基因重组蛇毒纤溶因子rFII理化特性及纤溶能力的研究

[目的]研究重组蛇毒纤溶因子的理化特性和纤溶能力.[方法]SDS-PAGE及高效液相法分析重组蛇毒纤溶因子rFII相对分子质量、纯度,等电聚焦分析其等电点;纤维平板和SDS-PAGE检测重组蛇毒纤溶因子对纤维蛋白及纤维蛋白原的水解能力.[结果]重组蛇毒纤溶因子rFII是一个相对分子质量在28 000,等电点9.0的碱性蛋白酶.它水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ亚基,水解能力随时间和浓度的增加而增加.它对纤维蛋白的水解能力比相同浓度下的纤溶酶强4倍.[结论]rFII是一种高效的水解纤维蛋白原和纤维蛋白的碱性蛋白酶.     

基因重组蛇毒纤溶因子rFⅡ的酶学特性研究

目的研究重组蛇毒纤溶因子的酶学特性。方法通过SDS-PAGE分析其分子量、纯度，用SDSPAGE方法检测其对纤维蛋白原的水解能力，用分光光度法检测其水解azocasein的能力和PMSF及EDTA对蛇毒纤溶因子的作用。结果蛇毒重组纤溶因子rFII是一个分子量在28000的蛋白酶。它呈时间和浓度依赖性水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ亚基，EDTA和PMSF均可以抑制该因子水解azocasein的能力。结论rFII是一种纤维蛋白原酶，它的酶活性可同时被EDTA和PMSF所抑制。     

缅甸蝰蛇毒纤溶酶FⅡaa的分离及生物活性

【目的】 从缅甸蝰蛇毒中分离纯化得到纤溶酶FⅡaa并研究其纤维蛋白溶解活性｡【方法】 缅甸蝰蛇蛇毒纤溶酶FⅡaa经过离子交换层析和凝胶层析分离程序得到,SDS-PAGE电泳测得其分子质量,用纤维蛋白平板法测得其纤维蛋白溶解活性,SDS-PAGE电泳测得其纤维蛋白原和纤维蛋白水解特异性｡通过小鼠背部皮下注射FⅡaa 测定FⅡaa的局部出血活性｡取昆明种小白鼠42只,体质量(20 ± 2)g,雌雄各半,随机分成7组,每组6只,皮下注射0.1 mL的FⅡaa(5个剂量组:用生理盐水配制成浓度分别为0.025､0.05､0.075､0.1､0.125 mg/mL),生理盐水和粗毒(0.1 mg/mL)做对照｡6 h后处死小白鼠,从皮内侧面测量出血点的大小,计算最小出血剂量(MHD)｡【结果】 通过三步分离方法得到蛇毒纤溶酶FⅡaa,其分子质量是69 000 u｡FⅡaa在纤维蛋白平板和加热纤维蛋白平板上均显示了纤维蛋白溶解活性｡纤维蛋白原和FⅡaa (0.2 g/L)保温后,Aα 和Bβ链分别在5 min和6 h后完全水解｡γ-链在24 h后部分水解｡FⅡaa水解纤维蛋白的过程与纤维蛋白原的水解过程相似｡蛇毒纤溶酶FⅡaa(0.025､0.05､0.075､0.1､0.125 mg/mL)的皮内出血点直径(mm)分别为7.7 ± 1.0､9.9 ± 1.4､10.5 ± 1.8､12.7 ± 1.4､13.5 ± 1.3｡最小出血剂量(MHD)为6.0 μg｡【结论】 FⅡaa是一种可以直接降解纤维蛋白且具有出血活性的α-纤维蛋白酶     

一种新的沙蚕纤溶酶的纯化、活性鉴定及部分分子特性

目的：从沙蚕Nereis virens的体腔液中纯化、鉴定出一种新的纤溶酶,并对其进行分子表征。方法：运用离子交换层析、凝胶过滤层析等常规色谱方法纯化蛋白酶,采用纤维蛋白板检测法鉴定纤溶活性及活性分布曲线,利用2D-电泳方法检测此纤溶酶的表观分子量和等电点,并检测多种蛋白酶抑制剂对其酶活性的影响,以确定此蛋白酶的类型。结果: 获取一种新的具有极强纤维蛋白水解活性的单链蛋白酶,其相对分子质量为29000,等电点为4.5,其蛋白水解活性在pH7.8和45℃时表现为最高,并能被二异丙基氟磷酸（DFP）和甲苯磺酚氟（PMSF）完全性抑制,确证其为一种典型的丝氨酸内肽酶。结论：Nereis virens的体腔液中存在一种纤溶活性极强的单链丝氨酸内肽酶,该纤溶酶对预防和治疗血栓性疾病具有一定的药用价值。     

