小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因的克隆与表达

目的 :克隆小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因 ,并进行原核表达及蛋白纯化 ,为制备mNotch1的单克隆抗体做准备。方法 :计算机分析小鼠Notch1全长 ,PCR扩增其胞外段高抗原区编码基因 ,克隆入载体T -vector进行序列测定 ,然后将测定正确的片段连入GST融合表达载体pGEX - 4T - 1,得到pG -NEF ,转化宿主菌DH5α ,经IPTG诱导 ,SDS -PAGE分析 ,以及新生条带表达形式分析以后 ,用GST亲和层析柱纯化。结果 :小鼠Notch1分子胞外段近膜处约 170个氨基酸区域抗原性较高 ,PCR扩增得到大小约 5 0 0bp的特异性片段 ,序列测定结果与文献报导的完全一致 ;原核表达产物大小约Mr 43× 10 3 ,以包涵体形式存在 ,约占总蛋白的2 5 % ,纯化后目的蛋白含量 >95 %。结论 :成功地进行了小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因的基因克隆、原核表达及蛋白纯化。     

小鼠牙髓干细胞培养及诱导分化

目的 :分离、培养小鼠牙髓干细胞并诱导分化 .方法 :采用酶消化培养法获得小鼠的单个牙髓细胞悬液 ,细胞密度调整为 1× 10 4/孔细胞 ,用 2 0 0mL·L -1胎牛血清的α MEM培养液培养 14d ,挑出细胞克隆消化传代 ,TGF β、BMP2 、bFGF细胞因子诱导 ,PCR检测DSPP的mRNA的表达 .结果 :小鼠牙髓细胞呈集落状生长 ,克隆形成率为 1.6 -2 .5个 / 10 4细胞 ,所形成的集落细胞结合紧密 ,细胞体积小、胞核大 ,经细胞因子刺激后的细胞表达DSPP的mRNA .结论 :培养的小鼠牙髓集落状生长的细胞具有干细胞增殖快等特性 ,细胞因子可诱导小鼠牙髓干细胞定向分化     

带有蛋白转导结构域的bcr/abl癌蛋白片段表达及其跨膜转运

0　引言　人类免疫缺陷病毒 (human immunodeficiencyvirus,HIV) - 1编码的反式激活蛋白 TAT具有独特的跨膜运转方式 ,而且有转导速度快 ,效率高的特点 ,被称为蛋白转导结构域 (protein transduction domain,PTD) [1 ,2 ] .本研究用PCR扩增了慢性粒细胞白血病慢粒 bcr/ abl融合蛋白的基因片段 ,在其 5′端融合 PTD结构域的编码区后在大肠杆菌中进行了表达 .表达产物经纯化后 ,加入培养的 HL 6 0细胞 ,表达的蛋白可直接进入细胞内 .这一结果为用外源蛋白负载(L oading)免疫细胞提供了新的途径 .1　材料和方法1.1　 DNA重组　人工合…     

重组酶Cre在体外对LoxP标记的基因组进行重组的初步研究

目的：研究逆转录病毒体系转导的重组酶Cre在体外对LoxP标记的基因组进行重组的能力。方法：用逆转录病毒表达Cre,体外感染条件性基因剔除（即LoxP标记的基因）小鼠来源的原代培养的牙乳头间充质细胞。从被感染的牙乳头间充质细胞中提取基因组DNA,用PCR的方法显示LoxP标记的基因组长度的变化,从而反映Cre在体外的重组能力。结果：被表达Cre的逆转录病毒感染的牙乳头间充质细胞,其标记的基因组长度发生了预期的变化,被标记的部分发生缺失。结论：用逆转录病毒体系转导重组酶Cre吸效地对LoxP标记的基因组进行重组。为用这一方法在体外研究特异基因对细胞生物学行为的影响奠定基础。     

