血红素氧合酶-1基因治疗减缓移植物血管病及机制

目的 观察血红素氧合酶-1(HO-1)基因治疗减缓同种移植物血管病的效果,探讨其机制.方法 以BN-Lewis大鼠血管移植为对象,依据基因治疗方案分为4组:同系对照组、空白对照组、载体对照组、腺病毒介导的HO-1( AdHO-1)组.移植后2个月,观察各组移植物纤维化和内膜增生,检测T细胞(CD3+)、B细胞(CD45RA)和巨噬细胞(CD68+)浸润数量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测移植物HO-1基因和蛋白的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测受体血清白细胞介素(IL)-10的浓度.结果 同系对照组无移植物血管病表现,空白对照组和载体对照组大量纤维沉积,AdHO-1组纤维沉积轻微.血管内膜/(内膜+中膜)百分比4组分别为7.6％、81.4％、85.9％、15.9％.每400倍视野浸润细胞数4组分别为T细胞(9.2±1.6、92.3±11.6、89.6±17.8、39.3±10.1)、B细胞(3.6±1.1、72.6±11.8、66.6±10.9、30.6±9.9)、巨噬细胞(7.5±1.2、78.5 ±21.7、72.5 ±19.8、34.5±18.7).血清IL-10浓度4组分别为(50.2±20.1)、(40.2±11.1)、(38.6±19.3)、(481.2 ±69.1)ng/L.AdHO-1组与空白对照组和载体对照组间差异有统计学意义(P＜0.05).AdHO-1基因治疗增高了移植血管HO-1基因和蛋白的表达.结论 AdHO-1基因治疗减缓同种移植物血管病,移植物纤维化和内膜增生明显减轻.AdHO-1基因治疗下调了T细胞、B细胞和巨噬细胞在移植物中的浸润,增加了HO-1和IL-10的表达,IL-10-HO-1通路的活化可能是移植血管得到保护的重要原因.     

胰肾联合移植53例术后长期存活的临床观察

目的 分析53例胰肾联合移植长期存活情况及其影响因素.方法 回顾性分析2000年1月至2009年6月间施行的53例胰肾联合移植受者和移植物长期存活情况,分析受者死亡原因和移植物功能丧失原因.结果 3、5和8年受者存活率分别为90.1％、89.1％和80.0％,3、5和8年移植胰腺存活率分别为84.9％、84.8％和60.0％,3、5和8年移植肾存活率分别为83.0％、82.6％和53.3％.受者死亡原因分别为感染(4例)、移植肾功能丧失(2例)、心血管急症(1例)和脑卒中(1例).移植胰腺功能丧失的主要原因为带功能受者死亡、排斥反应和外科并发症.移植肾功能丧失的主要原因为排斥反应和带功能受者死亡.结论 胰肾联合移植治疗终末期糖尿病肾病远期效果良好,感染、排斥反应和外科并发症是受者死亡和移植物功能丧失的主要原因.     

活体供肾移植进展

一、活体供肾移植的历史 1954年12月,Murray成功实施首例同卵孪生兄弟间活体供肾移植,使器官移植从实验进入了临床应用阶段.1959年和1962年,Hamburget等先后施行了异卵孪生间和表亲间活体供肾移植.     

阻断ERK2信号转导通路对血小板源生长因子-BB诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移和表达转化生长因子-β1的影响

