HSP70在大肠癌细胞的表达规律

第一军医大学细胞生物与医学遗传学教研室,广东　广州　５１０５１５　摘要目的　探讨大肠癌细胞（ＬｏＶｏ株）热休克蛋白７０（Ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ　ｐｒｏｔｅｉｎ　７０,ＨＳＰ７０）热应激时表达规律,为进一步研究ＨＳＰ７０在ＴＮＦ－α诱导大肠癌细胞凋亡中的作用提供了实验依据。方法培养大肠癌细胞 （ＬｏＶｏ）,热应激（４２℃, ３０ｍｉｎ）后分别培养２、 ５、 ８、１１ ｈ,然后运用免疫组化、Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ方法分析应激后不同时间细胞内ＨＳＰ７０的表达和分布。结果热应激２ｈ后ＨＳＰ７０合成量增加,与未应激组比有显著差异（Ｐ＜０．０５）,５～８ｈ后合成量最高（Ｐ＜０．０１）,１１ｈ后明显减少,与２ｈ染色情况基本相同。并观察到热应激细胞中胞核比胞质染色深,ＨＳＰ７０有核迁移现象。少量热应激死亡细胞的特异性染色更深。结论　热应激前ＨＳＰ７０在大肠癌细胞中合成较少,热应激后合成量增加,在 ５～８ ｈ达峰值后降低。     

未习服男子干热暴露时的热调节反应

１２名未习服健康男子，暴露于干热环境（Ｔｄ４２℃、Ｔｗ２３．５℃、Ｔｇ４６．５℃、ＲＨ１７％、ＷＢＧＴ３０℃、Ｖ０．１４～０．８０ｍ／ｓ）２．５ｈ，于受热１５和１２０ｍｉｎ时分别以功率１００Ｗ踏车５ｍｉｎ。结果呈现明显的热应激反应，Ｔｒ、Ｔｔ、Ｔｓ、Ｔｂ和ＨＲ增高非常显著（Ｐ＜０．０１）。Ｔｂ３７．１９℃，接近热负荷限度范围；最高Ｔｒ达到３８．８５℃，ＨＲ达１３６ｂ／ｍｉｎ，超过静止热负荷限度；ＳＶ仅０．２９３ｋｇ／ｈ，ＰＳＩ１．５，ＢＨＳＩ１２４ｋＪ／ｍ￣２，都低于耐受限度。但视反应时明显延长（Ｐ＜０．０５），握力降低３～５％。提示这样的干热应激对人体的热调节反应以及精神、体力和工作效率产生了一定的影响。     

蛋白激酶C在热休克基因表达中的作用

热休克（４２℃，２ｈ）或Ｈ２Ｏ２预处理，均能在蛋白翻译合成水平使牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）中的ＨＳＰ７０增多；在基因围录水平使ＢＰＡＥＣｓ中ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ含量增加。蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂－－Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＰ）能显著减少热休克和Ｈ２Ｏ２诱导的ＨＳＰ７０合成及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ转录的增加。提示ＰＫＣ在热休克和Ｈ２ＯＳ诱导的热休克基因表达的信息传递中具有重要作用。     

热应激对热休克蛋白70mRNA的诱导

用＾３２Ｐ标记的热休克蛋白７０（ｈｓｐ７０）ｃＤＮＡ为探针，检测了热应激时完整及人骨肉瘤细胞（ＨＯＳ－８６０３）的ｈｓｐ７０ ｍＲＮＡ。结果表明，大鼠体温在４２℃３０ｍｉｎ后，脑、肝、肺、脾中ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ的表达明显增加，以脑最为显著。ＨＯＳ－８６０３细胞经４２℃热处理３０ｍｉｎ，置３７℃培养２～４ｈ后，ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ的表达，且在整体动物上有组织特异性。     

蛋白激酶C在热休克基因表达中的作用

热休克（４２℃，２ｈ）或Ｈ＿２Ｏ＿２预处理，均能在蛋白翻译合成水平使牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）中ＨＳＰ７０增多；在基因转录水平使ＢＰＡＥＣｓ中ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ含量增加。蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂──Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＰ）能显著减少热休克和Ｈ＿２Ｏ＿２诱导的ＨＳＰ７０合成及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ转录的增加。提示ＰＫＣ在热休克和Ｈ＿２Ｏ＿２诱导的热休克基因表达的信息传递中具有重要作用。     

