Caspase-3、bax、bcl-2在睡眠剥夺大鼠心肌细胞中的表达及意义

目的：研究睡眠剥夺（SleepDeprivation,SD）对大鼠心肌细胞的影响及可能机制。方法：健康Wistar大鼠,随机分为大平台对照组、正常对照组、SD2日、4日、6日、8日组共6组,利用“小平台水环境法”（flowerpot）建立大鼠睡眠剥夺模型,用免疫组织化学方法观察SD后心肌细胞Caspase～3、bax、bcl-2基因表达的变化,进一步研究睡眠剥夺对大鼠心肌细胞损伤的作用机制。结果：睡眠剥夺各组Caspase-3、bcl～2、bax活性均高于大平台对照组及正常对照组（P〈0．05）,睡眠剥夺5日组细胞凋亡数量达到最高值。睡眠剥夺7目组细胞凋亡数量有降低趋势。大平台对照组与正常对照组比,细胞凋亡数量有增高趋势,但不如睡眠剥夺1日组高。结论：①睡眠剥夺可以导致心肌细胞调亡,并主要通过此途径引起心肌细胞死亡。②睡眠剥夺引起的心肌细胞调亡机制与bax大量表达,bcl-2／bax比值降低有关。⑧Caspase-3的高表达可以促进心肌细胞凋亡。     

Neuregulin-1β对阿霉素致心衰大鼠心肌细胞凋亡及bax、bcl-2蛋白表达的干预效应

目的 观察阿霉素所致心衰大鼠心肌细胞凋亡和bax、bcl-2蛋白表达情况及Neuregulin-1β(NRG-1β)的干预作用.方法 60只雄性SD大鼠,体质量200-250 g,分成3组:①模型组,即阿霉素心肌病组(ADR-DCM,n=20),阿霉素2 mg/kg,尾静脉注射,每周1次,连续注射8周;②阿霉素心肌病+NRG-1治疗组(NRG,n=20),在注射ADR后8周后即丌始给予NRG-1β 10μg(kg·d)尾静脉注射,连续5 d;③正常对照组(n=20),用2 ml/kg生理盐水,尾静脉注射,连续8周.9周后取心肌行HE染色病理观察,TUNEL法观察心肌细胞凋亡,Western blot检测bax、bcl-2蛋白的表达.结果 模型组与NRG治疗组心肌细胞凋亡指数较正常对照组显著增高(P<0.05),与模型组相比,NRG治疗组凋亡指数显著降低(P<0.05).与模型组比较,NRG治疗组bcl-2蛋白表达明显上调(P<0.05),bax蛋白表达明显下调(P<0.05).结论 NRG-1β能够抑制阿霉索所致心衰大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与bcl-2蛋白表达上调、bax蛋白表达下调、bcl-2/bax值上调有关.     

糖尿病结肠动力障碍大鼠远端结肠平滑肌细胞bax、bcl-2及caspase-3的表达

目的:探讨糖尿病(DM)结肠动力障碍大鼠远端结肠平滑肌细胞凋亡基因的表达。方法:雄性SD大鼠18只应用链脲佐菌素40mg/kg尾静脉注射后成功建立DM结肠动力障碍大鼠模型,分为模型6周和10周组;另18只分为正常对照6周和10周组,各组9只大鼠。应用实时荧光定量PCR检测各组大鼠远端结肠平滑肌细胞的bax、bcl-2和caspase-3mRNA表达,采用免疫组化SP法检测其蛋白的表达。结果:不同组别和作用时间各组大鼠远端结肠平滑肌细胞bax、bcl-2、caspase-3mRNA和蛋白的表达差异均有统计学意义(P均<0.001),模型组与同一时间点正常对照组以及模型10周组与6周组大鼠比较,远端结肠平滑肌细胞bax和caspase-3mRNA和蛋白的表达增强,bcl-2mRNA和蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:远端结肠平滑肌细胞凋亡基因bax、bcl-2及caspase-3表达的改变可能是DM大鼠结肠动力障碍发病机制之一。     