目的 观察ERK2信号转导通路在血小板源生长因子(PDGF-BB)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移和表达转化生长因子(TGF)-β1中的作用.方法 将原代培养的大鼠VSMC分为4组:(1)对照组;(2)PDGF刺激组;(3)Ad-LacZ组;(4)Adanti-ERK2组.用Westernblot检测细胞磷酸化ERK2蛋白水平;噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖率;流式细胞仪检测细胞细胞周期;Boyden小室测定细胞的跨膜迁移能力;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养液上清中TGF-β1的浓度.结果 Adanti-ERK2组和对照组细胞增殖率、S期细胞百分比及跨膜迁移细胞数目明显低于PDGF刺激组和Ad-LacZ组(细胞增殖率:2.75%、0.00%比64.45%、61.88%;s期细胞百分比:14.18%、13.58%比38.14%、32.99%;跨膜迁移细胞数:8.2±3.2、6.3±2.6比24.8±6.1、23.3±5.8,均P<0.05);(2)Adanti-ERK2组和对照组细胞培养上清液中TGF-β1含量明显低于PDGF刺激组和Ad-LacZ组(P<0.05);而Adanti-ERK2组明显高于对照组(P<0.05).结论 ERK2信号转导通路参与调控PDGF-BB诱导的VSMC增殖、迁移和基因表达.反义ERK2基因预先转染阻断ERK信号转导能显著抑制PDGF-BB刺激的VSMC增殖、迁移,阻断细胞周期由G1期进入S期,并且部分下调TGF-β1的合成分泌.     

结缔组织生长因子诱导人肾小管上皮细胞向间充质细胞转化的实验研究

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)对肾小管上皮细胞向间充质细胞转化的影响.方法 体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2),按是否用CTGF处理将其分为实验组和对照组.直接免疫荧光法、间接免疫化学检测培养72 h后肾小管上皮细胞E-cadherin、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白((α-SMA)、细胞外信号调节激酶2(ERK2)的表达;Western blot方法 在72 h检测E-cadherin、波形蛋白和ERK2的表达;Boyden小室在1、3、5 d检测细胞迁移能力的变化.结果 (1)实验组上皮细胞表型标志蛋白E-cadherin随着时间的延长而表达递减,波形蛋白表达渐增,ERK2表达上调;(2)在第1天,实验组与对照组细胞迁移能力差异无统计学意义,第3天实验组迁移至滤膜下面细胞多于对照组,第5天实验组细胞迁移数明显高于对照组[(45.0±1.1):(14.0±1.2),P<0.05].结论 在体外,人肾小管上皮细胞由CTGF刺激表现出向间充质细胞转化的特性,并且ERK2信号转导通路可能参与了对这一过程的调控效应.     

亲属活体供肾移植后近期及中长期供者和受者的安全性分析

目的 探讨亲属活体供肾移植术后近期及中长期供、受者的安全性.方法 对106名亲属活体供肾者及其受者进行随访.随访日分别为肾移植后2个月至7年,其中32名供者随访时处于术后3个月内,44名处于术后3个月至1年,30名处于术后1年以上(其中术后1～3年者14名,3～5年者11名,5年以上者5名).以GFR作为评估供、受者肾功能的主要指标,比较供、受者手术前后的肾功能以及血压和尿蛋白.GFR的计算采用同位素发射计算机辅助断层显像法(GFR-ECT法)、24 h尿肌酐(Cr)清除率法(GFR-24 h Urine法)及Cockcroft-Gault公式法(GFR-Cr法).结果 取肾前106名供者的GFR-ECT和GFR-Cr分别为(1.51±0.13)和(1.99±0.42)ml/s,GFR-ECT是GFR-Cr的75.8%;术后第5天,供者的GFR-Cr为(1.40±0.33)ml/s,为术前的70.5%;术后3个月内、3个月至1年和1年以上者的GFR-Cr分别为(1.47±0.28)、(1.36±0.24)和(1.37±0.23)ml/s,分别为取肾术前的73.7%、68.0%和68.6%;术后1～3年者、3～5年者及5年以上者的GFR-Cr与超过1年者整体的GFR-Cr比较,差异无统计学意义(P>0.05).4名供者术后尿蛋白为±,均为术后超过1年者;4名供者血压升高.术后3个月、1年及1年以上,受者的GFR-Cr分别为(1.09±0.26)、(1.20±0.31)和(1.07±0.29)ml/s.结论 术后近期供者的GFR会下降,并小幅波动,术后中长期其GFR接近术前70%的水平,并趋于稳定.亲属活体供肾移植术后供、受者具有良好的安全性.     