HSP70在大肠癌细胞的表达规律

目的 探讨大肠癌细胞（ＬｏＶｏ株）热休克蛋白７０（Ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ７０,ＨＳＰ７０）热应激时表达规律,为进一步研究ＨＳＰ７０在ＴＮＦ－α诱导大肠癌细胞凋亡中的作用提供了实验依据。方法 培养大肠癌细胞（ＬｏＶｏ）,热应激（４２℃,３０ｍｉｎ）后分别培养２、５、８、１１ｈ,然后运用免疫组化、Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ方法分析应激后不同时间细胞内ＨＳＰ７０的表达和分布。结果 热应激２ｈ后Ｈ     

恶性肿瘤颈部转移的热,放疗与单纯放疗效果对比

将６０例恶性肿瘤颈部转移患者随机分为热、放疗组（微波加温合并￣６０Ｃｏ放疗）和单纯放疗组，每组３０例。热、放疗组￣６０Ｃｏ照射剂量为Ｄ＿Ｔ６０～６５Ｇｙ，局部加温（肿瘤表面温度达４２～４３℃）每周２次，每次４０ｍｉｎ。单纯放疗组外照射总剂量Ｄ＿Ｔ５５～７５Ｇｙ，每周５次，每次２～２．５Ｇｙ，近期疗效显示，热、放疗组肿瘤全消率大于７０％，单纯性放疗组为３３．３％，二组差异显著（Ｐ＜０．０１）     

PA—MSHA,BCG分别联合S—180瘤苗对荷瘤小鼠治疗作用的比较

本文对比观察了ＰＡ—ＭＳＨＡ、ＢＣＧ分别联合Ｓ—１８０瘤苗对荷瘤Ｂａｌｂ／ｃ小鼠（接种１×１０７Ｓ—１８０活瘤细胞）的主动免疫治疗效果及对免疫细胞活性的影响。结果表明：ＰＡ—ＭＳＨＡ单独治疗、与瘤苗联合治疗及ＢＣＧ与瘤苗联合治疗均抑制局部移植瘤的生长（Ｐ＜０．０１），并可降低附近淋巴结转移率。免疫细胞活性测定表明：ＰＡ—ＭＳＨＡ联合瘤苗应用可显著增强小鼠腹腔ＭΦ细胞对Ｓ—１８０瘤细胞增殖的抑制作用（Ｐ＜０．０１），并提高脾细胞自然增殖能力（Ｐ＜０．０１）；ＢＣＧ联合瘤苗则增强ＭΦ的抑制作用（Ｐ＜０．０１），但未见提高脾细胞的自然增殖能力（Ｐ＞０．０５）。由此可见，ＰＡ—ＭＳＨＡ较ＢＣＧ更能有效地协同瘤苗，提高肿瘤的ＡＳＩ效应。     

丁硫氨酸亚砜胺逆转多重抗药细胞的抗性作用及其作用机理的研究

应用阿霉素诱导的人肺腺癌Ａ５４９多重抗药细胞Ａ５４９／Ｒ２，对丁硫氨酸亚砜胺（ＢＳＯ）逆转多重抗药细胞的抗性作用及其作用机理进行了初步探讨。研究发现：非细胞抑制剂量ＢＳＯ能使Ａ５４９／Ｒ２细胞的ＩＣ５０值显著下降（Ｐ＜０．０１）；大剂量ＢＳＯ能直接抑制癌细胞增殖，且对抗药细胞更有效；Ａ５４９／Ｒ２细胞内总体谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量和谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）活性均非常显著地高于其敏感细胞（Ａ５４９／Ｐ）水平（Ｐ＜０．０１）；ＢＳＯ能使Ａ５４９／Ｒ２细胞内总ＧＳＨ含量和ＧＳＴ活性非常显著地下降（Ｐ＜０．０１）。结果表明：ＢＳＯ能有效地逆转Ａ５４９／Ｒ２细胞的抗药性或对其直接产生细胞毒作用；ＢＳＯ阻断细胞内ＧＳＨ合成，降低抗药细胞内ＧＳＨ水平或干扰ＧＳＴ活性，是对抗药细胞产生抗药性逆转或发挥直接杀伤效应的重要原因。     

