胰腺β细胞生长激素受体基因敲除对STZ诱发1型糖尿病小鼠的影响

目的：利用胰腺β细胞组织特异性生长激素受体（GHR）基因敲除小鼠结合链脲佐菌素(STZ )诱导1型糖尿病模型,从基因水平研究胰腺β细胞GHR缺失对1型糖尿病的影响。方法： 实验小鼠分4组,包括LLc对照组［胰腺β细胞特异敲除GHR小鼠（βGHRKO,LLc）、LL对照组［含有GHR等位基因纯合子小鼠(LL)］、LLc STZ组及LL STZ组（LLc 小鼠和LL小鼠分别给予STZ注射造模）,小鼠餐后血糖≥25 mmol•L^-1为造模成功。对小鼠进行葡萄糖耐量实验（GTT）、小鼠胰腺组织HE染色和免疫组织化学检测。结果：STZ注射后,LL STZ组和LLc STZ组小鼠血糖出现上升趋势,16 d后达到1型糖尿病诊断标准。GTT,LL STZ组和LLc STZ组小鼠血糖值分别较LL对照组和LLc 对照组小鼠血糖值明显升高（P<0.05）,HE染色,与LL 对照组比较,LLc 对照组小鼠胰岛形态及结构无明显变化;LL STZ和LLc STZ组小鼠胰岛萎缩,β细胞数量明显减少。免疫组织化学检测,LL STZ组较LL对照组小鼠胰岛素分泌显著减少,LLc STZ组较LLc 对照组小鼠胰岛素分泌显著减少。结论：在STZ诱导1型糖尿病条件下,胰腺β细胞GHR基因敲除对1型　糖尿病小鼠血糖及β细胞功能无明显影响。     

链脲佐菌素诱导急性非糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡模型的建立

目的：以非致糖尿病的小剂量链脲佐菌素（STZ）诱导 BABL/ C 小鼠胰岛β细胞发生凋亡,建立小鼠急性损伤胰岛细胞凋亡的模型,明确其诱导胰岛β细胞凋亡的发生规律,为胰岛β细胞凋亡相关研究提供在体模型。方法选取 BABL/ C 小鼠,分别予生理盐水（对照组）及60、80、100 mg/ kg 小剂量 STZ 一次性腹腔注射（实验组）,观察时点分别为干预后6、12和24 h,动态观察指标为血糖、胰腺 HE 染色观察病理改变以及末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口标记技术（ TUNEL）检测胰岛β细胞凋亡。结果在所有测试时点血糖均在6～11 mmol/ L 范围内波动,未达到糖尿病模型范畴,TUNEL 凋亡检测发现：与对照组相比,实验组各时点的胰岛β细胞凋亡率均明显升高（P ＜0.05）;各实验组均在12 h 时点凋亡率达到最高峰,并且80 mg/ kg 组与60 mg/ kg、100 mg/kg 组相比明显升高（P ＜0.05）。结论非致糖尿病的小剂量 STZ 可成功构建急性非糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡模型,凋亡高峰期在注射后12 h 时点。     

白藜芦醇上调FasL表达对大鼠重症急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的影响

目的 探讨白藜芦醇对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠腺泡细胞凋亡的影响及其机制.方法 以3.5%牛磺胆酸钠诱导SD大鼠SAP模型,采用全自动生化分析仪检测血清淀粉酶浓度,应用TUNEL染色检测胰腺腺泡细胞凋亡,RT-PCR及Western blot技术检测胰腺组织凋亡调控基因Fas和FasL mRNA及蛋白的表达,以及白藜芦醇治疗对腺泡细胞凋亡及Fas和FasL表达的影响,光镜下观察胰腺组织的病理变化.结果 与SAP组相比,白藜芦醇治疗组血清淀粉酶水平及胰腺病理损害评分明显下降,腺泡细胞凋亡指数明显升高,FasL mRNA及其蛋白的表达水平亦显著升高. 结论 白藜芦醇通过上调胰腺组织凋亡调控基因FasL的表达诱导损伤的胰腺细胞凋亡以减轻胰腺组织病理损害,可能对SAP具有重要的治疗作用.     

