基因重组蛇毒纤溶因子rFⅡ理化特性及纤溶能力的研究

【目的】研究重组蛇毒纤溶因子的理化特性和纤溶能力。【方法】SDS—PAGE及高效液相法分析重组蛇毒纤溶因子rFII相对分子质量、纯度，等电聚焦分析其等电点；纤维平板和SDS-AGE检测重组蛇毒纤溶因子对纤维蛋白及纤维蛋白原的水解能力。【结果】重组蛇毒纤溶冈子rFII是一个相对分子质量在28000，等电点9．0的碱性蛋白酶。它水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ亚基，水解能力随时间和浓度的增加而增加。它对纤维蛋白的水解能力比相同浓度下的纤溶酶强4倍。【结论】rFII是一种高效的水解纤维蛋白原和纤维蛋白的碱性蛋白酶。     

基因重组蛇毒纤溶因子rFⅡ的酶学特性研究

目的研究重组蛇毒纤溶因子的酶学特性。方法通过SDS-PAGE分析其分子量、纯度，用SDSPAGE方法检测其对纤维蛋白原的水解能力，用分光光度法检测其水解azocasein的能力和PMSF及EDTA对蛇毒纤溶因子的作用。结果蛇毒重组纤溶因子rFII是一个分子量在28000的蛋白酶。它呈时间和浓度依赖性水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ亚基，EDTA和PMSF均可以抑制该因子水解azocasein的能力。结论rFII是一种纤维蛋白原酶，它的酶活性可同时被EDTA和PMSF所抑制。     

江浙蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及性质研究

目的:江浙蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及部分生物化学和药理性质的研究.方法:应用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换柱和HiPrep Sephacryl S 100柱分离纯化纤溶酶,以高效液相色谱仪和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯度、相对分子质量,应用等电聚焦电泳测定等电点,然后测定氨基酸组分及部分药理性质.结果:分离得到相对分子质量为59 100,等电点为4.98, SDS-PAGE为一条带,高效液相色谱分析为单一峰的纤溶酶.该组分属于金属蛋白酶类.氨基酸组成分析表明它含较多的酸性氨基酸.高浓度的纤溶酶对肿瘤细胞CEN2有抑制作用,有微弱的出血毒性.结论:分离纯化得到了一种有微弱出血毒,具有较强抗凝活性的单一组分的酸性金属蛋白酶.     

一种新的沙蚕纤溶酶的纯化、活性鉴定及部分分子特性

目的：从沙蚕Nereis virens的体腔液中纯化、鉴定出一种新的纤溶酶,并对其进行分子表征。方法：运用离子交换层析、凝胶过滤层析等常规色谱方法纯化蛋白酶,采用纤维蛋白板检测法鉴定纤溶活性及活性分布曲线,利用2D-电泳方法检测此纤溶酶的表观分子量和等电点,并检测多种蛋白酶抑制剂对其酶活性的影响,以确定此蛋白酶的类型。结果: 获取一种新的具有极强纤维蛋白水解活性的单链蛋白酶,其相对分子质量为29000,等电点为4.5,其蛋白水解活性在pH7.8和45℃时表现为最高,并能被二异丙基氟磷酸（DFP）和甲苯磺酚氟（PMSF）完全性抑制,确证其为一种典型的丝氨酸内肽酶。结论：Nereis virens的体腔液中存在一种纤溶活性极强的单链丝氨酸内肽酶,该纤溶酶对预防和治疗血栓性疾病具有一定的药用价值。     

纤溶系统与血栓形成

1 纤溶系统的概念 体内纤溶活性降低是血栓形成的常见原因之一。所谓纤溶指纤维蛋白或纤维蛋白原被纤溶酶水解的过程。它可使止血过程形成的纤维蛋白凝块及时得以清除,这对维持血液流体性和保证血管及排泄管道通畅性,都具有重要意义。     

中华眼镜蛇毒纤溶组份的纤溶活性及其机制研究

目的：研究中华眼镜蛇（NajaNajaatra）蛇毒中单一纤溶活性组份对人纤维蛋白和纤维蛋白原的降解作用及其机制。方法：使用剩余可凝纤维蛋白原测定法和酶联纤维蛋白原溶解试验研究该纤溶活性组份对人纤维蛋白原的降解作用；使用纤维蛋白平板法和酶联纤维蛋白溶解试验研究它对人纤维蛋白的降解作用；对它的纤溶机制研究使用的是纤维蛋白溶解酶原激活物活性测定法。结果：该活性组分对人纤维蛋白和纤维蛋白原有直接的降解作用。其活性大约是粗毒的10倍。该活性组份仅降解纤维蛋白原的Aa链，对它的印链和了链没有作用。该组分对人纤维蛋白溶解酶原没有激活作用。结论：从中华眼镜蛇毒中提取的单一纤溶活性组分是一种新的能够直接降解人纤维蛋白和纤维蛋白原的酶类。     

