HL-60细胞端粒酶活性的调控因素

目的 探讨HL－60细胞端粒酶活性的调控因素。方法 用脂质体介导法将LXSN－wt-p53逆转录病毒质粒导入人髓性白血病细胞系HL-60中,用c-myc,bcl-2基因反义脱氧寡核苷酸作用HL－60细胞,用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL－60细胞分化后,采用TRAP－ELISA－PAGE法测定端粒酶活性,观察野生型p53基因、c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）对HL－60细胞端粒酶活性的影响。结果 野生型p53基因不影响HL－60细胞的端粒酶活性;bcl-2及c-myc反义寡核苷酸可下调HL－60细胞的端粒酶活性;ATRA在诱导HL－60细胞分化的同时,可使HL－60细胞的端粒酶活性降低。结论 HL－60细胞端粒酶活性受到c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）的调节。     

二甲基亚砜对HL-60细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

探讨二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）对ＨＬ－６０细胞端粒酶活性和细胞周期的影响。采用ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ方法检测二甲基亚砜处理前后的ＨＬ－６０细胞端粒酶活性的改变,以流式细胞仪分析细胞周期的改变。二甲基亚砜作用于ＨＬ－６０细胞后,其端粒酶活性明显受到抑制,且细胞周期明显改变,Ｓ期细胞数显著减少。二甲基亚砜可抑制ＨＬ－６０细胞的端粒酶活性,阻止细胞周期的进程。     

二甲基亚砜对HL—60细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

探讨二甲基亚砚（ＤＭＳＯ）对ＨＬ－６０细胞端粒酶活性和细胞周期的影响。采用ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ方法检测二甲基亚砜处理前后的ＨＬ－６０细胞粒酶活性的改变,以流式细胞分析细胞周期的改变。二甲基亚砚作用于ＨＬ－６０细胞后,其端粒酶活性明显受到抑制,且细胞周期明显改变,Ｓ期细胞数显著减少。二甲在亚砜可抑制ＨＬ－６０细胞的端粒酶活性,防止细胞周期的进程。     

抗分化HL－60／RA和分化敏感HL－60细胞对阿糖胞苷、三尖杉酯碱等抗肿瘤药物细胞毒作用的敏感性比较

抗分化ＨＬ－６０／ＲＡ和分化敏感ＨＬ－６０细胞对阿糖胞苷、三尖杉酯碱等抗肿瘤药物细胞毒作用的敏感性比较李林，夏丽娟，韩锐（中国医学科学院，中国协和医科大学药物研究所，北京１０００５０）急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的全反式维甲酸（ａｌｌ－ｔｒａｎｓｒ...     

维甲类化合物Ro13—7410对白血病细胞端粒酶活性的抑制

为深入探讨第三代维甲类化合物Ｒｏ１３－７４１０诱导白血病细胞凋亡和分化的机制。本文采用ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ－ＰＡＧＥ两种方法观察了ｏ１３－７４１０对ＨＬ－６０细胞端粒酶活性的影响。实验结果显示在Ｒｏ１３－７４１０诱导ＨＬ－６０细胞亡和分化的过程中端粒酶活性逐渐下降，结论：Ｒｏ１３－７４１０能明显抑制ＨＬ－６０细胞端粒酶活性，且可能与白血病细胞的增殖抑制和诱导凋亡及分化作用有关。     

HL—60细胞内一种新的全反式维甲酸应答基因的克隆

利用差示ＰＣＲ技术从ＨＬ－６０细胞内克隆出一个新的,差异表达的ｃＤＮＡ片段,并并其命名为Ｗ－１基因,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交证实,用全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）诱导ＨＬ－６０细胞分化时,Ｗ－１基因的转录水平在诱导早期增加而在诱导２４ｈ后关闭,推测Ｗ－１基因可能在ＨＬ－６０细胞早期分化中有一定作用。     

诱导分化治疗中端粒酶活性的改变及其意义

目的 研究诱导分化治疗中端粒酶活性的变化规律。方法 对白血病细胞株、正常骨髓和急性白血病的骨髓单个核细胞的端粒酶活性进行了检测,观察了全反式维甲酸（ATRA）在体外和体内分化诱导过程中端粒酶活性的改变。结果 发现端粒酶表达下降是诱导分化的早期效应之一。诱导分化治疗可使急性白血病M3早幼粒细胞端粒酶活性水平降至正常。结论 在体内和体外实验中,ATRA诱导分化过程中伴随着端粒酶活性下调。     