五味子油对链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠血糖的影响

目的 研究五味子油对链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠血糖、胰岛细胞形态及功能影响。方法 高脂饲料联合2次ip小剂量链脲佐菌素（STZ）诱导建立2型糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠每天分别ig五味子油0.25、0.5、1.0 mg/kg,连续给药6周后检测大鼠空腹血糖、血清胰岛素水平;HE染色法观察大鼠胰腺病理形态学改变;免疫组织化学方法检测大鼠胰腺细胞胰岛素的表达;RT-PCR法检测大鼠胰腺组织胰岛素和胰十二指肠同源盒因子（PDX-1）mRNA表达水平。结果 五味子油可显著降低糖尿病大鼠的血糖水平,其高剂量组可使血糖恢复至正常水平;提高胰岛素分泌水平,显著提高胰岛素敏感指数,改善胰岛素抵抗;可减轻糖尿病大鼠胰腺病理学改变,使变小的胰岛体积增大、胰岛β细胞数目增多、胰岛素表达提高;还可提高糖尿病大鼠胰腺组织胰岛素和PDX-1 mRNA表达水平。结论 五味子油可以改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗,减轻胰岛β细胞的损伤,增加β细胞数量,改善β细胞的功能缺陷,提高胰岛素的分泌量,增加胰岛素和PDX-1 mRNA表达,从而产生降血糖作用。     

柴芩承气汤减轻急性胰腺炎大鼠胰腺钙超载的机制研究

目的：观察柴芩承气汤（Chaiqinchengqi decoction,CQCQD）对急性胰腺炎大鼠胰腺组织肌浆网钙ATP酶（sarcoendoplasmic reticulum Ca2＋-ATPase,SERCA）mRNA表达的影响。方法：30只SD大鼠随机分成正常对照组、模型组及CQCQD组。采用蛙皮素腹腔注射法建立急性胰腺炎大鼠模型。逆转录聚合酶链式反应检测胰腺组织SERCA1和SERCA2 mRNA表达的变化;激光共聚焦显微镜检测腺泡细胞内钙离子浓度,并比较各组大鼠胰腺组织病理变化。结果：SERCA1 mRNA在正常胰腺和急性胰腺炎胰腺腺泡细胞均不表达。模型组与正常对照组比较,腺泡细胞SERCA2 mRNA表达下调,表达率为0.536（P=0.001）;CQCQD组与模型组比较,腺泡细胞SERCA2 mRNA的表达上调,表达率为1.803（P=0.035）。模型组大鼠细胞内钙离子的荧光强度高于正常对照组及CQCQD组（P〈0.05）;CQCQD组大鼠胰腺组织的病理评分低于模型组（P〈0.05）。结论：CQCQD可以通过上调SERCA2 mRNA表达,减缓胰腺细胞内钙超载,减轻胰腺组织的病理改变。     

VEGF在胰腺缺血再灌注损伤中的作用

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在缺血再灌注损伤（IRI）胰腺组织中的表达及其意义。方法：将雄性SD大鼠32只随机分为4组（n=8）。A组为对照组;B组、C组和D组分别通过钳闭大鼠腹腔干和肠系膜上动脉15、30和60min造成胰腺缺血,然后再灌注6h建立缺血再灌注损伤模型。对各组胰腺组织进行湿干质量比（W/D）检测、病理损伤评估及VEGF免疫组化染色。结果：经缺血再灌注后,胰腺组织的VEGF蛋白表达增强,VEGF蛋白表达在胰腺的胰岛细胞、间质血管内皮细胞、腺泡及导管上皮细胞之间差异有显著性（P＆lt;0.01）。胰腺病理评分和W/D比值与胰岛细胞的VEGF免疫组化染色评分呈正相关（P＆lt;0.01）,与间质血管内皮细胞的VEGF免疫组化染色评分呈高度正相关（P＆lt;0.01）。结论：胰腺IRI引起的胰腺水肿可能与VEGF表达增强有关。     