阈下电刺激对大鼠缺血心肌细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响

目的：探讨阈下电刺激对大鼠缺血心肌细胞凋亡及bcl-2和bax表达的影响.方法：Wistar大鼠随机分为假手术组、急性心梗组、阈下电刺激组,假手术组手术不结扎,置入电极不给予电刺激;急性心梗组和阈下电刺激组采用左冠状动脉前降支结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型,急性心梗组仅植入电极,不给予电刺激,阈下电刺激组在建立心肌梗死模型后,给予25 Hz、0.3V阈下电刺激,TUNEL法检测3组大鼠心肌细胞凋亡,免疫组化和RT-PCR的方法检测心肌bcl-2及bax蛋白和mRNA的表达.结果：（1）与假手术组比较,急性心梗组、阈下电刺激组大鼠心肌细胞凋亡指数显著升高（P＜0.05）;与急性心梗组比较,阈下电刺激组大鼠心肌细胞凋亡指数降低（P＜0.05）.（2）与假手术组比较,急性心梗组、阈下电刺激组大鼠心肌细胞bcl-2和bax蛋白和mRNA的表达显著升高（P＜0.05）;与急性心梗组比较,阈下电刺激组大鼠心肌细胞bcl-2蛋白和mRNA的表达显著升高,而bax基因表达显著降低（P＜0.05）.结论：阈下电刺激能显著减少大鼠心肌梗死后缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调bcl-2表达和下调bax表达有关.     

氨氯地平对2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及bax和bcl-2表达的影响

目的探讨钙通道阻滞药氨氯地平(amlodipine)对实验性2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及调控基因bax,bcl-2的影响,以及其防治糖尿病肾病的可能机制.方法通过高糖高脂膳食喂养SD雄性大鼠,诱发胰岛素抵抗,再注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱发高血糖,复制实验性2型糖尿病大鼠模型.实验分为 3组,对照组、糖尿病组和氨氯地平治疗组.分别于注射STZ第8和12周后各取6只大鼠,光镜观察肾脏病理改变,免疫组织化学检测大鼠肾组织bcl-2以及bax表达,流式细胞术检测大鼠肾组织细胞凋亡率及bcl-2、 bax表达.结果糖尿病组肾小球系膜基质增生,基底膜增厚及细胞外基质堆积;少部分肾小管轻度萎缩或管腔扩张,上皮细胞肿胀,胞浆内可见小脂肪空泡.流式细胞术结果显示:糖尿病组肾小球及肾小管凋亡率高于其他各组,治疗组肾小球及肾小管凋亡率与糖尿病组比较降低,且有统计学意义(P<0.05).免疫组织化学结果显示:bcl-2与bax在各组均有不同程度表达,糖尿病组bcl-2与bax表达增强,治疗组与糖尿病组比较bcl-2表达增强,bax表达减弱.结论细胞凋亡及相关基因 bcl-2/bax参与了糖尿病肾病的发病;氨氯地平可以通过bax表达下降、bcl-2 表达增加使肾脏细胞凋亡率减少从而达到保护肾脏的作用.     

慢性应激对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和bax、bcl-2表达的影响

目的：探讨慢性应激对心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响。方法：大鼠随机分为4组（每组12只）,正常对照组（A组）,假手术组（B组）,心肌梗死模型组（C组）,心肌梗死后慢性应激组（C组）;用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测bax和bcl-2蛋白表达。结果：（1）与A、B组比较,C、D组心肌细胞凋亡指数明显增加,P〈0.01;与C组比较,D组心肌细胞凋亡指数明显增加,P〈0.01;A和B组心肌细胞凋亡指数比较无统计学差别;（2）与A、B组比较,C、D组心肌细胞bax和bcl-2蛋白表达均明显增加,P〈0.01;与C组比较,D组心肌细胞bax蛋白表达明显增加,P〈0.01,而bcl-2蛋白表达明显减少,P〈0.01。结论：慢性应激可促进心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与上调bax蛋白表达和下调bcl-2的蛋白表达有关。     

