血管性血友病因子与不同转移潜能人肺癌细胞转移的相关性研究

目的观察血管性血友病因子(vWF)在较高转移潜能人非小细胞肺癌细胞株95D及较低转移潜能人非小细胞肺癌细胞株95C的表达及vWF与这两株细胞的黏附,初步探讨vWF与人肺癌转移的关系。方法免疫组化观察vWF在这两株细胞的表达,通过黏附实验和四氮唑兰盐(MTT)法观察vWF与这两株细胞的黏附。结果免疫组化显示vWF在95D细胞表达呈强阳性,在95C细胞呈弱阳性;黏附实验和MTT法显示vWF均可以同这两株细胞黏附,其中与95D细胞黏附较强。结论 95D及95C细胞均能产生vWF,vWF可以与这两株细胞黏附,vWF可能通过发挥黏附作用从而促进肺癌转移。     

整合素β1基因剔降血管内皮细胞株的建立及其增殖活力研究

目的 构建人整合素(integrin)β1基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体(pGenesil-integrinβ1),建立integrin β1剔降血管内皮细胞株,观察integrin β1对EA.hy926细胞株增殖的影响.方法 合成integrin β1 siRNA模板,经退火后插入到pGenesil-1荧光载体.阳性重组质粒经DoTAP转染至EA.hy926细胞中.蛋白印迹观察pGenesil-integrinβ1表达载体对目的蛋白integrin β1 表达的抑制效率,绘制转染基因前后细胞生长曲线.结果 经酶切、测序验证,pGenesil-integrinβ1重组质粒构建成功.转染细胞后,可明显抑制integrin β1的表达.整合素β1基因剔降血管内皮细胞株细胞增殖减慢,与EA.hy926细胞株相比,生长曲线右移.结论 成功构建了pGenesil-integrin β1 重组质粒,建立了integrin β1下调细胞株,下调integrin β1表达对血管内皮细胞增殖产生负调控作用.     

硫酸右旋糖苷对人胃癌MKN1细胞的黏附以及整合素β1表达影响的研究

目的通过观察细胞的黏附过程和整合素β1的cDNA的表达,研究硫酸右旋糖苷(DS) 抑制人胃癌MKN1细胞株的黏附过程的机制.方法用位相差显微镜对MKN1细胞在培养盘上的附着过程及形态变化进行了观察.用半定量RT-PCR法对整合素β1 的cDNA的表达水平进行了测定.结果 DS抑制了MKN1细胞在培养盘上的附着,培养48小时后仍有部分细胞处于游离状态.在DS治疗组,黏附细胞和游离细胞内整合素β1的cDNA的表达水平分别减少到非治疗细胞的74% 和38%.结论 DS对人胃癌细胞株MKN1的黏附过程的抑制与对整合素β1 cDNA表达的抑制有关.     

硫酸右旋糖苷对人胃癌MKNl细胞的黏附以及整合素βl表达影响的研究

目的 通过观察细胞的黏附过程和整合素β1的cDNA的表达，研究硫酸右旋糖苷(DS)抑制人胃癌MKNl细胞株的黏附过程的机制。方法 用位相差显微镜对MKNl细胞在培养盘上的附着过程及形态变化进行了观察。用半定量RT—PCR法对整合素β1的cDNA的表达水平进行了测定。结果 DS抑制了MKNl细胞在培养盘上的附着，培养48小时后仍有部分细胞处于游离状态。在DS治疗组，黏附细胞和游离细胞内整合素β1的cDNA的表达水平分别减少到非治疗细胞的74％和38％。结论 DS对人胃癌细胞株MKNl的黏附过程的抑制与对整合素β1 cDNA表达的抑制有关。     

