GM-1对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Fas蛋白的表达与细胞凋亡的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后凋亡相关基因Fas在海马区表达的变化，进一步探讨脑缺血再灌注后细胞凋亡的机制和GM-1的脑保护作用。方法线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，同时给予GM-1治疗，采用TUNEL和免疫组化方法观察细胞凋亡及Fas蛋白在脑缺血再灌注后的变化规律。结果脑缺血再灌注后海马区神经细胞过度地表达Fas蛋白，并且该区出现明显的神经细胞凋亡；GM-1能够使Fas蛋白的表达高峰及神经细胞凋亡高峰下调。结论Fas的过度表达可能是脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的重要原因。GM-1可能通过抑制Fas的表达，减少神经细胞凋亡发挥脑保护作用。     

穴位埋药对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Fas蛋白表达的影响

目的探讨川芎嗪缓释剂穴位埋药（后简称埋药法）对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马区Fas蛋白表达的影响。方法用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）模型,免疫组化法检测局灶性脑缺血再灌注大鼠海马区Fas的表达。结果穴位埋药组各时相组Fas蛋白表达均显著低于模型组,与电针组和腹腔注射组比较差异也较显著。结论川芎嗪缓释剂穴位埋药法能下调促凋亡基因Fas的表达,发挥神经保护作用,可能是穴位埋药抗局灶性脑缺血再灌注损伤后的神经细胞凋亡的机制之一。     

灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后脑内Fas表达的抑制作用

目的研究灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注引起脑损伤的保护作用,探讨其作用机制。方法选用40只雄性Wistar大鼠,随机分成5组：假手术组、生理盐水组（I-R组）、MgSO4治疗组、灯盏花素治疗组Ⅰ和Ⅱ（BreⅠ、Ⅱ组）。结扎中脑动脉,然后再灌注。用TUNEL法和免疫组化法分别检测脑组织凋亡细胞和Fas阳性细胞的变化。结果①降低脑组织凋亡细胞：MgSO4组、BreⅠ、Ⅱ组在脑缺血再灌注23 h后海马区凋亡神经元/海马神经元均较I-R组海马区凋亡神经元/海马神经元低,差异有显著性。②降低Fas阳性表达细胞数量：MgSO4组、BreⅠ组和BreⅡ组在脑缺血再灌注23 h后海马区Fas表达阳性神经元/海马神经元均较I-R组海马区Fas表达阳性神经元/海马神经元低,差异有显著性。结论灯盏花素可显著保护大脑缺血再灌注引起的脑损伤,可能与其抑制Fas蛋白的表达有关。其作用优于单用MgSO4。     

大鼠缺血预处理诱导脑缺血再灌注损伤后BcI-2及BcI-xI表达

为探讨凋亡抑制基因Bcl-22及Bcl-x1在缺血预处理(IPC)对大鼠海马CAl区神经元细胞保护中的作用，利用大鼠四血管阻断和再灌注及再通建立前脑缺血再灌注损伤模型，采用尼氏小体染色光镜观察、流式细胞术、免疫组织化学等技术，观测缺血预处理海马CAl区部分神经元病理组织学改变，细胞凋亡百分率及Bcl-2和Bcl-x1蛋白表达的情况。结果发现，大鼠前脑缺血再灌注引起海马CAl区部分神经元发生凋亡，IPC还可明显的减少缺血再灌注损伤后凋亡的神经元数目，产生细胞保护作用，IPC可诱导缺血再灌注损伤早期缺血敏感神经元中出现Bc1-2及Bc1-xl蛋白的表达。结果提示，抑制神经元凋亡发生可能是IPC对脑缺血再灌注损伤起保护作用的机制之一。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马c-fos表达和神经元的凋亡

目的研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马c fos表达和神经元的凋亡。方法wistar大鼠双侧颈总动脉夹闭 30min ,造成全脑缺血 ,松开动脉夹再灌注。动物均于再灌注 1h行c fos原位杂交 ,再灌注 4 8h行TUNEL染色 ,观察海马神经元的凋亡情况。结果缺血再灌注后 ,大鼠海马CA1区c fos基因表达增强 ,缺血再灌注大鼠的TUNEL染色可见CA1区有大量阳性细胞 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论脑缺血再灌注后导致海马c fos基因的表达显著增强 ,细胞凋亡明显增加。     

