研究对象,根据CCR5Δ32碱基缺失位置采用3对特异性引物,用PCR扩增全血DNA样本,根据扩增结果判断CCR5野生型和CCR5Δ32突变体.从中随机抽取3份PCR扩增产物进行测序,通过测序结果与野生型的U95626序列比较来验证PCR扩增结果.结果:60份样本均为CCR5野生型,未发现CCRΔ32突变体.结论:广西壮族人群对HIV-1病毒感染可能具有较高的遗传易感性.     

延边朝鲜族人群趋化因子受体5Δ32基因突变的检测

[目的 ]了解趋化因子受体 5Δ32基因突变遗传多态性在延边朝鲜族人群中的分布情况 ,初步评估我国延边朝鲜族人群对人类免疫缺陷病毒 I感染的遗传易感性 .[方法 ]用酚 /氯抽提法对 12 0名延边地区朝鲜族人群的基因组DNA进行了提取 ,然后采用聚合酶链反应方法对基因组DNA中的趋化因子受体 5Δ32基因突变进行了检测 .[结果 ]在所观察的群体中没有趋化因子受体 5Δ32的存在 .[结论 ]初步显示我国延边朝鲜族人群对人类免疫缺陷病毒具有较高的遗传易感性 ,以此为朝鲜族艾滋病的流行病学研究及预防和治疗提供重要的遗传信息 .     

老年高血压患者CCR基因多态性研究

目的 探索中国老年汉族人群中CCR5和CCR2基因多态性与原发性高血压的相关性.方法 入选的高血压患者(n=187)和非高血压对照者(n=98)均为中国老年汉族人群,提取外周血基因组DNA.采用PCR法检测CCR5Δ32突变,PCR-测序法检测CCR2 64I基因型.结果 所有被研究者中均未发现CCR5Δ32突变基因型.高血压组中CCR2 64I杂合子59例(31.55%),纯合子16例(8.56%),CCR2 64I等位基因频率为24.3%;非高血压对照组中CCR2 64I杂合子34例(34.69%),纯合子4例(4.08%),CCR2 64I等位基因频率为21.4%.等位基因多态性在该群体中呈Hardy Weinberg平衡分布,两组等位基因频率及基因型比较有差别,但均无统计学意义(P>0.05).结论 该研究在中国老年汉族人群中未检出CCR5Δ32突变基因型,且未证实CCR2 64I基因位点与高血压相关.     

广西罗城仫佬族人群HIV-1感染相关基因CCR5多态性的初步研究

目的:了解广西仫佬人群中HIV辅助受体CCR5△32和CCR5-894C缺失等位基因突变频率和多态性的特点,为评估该民族人群对HIV的遗传易感性和艾滋病的防治提供理论依据。方法:以197例仫佬族为研究对象,应用PCR和DNA测序等方法检测CCR5△32和CCR5-894C缺失突变体。结果:未发现CCR5△32和CCR5-894C缺失突变体。结论:由于未发现CCR5△32和CCR5-894C缺失突变体,推测仫佬族人群对HIV-1病毒感染可能具有较大的遗传易感性。     

老年高血压患者CCR基因多态性研究

目的探索中国老年汉族人群中CCR5和CCR2基因多态性与原发性高血压的相关性。方法入选的高血压患者(n=187)和非高血压对照者(n=98)均为中国老年汉族人群,提取外周血基因组DNA。采用PCR法检测CCR5Δ32突变,PCR-测序法检测CCR2-64I基因型。结果所有被研究者中均未发现CCR5Δ32突变基因型。高血压组中CCR2-64I杂合子59例(31.55%),纯合子16例(8.56%),CCR2-64I等位基因频率为24.3%;非高血压对照组中CCR2-64I杂合子34例(34.69%),纯合子4例(4.08%),CCR2-64I等位基因频率为21.4%。等位基因多态性在该群体中呈Hardy-Weinberg平衡分布,两组等位基因频率及基因型比较有差别,但均无统计学意义(P>0.05)。结论该研究在中国老年汉族人群中未检出CCR5Δ32突变基因型,且未证实CCR2-64I基因位点与高血压相关。     

