PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因

[摘要] 目的 应用mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。方法 对临床分离的84株金黄色葡萄球菌,应用mecA基因PCR扩增法鉴定MRSA,并与苯唑西林纸片扩散法和头孢西丁纸片扩散法进行比较。结果 84株金黄色葡萄球菌中, 41株金黄色葡萄球菌的mecA基因扩增呈阳性,其中有1株表现为对苯唑西林敏感;苯唑西林纸片扩散法检出42株阳性，其中有2株mecA基因呈阴性. 头孢西丁纸片扩散法与PCR扩增法的试验结果完全符合。结论 mecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定MRSA。     

压电基因传感器阵列检测MRSA的实验研究

目的：探讨以压电传感阵列技术检测耐甲氧西林葡萄球菌的可行性。方法：收集临床64株葡萄球菌标本，对其耐药标志基因mecA基因和金黄色葡萄球菌特有基因femA增后应用压电传感器阵列进行检测，并以PCR电泳检测作参照，与目前采用的常规药物敏感试验进行对比分析。结果：传感器分析与PCR电泳分析结果完全一致，而此两种方法与常规培养加药敏法比较。结果略有差异。所有64株葡萄球菌中，2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的mecA为阴性，2株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA)的mecA为阳性，1株耐甲氧西林凝固酶性葡萄球菌（MRCNS）的mecA为阴性；2株甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（MSCNS）的mecA为阳性。结论：以压电传感阵列技术同时检测femA基因和mecA基因，既可鉴定出是否为金黄色葡萄球菌，又可判断其耐药类型，能为危重病人感染MRSA时的诊断和治疗提供依据。     

金黄色葡萄球菌耐药机制的研究

目的探讨金黄色葡萄球菌的耐药性及耐药机制。方法按NCCLS推荐的琼脂平皿对倍稀释法测定分离鉴定的198株金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药性（MIC值）；用Nitroeephin纸片法测定各菌株产酶情况，统计对苯唑西林不同耐药水平的金黄色葡萄球菌产酶率并分析其耐药水平和产酶率的相关关系；PCR测定各菌株含mecA基因情况。结果198株金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药率为64．65％;128株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）中，高耐菌株为118株（92．19oA），低耐株为10株（7．81%）。敏感株产酶率为58．57％（41株），高耐株产酶率53．39％（63株），低耐株产酶率40．00％（4株），苯唑西林敏感株与高耐株之间产β-内酰胺酶的差别有统计学意义，前者高于后者；含mecA基因的高耐株占95．76％（113／118）、低耐株占60．00％（6／10）、敏感株占10．00％（7／70），高耐株与敏感株含mecA基因的差别有统计学意义，前者高于后者。结论金黄色葡萄球菌耐药机制主要是产β-内酰胺酶和mecA基因的表达。     

Vitek-2药敏卡片检测MRSA的准确性评价

目的:评价Vitek 2 AST P535药敏卡片测定金黄色葡萄球菌对苯唑西林敏感性的准确性.方法:对临床分离的菌株采用AST P535药敏卡片和头孢西丁纸片测定对苯唑西林的耐药性,以PCR测定MecA基因为金标准,评价两种方法的准确性.结果:采用PCR共检测125株金黄色葡萄球菌,其中MecA基因阳性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin resistant Staphy lococcus aureus,MRSA)89株,mecA基因阴性的甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(Methicillin susceptive Staphylococcus aureus,MSSA)36株,以此为标准,在89株MRSA中用Vitek-2 AST P535药敏卡片检测出81株,敏感度为91%,在36株MSSA中采用Vitek-2 AST P535药敏卡片检测出35株,特异性为97.2%;而采用头孢西丁纸片法检测出MRSA 87株,敏感度为97.8%,检出MSSA 36株,特异性为100%.结论:AST P535药敏卡片测定金黄色葡萄球菌对苯唑西林的敏感性具有良好的灵敏度和特异性,准确性能满足临床需要,同时采用头孢西丁纸片法检测可进一步提高检测的准确性.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌femA调控基因的研究

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的辅助基因femA是否存在调控基因,以进一步揭示其耐药机制。方法用最低抑菌浓度法（MIC）筛选对苯唑西林高耐株、低耐株、敏感株;用头孢色芬纸片法（Nitrocephin）筛选出不产β-内酰胺酶菌株;用PCR筛选出含mecA的菌株。将含mecA不产酶的高耐株、低耐株、敏感株纳入进一步研究中;PCR扩增femA及femA5？上游基因;提取细菌总蛋白;生物素标记DNA探针;滞留电泳检测调控基因。结果滞留电泳检测对苯唑西林高度耐药不产β-内酰胺酶含mecA基因菌株均出现滞留条带。结论耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的辅助基因femA有调控基因存在。     

头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的评价

目的:评价头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的可靠性和临床实用性.方法:将临床分离得到的葡萄球菌310株,按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准操作规程进行苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法实验,并以PCR检测葡萄球菌mecA基因为判断标准,比较4种方法的敏感性及特异性.结果:经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为57.1%(113/198),耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)为62.5%(70/112).头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,检测MRCNS敏感性为98.6%,特异性为100%.结论:头孢西丁纸片扩散法操作简便,结果可靠,可作为临床实验室检测耐甲氧西林葡萄球菌的常规方法.     

MecA、femB基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的了解mecA、femB多重聚合酶链反应（PCR）法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检出效率。方法对临床分离的71株非重复的金黄色葡萄球菌,采用多重PCR进行检测。结果 mecA、femB多重聚合酶链反应对MRSA的检测的特异性为100%,敏感性为97.87%。结论 mecA、femB多重PCR法可以对临床分离的金黄色葡萄球菌的甲氧西林耐药作出判断,是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。     

单克隆抗体标志乳胶凝集试验快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的探讨快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的实验方法。方法目标菌株采用SlidexMRSA Detection乳胶快速检测金黄色葡萄球菌(SA)菌株青霉素结合蛋白2 a(PBP2 a),确认MR-SA;设立SA耐苯唑西林筛选试验对照,两组不符合菌株经PCR方法检测M ecA基因确认。结果Sli-dexMRSA Detection乳胶快速检测247株SA的PBP2 a,阳性93株(37.65%);247株SA经苯唑西林筛选试验及PCR测定M ecA基因确定MRSA102株(41.30%),93株PBP2 a阳性菌株都为MRSA;PBP2 a阴性耐苯唑西林22株中,经PCR法检测M ceA基因,9株确认为MRSA,13株为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)。乳胶凝集法快速检测SA的PBP2 a确定MRSA,敏感性91.2%,特异性100%,阳性预测值为1,阴性预测值0.94。结论单克隆抗体乳胶凝集法快速检测鉴定MRSA具有较高敏感性和特异性。     

6种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的应用评价

目的 对6种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法进行应用评价.方法 分别采用6种方法检测134株临床分离的金黄色葡萄球菌耐甲氧西林的情况:聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因、苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、琼脂稀释法检测苯唑西林最小抑菌浓度、琼脂稀释法检测头孢西丁最小抑菌浓度、显色培养基法.结果 以PCR检测mecA基因为“金标准”,65.7％的金黄色葡萄球菌耐甲氧西林 ;苯唑西林纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的敏感性和特异性分别为95.5％和97.8％ ;头孢西丁纸片扩散法敏感性和特异性分别为97.7％和97.8％;苯唑西林和头孢西丁琼脂稀释法敏感性均为100％,特异性分别为97.8％和91.3％ ;显色培养基法敏感性和特异性分别为98.9％和97.8％.结论 6种检测方法具有较好的一致性.头孢西丁纸片扩散法简便、可靠,可作为临床实验室常规检测MRSA的方法.     

金黄色葡萄球菌苯唑西林及红霉素耐药基因多重PCR快速检测

目的 建立金黄色葡萄球菌苯唑西林和红霉素耐药基因的多重PCR快速检测体系,并进行临床应用评价.以了解耐药基因mecA、ermA、ermC在广州地区的流行分布,指导临床合理使用抗生素.方法 全自动仪器鉴定菌株及药敏试验,克林霉素耐药试验检测克林霉素诱导耐药,通过优化PCR反应体系建立多重PCR反应并应用于检测金黄色葡萄球菌耐药基因:mecA、ermA和ermC.结果 成功构建四重PCR快速检测体系,临床评价所分离的124株金黄色葡萄球菌中,mecA、ermA、ermC检出率分别为59.7%、50%、33.9%;克林霉素诱导耐药菌株主要是ermC基因;苯唑西林耐药菌株中均能检测出mecA,红霉素耐药菌株中97.7%携带耐药基因ermA或/及ermC.结论 所构建的多重PCR检测体系为临床实验室提供快速而有效的菌株耐药基因检测手段.mecA、ermA、ermC是本地区分离的金黄色葡萄球菌对苯唑西林和红霉素耐药的主要机制之一.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测及耐药性分析