大鼠自发性高血压和心肌肥厚时热休克蛋白70基因表达的研究

本工作采用热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）核酸分子杂交方法，检测了自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）与其正常对照（ＷＫＹ）大鼠离体培养的主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）受热刺激后以及大鼠腹主动脉缩窄后心肌肥厚时左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的水平，并对ＳＨＲ和ＷＫＹ肝组织基因组ＤＮＡ进行了限制性酶切片断长度多态性（ＲＦＬＰ）分析。结果表明：ａ．３７℃培养的ＳＨＲＡＳＭＣ及整体ＳＨＲ肝组织ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的基础表达水平均低于ＷＫＹ大鼠，ＳＨＲＡＳＭＣ受热刺激（４２℃１５ｍｉｎ）后２ｈ，ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达增加的程度明显大于ＷＫＹ大鼠。ｂ．大鼠腹主动脉缩后造成左室压力超负荷，左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ在压力超负荷４ｈ时已明显升高，１ｄ、２ｄ、１ｗ均维持在高水平，１ｗ后逐渐降低。ｃ．ＳＨＲ和ＷＫＹ鼠肝组织基因组ＤＮＡ经ＢａｍＨＩ酶切后，ＳＨＲＨＳＰ７０基因缺失一条约５．６ｋｂ的片段。提示：ＳＨＲＡＳＭＣ对热敏感性增加；压力负荷增加早期，左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达明显增加；ＨＳＰ７０基因结构异常可能与高血压发生有关。     

异丙酚和咪唑安定对心内直视手术中心肌顿抑的影响

目的通过心肌酶学和过氧化物代谢的动态观察，比较异丙酚和咪唑安定静脉麻醉对心内直视手术中心肌顿抑的影响。方法将３０例先天性心脏病患者随机分为异丙酚（Ｐ）组、咪唑安定（Ｍ）组和对照（Ｃ）组，Ｐ组或Ｍ组麻醉诱导维持为异丙酚或咪唑安定、芬太尼；Ｃ组麻醉诱导和维持为安定和芬太尼，分别于术前、主动脉开放３０，６０ｍｉｎ和２４ｈ测定血清心肌酶学指标、丙二醛（ＭＤＡ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）。结果在主动脉开放３０ｍｉｎ时，Ｍ组肌酸激酶同功酶（ＣＫ－ＭＢ）和α－羟丁酸脱氢酶（ＨＢＤＨ）均明显低于Ｃ组（Ｐ＜０．０５）；Ｐ组和Ｍ组乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）在６０ｍｉｎ时均低于Ｃ组（Ｐ＜０．０５）；在２４ｈＰ组和Ｍ组ＬＤＨ、ＨＢＤＨ和ＣＫ－ＭＢ均低于Ｃ组；Ｍ组和Ｐ组ＳＯＤ分别于３０，６０ｍｉｎ明显高于Ｃ组（Ｐ＜０．０５），Ｐ组ＭＤＡ于３０ｍｉｎ和２４ｈ均降低（Ｐ＜０．０５）。结论异丙酚和咪唑安定麻醉可降低心内直视手术中心肌酶的释放，降低过氧化代谢，表明两者可对抗心肌顿抑。     

中药黄柏的光敏抗癌作用研究

以 Ｂ Ｇ Ｃ８２３ 人胃癌细胞为实验材料,研究黄柏在４８０ ｎ ｍ 和６５０ ｎｍ 光照下对癌细胞的光敏作用。结果：黄柏加药照光组对癌细胞生长、癌细胞噻唑蓝代谢活力均有光敏抑制效应。同时,黄柏实验组癌细胞酸性磷酸酶含量明显减少（ Ｐ＜ ０ ．０１） ,癌细胞３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 掺入量显著降低（ Ｐ＜ ０ ．０１） ,１００ ｍ Ｌ／ Ｌ 黄柏对染色体并无光敏致粘连畸变作用,但能延缓 Ｓ 期细胞周期过程（ Ｐ＜ ０ ．０１） 。透射电镜发现：１０ ｍ Ｌ／ Ｌ 和１００ ｍ Ｌ／ Ｌ 黄柏使实验组细胞线粒体、内质网广泛肿胀、扩张,细胞核糖体明显减少。提示黄柏对 Ｂ Ｇ Ｃ８２３ 人胃癌细胞的确具有光敏抑制效应。     