促血管生成素-1对人胃癌细胞黏附和转移作用的研究

目的:探讨促血管生成素-1(Ang-1)对人胃癌细胞中整合素β1(integrin β1)和CD44V6的作用,研究其对肿瘤细胞黏附和转移的影响及可能的作用机制. 方法:利用腺病毒为载体,将已构建成功的、含Ang-1基因的重组腺病毒(Ad-Ang-1)瞬时转染人胃癌细胞株BGC-823,转染含绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad-GFP)作为阴性对照,未转染的正常细胞作为空白对照,用细胞黏附法检测转染前后细胞与细胞外基质黏附率的改变,再分别用半定量RT-PCR和Western blot方法对3组细胞中整合素β1和CD44V6的mRNA和蛋白表达水平进行分析. 结果:细胞黏附实验显示,转染Ad-Ang-1后,细胞与细胞外基质之间的黏附率明显增强(P<0.01);RT-PCR、Western blot结果显示整合素β1、CD44V6 mRNA和蛋白的表达在Ad-Ang-1组明显高于空白对照组及Ad-GFP组. 结论:转染Ang-1能明显提高人胃癌细胞BGC-823中整合素β1、CD44V6 mRNA、蛋白的表达,从而促进肿瘤细胞的黏附和转移.     

模拟CO2气腹对人子宫内膜癌细胞黏附能力的影响

目的 探讨二氧化碳(CO2)气腹环境对培养人子宫内膜癌细胞黏附能力的影响.方法 体外培养人子宫内膜癌HEC-1-B细胞株,以模拟CO2气腹处理4 h,通过MTT法检测细胞生长变化和细胞黏附改变;应用免疫组织化学方法检测细胞中β1-整合素(β1-integrin)以及E-钙黏素(E-cadherin)的表达变化.结果 CO2处理4 h后,与对照组相比,HEC-1-B细胞生长曲线上移,黏附能力增强,β1-整合素与E-钙黏素的表达均减少.结论 CO2气腹有可能通过减弱子宫内膜癌细胞β1-整合素和E-钙黏素的表达导致其黏附能力增加,从而可能对肿瘤细胞的转移产生一定影响.     

CHO细胞中稳定表达人整合素β_3对登革2型病毒感染的影响

目的 检测CHO细胞中稳定表达人整合素β,对登革2型病毒(Dengue virus serotype 2,DV2)感染的影响.方法 将表达人整合素β3的质粒转染CHO细胞,通过G418筛选、流式细胞学检测和间接免疫荧光实验,建立稳定表达整合素β3的CHO细胞株;利用该细胞株进行感染实验,柃测人整合素β3稳定表达对DV2易感性的影响.结果 共获得了C9、C10、F8和H6 4个高表达整合素β3的细胞克隆,其中克降F8中整合素β3的表达水平最高,是对照组的1.89倍.感染实验结果显示,进入整合素β3高表达细胞株的病毒数量均有所增高,增高的比例与整合素β3的表达增高趋势基本一致,进入F8细胞株的病毒量最高,是财照细胞的2.63倍,说明整合素β3有助于DV2进入细胞..结论 在CHO细胞中外源性表达整合素β3可以提高DV2的感染率.     

整合素β1在人表皮细胞株HaCaT增殖中影响的研究

目的探讨β1整合素对表皮细胞增殖的影响.方法将重组整合素β1小干扰RNA表达载体(siIntegrin β1)转染到HaCaT细胞株中,应用免疫印迹(Western blotting)方法检测靶基因的抑制情况,应用细胞计数法检测表皮细胞增殖情况.结果重组siIntegrinβ1 转染HaCaT细胞株能够抑制靶基因整合素β1 的表达,抑制细胞增殖.结论在人表皮细胞株HaCaT中抑制整合素β1表达可抑制HaCaT增殖,为进一步研究整合素在表皮细胞中的基因表达调控奠定了基础.     

丹皮酚抑制GLC-82细胞增殖的体外实验研究

目的探讨丹皮酚(paeonol,Pae)对人肺癌细胞株GLC-82增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法检测丹皮酚对体外培养的人肺癌细胞株GLC-82的增殖抑制作用,用透射电镜和流式细胞仪观察Pae对GLC-82细胞的诱导凋亡作用。结果Pae在31.25～250mg/L浓度范围内对GLC-82细胞的增殖均有抑制作用,呈现明显的量效和时效依赖关系。透射电镜下可见肿瘤细胞发生凋亡改变。Pae在31.25～250mg/L浓度下均可诱导GLC-82细胞发生凋亡,有明显的时效和量效关系。丹皮酚作用后细胞周期发生明显变化,主要表现为S期细胞增加,G0/G1期和G2/M期细胞减少,细胞周期几乎停滞于S期。结论Pae有抑制人肺癌细胞株GLC-82的增殖和诱导其发生凋亡的作用。     