慢性乙型肝炎和性传播疾病人群中辅助受体基因多态性的检测及分布特点

本课题研究乙型肝炎、HIV-1感染者和性病患者中CCR5，CCR2和SDF1等位基因的分布及其特点。我们通过收集乙型肝炎患者(268例)、艾滋病感染者(130例)和性病(259例)的血液标本共657份，应用QIAGEN全血细胞基因组提取试剂盒，分离纯化人血细胞基因组DNA样品。应用PCR或PCR～RFLP分析CCR5，CCR2-64I和SDF1-3’A等位基因突变频率和分布特点。研究结果表明：在乙型肝炎、性病和HIV-1感染者人群中，CCR5A32的突变频率分别为0．19％、0％和0％。在259例个体性病患者中只有1例男性发生了杂合子突变，而在乙型肝炎和HIV-1感染者人群中没有检测出CCR5△32突变基因，可见，CCR5△32的突变率较低。反之，CCR2-64I的突变频率较高，与前述3种病人对应的突变频率分别为19．3％、19．6％和20．7％。进而分析发现SDF1-3’A等位基因在乙肝、性病和HIV-1感染人群中的突变率分别为27．8％，27．4％和26．9％。应用X^2检测与统计学分析显示在乙肝，性病和HIV-1感染人群中CCR2-64I和SDF1-3’A等位基因突变分布之间无连锁关系。小结：突变频率很低的CCR5△32基因型在上述3种类型传染病的发病过程中可能不起主要作用；而突变频率较高的CCR2-64I和SDF1-3’A基因型的功能及其在上述3种传染病进程中的意义有待进一步研究。     

IL-4 α受体Q576R等位基因和CCR5Δ32基因突变与哮喘相关性研究

目的探讨沈阳市城市汉族人群哮喘的遗传特点,IL-4α受体Q576R等位基因和CCR5Δ32基因突变与哮喘的相关性。方法对2000年1月至12月我院在沈阳市城市人口支气管哮喘流行病学调查资料确定的47例哮喘家系成员及50例健康对照者,采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法确定其基因型。结果47例哮喘家系成员经问卷调查、过敏原皮试、血清总IgE水平、肺功能检测,诊断哮喘35例,非哮喘12例。结果哮喘家系成员血清总IgE水平明显增高,过敏原皮试阳性率明显高于健康对照组,肺功能指标明显低于健康对照组;IL-4α受体Q576R等位基因频率哮喘家系组与对照组比较有增高趋势;DNA扩增产物未发现与CCR5Δ32基因相关的244bp长度片段。结论在沈阳市城市汉族人群中,Q576R等位基因频率有增高趋势,无CCR5Δ32基因突变。     

CCR5Δ32等位基因多态性与贵州特殊人群HBV感染的相关性

目的：探讨CCR5Δ32等位基因在贵州世居少数民族（彝、瑶）与汉族人群的分布,并分析CCR5位点突变与HBV的关系。方法：采用PCR技术分别扩增贵州92份黔西彝族、101份威宁彝族、138份荔波瑶族以及165份毕节汉族CCR5编码区片段,通过琼脂糖凝胶电泳对CCR5Δ32多态性进行分析,最后抽取样本并进行DNA测序验证。结果：经过PCR特异性扩增,琼脂糖凝胶电泳后,496份样本均未发现CCR5Δ32突变型和杂合子。DNA测序验证所有样本CCR5基因未发生32碱基缺失的突变。结论：CCR5Δ32的分布有较明显的地域和种族差异,该位点与HBV感染的相关性有待于进一步深入研究。     

HIV-1感染者中枢神经系统的病毒学特征研究

目的 探讨HIV-1感染者中枢神经系统(CNS)的病毒学特征.方法 通过克隆测序分析病毒亚型,观察CNS中HIV-1变异性和离散率;依据V3环11/25法则并结合10例有偿献血HIV-1感染者尸检脑组织标本免疫荧光试验分析中枢神经HIV-1复合受体的使用.结果 有偿献血人群感染的HIV-1显示B和B’亚型特征,脑脊液(CSF)和外周血序列有嵌合现象;CSF C2-V5区序列变异性明显低于外周血,两者的离散率差异无统计学意义;依据11/25法则分析V3环序列可见中枢神经HIV-1大多数使用CCR5复合受体.结论 CNS HIV-1病毒变异性明显小于外周血;CNS HIV-1具有CCR5嗜性.     

