豚鼠骨髓滋养层对CFU-F的影响及其最佳作用时间的研究

本文研究了受60Gy照射的豚鼠骨髓细胞作滋养层对正常小鼠骨髓细胞造血基质祖细胞(CFU-F)体外培养成集落的影响,优选了滋养层与骨髓细胞的最佳作用时间。种植骨髓细胞当天或次日添加滋养层细胞后继续培养7～10天则CFU-F数最多;种植骨髓细胞当天加滋养层而次日通过换液去掉未贴壁细胞则CFU-F数最低;骨髓细胞培养4天后再加滋养细胞则不起成集落刺激作用;不论在集落数及集落所含细胞数上,加滋养层者都比不加者为多。     

全反式维甲酸对骨髓纤维细胞集落形成的影响

本文主要通过纤维细胞集落的培养,观察了急性早幼粒细胞性白血病的骨髓纤维细胞集落,结果急性早幼粒细胞白血病的骨髓纤维细胞集落形成单位(CFU-F)较正常者明显低下4.3±4.9/2×~510细胞(n=9);完全缓解后,则上升为12.4±5.7/2×10~5(n=5)正常水平。体外试验结果显示维甲酸对 CFU-F 具有抑制作用。加入维甲酸之后,CFU-F 则降为3.11±3.5/2×10~5细胞,P<0.05。维甲酸诱导急性早幼粒细胞性白血病,外周血白细胞总数先出现高峰,然后进入低谷,后者可能与白血病细胞浸润有关外,还可能与骨髓纤维细胞被抑制有关.     

人骨髓成纤维细胞集落形成培养方法的研究

本文主要报告了体外人骨髓成纤维细胞集落形成(CFU-F)的液体培养方法,从试剂制备,培养条件的选择及细胞生长和形态特点等几方面进行了研究。认为把含有5×10~6细胞、30％胎牛血清、10~(-6)M氢化可地松和RPMI 1640培养液的培养物置于37℃,5％CO_2,饱和湿度条件下培养至第9天观察结果最佳。这一培养方法简便易于推广,且体外CFU-F培养对于研究造血血液系统疾病的发病与转归有重要意义。     

粒细胞集落刺激因子对小鼠骨髓间充质干细胞的作用

目的:研究不同剂量下重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对小鼠骨髓间充质干细胞的动员作用。方法:32只小鼠随机分成4组,分别给予0,20,40,80μg/kg rhG-CSF皮下注射,每日1次,连续5 d,最后一次注射后6 h分别取骨髓和外周血,以1×106分别接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基的12孔板中培养10 d,计数成纤维样集落(CFU-F)的个数,对形成的CFU-F消化后收集细胞,流式细胞术检测表面抗原表达并进行成脂、成骨诱导。结果:骨髓所形成的CFU-F与rhG-CSF剂量成正比,外周血也有类似骨髓的成纤维样集落,但出现的频率极低。骨髓CFU-F流式检测呈CD34-、CD133-、CD90+、CD105+,具有成脂、成骨分化的能力。结论:rhG-CSF可促进骨髓间充质干细胞增殖,且随rhG-CSF剂量增大,促增殖作用越强。rhG-CSF也有动员小鼠间充质干细胞的能力,但作用较弱。     

人参蜂王浆对正常和照射豚鼠造血免疫器官CFU-F影响的实验研究

骨髓及脾细胞体外培养中加不同浓度人参蜂王浆后培养8～12天,计数基质祖细胞集落(CFU-F)数。发现实验组形成的CFU-F小型集落明显高于对照组。培养1Gy照射的骨髓细胞,加入3.10~(-1)～3.10~(-3)g/ml人参蜂王浆后,细胞呈融合生长,认为人参蜂王浆对骨髓和脾细胞体外培养形成的小型CFU-F有成集落刺激作用,而对大型集落则相反。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者基质研究初探

目的研究与造血密切相关的基质在阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者中是否存在异常.方法对7例患者骨髓进行成纤维细胞集落(CFU-F)的培养,观察其形态及数量是否存在异常;将分选后的CD34+正常造血干/祖细胞分别加入含有相同数量的患者及正常对照基质的培养基中,观察其扩增及形成集落的情况;用半定量RT-PCR的方法,以自身β-肌动蛋白作为内参对照,检测患者肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素6(IL-6)表达量与正常人是否不同.结果 (1)PNH患者骨髓CFU-F数量(13.0个±1.8个)类似正常人(10.7个±3.7个,P>0.05).(2)PNH患者的骨髓基质细胞对正常人造血干/祖细胞支持能力与正常人相仿.液体培养细胞数为(4.21±1.05)个×104 vs(4.76±1.04)个×104;半固体培养粒细胞集落10.80个±5.40个 vs 1.50个±0.23个;红细胞集落形成单位4.50个±3.51个 vs 0.83个±0.12个,P>0.05).(3)PNH患者骨髓基质细胞的TNF-α(以细胞因子与自身β-肌动蛋白电泳条带强度的比值表示0.55±0.12)和IL-6(0.62±0.13) mRNA表达量与正常人(0.48±0.08、0.68±0.10)相似(P>0.05).结论患者的骨髓成纤维细胞集落形成能力是正常的.患者基质细胞对正常人造血干/祖细胞的支持能力及其TNF-α、IL-6的mRNA表达基本正常.     