槲皮素诱导人肺癌GLC-82细胞凋亡及机制

目的：探讨黄酮类中药成分槲皮素（Quercetin）对人肺癌GLC-82细胞生长抑制和凋亡的影响.方法：采用细胞培养技术,用不同浓度的槲皮素作用GLC-82细胞48 h,用Hoechst33258染细胞核,在荧光显微镜下观察凋亡细胞核形态变化,用QWin图像分析软件测量细胞核面积和凋亡率.采用MTT法测定细胞的生长能力.采用荧光免疫细胞化学SABC-Cy3法检测Mdm2、p53、Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达,用QWin图象分析软件测定Mdm2、p53、Bax、Bcl-2和caspase-3荧光强度值.结果：槲皮素剂量依赖性的抑制GLC-82细胞生长,呈现典型的凋亡形态学特征,胞核缩小,核质浓集,呈斑块状,有凋亡小体.上调凋亡抑制因子Mdm2和Bcl-2蛋白表达,下调凋亡促进因子Bax和Caspase-3的蛋白表达,对p53蛋白表达量没有明显影响.增加Mdm2、p53、Bax、Bcl-2的阳性表达率,降低caspase-3阳性表达率.结论：槲皮素能够抑制肺癌GLC-82细胞生长并诱导细胞凋亡,而Mdm2的蛋白表达增加,可能抑制了p53发挥促凋亡作用,使部分GLC-82肺癌细胞逃避死亡.     

人表皮干细胞的体外培养与鉴定

目的 探讨人表皮干细胞的体外分离培养方法 ,并对培养的表皮干细胞进行鉴定.方法 运用中性蛋白水解酶和胰蛋白酶两步法分离表皮层和真皮层,并获得表皮单细胞悬液,采用Ⅳ型胶原铺板选择性黏附分离角质形成细胞,应用表皮干细胞培养基进行培养.倒置显微镜下观察培养细胞的生长状况,免疫组织化学染色观察表皮干细胞β1整合素、角蛋白19(K19)、CK10的表达. 结果 组织学观察显示,培养中实验组细胞呈现克隆生长,且克隆维持时间较长;免疫组织化学染色显示,实验组的培养细胞β1整合素及K19均呈阳性表达,而CK10阴性表达.结论 应用Ⅳ型胶原黏附和运用表皮干细胞培养基可以实现人体表皮干细胞的分离和培养,为表皮干细胞体外的大量扩增奠定了基础.     

β1整合素及局部粘附激酶P125FAK在入肺癌细胞中的表达及其意义

目的:探讨β1整合素和局部粘附激酶P125FAK在人肺癌细胞粘附和转移过程中的作用.方法:用细胞粘附实验检测β1整合素在10种人肺癌细胞粘附中的作用;用Western印迹检测β1整合素和局部粘附激酶P125FAK在肺癌细胞上的表达情况.结果:β1整合素抗体可明显抑制非小细胞肺癌的粘附作用,β1整合素在10种人肺癌细胞中均有表达,而p125FAK在小细胞肺癌中的表达则明显减少.结论:β1整合素在人非小细胞肺癌粘附到基底膜的过程中是不可缺少的,而P125FAK的缺乏则可能导致小细胞肺癌的悬浮生长.     

整合素αVβ3在人胆管癌组织中的表达及其临床意义

目的研究整合素αVβ3在人胆管癌组织中的表达及其与胆管癌的临床病理关系.方法采用免疫组织化学方法检测47例人胆管癌组织及正常癌旁胆管组织中整合素αVβ3的表达.结果整合素αVβ3表达于人胆管癌细胞及胆管癌组织中的新生血管细胞,47例标本均呈阳性表达,其表达强度与是否伴有肿瘤转移有显著差异(P<0.05),而与性别、癌组织分化程度无关.结论整合素αVβ3可能在胆管癌细胞的恶性生物学行为中具有重要的作用,检测整合素αVβ3表达可以作为胆管癌预后判断的依据之一.     