中华眼镜蛇毒纤溶组份的纤溶活性及其机制研究

目的：研究中华眼镜蛇（NajaNajaatra）蛇毒中单一纤溶活性组份对人纤维蛋白和纤维蛋白原的降解作用及其机制。方法：使用剩余可凝纤维蛋白原测定法和酶联纤维蛋白原溶解试验研究该纤溶活性组份对人纤维蛋白原的降解作用；使用纤维蛋白平板法和酶联纤维蛋白溶解试验研究它对人纤维蛋白的降解作用；对它的纤溶机制研究使用的是纤维蛋白溶解酶原激活物活性测定法。结果：该活性组分对人纤维蛋白和纤维蛋白原有直接的降解作用。其活性大约是粗毒的10倍。该活性组份仅降解纤维蛋白原的Aa链，对它的印链和了链没有作用。该组分对人纤维蛋白溶解酶原没有激活作用。结论：从中华眼镜蛇毒中提取的单一纤溶活性组分是一种新的能够直接降解人纤维蛋白和纤维蛋白原的酶类。     

纤溶系统与血栓形成

1 纤溶系统的概念 体内纤溶活性降低是血栓形成的常见原因之一。所谓纤溶指纤维蛋白或纤维蛋白原被纤溶酶水解的过程。它可使止血过程形成的纤维蛋白凝块及时得以清除,这对维持血液流体性和保证血管及排泄管道通畅性,都具有重要意义。     

尖吻蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化及氨基酸序列测定

目的:从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化出高纯度的纤溶酶并对其进行初步性质研究和氨基酸序列分析。方法:采用DEAE-Sepharose FF离子交换和两次Superdex75PG凝胶过滤,从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出可直接溶解纤维蛋白原的蛋白酶。结果:分离到的纤溶酶相对分子质量为25kD,HPLC分析纯度在97%以上,氨基酸序列分析其N末端为MSTEF QRYME IVVNHS MVKKY NGDSD KIKAW。结论:采用此工艺可从尖吻蛇毒中分离出高比活的纤溶酶,为进一步研究其药理作用奠定了基础。     

江浙蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及性质研究

目的:江浙蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及部分生物化学和药理性质的研究.方法:应用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换柱和HiPrep Sephacryl S 100柱分离纯化纤溶酶,以高效液相色谱仪和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯度、相对分子质量,应用等电聚焦电泳测定等电点,然后测定氨基酸组分及部分药理性质.结果:分离得到相对分子质量为59 100,等电点为4.98, SDS-PAGE为一条带,高效液相色谱分析为单一峰的纤溶酶.该组分属于金属蛋白酶类.氨基酸组成分析表明它含较多的酸性氨基酸.高浓度的纤溶酶对肿瘤细胞CEN2有抑制作用,有微弱的出血毒性.结论:分离纯化得到了一种有微弱出血毒,具有较强抗凝活性的单一组分的酸性金属蛋白酶.     

纤溶酶与降纤酶治疗缺血性脑卒中对比分析

目的探讨不同蛇毒制剂治疗缺血性脑卒中的疗效、不良反应及其对血液纤维蛋白原等的影响。方法采用回顾性对比分析的方法，降纤酶为A组，纤溶酶为B组。结果两组疗效基本相同，但A组降低血液中纤维蛋白原特别显著，皮肤、消化道出血不良反应明显多于B组。结论在缺血性脑卒中药物治疗方面，降纤治疗仅次于溶栓治疗；降纤酶与纤溶酶二者疗效基本相同，但降纤酶降低血液中纤维蛋白原迅速、数值显著，甚至部分患者复查血凝／纤溶四项测不出结果，因而出血不良反应明显；纤溶酶可能是以降解已形成的纤维蛋白为主要作用，对血液循环中无形状的纤维蛋白原作用较弱。两种蛇毒制剂治疗缺血性脑卒中主要作用靶点的不同，决定了纤溶酶更加安全、可靠，患者易接受。     

纤溶酶在抗浆膜结核粘连中的临床应用

纤溶酶(plasmin)是一类能专一降解纤维蛋白凝胶的蛋白水解酶,是纤溶系统中的重要组份.纤溶酶有降解纤维蛋白和纤维蛋白原,水解多种凝血因子,使纤溶酶原转变为纤溶酶和水解补体等重要功能,现在已经成为临床常用的一种溶纤药物.     