培高利特对脑缺血／再灌注损伤及c-jun表达的影响

目的 研究培高利特对沙土鼠前脑缺血／再灌注损伤海马CA1区神经元凋亡及即早基因c-jun表达的影响。方法 应用HE染色法、DNA原位末端标记(TUNEL)法及免疫组织化学染色法，观察沙土鼠前脑缺血5min再灌注1、3及7天，不同时间海马CA1区神经元凋亡和c-jun的表达。结果 沙土鼠短暂脑缺血再灌注3天，海马CA1区约95％的锥体细胞凋亡；再灌注7天，海马CA1区仅残存约5％的存活锥体细胞；再灌注1天，海马CA1区c-jun表达增高，随时间的延长表达逐渐减弱。预先应用培高利特可抑制海马CA1区锥体细胞凋亡、提高存活锥体细胞数、显著抑制c-jun的表达。结论 培高利特具有确切的脑保护作用，抑制c-jun的表达可能是其脑保护作用机制之一。     

清热化瘀方提取物预处理对大鼠脑缺血耐受作用及Fas/FasL表达的影响

目的：探讨脑缺血耐受机制及清热化瘀方作为预处理药物对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：采用线栓法制备大鼠大脑中动脉脑缺血预处理模型和再灌注模型。取健康雄性SD大鼠40只，随机分为假手术组、单纯脑缺血再灌注组、脑缺血预处理组、药物预处理组。再灌注后以免疫组化法测定Fas／FasL蛋白表达。TUNEL法检测细胞凋亡。结果：药物预处理能够抑制梗死后Fas／FasL表达（P〈0．05），其作用程度与缺血预处理接近；药物预处理能抑制缺血半暗区神经元凋亡（P〈0．05）。其作用程度与缺血预处理相当。结论：脑缺血预处理可能通过抑制促凋亡蛋白Fas／FasL的合成发挥其神经保护作用，Fas／FasL是脑缺血耐受机制之一；清热化瘀方通过下调脑缺血后Fas／FasL的表达而减轻再缺血后神经元凋亡。     

大鼠缺血预处理诱导脑缺血再灌注损伤后Bc1-2及Bc1-xl表达

为探讨凋亡抑制基因Bc1-2及Bc1-x1在缺血预处理(IPC)对大鼠海马CA1区神经元细胞保护中的作用,利用大鼠四血管阻断和再灌注及再通建立前脑缺血再灌注损伤模型,采用尼氏小体染色光镜观察、流式细胞术、免疫组织化学等技术,观测缺血预处理海马CA1区部分神经元病理组织学改变,细胞凋亡百分率及Bc1-2和Bc1-xl蛋白表达的情况.结果发现,大鼠前脑缺血再灌注引起海马CA1区部分神经元发生凋亡,IPC还可明显的减少缺血再灌注损伤后凋亡的神经元数目,产生细胞保护作用,IPC可诱导缺血再灌注损伤早期缺血敏感神经元中出现Bc1-2及Bc1-x1蛋白的表达.结果提示,抑制神经元凋亡发生可能是IPC对脑缺血再灌注损伤起保护作用的机制之一.     

乌司他丁对脑缺血再灌注后大鼠海马区神经细胞凋亡及学习记忆功能的影响

目的:研究乌司他丁对大鼠脑缺血再灌注(IR)后海马区神经细胞凋亡及学习记忆功能的影响.方法:线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,同时给予乌司他丁治疗,采用TUNEL和水迷宫测试观察海马区细胞凋亡及学习记忆在脑缺血再灌注后的变化规律.结果:脑缺血组大鼠再灌注后6h,海马CA1区即出现少量凋亡阳性细胞;于48～72h达高峰.乌司他丁能够使海马区神经细胞凋亡的高峰明显下调(P<0.01).水迷宫测试结果表明缺血组潜伏期较正常组明显延长,乌司他丁组潜伏期较缺血组明显缩短.结论:乌司他丁能够有效的抑制大鼠脑缺血再灌注后海马区神经细胞凋亡,明显改善学习记忆功能障碍.     