尖吻蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化及氨基酸序列测定

目的:从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化出高纯度的纤溶酶并对其进行初步性质研究和氨基酸序列分析。方法:采用DEAE-Sepharose FF离子交换和两次Superdex75PG凝胶过滤,从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出可直接溶解纤维蛋白原的蛋白酶。结果:分离到的纤溶酶相对分子质量为25kD,HPLC分析纯度在97%以上,氨基酸序列分析其N末端为MSTEF QRYME IVVNHS MVKKY NGDSD KIKAW。结论:采用此工艺可从尖吻蛇毒中分离出高比活的纤溶酶,为进一步研究其药理作用奠定了基础。     

缅甸蝰蛇毒纤溶酶FⅡaa的分离及生物活性

【目的】 从缅甸蝰蛇毒中分离纯化得到纤溶酶FⅡaa并研究其纤维蛋白溶解活性｡【方法】 缅甸蝰蛇蛇毒纤溶酶FⅡaa经过离子交换层析和凝胶层析分离程序得到,SDS-PAGE电泳测得其分子质量,用纤维蛋白平板法测得其纤维蛋白溶解活性,SDS-PAGE电泳测得其纤维蛋白原和纤维蛋白水解特异性｡通过小鼠背部皮下注射FⅡaa 测定FⅡaa的局部出血活性｡取昆明种小白鼠42只,体质量(20 ± 2)g,雌雄各半,随机分成7组,每组6只,皮下注射0.1 mL的FⅡaa(5个剂量组:用生理盐水配制成浓度分别为0.025､0.05､0.075､0.1､0.125 mg/mL),生理盐水和粗毒(0.1 mg/mL)做对照｡6 h后处死小白鼠,从皮内侧面测量出血点的大小,计算最小出血剂量(MHD)｡【结果】 通过三步分离方法得到蛇毒纤溶酶FⅡaa,其分子质量是69 000 u｡FⅡaa在纤维蛋白平板和加热纤维蛋白平板上均显示了纤维蛋白溶解活性｡纤维蛋白原和FⅡaa (0.2 g/L)保温后,Aα 和Bβ链分别在5 min和6 h后完全水解｡γ-链在24 h后部分水解｡FⅡaa水解纤维蛋白的过程与纤维蛋白原的水解过程相似｡蛇毒纤溶酶FⅡaa(0.025､0.05､0.075､0.1､0.125 mg/mL)的皮内出血点直径(mm)分别为7.7 ± 1.0､9.9 ± 1.4､10.5 ± 1.8､12.7 ± 1.4､13.5 ± 1.3｡最小出血剂量(MHD)为6.0 μg｡【结论】 FⅡaa是一种可以直接降解纤维蛋白且具有出血活性的α-纤维蛋白酶     

纤溶酶在抗浆膜结核粘连中的临床应用

纤溶酶(plasmin)是一类能专一降解纤维蛋白凝胶的蛋白水解酶,是纤溶系统中的重要组份.纤溶酶有降解纤维蛋白和纤维蛋白原,水解多种凝血因子,使纤溶酶原转变为纤溶酶和水解补体等重要功能,现在已经成为临床常用的一种溶纤药物.     

血浆纤溶酶测定及其临床应用

纤溶酶原(Plasminogen,Plg)是纤溶系统的重要组成成份,在纤溶酶原激活剂作用下,转变为有活性的纤溶酶(Plasmin,Plm),除可水解纤维蛋白(原)外,还可水解凝血酶原、Ⅴ、Ⅷ、Ⅸ因子等。纤溶酶原对机体许多生理和病理过程起着重要作用,纤溶酶原测定对于肝脏疾病、血栓性疾病、感染性休克、DIC等疾病的基础与临床研究及溶栓疗法的监测等方面都有重要意义。     

Fibrinolytic activity in Nigerian diabetics

Fibrinolytic activity, using euglobulin lysis time (ELT), was assessed in 46 Nigerians with type 2 diabetes mellitus to study the effect of the disease on fibrinolytic component of haemostasis. There were 20 females and 26 males. Fifty age matched non-diabetics and apparently healthy Nigerians were similarly studied as controls; there were 24 females and 26 males. In the patients, the mean (SD) age of the females was 56.7 (12.0) years and mean (SD) ELT was 276.4 (62.2) min; the mean age of the males was 55.7 (8.5) years and mean ELT was 303.5 (51.5) min. The mean age for female controls was 54.3 (12.6) years and their mean ELT was 198.3 (37.5) min; the mean age of the male controls was 53.4 (11.0) years and mean ELT was 181.6 (39.4) min. There was reduced fibrinolytic activity in diabetic Nigerians as revealed by significantly prolonged ELT in diabetic patients compared with healthy controls. There was good correlation between the blood glucose level and ELT. The observed changes in fibrinolytic activity in this study were not affected by duration of illness. The prolonged ELT in the diabetic population is an additional risk factor for thromboembolic disorders. Fibrinolytic agents may therefore be useful in the management of diabetes mellitus.     