谷胱甘肽对高糖时人内皮细胞分泌前列环素和内皮素-1的影响

了解谷胱甘肽（ＧＳＨ）对高糖时人内皮细胞分泌前列环素（ＰＧＩ２）和内皮素－１（ＥＴ－１）的影响。方法： 原代培养人脐静脉内皮细胞,分别加入正常对照组,高糖组,正常＋ＧＳＨ组,高糖＋ＧＳＨ组培养基,放免法测定培养 ２４ｈ,４８ｈ,７２ｈ时培养基中的ＰＧＩ２和ＥＴ－１含量。结果：①高糖组较正常对照组ＰＧＩ２显著下降（Ｐ＜０．０１）,ＥＴ－１显 著升高（Ｐ＜０．０１）;②高糖＋ＧＳＨ组较高糖组ＰＧＩ２升高（Ｐ＜０．０１）,ＥＴ－１显著下降（Ｐ＜０．０１）。结论：ＧＳＨ在调节高 糖时人血管内皮细胞分泌 ＰＧＩ２／ＥＴ－１的平衡方面起一定作用。     

人参二醇皂甙对沙土鼠急性脑缺血再灌注损伤的保护作用

用结扎蒙古沙土鼠双侧颈总动脉制成的急性脑缺血－再灌注损伤模型研究人参二醇皂甙（ＰＤＳ）对损伤的保护作用。实验观察了脑缺血４０ｍｉｎ再灌注１ｈ后脑内的丙二醛（ＭＤＡ）含量、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性及脑水含量的变化。结果发现ＰＤＳ２００ｍｇ／ｋｇ缺血前３０ｍｉｎｉｐ能明显保护脑组织ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ及ＬＤＨ活性（Ｐ）值分别为Ｐ＜０．００１，Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１），抑制ＭＤＡ生成（Ｐ＜０．００１），减轻脑水肿（Ｐ＜０．０５）。结果表明ＰＤＳ对急性脑缺血－再灌注损伤具有保护作用，其作用机理可能与抑制自由基及脂质过氧化作用有关。     

谷胱甘肽及其构成氨基酸在犬经口、静注给药的药代动力学

目的　主要研究谷胱甘肽（ＧＳＨ）口服后的吸收情况。方法　Ｂｅａｇｌｅ犬５只，先后分别经口、静注给予ＧＳＨ及其构成氨基酸后，用ＨＰＬＣ法测定血中浓度。结果　在清醒犬，单剂量（３．８９、１．６２ｍｍｏｌ／ｋｇ）一次或单剂量（０．４９ｍｍｏｌ／ｋｇ）连续５、１０ｄ经口给ＧＳＨ后，犬前肢静脉血浆中ＧＳＨ、甘氨酸明显升高（Ｐ＜０．０５～０．０１）；如上单次给予１．６２ｍｍｏｌ／ｋｇ（等于ＧＳＨ分子中含有的摩尔数）构成氨基酸后，血浆中的ＧＳＨ水平未见变化，但构成氨基酸均显著增加（Ｐ＜０．０１）；在麻醉犬，经口给ＧＳＨ１．６２ｍｍｏｌ／ｋｇ后，１～６ｈ内肠系膜静脉血浆ＧＳＨ水平高于前肢静脉（Ｐ＜０．０５～０．０１）；清醒犬ｉｖＧＳＨ０．０６５ｍｍｏｌ／ｋｇ后静脉血浆中ＧＳＨ的Ｋｅｌ１和Ｔ１／２α分别为８．０４ｈ－１和０．０９ｈ，且在降至基值后又出现一个再分布的小峰。结论　ＧＳＨ经口给药后部分可以整分子吸收，经肝脏后血浆中ＧＳＨ浓度明显下降，可能是由于肝脏的摄取所致。     