蛋白转导结构域-bcr/abl融合基因的构建和表达

目的 构建含蛋白转导结构域（PTD）与慢性粒细胞白血病（CML）bcr/abl融合基因片段的质粒，并在大肠杆菌中表达。方法 PCR扩增的CML bcr/abl基因片段，经DNA测序后，与合成编码PTD的DNA片段一起手稿质粒pET-16b，构建表达载体pEPb，转化大肠杆菌并进行了PTD－bcr/abl蛋白的诱导表达和纯化。结果 跨越bcr/abl断裂点的523bp的目的片段被有效地扩增，DNA序列分析表明所构建的含PTD－bcr/abl融合基因的质粒与设计相同。PTD－bcr/abl融合蛋白在转化大肠杆菌获得了高效表达并纯化。结论 成功地获得了PTD－bcr/abl融合蛋白片段的基因表达产物，为进一步研究CML的免疫治疗奠定了基础。     

重组酶Cre的逆转录病毒载体的构建及鉴定

目的　构建表达重组酶 Cre的逆转录病毒载体并进行初步的体外感染研究 .方法　将 Cre基因片段插入到逆转录病毒载体 p Mx- IRES- GFP中 ,转染包装细胞系获得表达Cre的病毒颗粒 ,体外感染 NIH- 3T3细胞 ,通过绿色荧光蛋白GFP测定病毒滴度 .结果　构建了表达 Cre的逆转录病毒载体 p Mx- IRES- GFP- Cre.通过包装细胞系得到的含有病毒颗粒的培养上清 ,这种培养上清具有体外感染细胞的能力 ,病毒滴度为 10 5cfu·m L- 1 .结论　用逆转录病毒体系表达重组酶Cre并能有效地进行体外感染 .为用这一方法在体外研究特异基因对细胞生物学行为的影响奠定基础     

早产治疗的研究进展

本文对目前早产药物治疗的种类、机制、用药方法、效果、副作用等进行了综述。以抗生素为主的病因治疗加上抑制宫缩的对症治疗是目前比较可靠的方案。以氨苄青霉素、红霉素为主的抗生素足剂量、全身治疗可终止由感染诱发的早产。宫缩抑制剂中，β2受体激动剂、硫酸镁作用迅速，但易引起严重的并发症；前列腺素抑制剂、钙离子通道阻滞剂效果较好，副作用轻微；催产素拮抗剂特异性高，副作用少而被视为最有前途的药。此外，一氧化氮供体制剂、利多卡因、转化生成因子β2、尿胰蛋白酶抑制剂的治疗也初见端倪。     

Notch信号分子于小鼠牙髓干细胞样细胞表达的研究

目的　研究Notch基因在小鼠牙髓干细胞样细胞表达。方法　采用酶消化培养法获得小鼠的单个牙髓细胞悬液,调整细胞密度为1×104个/孔细胞,干细胞培养液培养14 d,挑选细胞克隆扩增,提取细胞的总RNA,反转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测Notch基因的表达。结果　小鼠牙髓细胞呈集落状生长,克隆形成率约为1·6 ~2·5 个/104细胞,所形成的集落细胞结合紧密,细胞胞体小、胞核大,RT-PCR结果显示Notch的mRNA在牙髓干细胞样细胞中有表达。结论　培养的集落状生长的小鼠牙髓细胞具有干细胞增殖快的特性,Notch基因于牙髓干细胞中表达,表明Notch信号参与了牙髓干细胞样细胞的早期分化的调控过程。     

性腺动脉的应用解剖学

尸解观测性腺动脉的起始位置、支数、口径、与腹主动脉的夹角，与肠系膜下动脉起始处的距离、经行及其与肾蒂的关系，进行统计分析。发现左右两侧劝脉口径间存在显著线性关系，建立线性方程。结合观测结果讨论临床应用要点。     

suc2基因的克隆及在酵母基因组中的定位突变

目的 克隆酿酒酵母的蔗糖转换酶基因（ｓｕｃ２）,并定位突变酵母基因组中的ｓｕｃ２基因以获得无蔗糖转换酶表达的酵母品系。方法 用ＰＣＲ法从酵母Ｙ１９０基因组中扩增出ｓｕｃ２的成熟肽基因片段,克隆后测序。将色氨酸合成酶（ＴＲＰ）基因片段插入ｓｕｃ２基因中,构建成用于同源重组的ｓｕｃ２基因定位突变载体。导入酵母Ｙ１９０,用营养缺陷筛选出ｓｕｃ２基因突变的克隆。用ＰＣＲ扩增并克隆突变后的ｓｕｃ２基因,用序