脑钠肽对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的:探索脑钠肽(BNP)对大鼠急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响.方法:采用结扎大鼠左冠状动脉法制备心肌缺血再灌注(IR)模型.将大鼠随机分为三组,(1)假手术组(Sham组)行假手术,滴注生理盐水,观察时间同实验组;(2)缺血再灌注组(IR组):缺血45分钟,再灌注1小时,滴注生理盐水;(3)脑钠肽治疗组(BNP组):缺血45分钟,再灌注1小时,滴注BNP注射液.分别以地高辛随机引物法及免疫组化法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞bax、bcl-2基因的蛋白表达情况.结果:缺血再灌注心肌细胞凋亡数量显著高于假手术组(P<0.01),脑钠肽治疗组心肌细胞凋亡(P<0.05)明显受到抑制.IR组和BNP组bax和bcl-2基因蛋白表达均明显增加(P均<0.01),BNP明显抑制bax基因表达(P<0.05),但对bcl-2基因表达无明显影响.结论:急性心肌缺血再灌注时心肌细胞调亡加剧,bax、bcl-2参与了缺血再灌注时心肌细胞调亡调控, BNP可抑制调亡加速基因bax的表达,因而在缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的保护方面有一定价值.     

金樱子对阿霉素诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨金樱子对大鼠阿霉素诱导心肌细胞凋亡的保护作用。方法SD大鼠随机分为空白对照组、阿霉素组模型组和金樱子干预组。模型组采用阿霉素（15mg／kg）分6次隔日腹腔注射,金樱子组按1～5g／kg体重给予金樱子灌胃,空白对照组仅给予等体积生理盐水。采用缺口末端标记法检N,b肌凋亡细胞,比色法检测Caspase-3的活性改变,荧光探针法检测活性氧（Reactiveoxygenspecies,ROS）的产生。Westernblot检测bcl-2和bax蛋白的表达。结果与模型组相比,金樱子能有效降低心肌细胞凋亡和Caspase-3的活性,并能降低细胞内ROS的产生。bcl-2和bax在正常心肌细胞中均有表达,阿霉素模型组bcl-2表达显著降低,bax表达上调,bcl-2／bax比率下降;金樱子可明显增加bcl-2／bax比率。结论金樱子能在一定程度上抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制ROS产生,降低Caspase-3活性,上调bcl-2／bax比率有关。     

迷迭香酸对冠脉结扎大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的 通过建立冠脉结扎大鼠心肌缺血模型,探讨迷迭香酸(Rosemarinic acid,RA)对冠脉结扎大鼠心肌缺血细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响.方法 取60只雄性Wister大鼠随机分为假手术组、缺血模型组、硝酸异山梨酯组、RA小剂量组、RA中剂量组、RA高剂量组.以结扎冠状动脉前降支造成大鼠急性心肌缺血模型,采用TUNEL标记法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测心肌细胞bcl-2和bax基因的蛋白表达.结果 缺血模型组与假手术组比较,凋亡的细胞明显增多(P<0.01),RA组凋亡细胞较缺血模型组明显减少(P<0.01),与假手术组比,缺血模型组bcl-2,bax蛋白表达量增加,bax表达尤其明显.RA各给药组bcl-2,bax蛋白的表达量比假手术组有所增加,但bax明显较缺血模型组低(P<0.05或P<0.01).结论 RA能上调心肌细胞抗凋亡因子bcl-2和下调促凋亡因子bax的表达,从而抑制心肌缺血后心肌细胞凋亡的发生,这可能是其心肌缺血保护作用的机制之一.     