诱导分化治疗中端粒酶活性的改变及其意义

目的研究诱导分化治疗中端粒酶活性的变化规律。方法对白血病细胞株、正常骨髓和急性白血病的骨髓单个核细胞的端粒酶活性进行了检测,观察了全反式维甲酸(ATRA)在体外和体内分化诱导过程中端粒酶活性的改变。结果发现端粒酶表达下调是诱导分化的早期效应之一。诱导分化治疗可使急性白血病M3早幼粒细胞端粒酶活性水平降至正常。结论在体内和体外实验中,ATRA诱导分化过程中伴随着端粒酶活性下调。     

维甲酸和人参皂甙对肝癌细胞端粒酶活性的影响

目的 了解维甲酸和人参皂甙对肝癌细胞端粒酶活性的作用。方法 在培养的肝癌细胞中加入维甲酸和人参皂甙，利用TRAP－ELISA方法对不同时期肝癌细胞进行了端粒酶活性测定。结果 在加入维甲酸末期肝癌细胞端粒酶活性明显降低，而人参皂甙的作用没有维甲酸明显。结论 维甲酸对肝癌细胞的抑制作用可能是通过抑制端粒酶活性途径实现的。     

维甲酸诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的：观察维甲酸（ＲＡ）在体外诱导ＨＬ６０细胞（人早幼粒细胞白血病细胞株）凋亡的作用,探讨维甲酸治疗早幼粒细胞白血病的作用机制。方法：用ＤＮＡ电泳、ＤＮＡ片段定量测定技术、流式细胞术分析及光镜和电镜观察凋亡细胞。结果：在体外培养中加维甲酸５０ｍｇ／Ｌ孵育４ｈ,ＤＮＡ片段率达５５７％±１２１％,而对照为１２５％±４９％（Ｐ＜０００１,ｎ＝９）;流式细胞术检测发现,在５０ｍｇ／Ｌ维甲酸作用下,细胞凋亡达５０％,对照为９％。电镜观察维甲酸组ＨＬ６０细胞出现典型的凋亡细胞形态改变。维甲酸诱导ＨＬ６０细胞凋亡具有剂量及时间依赖性,维甲酸作用６ｈ,出现凋亡高峰;随维甲酸浓度升高,诱导凋亡作用明显增强。在环孢素Ａ（ＣｓＡ）存在时,低浓度的维甲酸也有明显诱导ＨＬ６０细胞凋亡作用。结论：维甲酸在体外能诱导ＨＬ６０细胞凋亡,ＣｓＡ能增强维甲酸诱导ＨＬ６０细胞凋亡活性。研究提示诱导白血病细胞凋亡是维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病的重要机制之一。     

端粒酶反义RNA对人髓性白血病细胞系HL-60的作用

目的 探讨抗端粒酶在急性白血病治疗中的意义。方法 用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体）导入人髓性白血病细胞系HL-60中,采用TRAP法测定端粒酶活性,细胞生长动力学检测,电镜,DNA片段分析等方法观察其对HL-60细胞的端粒酶活性、细胞增殖及细胞凋亡影响。结果 端粒酶反义RNA能显抑制HL-60细胞的端粒酶活性,抑制HL-60细胞的增殖并促进其凋亡。结论 以端粒酶反义RNA抑制端粒酶活性是治疗白血病的潜在途径。     

三氧化二砷或ATRA对原代APL细胞或HL-60细胞作用研究

目的：探讨三氧化二砷（吡霜）或ATRA对原代APL细胞或HL－60细胞影响,同时分析三氧化二砷与ATRA之间的交叉耐药性。方法:MTT测定HL－60细胞或APL细胞的增殖性。流式细胞仪检测两类细胞的凋亡性,NBT法用于测定HL－60细胞或原代APL细胞的分化性。结果：三氧化二砷与ATRA均能明显抑制APL细胞或HL－60细胞的体外增殖,它们作用机制分别为诱导明显的凋亡或分化。体外三氧化二砷对ATRA耐药HL－60细胞具有明显的抑制增殖作用,并诱导其凋亡发生。结论：三氧化二砷与ATRA无交叉耐药性。研究结果表明,ATRA诱导的高白细胞征并非归因于分化大于凋亡。     

高三尖杉酯碱诱导HL60细胞端粒酶活性的变化

目的研究高三尖杉酯碱(Homohrringtonine,HHT)对HL60细胞端粒酶活性的影响.方法不同浓度HHT作用于HL60细胞12 h及0.02 mg/L HHT作用HL60细胞不同时间后,采用TRAP-PCR-ELISA检测HL60细胞端粒酶活性.结果HHT浓度增加至0.04 mg/L和0.05 mg/L时,HL60细胞端粒酶活性与0 mg/L组相比明显下降(P均＜0.05).0.02 mg/L HHT作用HL60细胞18 h、24 h、30 h后,HL60细胞端粒酶活性明显低于0 h组(P均＜0.05),且低于空白对照(P均＜0.05).结论HHT是一种有效的端粒酶活性抑制剂,其对端粒酶活性的抑制呈时间和浓度依赖性.     