肝肾联合移植的单中心经验总结

目的 分析单中心肝肾联合移植(SLKT)的治疗效果.方法 1999-2010年间共实施SLKT 21例,患者的原发疾病分别为多囊病11例,病毒性肝炎后肝硬化合并肝肾综合征5例,慢性肾炎肾功能衰竭合并肝硬化2例,肾移植术后移植肾功能丧失合并肝硬化2例,肝炎后肝硬化合并糖尿病肾病1例.统计患者的资料,与同期同中心"中国肝移植注册网站"收录的肝炎后肝硬化行肝移植的133例(LT组)和"中国肾移植科学登记系统"收录的尸体肾移植609例(KT组)进行对比,分析各组受者术前状态和预后的差异.结果 SLKT组术前终末期肝病模型(MELD)评分为21.3±5.5,血肌酐为(516.0±329.9)mmol/L;LT组术前MELD评分为20.6±9.9,血肌酐为(111.4±138.1)mmol/L,与SLKT组相比较,血肌酐的差异有统计学意义(P＜0.01).SLKT组中,3例分别于术后2周、半年和5年因感染而死亡,1例因多器官功能衰竭而死亡,1例于术后5年自行停药,因排斥反应而死亡.SLKT组术后1年内移植肾急性排斥反应的发生率为零,KT组为6 %(P＞0.05).术后SLKT组移植肾功能延迟恢复的发生率为9.5 %,KT组为17.3 %(P＞0.05).SLKT组术后1、3和5年的受者存活率分别为87.7 %、67.8 %和67.8 %,LT组分别为84.2 %、73.5 %和69.4 %(P＞0.05).结论 SLKT是终末期肝、肾疾病的有效、安全的治疗方法.

Abstract：

Objective To analyze the curative effect of simultaneous liver and kidney transplantation (SLKT) for patients with end-stage liver and kidney diseases and liver cirrhosis patients with hepatorenal syndrome.Methods All SLKTs (n=21) performed at our center from January 1999 to December 2010 were reviewed and SLKT outcomes were compared with those of kidney transplantation (KT) (n=609) and liver transplantation (LT) (n=133) performed during the same period.Results There were 3 deaths due to infection 2 weeks, 6 months and 5 years respectively after operation. One patient died due to multiple organ dysfunction syndrome 2 weeks after operation. One patient was dead 5 years after operation because of rejection. MELD level between SLKT and LT had no significant difference, but serum creatinine in SLKT group was significantly higher than in LT group (516.0±329.9 vs 111.4±138.1 mmol/L, P<0.01). The 1-year acute kidney rejection rate and rate of delayed graft function (DGF) of the kidney had no significant difference between SLKT group (0 vs 9.5 %) and KT group (6 % vs 17.3 %). There was no significant difference in one-, 3- and 5-year patient survival rate between SLKT group (87.7 %, 67.8 % and 67.8 %) and LT group (84.2 %, 73.5 % and 69.4 %).Conclusion SLKT is a safe and effective treatment for end-stage liver and kidney diseases.     