激活素A及其ⅡA型受体在小鼠肝损伤模型肝组织中的表达

目的：探讨激活素A及其ⅡA型受体在Con A诱导的小鼠肝损伤模型肝组织中的表达形式及其可能的作用。方法：小鼠尾静脉注射Con A（10 mg•kg^-1）,每周1次,连续4周,建立小鼠肝损伤模型（n=24）,另设正常对照组（n=24）,于末次注射后的24、72、120 及168 h,各组（n=6）分批检测小鼠血清酶变化及肝脏组织病理损伤程度,同时采用荧光定量RT-PCR法检测激活素A及其ⅡA型受体的表达水平。结果：在末次注射后72 h肝组织病理损伤最为严重,肝小叶结构紊乱,肝细胞索消失,细胞肿胀,呈气球样变,以后逐渐恢复;激活素A蛋白水平及其mRNA表达与其ⅡA型受体mRNA表达呈平行状态,于注射后72 h达高峰,与对照组比较差异具有显著性(P<0.05)。结论：激活素A与其Ⅱ A受体变化与肝组织病理损伤呈平行状态,提示激活素A可能参与了Con A诱导肝损伤模型小鼠的肝损伤。     

发育中小鼠胰腺D细胞的发生、形态及分布

目的观察发育中小鼠胰腺生长抑素免疫反应细胞（D细胞）的个体发生、分布及形态。方法免疫组织化学SP法。结果胚胎第14天，小鼠胰腺中出现D细胞。胚胎期D细胞散在分布于外分泌部腺泡之间或胰岛内；出生后直至发育成熟，D细胞多分布于胰岛周边，也有单个细胞镶嵌于外分泌部导管的上皮细胞之间。D细胞形态多样，可见免疫反应阳性的细胞突起伸至其他细胞之间。结论小鼠胰腺中的D细胞不仅分布于胰岛内，还可见于外分泌部的腺泡及导管上皮细胞之间。D细胞分泌的生长抑素可能对胚胎期胰腺的形态发生、发育及胰腺的外分泌和内分泌功能均有影响。     

siR N A 干扰 A T1 R 基因调控链脲佐菌素诱导NIT －1细胞凋亡的实验研究

目的：用siRNA干扰技术沉默小鼠胰岛素瘤NIT－1细胞血管紧张素Ⅱ1型受体（ AT1R）基因,探讨其对链脲佐菌素（STZ）诱导的胰岛素瘤细胞凋亡的影响。方法针对小鼠AT1R基因,设计并合成3对siRNA序列,脂质体法转染至NIT－1细胞,荧光显微镜观察荧光强度检测转染效率,Real－time PCR检测AT1R mRNA表达量判断不同干扰序列及干扰时间的基因沉默效果;分4组：空白组不予任何干预,STZ组予5 mmoL／L STZ干预30 min,si－AT1R组予40 nmol／L si－AT1R转染24 h,si－AT1R＋STZ组予40 nmoL／L si－AT1R转染24 h后5 mmoL／L STZ干预30 min;Real－time PCR检测Caspase－3 mRNA表达量,Hoechst33342染色荧光显微镜和Annex-in V－FITC／PI流式细胞术检测细胞凋亡率。结果40 nmol／L siRNA转染的荧光强度最强,转染后AT1R mRNA表达量明显下降,si－AT1R－2转染24 h的沉默效果最佳（92.20％）;Caspase－3 mRNA表达量：STZ组与空白组比增加了2.37倍（P＜0.05）,si－AT1R＋STZ组与STZ组比减少了11.28％,但差异无统计学意义;细胞凋亡率：STZ组与空白组比增加了3.27倍（P＜0.05）,si－AT1R＋STZ组与STZ组比减少了26.82％（P＜0.05）。结论本研究建立了稳定的胰岛细胞AT1R基因沉默模型;RNA干扰沉默胰岛细胞AT1R基因可通过下调Caspase－3 mRNA表达量降低STZ诱导的细胞凋亡率,提示AT1R介导了STZ诱导的胰岛细胞凋亡过程。     

