整合医学模式下生理学教学新理念与教学体系的构建

以生理学课程教学为例,深入探讨在整合医学模式下,为实现培养未来整合性医学人才的目标,采取抓住核心概念的讲解、打通系统的壁垒、引入创建应用新的生理学教育理念、推动基础与临床的教学融合、建立与之匹配的教学和学习方法及评价体系等措施,构建新的生理学教学模式。并初步实现了在督促学生重视基础理论知识学习的同时,加强其对知识的深度理解和拓展应用。更加注重以问题为导向的临床思维、科学创新精神的养成,及科研、医疗实践能力的培养等综合素质的提高。     

PEP-1-SOD1对离体缺血再灌注损伤大鼠心肌Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:研究细胞穿透肽PEP-1介导人铜锌-超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD,SOD1)对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤(MIRI)细胞凋亡的影响。方法:采用Langendorff灌流系统对离体大鼠心脏进行停灌-复灌建立心肌缺血再灌注损伤模型。大鼠随机分为对照组、SOD1蛋白预处理组,25、50、100μmol/L PEP-1-SOD1蛋白预处理组。复灌结束后,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫荧光法检测心肌组织Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:与对照组及SOD1组相比,各PEP-1-SOD1组心肌细胞凋亡指数(AI)显著下降,Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:PEP-1-SOD1融合蛋白可抑制离体心脏缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与上调Bax表达及下调Bcl-2表达有关。     

微滴式数字PCR技术检测非小细胞肺癌患者外周血EGFR基因突变

目的分析微滴式数字PCR技术(droplet digital PCR,dd PCR)在非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)患者外周血EGFR基因突变检测中的应用价值。方法采用dd PCR法与扩增阻滞突变系统技术(amplification refractory mutation system,ARMS)分别检测58例NSCLC患者及TKI治疗后耐药患者20例外周血EGFR基因突变,Kappa检验验证dd PCR法检测EGFR基因突变结果与ARMS法的一致性,并对检测结果进行分析比较。结果 ARMS法检测EGFR基因突变共检出34例患者,其中双突变患者5例,dd PCR法共检出38例患者,其中双突变患者10例;两者Kappa值=0.72,阳性一致率为97.50%,阴性一致率为72.73%,总一致率为86.30%;dd PCR法检测接受TKI治疗患者的20外显子p.T790M位点突变检出率为50.00%(10/20),而无TKI用药史患者均未检出;dd PCR法检出突变丰度1%的突变位点占总突变位点的29.17%(14/48),ARMS法仅检出其中的35.71%(5/14)。结论 dd PCR法与ARMS法相比具有更高敏感性,且可绝对定量,EGFR基因突变的检出率更高。     

干细胞迁移到心肌梗死区的调控机制

研究应用局部注射、静脉注射、冠脉注射等不同途径 ,移植干细胞修复受损心脏都是可行的。在损伤心脏部位通过什么信号诱导干细胞迁移到心肌梗死部位 ?目前初步知道干细胞因子、血管内皮生长因子、粒细胞集落刺激因子等参与了这个过程。作者在此主要综述了调控干细胞迁移到心肌梗死区的环境因子 ,希望依此能为临床利用干细胞治疗人类疾病提供新的策略。     

不同检测体系下骨髓源间充质干细胞迁移特征的比较

为研究不同检测体系下骨髓源间充质干细胞（MSC）迁移特征的差异，本研究利用Boydenchamber观察hSDF-1对MSC迁移的影响是否存在浓度依赖性；观察上述体系经50nmol渥曼青霉素（wortmannin），10μmol/L LY294002，50μmol/L PD98059，10μmol/L U73122，126μmol/L AMD3100以及50nmol/L维拉帕米等处理MSC后对MSC迁移的影响。结果表明：MSC迁移能力随着hSDF·1α浓度的递增而逐渐增强，并且发现Wortmannin、LY294002、PD98059、U70312、AMD3100、Verapamil对MSC迁移均有影响，其中U73122、AMD3100对MSC迁移阻断的效应最显著。结论：SDF-1／CXCR4所介导的MSC迁移可能与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C（PI-PLC）和蛋白激酶C（PKC）等信号途径有关。     