人CCR5Delta32基因的克隆及其重组慢病毒载体的构建

目的:克隆人CCR5Delta32基因并构建含目的基因的重组慢病毒载体pLenti-CCR5Delta32,用于获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的基因治疗研究. 方法:从CCR5Delta32突变个体外周血单个核细胞(PBMCs)内提取人基因组DNA,利用PCR技术扩增CCR5Delta32全长基因,经EcoRI单酶切后与pUCm-T载体连接,随后转化感受态E.coli DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及DNA测序. 再将鉴定正确的CCR5Delta32基因亚克隆至慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO并进行酶切鉴定及DNA序列分析. 结果:经PCR扩增获得约650 bp的DNA片段,测序结果与GenBank上的序列完全一致,克隆的目的基因已经正确插入到慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO中. 结论:成功克隆了人CCR5Delta32基因并构建了含目的基因的重组慢病毒载体pLenti-CCR5Delta32,为进一步AIDS基因治疗研究奠定基础.     

ZFNs和TALEs在艾滋病基因治疗中的价值

随着对HIV病毒研究的深入以及传统治疗手段的局限性,通过基因治疗达到控制甚至治愈艾滋病受到重视。CCR5（趋化因子受体5）作为HIV-1进入人类白细胞的主要受体蛋白之一,其突变型CCR5Δ32携带者表现出一定抗HIV-1感染能力。本文综述两类基因工程酶ZFNs和TALEs在艾滋病基因治疗中的应用价值。     

人CCR5Delta32基因重组慢病毒载体的构建及表达

目的:构建含人CCR5Delta32基因的重组慢病毒载体并鉴定其表达性能。方法:从CCR5Delta32突变个体外周血单个核细胞(PBMCs)内提取人基因组DNA,利用PCR技术扩增CCR5Delta32全长基因,经EcoRI单酶切后与pUCm-T载体连接,随后转化感受态E.coliDH5α,提取质粒进行酶切鉴定及DNA测序。再将鉴定正确的CCR5Delta32基因亚克隆至慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO并进行酶切鉴定及DNA序列分析。最后用pLP1、pLP2、pLP/VSVG及pLenti-CCR5Delta32四种质粒共转染293T细胞,产生重组慢病毒并通过Western blot鉴定目的基因在靶细胞内的表达。结果:经PCR扩增获得约650bp的DNA片段,测序结果与发表于GenBank上的序列完全一致。经酶切鉴定,克隆的目的基因已经正确插入到慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO中。四种质粒共转染293T细胞,产生出5×105TU/ml高滴度的重组慢病毒。用其感染靶细胞,Western blot结果显示有目的蛋白表达。结论:成功构建了含人CCR5Delta32基因的重组慢病毒载体并将其在293T细胞内表达,为进一步AIDS基因治疗研究奠定基础。     

早、中、晚孕期胎盘因子对人外周血淋巴细胞CD4,CCR5和CXCR4表达的影响

目的:通过研究早、中、晚孕期胎盘因子(PF)对人外周血淋巴细胞(PBLs)中CD4, CCR5和CXCR4表达的作用,探讨PF在人免疫缺陷病毒-1 (HIV-1)垂直传播中的作用及其机制.方法:制备早、中、晚孕期PF.分离人外周血单个核细胞,并分别与相对浓度为25%的早、中、晚孕期PF作用,培养24 h后收集细胞,荧光抗体标记,流式细胞术检测外周血淋巴细胞(PBLs)中CD4,CCR5和CXCR4表达,以及CD4 T细胞中CCR5 细胞、CXCR4 细胞、CCR5 CXCR4 细胞所占的百分率.结果:各孕期PF均可显著降低PBLs中CCR5的表达,其中早孕期PF的作用明显强于中、晚孕期PF的作用;各孕期PF组CD4 T细胞中CCR5 细胞的百分率均显著低于对照组,早孕期PF组CD4 T细胞中CCR5 细胞的百分率明显低于中、晚孕期PF组;各孕期PF组CD4 T细胞中CCR5 CXCR4 细胞的百分率均显著低于对照组,早孕期PF组CD4 T细胞中CCR5 CXCR4 细胞的百分率显著低于晚孕期PF组.结论:各孕期PF均可显著降低PBLs中CCR5的表达,以及CD4 T细胞中CCR5 细胞和CCR5 CXCR4 细胞的百分率,早孕期PF作用最强,中、晚孕期PF效应相当,PF可能通过抑制R5病毒的入胞而具有抗R5病毒的作用,并可能在阻断HIV-1宫内感染中具有重要作用.     