不同纯度的大鼠胰岛中干细胞标记物细胞角质蛋白19及胰十二指肠同源盒基因的表达

目的 探讨不同纯度的大鼠胰岛中干细胞标记物细胞角质蛋白19（CK-19）及胰十二指肠同源盒基因1（PDX-1）的表达。方法 将30只雄性SD大鼠随机平均分成3组,均采用胶原酶Ⅴ型通过胰管对胰腺进行灌注,切取胰腺,剪碎,吹打、消化、离心获得胰岛细胞沉淀物。A组：胰岛沉淀物不进行纯化;B组：胰岛沉淀物中加入25%的Ficoll液纯化;C组：胰岛沉淀物依次加入25%及11%的Ficoll液纯化。应用免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）,分析不同纯度胰岛中干细胞标记物CK-19及PDX-1蛋白和mRNA的表达。结果 采用不同的纯化方法后,A、B、C3组获得胰岛的纯度不同,3组间比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。免疫组化和RT-PCR分析A、B、C3组中CK-19及PDX-1的蛋白和mRNA的表达,A组中CK-19及PDX-1蛋白和mRNA的表达明显高于B、C组,而C组表达最弱。结论 不同纯度的胰岛中均有CK-19及PDX-1蛋白和mRNA的表达,表明在纯化胰岛中均有干细胞存在。     

实验性酒精性肝损伤小鼠血清和肝组织中ACTA及FS的表达水平及其意义

目的：探讨激活素A（ACTA）和卵泡抑素（FS）在酒精性肝损伤中的作用,阐明酒精性肝病的发生机制。方法：建立酒精性肝损伤小鼠模型,以建模后24、72、120及168 h为时间点,采用ELISA法检测40例模型组小鼠及40例对照组小鼠血清ACTA和FS水平以及肝功能变化情况。对模型组小鼠和对照组小鼠肝组织进行HE染色及免疫组织化学染色,观察小鼠肝组织病理变化和ACTA及FS的表达情况。结果：各时间点对照组小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和ACTA水平无明显变化,而模型组小鼠血清ALT、AST和ACTA水平均有不同程度的变化,其中ALT、AST水平以24 h为最高,ACTA水平以72 h为最高。模型组小鼠血清ALT、AST及ACTA水平在4个时间点上与相应对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01）。在4个时间点,模型组和对照组小鼠FS水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。对照组小鼠肝组织中几乎不表达ACTA,而FS表达阳性。模型组小鼠的肝组织汇管区周围高表达ACTA。模型组小鼠肝组织FS表达水平与对照组小鼠肝组织FS表达无明显差异。结论：ACTA和FS在酒精性肝损伤过程中发生了不同的变化,ACTA和FS系统失衡可能是酒精性肝病和肝纤维化形成的重要原因。     

IL-1β诱导子宫内膜异位症间质细胞activin A及相关因子的表达

目的探讨白细胞介素1β（IL-1β）对子宫内膜异位症（内异症）在位内膜间质细胞activin A、follistatin、cripto的表达及蛋白
分泌的影响。方法分离培养内异症在位内膜间质细胞,加入不同浓度IL-1β（250 pg/ml,500 pg/ml,750 pg/ml）干预。实时荧光
定量PCR技术及酶联免疫吸附试验,分别从mRNA及蛋白水平检测activin A、follistatin、cripto 的变化。结果经IL-1β刺激,
activin A及follistatin mRNA表达及蛋白分泌较对照组呈IL-1β剂量依赖性增加;cripto mRNA表达较对照组呈IL-1β剂量依赖
性增加。结论IL-1β可影响内异症在位内膜activin A、follistatin、cripto的分泌及表达。
     