黄芩苷对高糖培养条件下内皮细胞粘附分子水平的影响

目的：研究黄芩苷对高糖条件下人脐静脉血管内皮细胞株（CRL1730）细胞粘附分子水平的影响。方法：CRL1730细胞常规培养传代,在不同糖浓度培养基（5.5mmol/L、30mmol/L）、黄芩苷（50mg/L、100mg/L、200mg/L）条件下培养48h。酶联免疫吸附法测sICAM-1、sVCAM-1。结果：黄芩苷能抑制高糖导致的内皮细胞粘附分子增高。结论：黄芩苷对高糖状态下CRL1730细胞sICAM-1、sVCAM-1的增高具有抑制作用,其原因可能与其抑制炎症反应等因素有关。     

PEP-1-CAT抑制氧化应激条件下大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡

目的:研究PEP-1-CAT融合蛋白转导入大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,MSC)的能力,以及其预处理对MSC在氧化应激损伤条件下凋亡的影响及其机制。方法:采用流式细胞仪检测MSC表面标记物CD29、CD90、CD45、CD34,并检测成脂肪细胞和成骨细胞的诱导分化能力。采用免疫荧光染色和Western blot检测融合蛋白His-CAT和His-PEP-1-CAT转导入MSC的能力。DAPI染色和流式细胞仪检测细胞的凋亡率,采用相应的试剂盒分别检测丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性的改变和线粒体膜电位的变化。结果:MSC低表达CD34(1.78%)、CD45(1.41%),高表达CD29(94.3%)、CD90(95.5%),具有成脂、成骨多向分化的潜能。PEP-1-CAT转导入MSC中呈现时间和剂量依赖性特征,而His-CAT不能进入细胞内。与His-CAT组相比较,PEP-1-CAT融合蛋白预处理组MSC的凋亡率明显降低,LDH和MDA含量明显下降,减轻了因氧化应激引起的线粒体膜电位的下降。结论:PEP-1-CAT融合蛋白通过清除活性氧,维持线粒体膜电位的稳定,显著抑制了MSC在氧化应激损伤情况下的凋亡。     

细胞穿透肽PEP-1介导增强型绿色荧光蛋白在小鼠体内跨膜转导

目的 研究细胞穿透肽PEP-1介导的大分子物质在小鼠体内的跨膜转导能力.方法 用基因工程的方法制备并纯化增强型绿色荧光蛋白EGFP和PEP-1-EGFP融合蛋白,分别将500 μg的EGFP蛋白和PEP-1-EGFP融合蛋白通过尾静脉注射入昆明小鼠体内,2 h后麻醉小鼠,PBS充分灌流并取心、脑、肝、脾、肾快速冷冻切片后立即置荧光显微镜下观察.结果 2 h后PEP-1-EGFP融合蛋白处理的小鼠大脑、心肌、肝、脾和肾组织里出现均一的明亮绿色荧光,而EGFP蛋白处理的小鼠各脏器内均未见到绿色荧光.结论 细胞穿透肽PEP-1能携带增强型绿色荧光蛋白穿透小鼠细胞膜并分布于心、脑、肝、脾、肾组织内,为将来用PEP-1介导各种大分子药物跨膜转导进行各种疾病的蛋白治疗提供实验依据.     

吡咯喹啉醌对D-半乳糖致衰老大鼠海马神经元的影响

目的观察吡咯喹啉醌(PQQ)对D-半乳糖(D-gal)致大鼠海马神经细胞衰老的影响。方法用大剂量D-gal致大鼠脑老化模型,侧脑室注射PQQ,50 d后行脑组织切片H-E染色和尼氏染色,观察海马神经元的形态学变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡率;用TBA法和Fenton反应测海马组织自由基含量;W estern b lot观察C-FOS蛋白的表达。结果D-gal处理组鼠海马神经元胞体变小,尼氏小体的吸光度值(A)降低,细胞凋亡率和自由基含量增加,C-FOS蛋白的表达降低;而同时PQQ处理后,与对照组相比海马神经元的胞体变大,尼氏小体的A值增加,自由基含量和神经元的凋亡率无明显增加,PQQ剌激了C-FOS蛋白的表达。结论PQQ能延缓D-gal引起的大鼠海马神经细胞衰老。