CCR5Δ32基因突变与银屑病的相关性研究

目的 探讨CCR5Δ32突变与广东籍寻常型银屑病的相关性。方法 通过PCR方法分别扩增241份广东籍汉族银屑病患者及150份正常对照者CCR5编码区片段,通过2.5%琼脂糖凝胶电泳观察CCR5Δ32的多态性,最后抽取样本通过DNA测序进行验证。结果 PCR特异性扩增未发现患者和正常对照有纯合突变或杂合突变。测序亦未发现CCR5Δ32突变。结论 未发现CCR5Δ32突变与广东籍汉族寻常型银屑病的相关性。二者的关系还需进一步扩大样本量进行研究。     

IL-4α（受体Q576R等位基因和CCR5△32基因突变与哮喘相关性研究

目的探讨沈阳市城市汉族人群哮喘的遗传特点，IL-4α受体Q576R等位基因和CCR5△32基因突变与哮喘的相关性。方法对2000年1月至12月我院在沈阳市城市人口支气管哮喘流行病学调查资料确定的47例哮喘家系成员及50例健康对照者，采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法确定其基因型。结果47例哮喘家系成员经问卷调查、过敏原皮试、血清总IgE水平、肺功能检测，诊断哮喘35例，非哮喘12例。结果哮喘家系成员血清总IgE水平明显增高，过敏原皮试阳性率明显高于健康对照组，肺功能指标明显低于健康对照组；IL-4α受体Q576R等位基因频率哮喘家系组与对照组比较有增高趋势；DNA扩增产物未发现与CCR5△32基因相关的244bp长度片段。结论在沈阳市城市汉族人群中，Q576R等住基因频率有增高趋势，无CCR5△32基因突变。     

中国人群中HIV-1辅助受体CCR5基因新突变位点及CCR5-894C缺失基因多态性分析

目的：研究中国人群HIV-1辅助受体CCR5基因编码区新的单核苷酸多态性（SNP）位点;分析CCR5-894C缺失等位基因在中国普通人群和HIV-1高危人群中的分布特点和相关意义。方法：针对CCR5编码区用2对引物进行PCR扩增,设计测序引物对45例汉族人样本进行PCR产物直接测序,用DNAstar分析测序结果,寻找SNP位点。采用错配PCR-RFLP法对中国汉族、蒙族、藏族普通人群,性传播疾病和静脉吸毒高危人群及HIV-1携带者,共627份样品进行了CCR5-894C缺失等位基因分型。结果：在45例汉族人CCR5基因编码区共发现6个SNP位点,4个（184A→G、503G→T、668G→A、99G→T）引起氨基酸改变,两个无义突变;此外还发现1个单碱基缺失（894C缺失）,引起移码突变和提前终止。其中184A→G、503G→T、999G→T三个中国汉族人所特有的SNP位点为首次发现,它们的等位基因频率分别为1.11％,21.1%和10.0％;其中503G→T分布明显不符合Hardy-Weinberg平衡。汉、藏、蒙等民族的普通人群CCR5-894C缺失等位基因频率为1.11％,0.53%和0.在汉族HIV-1性传播、静脉吸毒传播的高危人群中,HIV-1阳性个体和阴性个体间CCR5-89C缺失等位基因频率差异无显著意义,与汉族普通人群比较差异也无显著意义。结论：中国人CCR5基因的SNP位点有自己的特点,共发现4个引起氨基酸改变的SNP位点（其中3个为首次发现）,1个引起移码突变的单碱基缺失。汉族人群中存在CCR5-894C缺失突变,但突变频率很低。这些SNP和缺失突变对于HIV-1感染和艾滋病病程的影响值得进一步研究。     