血浆纤溶酶测定及其临床应用

纤溶酶原(Plasminogen,Plg)是纤溶系统的重要组成成份,在纤溶酶原激活剂作用下,转变为有活性的纤溶酶(Plasmin,Plm),除可水解纤维蛋白(原)外,还可水解凝血酶原、Ⅴ、Ⅷ、Ⅸ因子等。纤溶酶原对机体许多生理和病理过程起着重要作用,纤溶酶原测定对于肝脏疾病、血栓性疾病、感染性休克、DIC等疾病的基础与临床研究及溶栓疗法的监测等方面都有重要意义。     

纤溶酶原激活剂治疗急性脑梗死的疗效分析

目的:探讨静脉使用纤溶酶原激活剂溶栓后,纤溶系统及相关凝血因子的浓度变化。方法:选择被试者36例,采集静脉血,测量血浆中纤维蛋白原、纤维蛋白溶酶原、α2-抗纤溶酶、凝血因子Ⅷ、纤维蛋白降解产物和D-二聚体的浓度,并比较治疗前、治疗后2h以及治疗后24h的浓度差别。结果:纤维蛋白原、纤维蛋白溶酶原、α2-抗纤溶酶和凝血因子Ⅷ在溶栓处理后浓度降低,纤维蛋白降解产物和D-二聚体浓度升高。结论:对血浆中纤溶系统和凝血系统的相关指标变化的研究,有利于我们加深对rt-PA溶栓治疗的病理学理解。     

凝血和纤溶与缺血性心脏病的关系

纤维蛋白原为重要的凝血因子,越来越多的研究表明高纤维蛋白原水平导致高凝状态,诱发血管疾病造成缺血性损伤。纤溶酶原激活物抑制物1是血浆纤溶活性的主要决定因素。异常升高纤溶酶原激活物抑制物1阻碍纤维蛋白分解,从而增加血浆纤维蛋白原。高纤维蛋白原水平导致高凝状态促进血栓形成。纤溶酶原激活物抑制物参与多种代谢性疾病血栓前状态的形成,造成动脉血栓形成的危险性增加。纤溶酶原激活物抑制物1、纤维蛋白原不仅在冠心病的发病机制中发挥着重要作用,而且与冠心病患者的不良预后有关。     

转基因内皮细胞tpA纤溶活性的变化

利用基因重组技术，将tpAcDNA与逆转录病毒载体LNSX重组构成LNS－ipA，转染病毒包装细胞，形成的重组逆转录病毒颗粒再用来感染牛血管内皮细胞。经G418筛选后的单克隆细胞培液，分别经纤维蛋白板法和发包底物法测取活性。结果：经基因转染的PA317细胞和牛血管内皮细胞，在含人纤维蛋白原和凝血酶的纤维蛋白板上出现溶圈；随培养时间的延长，细胞数量增加，tpA分泌活性也增加。结论：含人tpAcDNA转录单位的牛血管内皮细胞，其纤溶活性明显增高。该研究为将来进行基因治疗奠定了基础。     

急性白血病血浆纤溶酶活性测定及临床意义

<正> 纤溶酶原是一种由肝脏合成的单链糖蛋白,经血液或组织中的纤溶酶原致活因子激活后,成为纤溶酶(PLasmin,PL)。PL具有溶解纤维蛋白、纤维蛋白原第Ⅴ、Ⅷ、ⅩⅢ因子和补体的作用,是纤溶系统中关键的酶。因此,检测血浆PL的含量是观察纤溶活性有价值的重要指标,对白血病出血原因分析及治疗均有一定意义。本文对29例伴出血的急性白血病(AL)住院病例进行检测,结果如下。     