睡眠剥夺条件下大鼠中枢神经系统c-fos和nestin的表达特点

目的:分析睡眠剥夺条件下大鼠中枢神经系统c-fos和nestin在不同部位的表达特点,为进一步研究睡眠剥夺所造成生理影响的分子机制提供线索.方法:采用小平台水环境法建立大鼠睡眠剥夺24,48,72 h模型,设立大平台对照组和正常饲养对照组,RT-PCR方法分别检测各组大鼠海马、皮质和小脑中c-fos和nestin的表达水平.结果:与对照组相比,睡眠剥夺组c-fos表达升高,nestin表达降低.结论:睡眠剥夺影响大鼠中枢神经系统c-fos和nestin基因的表达.     

汉防己甲素对大鼠急性脊髓损伤后 bcl-2 和 bax 表达的影响

目的 观察汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2和bax表达的影响,探讨其对脊髓损伤的作用机制. 方法 成年SD大鼠100只,分为4组:假手术组10只,损伤对照组、甲基强的松龙(methylprednisolone, MP)治疗组、Tet治疗组各30只.胸8、9椎板切除后,损伤对照组,MP、Tet治疗组用加速压迫型Allen's打击法制成脊髓损伤模型,后2组动物于制模前,伤后24、48 h尾静脉分别注射MP 90 mg/kg和1% Tet 22.5 mg/kg.各组大鼠于术后8 h,1、3、7、14 d行运动功能BBB评分,取损伤段脊髓行石蜡切片HE染色,观察脊髓组织的形态结构变化,免疫组织化学染色检测细胞凋亡因子bcl-2、bax表达. 结果 伤后7、14 d MP、Tet治疗组大鼠运动功能评分显著高于损伤对照组(P<0.05),各时间点MP、Tet治疗组评分无统计学意义(P>0.05);MP、Tet治疗组脊髓组织损害较损伤对照组轻,术后8 h至14 d动态观察,3～7 d损伤表现最为严重,达到损伤高峰期;假手术组中bax、bcl-2阳性细胞数较少,MP、Tet治疗组bax阳性细胞数少于损伤对照组(P<0.05),而bcl-2阳性细胞数多于损伤对照组(P<0.05). 结论 Tet可通过增加bcl-2表达和降低bax表达来抑制急性脊髓损伤后神经细胞的凋亡,有益于脊髓组织的保护,促进运动功能的恢复.     

17-β雌二醇对压力诱导的视网膜神经节细胞凋亡的保护作用及其机制

目的: 探讨17-β雌二醇(E2)对压力诱导的视网膜神经节细胞(RGC-5细胞)凋亡的保护作用,并阐明其可能作用机制。方法: RGC-5细胞分为正常对照组、单纯加压组和加压联合E2组。取处于对数生长期细胞,应用MTT法检测各组细胞相对存活率;Hoe33342核染色法检测各组细胞凋亡形态;Western blotting法检测各组细胞凋亡相关蛋白bax、bcl-2、P53、iASPP和cleaved-caspase-3表达水平。结果: MTT法检测,与对照组比较,单纯加压组及加压联合E2组细胞存活率均降低(P<0.05);加压联合E2组细胞存活率高于单纯加压组(P<0.05)。细胞染色检测,加压联合E2组细胞核浓缩及凋亡小体出现率低于加压组。与对照组比较,单纯加压组及加压联合E2组bax、P53和cleaved-caspase3表达水平均升高(P<0.05),bcl-2和iASPP表达水平均降低(P<0.05);与单纯加压组比较,加压联合E2组bax、P53和cleaved-caspase-3表达水平降低(P<0.05),bcl-2和iASPP表达水平升高(P<0.05)。结论: E2对加压条件下RGC-5细胞有保护作用,可以减少加压条件下的RGC-5细胞的凋亡。     