卵泡抑素、激活素A与BMP-4在缺血缺氧性脑损伤大鼠脑组织中的表达

目的 探讨卵泡抑素、激活素A与骨形成蛋白-4(BMP-4)在正常大鼠和缺血缺氧性脑损伤大鼠脑组织中的表达规律及意义。方法 将同期受孕60只SD大鼠分为正常组和模型组各30只,每组按照胎鼠发育时间分为胚胎期8.5 d、13 d、18 d,出生后3 d、7 d、30 d 6个亚组,每个亚组取5只胎鼠或幼鼠。模型组建立脑缺血缺氧模型,应用 SABC免疫组化及 RT-PCR方法,检测不同生长时期大鼠脑缺血缺氧后卵泡抑素、激活素A与BMP-4的表达。结果 正常组卵泡抑素和激活素A的表达水平很低,免疫组化和RT-PCR法显示随着胎鼠发育的时期表达量逐渐减少,BMP-4在胚胎期几乎不表达,出生后30 d略有表达。缺血缺氧后模型组各发育时期卵泡抑素、 激活素A与BMP-4的表达量均高于同期正常组（P<0.01）,尤其以卵泡抑素和激活素A表达增高明显。结论 卵泡抑素、激活素A、BMP-4的表达与发育时间相关,脑缺血缺氧损伤可诱导卵泡抑素、激活素A高表达,但是BMP-4的表达增高不明显,推测在胚胎发育早期卵泡抑素的主要功能是作为激活素A的抑制剂而不是BMP-4的配体来调控神经发育。     

Fas和FasL在急性胰腺炎中的共表达及其与凋亡的关系

目的探讨凋亡调控基因Fas、FasL在大鼠急性胰腺炎中的表达及其与腺泡细胞凋亡的关系。方法通过胰胆管内逆行注射不同浓度的牛磺胆酸钠，建立不同严重程度的急性胰腺炎模型，用RT-PCR、免疫组化法检测胰腺组织Fas、FasL mRNA及蛋白的表达，原位末端标记法检测各组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡。结果在正常的胰腺腺泡细胞中即存在着Fas、FasL mRNA及蛋白的表达，且呈现共区域化特点，凋亡细胞极少。在炎症程度较轻的胰腺组织，Fas和FasL mRNA的表达水平显著提高．腺泡细胞凋亡指数亦明显提高，随胰腺炎症程度的加重，Fas和FasL mRNA的表达逐渐下降．腺泡细胞凋亡指数亦逐渐下降。结论Fas／FasL系统可能参与了正常胰腺组织的细胞更新和自稳；是介导急性胰腺炎时腺泡细胞凋亡的一个重要途径。     

激活素A和卵泡抑素对冻融人胎儿卵巢雌二醇分泌的影响

目的：研究组织培养条件下冻融人胎儿卵巢雌二醇（E2）的分泌及激活素A（Act A）和卵泡抑素（FS）对E2分泌的影响。方法：冻融人胎儿卵巢组织体外培养，分别加入基础培养液（对照组，即MEM组）、基础培养液＋100ng／ml Act A（Act A组）、基础培养液＋100ng／ml FS（FS组）和基础培养液＋100ng／ml Act A＋100ng／ml FS（A＋F组），每组4块组织，培养8d。收集培养2d、4d、6d、8d各组培养液，测定比较其E2值。结果：培养4d、6d、8d卵巢组织分泌的E2值均高于2d的E2值（均P〈0．05），随培养时间延长，E2分泌量先增加后减少，在培养后6d可达较高分泌水平；Act A组E2分泌量明显高于对照组、FS组和A＋F组（均P〈0．01）。结论：冻融人胎儿卵巢在组织培养条件下能分泌E2，Act A能促进体外培养胎儿卵巢E2的分泌，其作用可能受到FS的调节。     