川芎嗪对凝血—纤溶系统酶活性的影响

实验以川芎嗪对凝血－纤维蛋白溶解系统酶活性的影响来探讨其活血化瘀机理，结果表明，川芎嗪对凝血过程中的凝血酶和凝血酶的生成及活性有明显抑制作用，且抑制作用随浓度增加而加强，川芎嗪对纤溶酶原无直接激活作用，但对加速或增加尿激对纤溶酶原的激活作用或者增强纤溶酶对纤维蛋白的降解作用，因而川芎嗪对凝血－纤溶系统酶活性的影响是其活和因化瘀机制的重要因素。     

纤溶系统的检测及其临床应用

在生理状态下，血液在血管内不断流动循环，主要由于机体内存在着复杂的凝血系统和抗凝系统之故。广义而言，纤溶系统也是抗凝功能的重要部分C1纤维蛋白溶解（纤溶）系统1．1纤溶的生理功能生理状态下，在血管内处于流动状态的血液，由于少量凝血因子被激活，不断有纤维蛋白原转变为纤维蛋白，并集向血液的缘流，贴附于血管内壁形成薄层。与此同时，纤溶系统的各种因子亦在活动，将沉积在血管内壁的纤维蛋白溶解，这两个过程几乎是同时进行的。纤溶活动可清除血管和腺体排泌管道内形成和沉积的纤维蛋白，以防止血栓形成，保证管道通畅，并…     

组织型纤溶酶原激活物cDNA的克隆

组织型纤溶酶原激活物（t1SSUetypepl。Smlllogen。CtlV“－tor，tPA）是一种丝氨酸蛋白水解酶，在纤维蛋白存在的条件下，可使血浆纤溶酶原转变为纤溶酶，如果没有纤维蛋白的存在，它使纤溶酶原转变为纤溶酶的能力有限．当静脉给予药理剂量的tPA时，它与血栓处的纤维蛋白结合，同时把捕捉的纤溶酶原转变为纤溶酶，使纤维蛋白的溶解在血栓处发生，而并非全身性，这样可以减少全身性出血副作用，这也更是tPA优于尿激酶和链激酶之处．tPAlha床上主要用于治疗血栓性疾病，如急性心肌梗塞、肺栓塞、视网膜动脉栓塞等．而天然来源的tPA非…     

川芎嗪对凝血－纤溶系统酶活性的影响

实验以川芎嗪对凝血－纤维蛋白溶解系统酶活性的影响来探讨其活血化瘀机理．结果表明：川芎嗪对凝血过程中的凝血活酶和凝血酶的生成及活性有明显抑制作用，且抑制作用随浓度增加而加强；川芎嗪对纤溶酶原无直接激活作用，但能加速或增加尿激酶对纤溶酶原的激活作用或者增强纤溶酶对纤维蛋白的降解作用．因而川芎嗪对凝血－纤溶系统酶活性的影响是其活血化瘀机制的重要因素．     

嗜麦芽寡养单胞菌蛋白酶纤溶活性及其机制的研究

目的自双齿围沙蚕消化道内分离得到1株嗜麦芽寡养单胞菌,前期研究发现该菌株可大量胞外分泌一种具有纤溶活性的蛋白酶。文中旨在观察嗜麦芽寡养单胞菌蛋白酶(S.maltophiliaprotease,SMP)在体内外的纤维蛋白溶解活性,并探讨其纤溶机制。方法试管凝块法和纤维蛋白平板法体外观察SMP对纤维蛋白和纤维蛋白原的溶解作用,计算其比活性;建立SD大鼠动-静脉旁路血栓模型,分别给予不同剂量的SMP、等渗盐水和蚓激酶,观察各组血栓重量及表面情况,检测血浆优球蛋白溶解时间(euglobulin lysis time,ELT)、纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)、纤维蛋白降解产物(fibrin degradation prod-uct,FDP)和D-二聚体等指标,并比较血浆中组织型纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator,t-PA)和血浆纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor type-1,PAI-1)的变化。结果 SMP同时具有溶解纤维蛋白原和纤维蛋白的活性,且活性呈一定的量效关系;SMP不依赖纤溶酶原的激活而直接溶解纤维蛋白,并...