Integrin β1 participates in acquired resistance to gefitinib in non-small cell lung cancer

目的 探讨整合素β1及其下游信号转导通路在非小细胞肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFRTKI)吉非替尼获得性耐药中的作用.方法 以人肺腺癌细胞株PC-9和吉非替尼耐药株pC-9/G作为研究对象,免疫印迹分析检测整合素β1、Akt、磷酸化Akt蛋白的表达;用MTT法检测吉非替尼和(或)磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002、细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂PD98059对细胞增殖的影响;用Annexin V/PI试剂盒和TUNEL试剂盒检测细胞凋亡.结果 吉非替尼耐药株PC-9/G高表达整合素β1,RNA T扰抑制整合素β1表达能够抑制PC-9/G细胞的生长和促进凋亡.PC-9/G细胞中吉非替尼对Akt磷酸化的抑制作用弱于PC-9细胞,RNA干扰抑制整合素β1表达后Akt的磷酸化水平降低.ERK抑制剂PD98059不能恢复PC-9/G细胞对吉非替尼的敏感性,PI3K抑制剂LY294002能恢复PC-9/G细胞对吉非替尼的敏感性.结论 整合素β1过表达可以通过PI3K途径激活下游信号分子,这可能是一种重要的EGFR TKI耐药机制.     

P53基因状态与应用今又生的疗效研究

目的p53是迄今临床发现与肿瘤发病相关性最高的肿瘤抑制基因（TSG）,是肺癌中发生频率最高的遗传改变。本研究的目的观察肺腺癌细胞中p53基因突变对状态对重组人p53腺病毒注射液治疗疗效的影响。方法将重组腺病毒截体所携带的野生型p53基因导入人肺腺癌耐药细胞株GLC-82及A549,通过Western blot法分析外源野生型p53基因在细胞内的表达,MTT法和流式细胞术观察对细胞生长抑制及细胞周期,凋亡的影响。结果通过Western blot证实了外源p53基因能在GLC-82及A549细胞中高效表达。MTT法观察到Ad-p53对肺癌细胞的抑制作用呈时间依赖性、剂量依赖性效应,流式细胞术检测结果显示,Ad-p53与能使细胞阻滞于G0～G1期,S期细胞比例明显减少,引起的A549细胞凋亡半为（15．35±1．31）％,GLC-82细胞凋亡率为（20．88±0．71）％。结论Ad-p53能可以抑制含突变型p53基因及含野生型p53基因的人肺腺癌细胞株的生长,促进其凋亡,作用效应不受内源性p53状况的影响。     

黄芩苷体外抑制氟尿嘧啶耐药肝癌细胞的生长及作用机制

目的:观察黄芩苷体外对氟尿嘧啶(Fu)耐药肝癌细胞株生长的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养人肝癌细胞BEL-7402及其耐药细胞BEL-7402/5-Fu,MTT法观察黄芩苷作用后细胞增殖情况;流式细胞术测定细胞内罗丹明123荧光强度;RT-PCR检测细胞多重耐药MDR1基因表达;Western印迹法检测细胞P-gP蛋白表达;应用Matrigel模型测定细胞黏附率;荧光免疫技术测定细胞β1-整合素(β1-integrin)和上皮钙黏附素(E-CD)蛋白表达.结果:黄芩苷明显抑制肝癌细胞BEL-7402及其耐药细胞BEL-7402/5-Fu的增殖,IC50分别为34.2、36.6 mg/L.5、10 mg/L黄芩苷能部分逆转耐药细胞对Fu的耐药,逆转倍数分别为28.6、46.7;5、10 mg/L黄芩苷增强BEL-7402对Fu敏感性,增敏倍数分别为1.4、2.1.5、10 mg/L黄芩苷增加耐药细胞内药物积聚,降低MDR1基因及P-gP蛋白表达,抑制耐药细胞黏附率,降低耐药细胞β1-整合素表达,促进E-CD蛋白表达;且10 mg/L黄芩苷效果优于5 mg/L(P均＜0.05).结论:黄芩苷体外能抑制肝癌细胞生长及降低细胞黏附性,并能部分恢复肝癌耐药细胞对Fu的敏感性,这可能与其增加细胞内药物浓度、抑制MDR1基因表达有关.     