CCR5与艾滋病的防治

人类获得性免疫缺乏症——艾滋病主要由于HIV-1病毒感染，在体内快速繁殖并导致宿主白细胞的大量破坏所致。在HIV进入白细胞过程中，结构正常的CCR5蛋白质起到促进HIV入胞的通道蛋白的功能。临床观察表明，CCR5的不同基因型个体对HIV的易感性有明显差异，在CCR5的几种基因变异型中，CCR5-△32的杂合子HIV携带者从病毒携带状态转变为艾滋病患者的时间较正常CCR5野生型人群长，     

HIV-1 CHLJBF06044包膜特性分析

目的 分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)原代分离株CHLJBF06044包膜糖蛋白的变异性及表型特征.方法 从一名HIV阳性感染者外周血单个核细胞提取DNA,采用保守引物进行HIV病毒包膜直接克隆,进行序列分析及系统树分析.构建一株带该包膜蛋白的伪病毒并利用表达CXCR4和CCR5的靶细胞进行感染实验,观察该病毒包膜利用辅助受体的表型特征.结果 共获得2个有功能全Env克隆,分别命名为CHLJBF06044c7和CHLJBF06044c8.获得2个有完整包膜基因的克隆,用全Env氨基酸序列与国内分离株进行系统发育分析结果 表明,该株为B'亚型.对包膜蛋白结构分析结果 显示,分离株CHLJBF06044c7和CHLJBF06044c8包膜在抗原性和亲水性上没有明显差别.感染性检测结果 显示该病毒只能感染U87.CD4.CCR5细胞,不能感染U87.CD4.CXCR4细胞.结论 黑龙江省一名HIV-1阳性者克隆到HIV-1 CHLJBF06044病毒的包膜基因,该病毒属于B'亚型(泰国亚型),为CCR5亲嗜性毒株.     

扩增潜伏HIV-1 DNA序列实验方法的优化

目的对PCR扩增潜伏HIV-1DNA序列的实验方法进行优化。方法收集30例经高效抗逆转录病毒治疗（HAART）6~12个月的HIV-1感染者抗凝血标本,分别从外周血单个核细胞（PBMC）和高度纯化的CD4＋T细胞提取基因组DNA,巢式PCR扩增HIV-1env的C2-V5区,电泳检测扩增产物并进行DNA序列测定。结果同一患者PBMC纯化CD4＋T细胞标本扩增HIV-1env基因C2-V5区的效率（93.3%）明显高于直接从PBMC标本扩增该目的片段的效率（10.0%）。结论 PBMC纯化CD4＋T细胞后,再提取基因组DNA进行巢式PCR扩增,可提高扩增潜伏HIV-1DNA序列的效率。     

Polymorphism of HIV-1 Resistance Genes in Dai and Jingpo Minorities of Yunnan Province

Objective To investigate the mutant frequency and polymorphism of HIV- 1 resistance CCR5-A32, CCR2-64L SDF1-3‘A alleles in Jingpo and Dai nationalities of Yunnan Methods The study population included I01 Dai and 113 Jingpo ethnical subjects. The genotypes were respectively detected by polymerase chain reaction (PCR) or by PCR/RFLP (restriction fragment length polymorphism) assay. Mutant frequencies were calculated and allelic polymorphism of the three genes in population was analyzed by U test. Results We didn‘t find CCR5-Δ32 mutant in either Dai or Jingpo nationality. In Dai minority, the allele frequency of CCR2-64I was 21.00% and that of SDF1-3‘A was 20.30%. In Jingpo minority, the allele frequency of CCR2-64I was 16.37% and that of SDF1-3 ‘A was 17. 70%. Conclusion Dai and Jingpo nationality of Yunnan might have a high genetic susceptibility to HIV-1 (including R5 and X4 HIV strains) since we didn ‘t find CCR5- A32 and the frequency of SDF1-3‘A was much lower than that of Han nationality as was reported in other research papers.