全反式维甲酸诱导HL60细胞分化前后蛋白表达差异分析

目的:建立全反式维甲酸(All trans-retinoic acid,ATRA)诱导HL60细胞向粒系分化的模型,研究采用改良双向电泳条件对分化前后的细胞全蛋白进行分离分析,寻找差异表达蛋白.方法:采用全反式维甲酸对HL60细胞进行诱导分化.通过MTT、流式细胞技术分析细胞增殖情况和CD11b细胞表面分化抗原的表达,选择最适的药物浓度和诱导时间;再通过细胞化学染色对分化结果进行验证,构建分化模型.采用改良双向电泳分离技术对细胞全蛋白进行分离,运用PDQuest软件分析HL60细胞分化前后蛋白表达差异,并用基质辅助激光解吸-飞行时间质谱(MALDI-TOF)对差异蛋白点进行分析.结果:ATRA明显抑制HL60细胞增殖,并随药物浓度的增加,抑制效果也越显著;2 μmol/L的ATRA连续作用HL60细胞5 d即有90%以上的细胞有粒系分化标志抗原CD11b的表达.细胞化学染色结果亦表明诱导后的HL60细胞向粒系分化.将分化前后的HL60细胞全蛋白经过改良双向电泳技术分离,PDQuest软件比对,MAIDI-TOF分析,发现有25个蛋白点仅在未分化凝胶谱中找到,有15个蛋白点仅在分化细胞蛋白表达谱中找到.其中有的是癌基因表达蛋白,有的是抑癌基因表达蛋白,还有的则参与凋亡过程等.结论:在选定的药物浓度和作用时间下,ATRA可以诱导HL60细胞向粒系分化.改良双向电泳技术对药物作用前后细胞蛋白的分离,可发现不同于传统双向电泳分离所得的蛋白结果.     

ATRA诱导HPV16型亚基因永生化人宫颈上皮细胞分化的实验研究

目的:研究ATRA对HPV16型亚基因(E6、E7)永生化人宫颈上皮细胞(H8细胞)的诱导分化作用及机制.方法:H8细胞经ATRA处理后,用MTT法测定ATRA的抗增殖效应,光镜、电镜观察细胞形态变化,流式细胞术(FCM)检测细胞周期,免疫组化SABC法检测增殖细胞核抗原Ki67表达水平的变化,PCR-ELISA法检测端粒酶活性变化,荧光免疫细胞化学检测HPV和E6蛋白表达变化.结果:ATRA使H8细胞增殖抑制;细胞形态朝良性方向分化;细胞堆积于G1期,S期细胞减少;细胞核内Ki67的表达水平下降;端粒酶活性下降.结论:ATRA对H8细胞有明显诱导分化作用,这种作用可能是通过抑制增殖,阻滞细胞周期,降低端粒酶活性来实现的.     

反义hTERT体外抑制白血病细胞增殖的研究

目的研究反义hTERT基因对白血病细胞体外增殖的抑制作用。方法体外通过SuperFect将已构建好的正、反义hTERT真核表达载体转染HL60白血病细胞,再经过G418及PCR筛选鉴定分别转入了正、反义hTERT载体的抗性克隆细胞HL60-s和HL60-as。随后运用实时荧光定量RT-PCR技术及TRAP-银染法对各组细胞内源性hTERT mRNA的表达情况及端粒酶的活性进行检测。同时还采用MTT法、双层软琼脂克隆形成试验、流式细胞术观察和分析反义hTERT对白血病细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡。结果与空白对照、正义hTERT组相比,反义hTERT能显著地降低HL60细胞内源性hTERT mRNA的表达(P<0.01)和下调端粒酶活性。当各组细胞传至第25代后,与HL60、HL60-s比较,HL60-as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低,同时伴有凋亡率的显著增加。结论反义hTERT在体外能抑制白血病细胞的生长增殖能力,其潜在、广谱的抗肿瘤作用的分子生物学机制可能是首先通过抑制和下调hTERT表达(端粒酶活性)而最终引发瘤细胞衰亡的途径来实现的。     

Experimental study on induction of apoptosis of leukemic cells by Boswellia carterii Birdw extractive]

The purpose of the study was to investigate the apoptosis of leukemic cells induced by Boswellia Carterii Birdw(BCB). The target leukemia cell line HL60 and bone marrow leukemic cells from 30 acute non-lymphocytic leukemic(ANLL) patients (3 M1 11 M2a 10 M3 1 M4a 5 M5b) were studied. Apoptosis was detected by morphological observation, DNA electrophoresis, percentage of DNA fragmentation test and flow cytometric cell cycle analysis. It is concluded that BCB can induce apoptosis in ANLL cells and HL60 cells.