醋酸铅对小鼠骨髓间充质干细胞生长的影响

目的：探讨醋酸铅对小鼠骨髓间充质干细胞生长的影响。方法: 体外培养法培养小鼠骨髓间充质干细胞，加入40、60和100 μmol•L^-1醋酸铅，观察其对间充质干细胞成集落(CFU-F)能力的影响及其变化规律。结果：醋酸铅浓度40、60和100 μmol•L^-1时的成集落率分别为(3.30±0.20)、(2.40±0.10)和(1.57±0.21)/10⁵， 与对照组成集落率［（4.20±0.20）/105)］比较差异有显著性(P<0.05)；醋酸铅各浓度组间比较，CFU-F集落率差异有显著性(P<0.05)，剂量-效应关系分析醋酸铅浓度与CFU-F集落率呈负相关关系（r=-0.960，P<0.01)。体外培养6 d时，对照组集落中细胞多呈现梭形，加铅组细胞多呈不规则形状或圆形。结论:醋酸铅可明显抑制体外培养的骨髓间充质干细胞的成集落率生长并随剂量的增大抑制作用明显增强。     

CD8+细胞强化骨髓细胞输注免疫调节效应及机制

目的观察不同脾细胞亚群强化骨髓细胞输注调节特异性免疫状态的效应,并探讨其可能机制。方法C57BL/6小鼠分别输注BACB/C小鼠5×106骨髓细胞、5×106骨髓细胞+5×106脾细胞、5×106骨髓细胞+5×106CD4+细胞和5×106骨髓细胞+5×106CD8+细胞,3月后观察特异性免疫状态和淋巴细胞分化状况。结果CD8+细胞联合输注的受体淋巴细胞反应较弱,IL-2和IFN-γ低表达,IL-4高表达。结论CD8+细胞输注强化了骨髓细胞输注调节特异性免疫状态的效应,包括免疫偏移在内的机制参与了这一过程。     

松茸多糖对X射线照射小鼠造血功能的保护作用

目的：探讨松茸多糖(PTM)对辐射损伤小鼠造血功能的保护作用。方法：将50只ICR小鼠随机分成5组,每组10只。正常对照组(NC)和辐射对照组(IC)给予生理盐水灌胃,3个剂量PTM组分别给予400、800和1 200 mg•kg^-1剂量PTM灌胃,每天1次,连续7 d。第8天给予IC组和PTM组动物进行全身一次性照射,总剂量2.0 Gy,检测小鼠造血干细胞集落形成单位（CFU-S）数 、骨髓基质细胞-成纤维祖细胞集落形成单位（CFU-F）数、骨髓细胞周期和骨髓微核率。结果：与IC组比较,预防给予PTM各组小鼠CFU-S数量明显减少( P<0.05或 P<0.01)、骨髓CFU-F数显著升高( P<0.05或 P<0.01),中、高剂量PTM组PCE微核的数量明显降低(P<0.05或 P<0.01),G₁期细胞数明显减少( P<0.05或 P<0.01),S期细胞数明显增加( P<0.05或 P<0.01)。结论：松茸多糖对辐射所致的造血损伤有明显的保护作用。     

体内摄入裂变产物~(134)Cs诱发放射遗传毒理效应研究

本研究结果揭示,当小鼠注入不同活度的~(134)Cs 后,9.25×10Bq/g 组的骨髓细胞染色体畸变率,显著高于对照组;9.25×10~2Bq/g 组的骨髓多染红细胞微核率,非常显著高于对照组,畸形精子显著高于对照组;而精原细胞需放射性活度为2.3125×10~5Bq/g 时,染色体畸变率显著高于对照组。~(184)Cs 对骨髓细胞和精原细胞染色体的损伤,都以单体型畸变为主。骨髓细胞染色体畸变,多染红细胞微核、畸形精子与剂量之间均为幂函数关系。     