胰腺局部肾素-血管紧张素系统的生理作用

全身肾素-血管紧张素系统(RAS)在调节血压及水、电解质平衡方面起重要作用。而最近发现多种组织、器官中存在局部独立的RAS,在局部自分泌、旁分泌等生理功能方面起不同程度的作用。目前发现在胰腺组织内,包括胰腺腺泡、导管、胰岛、上皮细胞以及星形细胞中存在局部RAS,在生理和包括低氧、胰腺炎、胰岛移植、糖尿病等病理刺激条件下,其表达发生相应改变。RAS在胰腺内、外分泌功能中起重要作用:调节局部血流、导管细胞分泌碳酸氢钠、腺泡细胞分泌消化酶、胰岛β细胞合成及释放胰岛素、δ细胞分泌生长抑素、胰腺细胞增殖和分化。此外,还可能介导氧化应激诱导的细胞炎症、凋亡和纤维化。通过上述影响,胰腺局部RAS在胰腺炎、糖尿病、囊性纤维化及胰腺肿瘤的形成中可能起一定的作用,本文就胰腺局部RAS的生理功能及临床意义进行综述。     

阻断Pannexin-1 可减轻肾脏组织炎症细胞浸润和缓解顺铂诱导的急性肾损伤

目的探讨阻断pannexin-1在顺铂致急性肾损伤中的作用。方法将26只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、顺 铂模型组、顺铂+Carbenoxolone 处理组。顺铂模型组、顺铂+Carbenoxolone 处理组予顺铂20 mg/kg 腹腔注射1 次,顺铂+ Carbenoxolone处理组于顺铂处理前30 min、处理后24、48 h分别腹腔注射Carbenoxolone 20 mg/kg,所有组于顺铂处理72 h处 死小鼠,留取血浆及肾组织样品进行下一步检测。RT-qPCR及Western blot 检测肾组织内pannexin-1 的表达水平;检测血浆 BUN、Scr水平评估肾功能;PAS 染色评估肾组织病理学改变;免疫组化检测肾损伤分子1（KIM-1）表达水平及RT-qPCR检测肾 损伤分子1与中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）mRNA水平评估肾小管损伤情况;免疫荧光检测肾组织F4/80+巨噬 细胞及CD4+ T细胞浸润水平;RT-qPCR及Western blot检测肾组织pannexin-1的mRNA及蛋白表达水平;用终浓度50 μmol/L 顺铂刺激人近端小管上皮细胞株HK-2 细胞4、6、12、18、24 h 构建体外顺铂致急性肾损伤模型;RT-qPCR及Western blot 检测 HK-2细胞pannexin-1的表达水平。结果与对照组相比,顺铂模型组肾组织pannexin-1蛋白水平及mRNA水平表达上调（P< 0.005）;体外实验结果显示,与对照组相比,顺铂模型组的pannexin-1蛋白水平及mRNA水平表达水平上调（P<0.005）;与顺铂 模型组相比,体内应用pannexin-1抑制剂Carbenoxolone处理后,可减轻顺铂所致的肾脏损伤,肾小管损伤程度明显减轻,顺铂+ Carbenoxolone处理组的血浆BUN、Scr水平回降（P<0.01）,肾组织KIM-1、NGAL表达减少（P<0.05）,肾组织浸润的F4/80+巨噬 细胞（P<0.01）及CD4+ T 细胞（P<0.05）减少。结论在顺铂所致急性肾损伤小鼠模型中,Pannexin-1 表达显著上调,阻断 pannexin-1减少炎症细胞浸润,可减轻肾损伤。     

INH-FS-ACT系统对女性睾酮水平的影响

目的探讨女性体内雄激素水平的影响因素.方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附技术(Sandwich ELISA),检测27名无内分泌疾病的女性月经周期第三天血清中睾酮(T)、抑制素(INHB)、卵泡抑素(FS)、激活素(ACTA)水平,并分析T与年龄、体重指数(BMI)、INHB、FS、ACTA、ACTA/FS及其他性激素:雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)的相关性.结果 T随年龄增长而降低(r=0.577,P＜0.05),与INHB正相关(r=0.663,P＜0.05),与FS负相关(r=-0.572,P＜0.05),与ACTA无相关性(r=0.293,P＞0.05),但与ACTA/FS比值正相关(r=0.629,P＜0.05).T与BMI及其他性激素均无相关性.结论 INH-FS-ACT系统影响女性睾酮的分泌.