目的 分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床感染现状及耐药性.方法 采用美国MicroScan全自动细菌分析仪鉴定细菌种类,并用纸片扩散法进行药敏试验.结论 2006～2007年共分离出金黄色葡萄球菌270株,其中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)174株,检出率为64.4%.所有的分离株对万古霉素都敏感;MRSA对 红霉素、克林霉素、庆大霉素、复方磺胺、利福平和左旋氧氟沙星的耐药率分别为94.8%、71.8%、67.8%、85.1%、15.5%和48.9%.结论MRSA的分离率显著增高,耐药性严重,临床细菌室应高度重视MRSA的检测.     

913株凝固酶阴性葡萄球菌临床分离株耐药性分析

目的了解2008-2011年广州医学院第二附属医院临床分离的凝固酶阴性葡萄球菌感染状况及其耐药性变迁,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法凝固酶阴性葡萄球菌培养与鉴定严格按照《全国临床检验操作规程》进行;药敏试验采用K-B法,结果依据NCCLS最新折点进行评价。结果共检出革兰阳性球菌3 319株,其中凝固酶阴性葡萄球菌913株,占革兰阳性球菌的27.51%。耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌647株,占凝固酶阴性葡萄球菌的70.86%。CNS对青霉素耐药率最高,高达99.1%,对克林霉素、复方新诺明、庆大霉素、喹诺酮类药的耐药率次之,对利福平、夫西地酸、万古霉素等耐药率均较低。结论CNS对多种抗菌药物的耐药率不断提高,应及时监测,指导临床医师合理使用抗菌药物,延缓耐药菌株的产生,同时加强控制感染工作,阻止耐药菌株的传播。     

不同致病菌体外对人精子运动参数的影响

目的：为了研究金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和结核杆菌体外对人精子的运动功能有无直接影响。方法：将从临床泌尿生殖系感染病人中分离培养出的金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌和结核杆菌制成活菌悬液，然后将其在体外与10例健康成年男性手淫获得并经上游优化处理的精子按菌／精比50：1一起孵化0、2和4小时后，采用计算机辅助的精子分析系统检测入精子活率，运动参数（前向性运动百分率、直线速度VCL、曲线速度VSL、平均均路径速度VAP）和精子形态及凝集情况。结果：金黄色葡萄球菌与精子比例为50：1体外孵化0、2和4小时后，人精子活率和运动参数明显降低（P＜0．05）。表皮葡萄球菌和结核杆菌体外对人精子的活率和运动功能则无明显影响。结论：金黄色葡萄球菌与精子的比例为50：1体外孵化4小时内，能显著降低人精子活率和抑制精子运动功能。表皮葡萄球菌和结核杆菌对精子运动功能无直接影响。     

382株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性分析

目的了解本地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床感染现状和耐药性,提供临床参考。方法采用法国梅里埃葡萄球菌鉴定试剂盒和ATBExpression仪鉴定细菌的种类,用纸片扩散法进行药敏试验。结果2007～2009年共分离金黄色葡萄球菌784株,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（（MRsA）395株,检出率50．4％。全部金葡菌株对万古霉素和利奈唑胺都敏感,MRSA株对青霉素、红霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、克林霉素、替考拉宁和复方新诺明的耐药率分剐为100％、94．4％、87．1％、80．0％、86．8％、71．6％和44．1％。结论MRSA的检出比率较高,耐药性严重。呈多重耐药,临床应高度重视对MRSA及其耐药性的检测,以帮助合理用药。     