黄芪对辐照小鼠粒-单系造血祖细胞的影响

目的 :探讨黄芪对造血功能的影响及作用机制。方法 :采用造血祖细胞体外培养和体内扩散盒植入技术 ,观察黄芪对辐照小鼠粒 单系造血祖细胞 (CFU GM)的影响。结果 :体内培养证明 ,辐照前、后用药组CFU GM分别为 (2 7 14± 5 88)个 / (4× 10 5BMC)和 (2 6 38± 4 90 )个 / (4× 10 5BMC) ,均较辐照对照组 (16 5 8± 3 37)个 / (4×10 5BMC)明显增高 (P <0 0 1) ,而体外培养未显示刺激活性。结论 :黄芪可刺激体内造血干细胞的增殖与分化 ,对辐照小鼠的骨髓具有保护作用。     

急性粒细胞白血病细胞体外软琼脂培养的集落形成及其组成细胞的形态观察

本文应用体外软琼脂培养技术,以PHA-LCM条件培养液作为白血病细胞集落形成刺激因素,对10例急性粒细胞白血病患者进行了L-CFU培养。结果10例患者的骨髓细胞均有L-CFU形成。培养7天后L-CFU形成达到高峰。每1×10~6骨髓细胞可形成74～451个集落,细胞丛197～1,015个。7例患者进行了外周血L-CFU培养,结果亦都有L-CFU形成。L-CFU数为26～700个,细胞丛83～976个。为了解L-CFU组成细胞性质,进行了培养前后的细胞化学染色及电镜等观察,结果表明,培养后所形成集落的组成细胞均出现幼稚细胞特征。2例在培养前后的幼稚细胞中均见到了Auer小体。从上述观察推定集落来源于白血病细胞。     

小鼠牙髓干细胞培养及诱导分化

目的 :分离、培养小鼠牙髓干细胞并诱导分化 .方法 :采用酶消化培养法获得小鼠的单个牙髓细胞悬液 ,细胞密度调整为 1× 10 4/孔细胞 ,用 2 0 0mL·L -1胎牛血清的α MEM培养液培养 14d ,挑出细胞克隆消化传代 ,TGF β、BMP2 、bFGF细胞因子诱导 ,PCR检测DSPP的mRNA的表达 .结果 :小鼠牙髓细胞呈集落状生长 ,克隆形成率为 1.6 -2 .5个 / 10 4细胞 ,所形成的集落细胞结合紧密 ,细胞体积小、胞核大 ,经细胞因子刺激后的细胞表达DSPP的mRNA .结论 :培养的小鼠牙髓集落状生长的细胞具有干细胞增殖快等特性 ,细胞因子可诱导小鼠牙髓干细胞定向分化     

不同细胞密度对小鼠心肌微血管内皮细胞小管生成的影响

目的 探讨小鼠心肌微血管内皮细胞的体外小管生成实验的最佳细胞浓度，从而为心脏微血管的研究提供体外实验模型。方法 组织块贴壁法培养小鼠心肌微血管内皮细胞，将小鼠心肌微血管内皮细胞分成5×103个/孔、1×104个/孔、2×104个/孔、3×104个/孔4组，并接种至Matrigel胶包被的48孔板中，细胞接种后24 h在倒置显微镜下观察拍照，并用Image J软件对形成的管腔数量、分支数量进行统计，统计结果用（x-〗±s)表示，数据采用SPSS 17.0软件分析。结果 组织块贴壁法可成功培养小鼠心肌微血管内皮细胞，分离培养的小鼠心肌微血管内皮细胞vWF相关抗原阳性表达。细胞密度为5×103个/孔时无管腔样结构生成，当细胞浓度为1×104个/孔、2×104个/孔、3×104个/孔时可有管腔样结构生成。细胞浓度为2×104个/孔时形成的管腔数量及分支数量高于1×104个/孔、3×104个/孔（P＜0.05）。 结论 分离培养的小鼠心肌微血管内皮细胞具有血管形成能力。在一定的细胞接种浓度范围内，接种的细胞密度越大，体外血管形成能力增强，但细胞浓度超过血管形成的最佳浓度后，随着接种细胞浓度的增大，小鼠心肌微血管内皮细胞的体外血管形成能力减弱。     

测定CSF活性的骨髓细胞微量培养法

我们建立了骨髓细胞~3H—TdR掺入的微量培养法,检测CSF的活性水平。利用96孔培养板,每孔含200μl培养物,其中包括5×10~5N—BMC、20％FCS、10％CSF待测物和RPMI1640培养液,37℃、5％CO_2、饱和湿度下培养4天,在终止培养前6h,加入~3H—TdR(1.85×10~4B_q/孔),测集细胞,在液体闪烁计数仪上计cpm值。此法能取代传统的骨髓细胞GM—CFU培养法,用以测定CSF活性。     