Bcl-2基因转染对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的研究bcl-2基因转染对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞氧糖剥夺损伤的保护作用,为基因转染治疗脑血管病寻找实验依据。方法体外培养新生大鼠大脑皮层神经细胞,应用脂质体转染法将bcl-2基因转染入神经细胞,建立氧糖剥夺模型,实验分为正常对照组、氧糖剥夺组和bcl-2转染组(转染bcl-2基因24h后,进行氧糖剥夺),采用Western blot法、MTT法、流式细胞仪分别检测各组细胞的bcl-2蛋白表达、细胞活力及凋亡率。结果 SD大鼠大脑皮层神经细胞可纯化体外培养,纯度达到90%以上。成功建立了大鼠神经细胞体外氧糖剥夺模型,成功进行了质粒pc-DNA3.1-hbcl-2的转化、扩增及基因转染。对照组神经细胞bcl-2少量表达,氧糖剥夺组bcl-2蛋白微弱表达,转染组细胞bcl-2蛋白高表达,各组间差异均有统计学意义(均P<0.01)。MTT法检测结果显示,对照组细胞的吸光度值(A)为(0.851±0.034);氧糖剥夺组的A值为(0.648±0.030),与对照组相比明显降低(P<0.01);转染组的A值为(0.787±0.004),低于对照组(P<0.05),但明显高于氧糖剥夺组(P<0.05)。对照组神经细胞凋亡率为4.6%;氧糖剥夺损伤后细胞凋亡率明显增加,为19.6%;转染组细胞凋亡率与氧糖剥夺组相比有明显下降,为9.6%,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论脂质体介导的bcl-2基因转染对氧糖剥夺损伤的大鼠大脑皮层神经细胞有明显保护作用。     

β受体阻滞剂阿替洛尔和酒石酸美托洛尔对大鼠急性心肌梗死后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的作用

目的比较阿替洛尔和酒石酸美托洛尔对大鼠急性心肌梗死(AMI)后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的作用。方法251只雌性SD大鼠结扎左冠状动脉建立AMI模型,术后24h存活的124只随机分为AMI对照(MI组,n=43)、阿替洛尔(A组,10mg·kg-1·d-1,n=39)和酒石酸美托洛尔(B组,20mg·kg-1·d-1,n=42)治疗组;另设假手术组(S组,n=27)。各组再按观察时点随机分为48h和4周两亚组。术后24h以直接灌胃法给药。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术(TUNEL)和DNA凝胶电泳检测心肌细胞凋亡。免疫组织化学方法和Western blot检测“凋亡抑制基因”bcl-2、“凋亡促进基因”bax和“凋亡执行因子”caspase-3基因的表达。结果与AMI对照组相比,AMI后48h,A、B两组梗死区、边缘区和非梗死区的心肌细胞凋亡指数,除B组梗死区显著降低(P<0·01)外,其他指标差异均无显著性(均P>0·05);心肌细胞中bcl-2的表达除A组的非梗死区外均增加(免疫组织化学染色),bax和caspase-3的表达均无明显降低。AMI4周时,A、B两组瘢痕区及其边缘区和非梗死区的心肌细胞凋亡指数均显著降低(P<0·05,P<0·01);bcl-2、bax和caspase-3的表达均无明显变化,仅A4周组非梗死区bax的表达明显降低。Western blot显示,与AMI对照组相比,A、B两组心肌细胞中caspase-3、bcl-2和bax的表达差异均无显著性,但bcl-2/bax的比值显著增加(P<0·05),并与假手术组相当。结论阿替洛尔和酒石酸美托洛尔均能减少AMI梗死/瘢痕区、边缘区和非梗死区的心肌细胞凋亡,作用相当,此作用主要是通过增加bcl-2的表达和bcl-2/bax的比值而实现。     

胸部撞击致大鼠急性肺损伤凋亡相关基因bcl-2、bax表达改变及意义

目的:探讨bcl-2、bax在胸部撞击致大鼠急性肺损伤(ALI)中的表达改变及其意义.方法:健康雄性SD大鼠24只,随机分为正常对照组和创伤后3h,12h,24h组.采用TUNEL法以及免疫组化技术观察肺组织bcl-2、bax表达及细胞凋亡的变化,观察病理形态.结果:与对照组比较,各创伤组肺组织内细胞凋亡指数增加,并随着病程延长逐渐上升(P＜0.05＝;bax基因表达明显增强,并随着病程延长而逐渐增高(P＜0.01＝;bcl-2基因表达亦明显升高,但随着病程延长呈降低趋势(P＜0.01＝;bcl-2/bax比值降低,该比值也有随着病程延长而逐渐下降的趋势(P＜0.01＝.各创伤组光镜下见肺组织损伤明显.结论:肺组织细胞凋亡及bcl-2、bax基因表达参与胸部撞击致ALI时的肺损伤,并在其发病机制中起着一定的作用.     