反义细胞外信号调节激酶-2基因治疗移植物动脉血管病内膜病变

目的 观察移植物动脉血管病(TA)的内膜病变机制和反义细胞外信号调节激酶2基因腺病毒载体(Adanti-ERK2)基因治疗的效果.方法 建立Brown-Norway(BN)-Lewis移植物动脉血管病模型,分为同系组、Control组、LacZ组和Adanti-ERK2组(给予5×109 pfu Adanti-ERK2基因治疗),每组各6例.术后60 d检测各组内膜病变和血管腔内膜/(内膜+中膜)比,α-肌动蛋白(α-actin)和血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)染色检测移植动脉平滑肌细胞(VSMCs)增殖和分泌功能,评估移植动脉新生毛细血管情况并检测移植动脉中环氧化酶-2(COX-2)的表达.结果　术后60 d同系组内膜无异常,Control组和LacZ组典型内膜增殖改变,Adanti-ERK2组内膜病变较轻;内膜/(内膜+中膜)比各组分别为7.6%、81.4%、85.9%、15.9%;α-actin阳性细胞(内膜平滑肌细胞)每视野计数各组分别为0、71.3±9.2、76.4±11.3、34.8±5.3;PDGF-BB阳性细胞每视野计数各组分别为0.9±0.5、28.4±3.4、29.1±3.2、8.6±1.7;移植动脉中膜和内膜新生毛细血管检测各组分别无、丰富、丰富、少量;COX-2新生血管阳性细胞计数各组分别为0、36.3±8.3、40.9±9.2、10.4±3.9.Adanti-ERK2组与其他组别间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论　内膜增生,血管腔缩窄,PDGF-BB诱导内膜平滑肌细胞募集分化并激发血管新生是TA重要病理生理环节,AdantiERK2基因治疗可有效干预各发病环节,达到治疗效果.

Abstract：

Objective To explore the mechanisms of intimal injury underlying transplant arteriosclerosis (TA) and to clarify the treatment effect of adenovirus-mediated anti-extracellular signal regulated kinase 2 (Adanti-ERK2) gene therapy on TA. Methods The Brown-Norway (BN)-Lewis TA model was employed. According to different gene therapy, the recipients were divided into isograft group, control group, LacZ group, which were used as control, and Adanti-ERK2 group (5 × 109 pfu Adanti-ERK2 was transferred into the graft before transplant, 6 cases in each group). The grafts were harvested on the day60 post-transplantation to evaluate the intimal injury and calculate the ratio of intima/( intima + media). The staining of α-actin and PDGF-BB was performed to analyze proliferation and secretion of vascular smooth muscle cells (VSMCs). The angingenesis was evaluated and the cyclooxygenase-2 (COX-2) staining was detected. Results The intima was normal in the isograft group but a typical intimal proliferation was observed in the control group and the LacZ group. A mild intima injury was obtained in the Adanti-ERK2 group. The ratio of intima/( intima + media) was 7.6%, 81.4%, 85.9% and 15.9% in isograft, control, LacZ and Adanti-ERK2 groups, respectively. The α-actin staining-positive cells, which indicated VSMCs, were counted per vision-field as 0, 71.3 ± 9.2, 76. 4 ± 11.3 and 34. 8 ± 5.3, respectively. The platelet derived growth factor-BB (PDGF-BB) positive cells were counted as 0. 9 ± 0. 5, 28.4 ± 3.4,29. 1 ± 3.2 and 8.6 ± 1.7, respectively. The angiogenesis was detected as none, abundant, abundant and few, and COX-2 positive cells were counted as 0, 36. 3 ± 8. 3, 40. 9 ± 9. 2 and 10. 4 ± 3.9, respectively (P ＜ 0. 05 between Adanti-ERK2 group and other groups). Conclusion Intimal proliferation, luminal narrow, VSMCs recruitment and differentiation induced by PDGF-BB in intima and the following angiogenesis are the important pathophysiological process of TA. Adanti-ERK2 gene therapy modulates the process and then ameliorates TA.     

优化应用麦考酚酸的临床策略

麦考酚酸(MPA)是次黄嘌呤核苷-5'-单磷酸脱氢酶的抑制剂,它优先耗竭T淋巴细胞和B淋巴细胞中的鸟苷和脱氧鸟苷,从而抑制细胞增殖,抑制细胞介导的免疫应答和抗体形成.MPA的临床应用显著改善了移植物和受者的生存质量,但仍存在消化道不良反应、骨髓抑制及感染增加等问题.吗替麦考酚酯(MMF)是目前使用广泛的MPA前体药物,但其不良反应降低了受者对药物的耐受性和依从性,影响MPA的药物暴露量.