广东舟山眼镜蛇蛇毒镇痛活性成分的分离及其药理性质研究

目的:研究广东舟山眼镜蛇蛇毒的镇痛活性成分,为广东舟山眼镜蛇蛇毒的开发利用,寻找新型镇痛药奠定基础.方法:采用对氨基苯甲酸-Sepharose 6B亲和色谱与Sephadex G-50凝胶色谱进行分离纯化;利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法与高效液相色谱法进行纯度的鉴定;应用激光飞行质谱测定其相对分子质量;采用神经病理性疼痛模型评估产物的镇痛活性.结果:经过两步柱色谱法分离得到的产物为单一成分,高效液相色谱测定相对纯度达到95%;相对分子质量为6741.236 Da;在神经病理性疼痛模型,单次腹腔给药后镇痛作用显著,持续时间超过24 h.结论:广东舟山眼镜蛇毒经过两步柱色谱后得到一高纯度的镇痛活性产物,值得进一步开发研究.     

盐酸贝那普利片生物等效性研究

目的:研究广州某公司提供的盐酸贝那普利片人体相对生物利用度,并与市售盐酸贝那普利片(洛汀新)比较生物等效性。方法:24名健康男性受试者采用随机交叉给药方案,分别单剂量口服40mg贝那普利片和参比片,采用液相色谱方法测定血浆样本中贝那普利及其代谢产物贝那普利拉的浓度,采用DAS软件计算药动学参数。结果:对于原药贝那普利,受试制剂相对于参比制剂生物利用度F为(103.0±25.9)%。对于代谢物贝那普利拉,受试制剂相对于参比制剂的AUC0→t的比值为(97.6±19.6)%。方差分析显示,无论是原药还是代谢物,受试制剂与参比制剂的Cmax、AUC0-t、AUC0→∞均无显著性差异。结论:受试制剂与参比制剂具有生物等效性。     

M受体对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制

目的研究毒蕈碱型胆碱受体在抗氧化应激所诱导的凋亡中不同亚型之间是否存在差异。方法用含有M1M4毒蕈碱型胆碱受体亚型的质粒pCDNA3.0转染PC12细胞,加入过氧化氢诱导凋亡,观察氨甲酰胆碱激动毒蕈碱型胆碱受体后各亚型之间抗凋亡能力是否存在差异,同时应用毒蕈碱型胆碱受体抑制剂阿托品,ERK和PI3K信号通路抑制剂PD98059与LY294002观察参与保护作用的相关的信号通路。结果氨甲酰胆碱激动毒蕈碱型胆碱受体后产生抗凋亡效应,各亚型之间没有差异,PI3K信号通路参与了保护作用。结论M1M4亚型毒蕈碱型胆碱受体在对抗过氧化氢诱导的凋亡没有亚型之间的差异,PI3K信号通路参与了保护作用。     

“低钾”诱导神经元凋亡过程中ARNT2上调表达的分析

目的：观察“低钾”诱导大鼠神经元凋亡过程中ARNT2的表达变化，探讨ARNT2与神经元凋亡的关系。 方法： 建立“低钾”诱导神经元凋亡模型，应用RT-PCR分析ARNT2在凋亡过程中mRNA的表达变化，Western blotting分析蛋白质的表达变化，间接免疫荧光与激光共聚焦确定亚细胞定位。 结果： “低钾”诱导30 min后大鼠小脑颗粒神经元ARNT2 mRNA表达水平即明显上调，1h后上调表达最明显，并持续至“低钾”诱导后12 h左右，ARNT2蛋白质水平的表达变化与 mRNA水平的表达变化相似，免疫荧光结合激光共聚焦分析显示ARNT2蛋白定位于正常大鼠小脑颗粒神经元细胞核内。 结论： ARNT2分布于正常大鼠小脑颗粒神经元细胞核内，在“低钾”诱导的凋亡过程中ARNT2 mRNA与蛋白均上调表达。     

咖啡因对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用及机制

目的　观察咖啡因 (caffeine)对苯妥英 (diphenylhy dantoin ,DPH) 10 0 μmol·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranularneurons ,CGNs)存活率的影响 ,并探讨其作用机制。方法　体外培养 8d的CGNs,同时给予 10 0μmol·L-1苯妥英和 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因 ,4 8h后行凋亡分析 ;采用dantrolene(2 0 μmol·L-1)、2APB (5 0 μmol·L-1)、nifedipine(10 0 μmol·L-1)和nimodipine(10 0 μmol·L-1)、MK80 1(4μmol·L-1)、KN93(1μmol·L-1)以及MEK1抑制剂PD980 5 9(5 0 μmol·L-1)分别预先孵育 30min ,再与10mmol·L-1咖啡因和 10 0 μmol·L-1苯妥英共孵育 4 8h ,测定CGNs存活率 ,观察咖啡因的作用与 [Ca2 + ]i 的关系 ;Westernblot法检测咖啡因对磷酸化c Jun和磷酸化ERK水平的影响。结果　① 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因可浓度依赖性抑制 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡 ,显著提高CGNs存活率 ;②dantrolene、2APB、nifedipine和nimodipine、KN93、MK80 1和PD980 5 9均不能取消 10mmol·L-1咖啡因对 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡的保护作用。③咖啡因可明显抑制苯妥英诱导CGNs中c Jun磷酸化水平的升高 ,但不影响被苯妥英抑制的ERK的活性。结论　一定浓度的咖啡因可保护苯?     