瘦素对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的: 研究瘦素对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法: 选取处于对数生长期的MCF-7细胞,随机分为对照组和20、40、80 μg·L^-1瘦素处理组。CCK8试剂盒检测各组MCF-7细胞增殖率;流式细胞术检测各组MCF-7细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting法分别检测各组MCF-7细胞bcl-2和bax的mRNA和蛋白表达水平;在抗凋亡作用的信号通路筛选实验中采用Western blotting法检测不同信号通路抑制剂处理组MCF-7细胞p-AKT和bcl-2的蛋白表达水平。结果: 与对照组比较,不同剂量瘦素处理组MCF-7细胞增殖率升高(P<0.05),且呈剂量依赖性,不同剂量瘦素组之间比较差异也有统计学意义(P<0.05);随着瘦素作用剂量增加,不同剂量瘦素处理组细胞凋亡率逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,不同剂量瘦素处理组MCF-7细胞 bcl-2 mRNA和蛋白表达水平增加(P<0.05),bax mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);与瘦素组比较,PI3K-AKT信号通路抑制剂LY294002处理组MCF-7细胞的p-AKT和bcl-2蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论: 瘦素对乳腺癌MCF-7细胞有促进增殖和拮抗凋亡的作用,其抗凋亡效应与通过细胞信号通路PI3K-AKT促进bcl-2表达有关。     

灯盏花素对糖尿病大鼠肾脏PI3K/AKT传导通路的影响

目的探讨灯盏花素对糖尿病大鼠肾脏PI3K/AKT传导通路的影响.方法 80只健康昆明种雄性SD大鼠随机分为正常对照组（N）、糖尿病组（DM）各25只和糖尿病灯盏花治疗组（EB）30只.链脲菌素（streptozotocin,STZ）诱导建立糖尿病大鼠模型.EB组灯盏花素20 mg/（kg.d）腹腔内注射,给药后2周和6周处死大鼠,SYBRGreenI荧光定量RT-PCR方法检测各组大鼠肾脏AKT、bax和bcl-2 mRNA的表达.检测血肌酐、尿素氮和血糖水平;肾组织HE,PAS染色比较各组肾小球平均面积（MGPA）、肾小球平均体积（MGV）.结果 （1）肾脏指数、MGPA、MGV为糖尿病组〉灯盏花组〉正常组（P〈0.05）;（2）血肌酐和尿素氮水平为糖尿病组〉灯盏花组〉正常组（P〈0.01）.（3）与正常组比较糖尿病组大鼠肾脏bax、bcl-2 mRNA的表达显著增强,bax/bcl-2的比值明显升高;灯盏花组与糖尿病组比较bcl-2 mRNA表达增强,bax mRNA表达减弱,bax/bcl-2比值降低.AKTmRNA表达,2周各组间无差异,6周EB组较N组增高（P〈0.01）,较DM及2周EB组增高（P〈0.05）.结论高血糖可促进糖尿病大鼠肾脏肥大,影响肾功能;灯盏花素可增加糖尿病大鼠肾脏AKTmRNA的表达,进而增加抗凋亡基因bcl-2的表达,影响NF-κB的表达,抑制糖尿病大鼠肾脏肥大,发挥保护肾功能.     