淋巴因子诱导的细胞毒细胞的体内抗肿瘤作用

淋巴因子诱导的细胞毒细胞(LICC)具有很强的体内外抗肿瘤作用。我们改进了Yang's方法,用小鼠脾细胞在细胞毒细胞分化因子(CCDF)及重组的白介素-2(r-IL-2)的作用下,经三天孵育,制备成LICC。在体外用Hamberger及Salmon的集落形成试验,证明由C_(57)BL/6及DBA/2小鼠脾细胞制成的LICC分别对小鼠黑色素瘤细胞B_(16)及白血病细胞L_(1210)有强大的抑制作用,且可逆转肿瘤细胞的耐药性。在此基础上,又进行了体内试验。给小鼠静脉注射由C_(57)BL/6小鼠脾细胞制成的LICC,1×10~8个/天/只,共10天,结果,明显抑制了B_(16)细胞的肺转移和Lewis肺癌的肺转移作用。给小鼠一次静注6～10×10~8LICC,未显示毒性反应,停药一月后再次以5×10~8LICC攻击,亦未显示出任何毒性反应。     

急性白血病骨髓粒单核系祖细胞培养结果及临床意义

用体外软琼脂培养法,测定了54例急性白血病患者骨髓粒单核系祖细胞(GM-CFU)的产率,以102例正常骨髓细胞的GM-CFU为对照,正常组集落平均产率为101.5±55.7/2×10~5,完全缓解组(CR)11例为95.3±19.7/2×10~5,未缓解组(NR)43例为7.0±7.2/2×10~5,与正常组及CR比较有非常显著性的差异(p<0.01),提示并非化疗损伤了祖细胞,而由白血病干细胞及其释放的抑制物所致。     

~(60)COγ线照射后小鼠骨髓红系祖细胞的变化

通过骨髓细胞体外培养法观察了受次致死剂量~(60)C0γ线照射后小鼠骨髓红系造血祖细胞的变化规律。实验测得正常小鼠的每根股骨中BFU-E和CFU-E的总数分別为3.23×10~3和3.97×10~4,经6Gy~(60)C0γ线照后3天,两者分别下降到0.3%和0.5%,骨髓有核细胞数降到正常值的4.6%;照后5天,开始出现回升。发现CFU-GM、CFU-E、BFU-E和骨髓有核细胞数量的降落与增长规律是一致的。因此,用CFU-E和BFU-E同样能够反映机体的造血功能。     

不同培养条件对小鼠脾脏成克隆基质祖细胞（CFU一F）集落形成的影响

本文观察到脾脏ＣＦＵ一Ｆ集落形成受滋养骨髓细胞数、血清浓度及脾细胞数的影响。优选脾ＣＦＵ一Ｆ最佳培养条件为２０％小牛血清、滋养骨髓细胞数为每孔３×ｌ０６，脾细胞数为每孔４×１０５。     

急性髓系白血病细胞P170表达与白血病集落生长关系的研究

为研究急性髓系白血病 (AML)细胞 P170表达与白血病细胞体外集落生长之间的关系及其预后意义 ,对 31例 AML 住院患者骨髓细胞用 Dicke法进行 AML 白血病集落 (AML- CFU)体外培养 ,并用单抗免疫组化法对骨髓细胞和 AML- CFU细胞 P170表达进行检测。 2 8例 AML 患者采用蒽环类药 Ara- c治疗 ,2个疗程后评定疗效。结果显示 :初发、复发 AML、慢粒急粒变及 CR期 AML 患者 AML- CFU集落分别为 172 .9± 72 .1/ 2×10 5 ,176 .0± 76 .6 / 2× 10 5 ,2 2 4.5± 5 4.7/ 2× 10 5和 9.7± 5 .0 / 2× 10 5 ,初、复发 AML 及 CML 急粒变患者 AML-CFU明显高于 CR期 AML 患者 (P<0 .0 1) ,而初、复发 AML 及慢粒急粒变患者 AML- CFU无差异。 AML 患者AML- CFU细胞和 BM细胞 P170阳性表达和 P170阴性表达均为 16例。两种细胞 P170阳性表达一致者 13例 ,P170阴性表达一致者 12例 ,P170阳性和 P170阴性表达不一致者各 3例 (P=0 .114)。 P170阴性者 CR10例 (10 /13,76 .9% ) ,P170阳性者 11例 CR2例 (2 / 11,18.2 % ) ,P=0 .0 0 48。多元回归及逐步回归分析 AML 患者 CR率与P170表达及疾病状态有关 ,其相关系数分别为 - 0 .9786和 - 0 .40 5 5 (P值分别为 0 .0 0 94和 0 .0 10 5 )。以上可见 ,AML- CFU数量与疾病活跃