眼镜蛇镇痛素najanalgesin对大鼠神经病理性疼痛脊髓GLT-1的影响

目的:观察眼镜蛇镇痛素najanalgesin对L5脊神经结扎并剪断(spinal nerve ligation and transection,SNL)大鼠脊髓胶质细胞谷氨酸转运体亚型1(GLT-1)表达的影响,探讨najanalgesin脊髓镇痛机制.方法:100只雄性SD大鼠,随机分为假手术组(A),SNL模型组(B),SNL+najanalgesin组(C),SNL+生理盐水对照组(D),SNL+najanalgesin+脂质体组(E),SNL+najanalgesin+脂质体+GLT-1反义寡核苷酸(As-ODNs,F)6组.鞘内分别注射10μL生理盐水(A,D),40ng·kg-1najanalgesin(C,E,F),每日1次,在注射najanalgesin的同时于第3天一次性注射脂质体+GLT-1As-ODNs10μL(F)以及脂质体10μL(E),术后1,4,7 d(A,B,C,D)及第7天(E,F)取各组大鼠L4～L6脊髓节段,检测各组GLT-1 mRNA和蛋白表达改变.结果:采用SNL成功建立了神经病理性疼痛模型.与假手术组相比,B,D组大鼠GLT-1 mRNA和蛋白表达先增加再降低,C组大鼠GLT-1 mRNA和蛋白表达明显增加,但不随时间变化.与D组相比,C组大鼠第7天GLT-1 mRNA和蛋白表达明显增高.与椎管内注射najanalgesin组相比,椎管内注射GLT-1As-ODNs后,F组GLT-1表达明显下降,而脂质体对照组GLT-1的表达基本不变.结论:najanalgesin可以增加脊髓GLT-1 mRNA和蛋白表达,是其脊髓镇痛机制之一.     

近8年中国儿童哮喘与室内空气污染、呼吸道感染和母乳喂养的病例对照研究Meta分析

【目的】 对已经发表的研究空气污染、呼吸道感染和母乳喂养与儿童哮喘的相关性的论文结果进行系统的Meta分析。 【方法】 搜索中国学术期刊全文数据库以及文献追溯等途径收集国内2002年起有关室内空气污染、呼吸道感染和母乳喂养与儿童哮喘关系的病例对照结果,计算合并OR值及95％的可信区间并检查文献间的异质性。 【结果】 共5篇文献被纳入分析,各文献之间没有明显异质性。在室内空气污染、呼吸道感染和母乳喂养3个相关因素中,呼吸道感染对儿童哮喘的危险性最大,合并OR值为2.26;室内空气污染的危险最小,合并OR值为0.35;母乳喂养可以降低儿童哮喘的危险,合并OR值为0.36。 【结论】 本文研究发现呼吸道感染是中国儿童哮喘的最危险因素,同时结果也表明室内空气污染也是儿童哮喘的危险因素之一,母乳喂养作为一种保护因素,可以降低儿童哮喘的危险性。     

基因重组蛇毒纤溶因子rFⅡ的酶学特性研究

目的研究重组蛇毒纤溶因子的酶学特性。方法通过SDS-PAGE分析其分子量、纯度,用SDSPAGE方法检测其对纤维蛋白原的水解能力,用分光光度法检测其水解azocasein的能力和PMSF及EDTA对蛇毒纤溶因子的作用。结果蛇毒重组纤溶因子rFII是一个分子量在28000的蛋白酶。它呈时间和浓度依赖性水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ亚基,EDTA和PMSF均可以抑制该因子水解azocasein的能力。结论rFII是一种纤维蛋白原酶,它的酶活性可同时被EDTA和PMSF所抑制。     

腺病毒载体介导的大鼠DNA多聚酶β重组体的构建及其在PC12细胞中的表达

【目的】为探讨DNA多聚酶β在神经细胞损伤中的作用与机制，构建其重组腺病毒载体，并在PC12细胞中表达。【方法】RT—PCR获取大鼠DNA多聚酶β（POLβ）的编码序列，TA克隆测序，酶切POLβ基因并连人穿梭质粒pAdTrack—CMV，电转至含腺病毒pAdeasy骨架质粒的大肠杆菌BJ5183。重组腺病毒质粒（pAd—polp）和Lipofectamine2000转染293细胞，用重组腺病毒感染PC12细胞。【结果】10个TA克隆中有3个克隆的序列与GENE BANK中大鼠POLβ cDNA序列完全一致，同源重组检测时30个克隆中有8个含目标条带。DNA序列正确的POLβ重组腺病毒质粒转染293细胞后，感染Ad—polβ的293及PC12细胞荧光显微镜下可见绿色荧光，重组腺病毒Ad—polβPCR鉴定含目标条带，Ad—polβ感染PC12细胞Western Blot检测到POLβ蛋白表达。【结论】成功构建了大鼠DNA多聚酶β的腺病毒重组体并在PC12细胞中表达     

广东眼镜蛇毒低分子量多肽的分离纯化与性质鉴定

目的从广东眼镜蛇粗毒中分离纯化出色谱纯的低分子量多肽并对其部分性质进行鉴定。方法采用化学沉淀法对蛇粗毒进行预处理,经Sephadex G-50凝胶过滤和UND Sphere S阳离子交换层析得到高纯度低分子量多肽,用SDS-PAGE及HPLC对产物纯度进行鉴定,并用SDS-PAGE和质谱法测定分子量,采用蛙心灌流法考察产物是否具有心脏毒性。结果结果表明,经分离纯化后得到两种低分子量多肽GI2和GI3,均为单一组分,可达到色谱纯,SDS-PAGE法测得GI2分子量为14 300 Da,质谱法测得GI3分子量为6 725.8 Da,仅GI2具有心脏毒性,收率分别为9.5%和10.1%。结论通过化学沉淀预处理,并经2次柱色谱可从广东眼镜蛇毒中分离得到两种色谱纯的低分子量多肽,且收率较高。