几类实体肿瘤对IFN-α2a治疗敏感性与其细胞表面受体表达的关系

目的:探讨肿瘤细胞表面干扰素α受体的表达与其肿瘤对IFN-α 2a治疗敏感性之间的关系.为建立干扰素α敏感肿瘤的快速评价方法奠定基础.方法:MTT法体外筛选IFN-α 2a敏感与抗性肿瘤细胞株,选取人肺腺癌细胞A549,SPC-A-1,GLC-82和人低分化胃腺癌细胞MKN-45共4株细胞;通过构建荷瘤裸鼠模型,证实不同肿瘤对干扰素治疗的敏感性存在差异.流式细胞术、免疫组织化学、Western Blot检测肿瘤细胞表面IFN-α受体的表达差异.结果:体内、体外实验结果表明:A549,SPC-A-1为IFN-α2a敏感性细胞株,MKN-45,GLC-82为IFN-α 2a抗性细胞株.细胞和组织水平检测的结果表明:表达量由高到低依次为A549,SPC-A-1,MKN-45,GLC-82.结论:IFN-α受体表达的高低与肿瘤细胞对干扰素的敏感性具有密切的相关性,对实现有针对性的个体化治疗具有一定的指导意义.     

汉坦病毒感染对β3整合素及血管内皮生长因子受体2的作用

目的探讨汉坦病毒(HV)感染后β3整合素与血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的变化及其对内皮功能的影响。方法本研究以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为对象,应用黏附试验、Transwell技术及流式细胞技术,观察HV感染后HUVEC黏附和迁移能力的变化,分析β3整合素与VEGFR2在其中的作用及二者表达数量的变化。结果 HV明显抑制HUVEC黏附和迁移能力(P<0.05)。VEGF促进内皮细胞的黏附和迁移的能力可被β3整合素拮抗剂或HV感染所阻断(P<0.05),VEGF促进β3整合素表达的作用也可被HV抑制(P<0.05)。HV可以促进β3整合素及VEGFR2的表达(P<0.05),且二者呈密切正相关(r=0.846)。结论 HV感染对β3整合素、VEGFR2的功能及表达数量的影响可能是其致病机制之一。     

整合素β1-黏附斑激酶在心肌纤维化中的作用及机制

初步探讨整合素β1-黏附斑激酶（integrin β1-FAK）在心肌细胞纤维化中的作用与机制。方法将培养的心肌细胞随机分为对照组、血清脂肪酶（LPS）处理组、integrin β1抑制组、黏附斑激酶（FAK）抑制组及integrinβ1阻断+FAK抑制组。免疫荧光双标法检测原代心肌细胞纯度,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）与实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-RCR）检测基质金属蛋白酶9（MMP-9）、转化生长因子β1（TGF-β1）、Ⅰ型胶原（Col1A1）、Ⅲ型胶原（Col3A1）和整合素β1 （integrin β1）mRNA 水平的变化,Western blot 检测FAK 的表达。结果①与对照组比较,LPS 能够刺激心肌细胞上调MMP-9、TGF-β1、Col1A1、Col3A1 及integrin β1表达;②与LPS 组比较,integrin β1阻断可以抑制LPS 诱导的TGF-β1、MMP-9、Col1A1 及Col3A1 信使核糖核酸（mRNA）的上调（p <0.05）,并阻断LPS 诱导的磷酸化FAK的激活（p <0.05）;③FAK 蛋白抑制剂PF-573228可抑制LPS诱导的TGF-β1和MMP-9 mRNA上调水平,同时加入integrin β1封闭性抗体显示相似的效果。结论Integrin β1阻断能抑制FAK 的磷酸化,下调TGF-β1、MMP-9、Col1A1 及Col3A1 的表达,从而改善在持续炎症刺激条件下心肌细胞的纤维化反应进程,为未来临床治疗拓展新思路。     

息贲胶囊对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及PCNA,CD-44,E-钙黏附素表达的实验研究

目的 探讨息贲胶囊对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及PCNA,CD-44,E-钙黏附素表达的影响.方法 用Lewis肺癌细胞株接种C57BL/6小鼠（H-2Kb）,造成自发性肺癌小鼠模型,息贲胶囊等中药灌胃治疗,用药后计数肺表面转移灶数目,免疫组织化学法检测瘤组织PCNA,CD-44,E-钙黏附素的表达.结果 息贲胶囊能减少肺转移灶数目,并能抑制肿瘤细胞PCNA的表达,增加E-钙黏附素的表达,降低CD44表达.结论 息贲胶囊能抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长,减少肺转移灶数目;其机制可能与抑制细胞增殖、降低PCNA表达、增加瘤细胞E-钙黏附素的表达、降低肿瘤组织CD44的表达有关.