蛇毒纤溶酶的体内过程及药物代谢动力学研究

以１２５Ｉ－蛇毒纤溶酶作示踪剂对蛇毒纤溶酶的体内过程及药代动力学进行了研究。实验结果表明，静脉注射后，大鼠体内血药浓度时程曲线为二房室模型，Ｔ１／２β分别为６．１ｈ（低剂量），６．３ｈ（中剂量）和５．６ｈ（高剂量）。小鼠尾静脉注射后３ｈ，各脏器中放射性活性达到峰值，其值（％）大小顺序如下：肾（１．３４）＞肺（（１．０９）＞肝（０．９０）＝脾（０．９０）＞心（０．５１）＞肌肉（０．４５）＞脑（０．２９）。１２５Ｉ－蛇毒纤溶酶主要从尿排泄，静脉注射后，７２ｈ内尿排泄率达８５．６％，而粪排泄仅为５．４％，胆汁排泄率为１２％。     

纤溶系统与急性冠状动脉综合征

越来越多的研究证实,纤溶系统活性降低在急性冠状动脉综合征(ACS)的发生、发展中起重要的作用。纤溶系统活性对ACS的诊断、临床治疗及预后预测的评估有重要价值。本文就ACS时纤溶系统活性变化及临床意义的研究进展进行综述。     

纤维蛋白溶解系统疾病及实验室诊断

纤维蛋白溶解系统(FibrinolyticSystem)简称纤溶系统,是参与机体完成正常生理止血、凝血,调节二者动态平衡,使血液既不会逸出血管之外而发生出血,也不会在血管中凝固而形成血栓的重要因素之一。纤维蛋白溶解是指纤溶酶原(P l a s-minogen,PLG)经不同途径被其特异性激活物激活转     

梅毒螺旋体金属蛋白酶水解纤维蛋白原的活性研究

目的　研究梅毒螺旋体金属蛋白酶Tp0751对细胞外基质纤维蛋白原的水解能力,为深入研究TP的致病机制提供实验依据。　方法　采用两点法构建H198A突变型及H202A突变型Tp0751基因,分别构建野生型和突变型Tp0751原核载体进行诱导表达;体外实验检测Tp0751野生型Tp0751蛋白、H198A　Tp0751突变型蛋白、H202ATp0751突变型蛋白对纤维蛋白原的降解活性。　结果　成功表达并纯化了野生型Tp0751蛋白、H198A　Tp0751突变体蛋白、H202A　Tp0751突变体蛋白,各蛋白相对分子量大小约为26kD;纤维蛋白原在与野生型Tp0751蛋白作用约24h后被完全水解;与H198A　Tp0751突变体蛋白作用约24　h后部分水解,尚有部分未被降解;与H202A　Tp0751突变体蛋白作用约24h后几乎不被水解。　结论　野生型Tp0751蛋白具有水解纤维蛋白原的作用;Tp0751蛋白水解纤维蛋白原的活性可能与金属蛋白酶HEXXH域相关,影响Tp0751蛋白对纤维蛋白原的降解的活性位点可能是202位的H而不是198位的H。     

纤溶系统对深静脉血栓形成的影响

目的以纤溶酶原、t-PA和PAI-1为轴心,探讨纤溶系统对深静脉血栓形成（DVT）的影响.方法收集DVT患者25例（血栓病组）,存在DVT高危因素患者43例（高危因素组）及健康者23例（对照组）.测定PT、aPTT、Fbg,用发色底物法测定PLG：A和PAI：A,用ELISA法测定t-PA：Ag、PAI-1：Ag和FDP.结果血栓病组和高危因素组Fbg、FDP及PAI：A较对照组显著升高（P＜0.05）,PLG：A较对照组显著降低（P＜0.05）.Logistic回归分析DVT的主要影响因素为PAI：A（P=0.029）.相关分析血栓病组和高危因素组t-PA：Ag与PAI-1：Ag呈显著正相关（r分别为0.630和0.430,P＜0.05）,而对照组无相关性（r=0.122,P=0.652）.结论血栓组及高危因素组患者均有凝血激活及纤溶潜力明显降低.特别对高危因素患者这些指标的变化是否可作为DVT的早期危险信号,是否进行干预性治疗,值得临床进一步探讨.     

肾素-血管紧张素系统、纤溶系统和缺血性疾病

大量证据表明,纤溶系统失衡与缺血性心血管事件的发生有关,参与心血管发病机制。肾素-血管紧张素系统控制纤溶系统,通过药理学干预抑制AngⅡ活性,可改善纤溶平衡,降低心血管事件的发生。