核因子—кB在缺血性脑损伤中作用机制的研究

目的 探讨核因子-кBDNA（NF-кB）结合活性在缺血性脑损伤后的变化。及NF-кB在缺血性脑损伤中的作用。方法 采用四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型。采用EMSA法观察大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区NF-кBDNA结合活性变化。原位细胞凋亡检测法（TUNEL染色）及电镜观察脑缺血后CA1区神经原凋亡情况，结果 大鼠全脑缺血再灌后海马CA1区NF-кBDNA结合活性于再灌注6h开始升高，再灌注12h达高峰，再灌注72h其结合活性仍保持一定水平，再灌注7d其结合活性达到对照组水平。再灌注24h海马CA1区出现凋亡细胞，再灌注72hCA1区凋亡细胞达高峰。结论 NF-кB参与了脑缺血再灌注损伤机制。NF-кB在脑缺血再灌后的不同时间发挥不同的作用。     

全脑缺血再灌注后Fas、TNFR1蛋白的表达与细胞凋亡的关系及Bcl-2过度表达对其的影响

目的通过观察全脑缺血再灌注后大鼠海马回Fas、TNFR1蛋白的表达与细胞凋亡及Bcl-2过度表达时对其表达的影响,探讨全脑缺血再灌注后Bcl-2过度表达对Fas、TNFR1介导凋亡的影响及可能机制。方法健康雄性SD大鼠90只,随机分成3组:假手术组(PO组)、缺血再灌注组(IR组)和Bcl-2过度表达组(BT组)。采用4-VO法建立SD大鼠全脑缺血再灌注模型,应用HE染色、免疫组化和TUNEL方法检测Bcl-2、Fas和TNFR1在CA1及CA3区的表达及细胞凋亡。结果 HE染色显示:IR组CA1区缺血48 h后神经元数目减少,排列紊乱,间质水肿;CA3区少数细胞结构不清。BT组变化不明显。免疫组化染色显示:Fas在IR组中CA1区6 h达高峰,BT组强度弱于IR组(P<0.05)。TNFR1在IR组CA1区24 h达到高峰,BT组强度弱于IR组(P<0.05)。两者PO组CA1、CA3区表达为阴性。细胞凋亡检测:IR组在缺血再灌注后6h,CA1、CA3区凋亡细胞开始增加,24～48 h为高峰。BT组弱于IR组(P<0.05)。结论 Fas和TNFR1蛋白在全脑缺血再灌注后海马CA1区及CA3区都有表达,只是表达强弱及细胞分布不同,提示死亡受体参与了全脑缺血再灌注损伤。Bcl-2过度表达能减弱Fas和TNFR1蛋白在全脑缺血再灌注后的表达,明显减少凋亡细胞数,提示Bcl-2过度表达对全脑缺血再灌注损伤有保护作用。     

脑复苏后细胞凋亡基因调控机制的实验研究

目的:探讨脑复苏后神经细胞凋亡的相关基因的调控机制.方法:大鼠脑缺血再灌注损伤后,分别应用 TUNEL 染色法和免疫组化法检测海马 CA1 区凋亡的神经细胞和 Bcl-2,Bax,C-fos,Fas,p53,Capases 3蛋白在细胞中的表达.结果:与假手术组相比,缺血再灌注24 h 后,凋亡的神经细胞增加(P＜0.01),Bcl-2 蛋白表达的阳性细胞减少(P＜0.01),Bax,C-fos,Fas,p53,Capases 3蛋白表达的阳性细胞增加(P＜0.01).结论:脑复苏后,多基因参与了神经细胞凋亡的调控,Bcl-2具有抗凋亡作用,Bax,C-fos,Fas,p53,Capases 3蛋白表达增加可促进细胞凋亡.     

全脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡和神经生长因子的保护作用

目的：研究大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区P75NTR、Bcl-2、Bax表达及细胞凋亡的变化及神经生长因子（NGF）对它们的影响，进一步探讨该区神经元短暂脑缺血后产生凋亡及NGF对神经元保护作用的可能机制。方法：通过四血管闭塞法建立大鼠全脑缺血-再灌注模型，侧脑室注射NGF，免疫组织化学法检测P75NTR、Bcl-2、Bax表达的情况，TUNEL法检测神经元凋亡。结果：对照组海马CA1区无P75NTR、Bcl-2阳性染色和凋亡细胞，可见少量Bax表达，再灌注后该区Bcl-2始终阴性表达，Bax则表达增加，出现P75NTR阳性表达和细胞凋亡；在NGF给药组，再灌注后海马CA1区Bcl-2出现阳性染色，而Bax及P75NTR的表达则明显降低，细胞凋亡亦明显减少。结论：再灌注后海马CA1区P75NTR、Bax的表达增加可能是神经元产生凋亡的机制之一，NGF抑制脑缺血后细胞凋亡的作用可能是通过对其受体的调节，从而调节Bcl-2和Bax的表达来实现的。     

70味珍珠丸对全脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元的保护作用

目的研究70味珍珠丸对大鼠全脑缺血/再灌注后海马的保护作用。方法 48只雄性Wistar大鼠采用4血管闭塞法制造大鼠全脑缺血模型,观察不同剂量70味珍珠丸对大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区神经元形态学的影响,并应用流式细胞仪检测海马神经元凋亡率。结果 70味珍珠丸组与缺血/再灌组相比表现为海马神经元凋亡率下降,海马CA1区锥体细胞组织学分级（histological grade,HG）明显降低,神经元密度（neuronal density,ND）明显升高（P〈0.05）。结论藏药70味珍珠丸可以抑制脑缺血再灌注时海马神经元凋亡,从而对脑缺血/再灌注损伤有明显的对抗作用。     

核因子-κB在缺血性脑损伤中作用机制的研究

目的　探讨核因子 -κBDNA(NF -κB)结合活性在缺血性脑损伤后的变化 ,及NF -κB在缺血性脑损伤中的作用。方法　采用四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型。采用EMSA法观察大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区NF -κBDNA结合活性变化。原位细胞凋亡检测法 (TUNEL染色 )及电镜观察脑缺血后CA1区神经原凋亡情况。结果　大鼠全脑缺血再灌后海马CA1区NF -κBDNA结合活性于再灌注 6h开始升高 ,再灌注 12h达高峰 ,再灌注 72h其结合活性仍保持一定水平 ,再灌注 7d其结合活性达对照组水平。再灌注 2 4h海马CA1区出现凋亡细胞 ,再灌注 72hCA1区凋亡细胞达高峰。结论　NF -κB参与了脑缺血再灌注损伤机制。NF -κB在脑缺血再灌后的不同时间发挥不同的作用     

高压氧治疗对沙土鼠脑缺血再灌注海马CA1区神经元凋亡的影响

目的:观察高压氧 (HBO) 作用下沙土鼠脑缺血再灌注海马CA1区神经元凋亡的变化,探讨HBO对脑缺血再灌注损伤的疗效及其机制.方法:建立沙土鼠脑缺血后再灌注模型,用HBO治疗连续3 d后,应用H-E和TUNEL染色方法,观察海马CA1区神经元的凋亡情况.结果:两种方法均显示沙土鼠脑缺血再灌注3 d后海马CA1区大量神经元凋亡,HBO治疗组凋亡细胞数明显减少(P<0.01),并以0.25 ATA HBO治疗组为佳.结论:HBO治疗对海马神经元缺血性损伤有保护作用,能减少其凋亡,是HBO治疗脑缺血性损伤的疗效机制之一.     