两种葡萄球菌致医院感染的分布及耐药趋势

目的 :了解我院金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌所致感染的发病情况及耐药趋势 ,以便更好地采取控制措施。方法 :对我院 2 0 0 0年 1月至 2 0 0 2年 12月送检的各类标本中分离的 2 19株葡萄球菌的分布及药敏结果进行分析。结果 :两种葡萄球菌所致感染的菌株分布以呼吸道最多见 ,其次为伤口 ;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)和耐甲氧西林表皮葡萄球菌 (MRSE)有逐年增加的趋势 ;两种葡萄球菌对阿米卡星耐药率 <10 % ,对利福平和环丙沙星耐药率 <5 0 % ,对其余抗生素均显示很高的耐药率 ;未发现对万古霉素的耐药株。结论 :葡萄球菌的耐药情况严重 ,MRSA和MRSE菌株的增多应引起高度重视 ,临床治疗必须根据药敏试验结果选择合适的抗生素。     

41株金黄色葡萄球菌的耐药性分析

目的：了解从中日友好医院临床分离出的金黄色葡萄球菌的耐药状况。方法：对41株金黄色葡萄球菌进行药敏试验并对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）作β－内酰胺测试，然后进行耐药分析。结果：41株金黄色葡萄球菌中有35株MRSA，占85．4％；有6株对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA），占14．6％。所有样本对呋西地酸、呋喃妥因、原始霉素、替考拉宁和万古霉素耐药率均为0；MRSA对24种抗生素的耐药率均在50％以上，其中耐药率为100％的有16种；而MSSA对抗生素耐药率超过50％的只有7种，耐药率为0的有20种；金黄色葡萄球菌的产β－内酰胺酶的产酶率为63．4％，MRSA和MSSA产酶率分别为60％和83．3％。结论：该院MRSA检出率非常高，其对万古霉素、呋西地酸、呋喃妥因、原始霉素和替考拉宁非常敏感；β－内酰胺酶的产酶率MSSA高于MRSA。     

病房葡萄球菌感染与耐药性分析

目的 了解我院葡萄球菌感染与耐药情况,为临床防治葡萄球菌感染提供依据.方法 对2005年1月-2009年12月病房所分离到的葡萄球菌耐药性进行回顾性调查.结果 共分离获得金黄色葡萄球菌139株,凝固酶阴性葡萄球菌253株,检出株数在逐年增加.体外药敏试验结果显示红霉素、克林霉素、庆大霉素、四环素、左氧氟沙星对金黄色葡萄...     

葡萄球菌属对常用抗生素耐药情况调查

目的了解葡萄球菌属,特别是耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的耐药情况,为临床用药提供参考。方法从2002年1~7月送检的住院病人的血、痰、脓液、分泌物等标本中分离出的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及其他血浆凝固酶阴性的葡萄球菌共105株,并进行药敏和多重耐药分析。结果MRS的分离率较高,为68.6%,耐甲氧西林金黄色葡葡球菌(MRSA)为69.2%;耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)为63.3%。MRS较非耐甲氧西林葡萄球菌(MSS)耐药率明显高,且MRS比MSS多重耐药率高得多;MRSA对四种不同作用机制的抗生素:泰能、阿米卡星、环丙沙星、复方新诺明具有很高的多重耐药率,达到50%以上。结论鉴于MRS的高分离率和多重耐药率,在治疗感染性疾病时,应加强病原学检查,提高标本鉴定的阳性率;在有效的治疗MRS感染的同时还应注意遏制MRS的产生。     

175 株金黄色葡萄球菌血流感染的临床分析

目的 研究金黄色葡萄球菌（SAU）的感染特点及耐药性,为合理控制SAU 血流感染提供依据。 方法 血培养、细菌鉴定和药物敏感分析采用血培养仪及全自动细菌鉴定及药物敏感分析系统。采用χ2 检 验耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）对多种不同抗生素的耐 药率进行统计学分析。结果 175 例SAU 血流感染的患者中,因基础疾病引起者152 例,占86.9%,因肺部 感染引起者61 例,占34.9% ;SAU 对青霉素、阿奇霉素、红霉素、克拉霉素的耐药率均>90%,对利奈唑胺、 米诺环素和替考拉宁的耐药率均<10%,未发现耐万古霉素菌株。MRSA 对多种抗生素的耐药率大于MSSA。 结论 血流感染SAU 多继发于有严重基础疾病患者,其对多种抗生素的耐药率较高,但对利奈唑胺、米诺环素、 万古霉素仍保留较高敏感性。