羟乙基淀粉及动脉灌注法结合持续低流量灌注对兔心肺联合保存的作用

目的研究胶体物质羟乙基淀粉（ＨＥＳ）及低流量灌注技术（ＬＦＰ）对兔心肺联合保存的作用。方法选用健康家兔５０只，２只用于正常心肺组织的超微结构观察，４８只随机均分为晶体液（ＣＳ）组、ＨＥＳ组及ＬＦＰ组，每组８对供、受体。用Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ液及改良Ｅｕｒｏ－Ｃｏｌｌｉｎｓ液灌注ＣＳ组心、肺，含５％ＨＥＳ的Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ液及改良Ｅｕｒｏ－Ｃｏｌｌｉｎｓ液灌注ＨＥＳ组及ＬＦＰ组心、肺，取心与左肺整体４℃保存７ｈ，保存期间ＬＦＰ组经主、肺动脉持续低流量（０．２５ｍｌ／ｇ心肺重量／ｈ）灌注４℃相应保存液。移植后每３０ｍｉｎ测定供体心左室收缩压（ＬＶｓｐ）、左室舒张末压（ＬＶｅｄｐ）、右房压（ＲＡＰ）及供体肺气道峰压（Ｐａｗ），取动脉血测氧分压（ＰａＯ２），实验结束时记录异丙肾上腺素用量，计算心肺重量增值，测定心肺组织丙二醛（ＭＤＡ）含量，取心肺组织观察超微结构。结果ＣＳ组心肺重量增值高于ＨＥＳ组（Ｐ＜０．０１），ＨＥＳ组与ＬＦＰ组无明显差异。ＣＳ组ＬＶｓｐ均低于ＨＥＳ组（Ｐ＜０．０５或＜０．０１），３０，６０ｍｉｎ时ＬＦＰ组高于ＨＥＳ组（Ｐ＜０．０５）。ＣＳ组ＬＶｅｄｐ均高于ＨＥＳ组（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）     

老年人硬膜外麻醉528例临床观察

本文观察５２８例老年人硬膜外麻醉手术中ＢＰ变化，结果ＢＰ下降率在各年龄组中，８０岁￣组比６０岁￣组及７０岁￣低（Ｐ分别〈０．０１，０．０５）；在不同穿刺部位中，Ｔ８￣Ｔ１２组比其他组均高（Ｐ〈０．０１），麻醉６０ｍｉｎ时Ｓ组比Ｔ４￣Ｔ７组及Ｔ８￣Ｔ１２组低（Ｐ分别〈０．０５，０．０１）；在不同时间里，Ｔ８￣Ｔ１２组麻醉６０ｍｉｎ比３０ｍｉｎ高（Ｐ〈０．０１）。其余差别比较无显著意义（Ｐ〉０．０５）     

普鲁卡因静脉复合与静吸互补麻醉的血流动力学改变

择期２４例ＡＳＡⅠ～Ⅱ级胸内手术患者，随机分为两组（静脉组１３例，静吸组１１例），于麻醉后５ｍｉｎ、１５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ测定ＰＲ、ＳＶ、ＣＯ、ＳＩ、ＣＩ、ＶＰＥ、ＭＡＰ、ＴＰＲ分析比较。结果表明：静脉组ＰＲ前３０ｍｉｎ稳定，６０ｍｉｎ增快（Ｐ＜０．０１），ＭＡＰ下降４％（ｐ＞０．０５），ＳＶ、ＣＯ、ＳＩ、ＣＩ、ＶＰＥ进行性下降（ｐ＜０．０１）；静吸组ＰＲ前３０ｍｉｎ增快７％（Ｐ＞０．０５），６０ｍｉｎ时正常，ＭＡＰ稳定，其他指标前３０ｍｉｎ呈下降趋势（Ｐ＜０．０５），６０ｍｉｎ恢复正常。两组ＴＰＲ增高幅度近似（６７．２％～７０．１％）。     

热应激蛋白的诱导,定位与再分布研究

用放射自显影和免疫印迹方法探讨了热应激蛋白（ＨＳＰ）在多种细胞株中的诱导、定位和分布。结果发现，与正常情况相比，各种细胞在热休克后均可诱导合成大量ＨＳＰ８２．３、ＨＳＰ６９．５和ＨＳＰ２６．８，其合成高峰为受热后４－６ｈ。在正常情况下，ＨＳＰ６９．５和ＨＳＰ２６．８主要位于胞浆，在热休克后（４３－４５℃）迅速向核内迁称，在恢复期，它们又回到胞浆。     

热应激蛋白的诱导、定位与再分布研究

用放射自显影和免疫印迹方法探讨了热应激蛋白（ＨＳＰ）在多种细胞株中的诱导、定位和分布。结果发现，与正常情况相比，各种细胞在热休克后均可诱导合成大量ＨＳＰ８２．３、ＨＳＰ６９．５和ＨＳＰ２６．８，其合成高峰为受热后４～６ｈ。在正常情况下，ＨＳＰ６９．５和ＨＳＰ２６．８主要位于胞浆，在热休克后（４３～４５℃）迅速向核内迁移，在恢复期，它们又回到胞浆。