尼卡地平对脑缺血再灌注后海马CA1区细胞凋亡的影响

目的　研究沙土鼠短暂性脑缺血再灌注后细胞凋亡及尼卡地平处理的影响。方法　实验动物随机分为正常组、假手术组、对照组、尼卡地平处理组。正常组不进行手术操作 ,不进行脑缺血 ;假手术组只进行手术操作 ,不进行脑缺血 ;对照组阻断双侧颈总动脉 15min造成完全性前脑缺血模型 ;尼卡地平处理组在脑缺血前 30min给予腹腔注射尼卡地平 2mg/kg。用TdT介导的原位末端标记 (TUNEL)法来检测死亡神经元的DNA片段。HE染色计数海马CA1区 1mm长度内正常的锥体细胞数。结果　 (1)缺血再灌注后 2～ 4d ,对照组海马CA1区正常锥体细胞数比假手术组明显减少 (P <0 .0 1)。 (2 )缺血再灌注后 2～ 4d ,尼卡地平处理组海马CA1区正常锥体细胞数明显比对照组多 (P <0 .0 1)。 (3)尼卡地平处理组明显减少缺血再灌注后海马CA1区细胞凋亡 (P <0 .0 1)。结论　完全性前脑缺血再灌注后存在细胞凋亡 ;尼卡地平可抑制脑缺血再灌注后海马CA1区细胞凋亡。     

丹龙醒脑片对大鼠脑缺血再灌注后海马区AI及Fas／FasL、TNF-α表达的影响

目的探讨丹龙醒脑片对大鼠脑缺血再灌注海马区细胞凋亡指数（AI）、MasL、TNF-α表达的影响。方法运用大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型。将动物随机分为假手术组、模型组、丹龙醒脑片组、尼莫地平组,采用原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡神经细胞。采用免疫组织化学法,观察海马区Fas／FasL、TNF-α的表达。结果丹龙醒脑片能显著减轻神经细胞的损伤;假手术组有一定量的Fas,FasL、TNF—α表达,缺血后Fas／FasL、TNF—α迅速增加．丹龙醒脑片组显著抑制Fas／FasL、TNF—α的表达,模型组和丹龙醒脑片组、尼莫地平组比较,差异均具有统计学意义（p〈0．05）。结论抑制由缺血再灌注损伤诱导的Fas,FasL、TNF-α表达可能是丹龙醒脑片具有脑保护作用的机制之一。     

三生饮对局灶性脑缺血大鼠海马区Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的：探讨三生饮对大鼠局灶性脑缺血后海马区细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法：用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，用SP免疫组织化学方法，检测再灌注后3、6、12、24h及3d不同时段海马区Bcl-2和Bax免疫反应阳性细胞平均计数，统计分析三生饮治疗组和模型组的表达量。结果：两组海马区神经元均大量表达Bax蛋白，两组间无统计学差异；与模型组相比，三生饮治疗组大鼠缺血侧海马区Bcl-2蛋白表达增多，表达时程延长（P〈0．05）；在缺血侧海马不同区域，Bcl-2／Bax之值不同。结论：大鼠脑缺血再灌注后海马区神经元均有Bcl-2和Bax蛋白的表达，而灌给三生饮可促进海马区Bcl-2阳性细胞的表达，提高Bcl-2／Bax值；但三生饮治疗组大鼠海马区脑细胞仍然过度表达Bax阳性蛋白，最终发生凋亡。     

NGF预处理对全脑缺血再灌注沙土鼠海马CA1区神经细胞凋亡的影响

目的探讨NGF预处理对沙土鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经细胞凋亡的影响及最佳给药时间窗。方法采用夹闭沙土鼠双侧颈总动脉造成全脑缺血再灌注模型。NGF侧脑室注射法。蒙古种沙土鼠30只随机分为五组，每组6只：假手术组（A）、缺血再灌注损伤组（B）、NGF预处理48h、24h、12h组（C、D、E），B、C、D、E各组分别行脑缺血20min再灌注72h后处死取标本。TUNEL法观察沙土鼠脑缺血再灌注后海马CAI区神经细胞凋亡的变化。结果与缺血再灌注损伤组相比，NGF预处理各组可显著减少沙土鼠海马CA1区神经细胞凋亡数目（P〈0．05）；其中以NGF预处理48h组神经细胞凋亡指数最低。结论NGF预处理能明显减轻沙土鼠脑缺血再灌注引起的神经细胞凋亡，具有明显脑保护作用；而以NGF预处理48h脑保护效果最好。