睡眠剥夺对大鼠自发活动及各脑区腺苷A1受体表达的影响

目的:探讨大鼠不同脑区腺苷A1受体在睡眠调节过程中的作用。方法:SD雄性大鼠(24只)随机分为睡眠剥夺组、大平台对照组和正常对照组。采用小平台水环境法对大鼠进行72h睡眠剥夺,用大平台水环境作对照。用开场实验观察睡眠剥夺后大鼠自发活动变化,并用逆转录-聚合酶链反应法检测各组前额叶、海马、下丘脑、中脑区、纹状体等脑区腺苷A1受体mRNA浓度变化。结果:睡眠剥夺组自发活动总路程大于大平台对照组((26 100±823)mmvs(15 656±729)mm,P<0.05),自发活动中央路程及休息时间两组比无统计学意义。腺苷A1受体mRNA表达结果显示:在海马,睡眠剥夺组低于大平台对照组((0.18±0.02)vs(0.93±0.17),P<0.05),大平台对照组高于正常对照组((0.93±0.17)vs(0.26±0.05),P<0.05);在中脑,睡眠剥夺组低于大平台对照组((0.06±0.00)vs(0.16±0.02),P<0.05),大平台对照组低于正常对照组((0.16±0.02)vs(0.26±0.03),P<0.05);在额叶,睡眠剥夺组与大平台对照组比差别无统计学意义,大平台对照组低于正常对照组((1.74±0.20)vs(2.68±0.39),P<0.05);在下丘脑和纹状体,各组差别无统计学意义。结论:睡眠剥夺对大鼠各脑区腺苷A1受体表达的影响不同,海马和中脑腺苷A1受体可能参与了睡眠调节。大鼠睡眠剥夺后的自发活动改变与腺苷A1受体表达改变的关系需进一步研究。     

神经酰胺对人内皮细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响

目的 观察外源性神经酰胺(C2-ceramide)对内皮细胞凋亡及相关基因bax和bcl-2表达变化的影响.方法 原代培养人脐静脉血管内皮细胞,加药组加入终浓度分别为5、12.5、25、50 μmol/L的C2-ceramide,对照组加入体积分数为0.1%的无水乙醇.采用TUNEL法检测细胞凋亡,用RT-PCR、Western blot技术对bax mRNA、bcl-2 mRNA及蛋白表达进行分析.结果 加药组内皮细胞的凋亡阳性率显著高于对照组(P＜0.05),且具有时间和剂量依赖性;加药组bax mRNA及蛋白的表达较对照组显著升高(P＜0.05),bcl-2 mRNA及蛋白的表达较对照组则显著降低(P＜0.05).结论 外源性神经酰胺通过上调bax及下调bcl-2表达水平,改变bax/bcl-2值,从而诱导内皮细胞凋亡.     

钾离子通道开放剂二氮嗪对胰岛细胞凋亡以及凋亡相关基因的表达

目的 探讨钾离子通道开放剂(二氮嗪)对糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡以及凋亡相关基因bcl-2、bax表达的影响.方法 利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导胰岛细胞凋亡.将实验用SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)和二氮嗪治疗组(DIA组),治疗4周.观察大鼠的一般状况,监测体重(Weight)、空腹血糖(FPG),摄食量的变化、OGTT的变化.使用TUNEL检测胰岛细胞的凋亡,使用免疫组化法检测bcl-2、bax的含量.结果 ①与NC组比较,DM组大鼠 体重明显下降(P<0.05),四周末时OGTT试验在0'、120'时血糖均上升、bcl-2的表达明显下降而bax的表达则明显升高(P<0.01),胰岛细胞的凋亡也是明显增多的(P<0.05).②与DM组比较,DIA组大鼠体重下降(P<0.05),四周末时 OGTT试验在0'、120'时血糖下降以及bcl-2的含量明显升高(P<0.01),而bax的表达则明显下降(P<0.05),胰岛细胞的凋亡也是减少(P≥0.05).结论 二氮嗪通过开放钾离子通道,明显改善糖尿病大鼠的OGTT,降低体重并且上调bcl-2,下调bax,从而减少胰岛细胞的凋亡,对胰岛细胞具有保护作用.