APP17肽对卵巢去势大鼠海马神经元凋亡相关因子表达的影响

为研究卵巢去势大鼠海马神经元内凋亡相关因子Fas、Fas-L、NFκB、c-fos、c-Jun的表达及APP17肽对这些因子表达的影响,将健康雌性Wistar大鼠行双侧卵巢切除手术造模,并用APP17肽治疗,分别用免疫组化方法观察Fas、Fas-L、NFκB、c-fos 、c-Jun的表达, 用TUNEL方法检测神经元的凋亡.结果发现卵巢去势大鼠海马神经元Fas、Fas-L、c-fos、c-Jun的表达增高,而NFκB的表达则减少;使用APP17 肽治疗后,上述蛋白质的表达恢复到正常水平,TUNEL检测未发现凋亡神经元. 提示卵巢去势大鼠发生了海马神经元的凋亡相关蛋白的改变,可能是神经元处于凋亡前状态;APP17肽可改善卵巢去势大鼠海马神经元内凋亡相关蛋白的表达,维持神经元的正常功能.     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马c-fos表达和神经元的凋亡

目的研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马c fos表达和神经元的凋亡。方法wistar大鼠双侧颈总动脉夹闭 30min ,造成全脑缺血 ,松开动脉夹再灌注。动物均于再灌注 1h行c fos原位杂交 ,再灌注 4 8h行TUNEL染色 ,观察海马神经元的凋亡情况。结果缺血再灌注后 ,大鼠海马CA1区c fos基因表达增强 ,缺血再灌注大鼠的TUNEL染色可见CA1区有大量阳性细胞 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论脑缺血再灌注后导致海马c fos基因的表达显著增强 ,细胞凋亡明显增加。     

慢性低氧高二氧化碳对大鼠海马NFtcB的影响

目的探讨慢性低氧高二氧化碳对大鼠海马区NFκB的影响及其在海马损伤中的作用。方法采用慢性低氧高二氧化碳肺动脉高压大鼠模型将30只大鼠随机分为正常对照组（NC）、低氧高二氧化碳2周组（2HH）和低氧高二氧化碳4周组（4HH）,免疫组织化学法检测海马CA1／3区mB的表达,TUNEL法检测海马细胞的凋亡。结果NC组大鼠海马CA1／3区可见NFκB／p65少量表达于胞浆,而模型组可见NFκB／p65在细胞核内有不同程度的表达,与NC组比较有显著性差异（P〈0．01）,以4周组最明显。模型组大鼠海马CA1／3区细胞凋亡明显增多（P〈0．01）,也以4周组最明显。结论慢性低氧高二氧化碳能引起大鼠海马区NFκB活化,NFκB活化与大鼠海马神经元凋亡有密切关系。     

核因子-κB在缺血性脑损伤中作用机制的研究

目的　探讨核因子 -κBDNA(NF -κB)结合活性在缺血性脑损伤后的变化 ,及NF -κB在缺血性脑损伤中的作用。方法　采用四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型。采用EMSA法观察大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区NF -κBDNA结合活性变化。原位细胞凋亡检测法 (TUNEL染色 )及电镜观察脑缺血后CA1区神经原凋亡情况。结果　大鼠全脑缺血再灌后海马CA1区NF -κBDNA结合活性于再灌注 6h开始升高 ,再灌注 12h达高峰 ,再灌注 72h其结合活性仍保持一定水平 ,再灌注 7d其结合活性达对照组水平。再灌注 2 4h海马CA1区出现凋亡细胞 ,再灌注 72hCA1区凋亡细胞达高峰。结论　NF -κB参与了脑缺血再灌注损伤机制。NF -κB在脑缺血再灌后的不同时间发挥不同的作用     

神经调节素对阿尔茨海默病大鼠模型海马细胞凋亡和核转录因子κB表达的影响

目的 研究神经调节素1β( neuregulin 1β,NRG1β)对β-淀粉样蛋白1-40(beta-amyloid protein,Aβ1-40)所致的模拟阿尔茨海默病模型大鼠空间学习记忆能力、神经元凋亡、核转录因子κB( nuclear factor kappa B,NFκB)表达的影响,探讨NRG改善学习记忆能力的作用机制.方法 成年健康雄性Wistar 大鼠30只,随机数字表法分为对照组、模型组和治疗组,每组10只,经侧脑室微量注射Aβ1-40建立实验性阿尔茨海默病模型大鼠,经侧脑室注射NRG1β(0.3μg·kg-1)干预治疗.各组大鼠实验前及造模7d后、治疗14d后均用Y型迷宫检测大鼠学习和记忆功能,利用HE染色观察海马神经细胞的结构变化,原位TUNEL法检测海马神经细胞凋亡,免疫组织化学法检测海马神经细胞NFκB的表达.结果 模型组大鼠学习能力[ (57.50±1.58)次]和记忆能力[(7.20±1.03)次]较对照组学习[(59.50±2.79)次]和记忆能力[(7.50±1.08)次]明显下降(=20.36,5.28,P＜0.05),海马区神经细胞排列稀疏、紊乱,有明显神经元脱失,TUNEL阳性细胞数明显增多、NFκB表达增加(P＜0.05).NRG1β治疗组大鼠学习记忆能力[ (67.70±4.90)次,(5.80±0.63)次]及细胞结构较模型组[(79.10±4.12)次,(4.40±0.69)次]显著改善( t=5.63,4.69,P＜0.05).相对于模型组[(41.10±7.95)次,(29.30±7.24)个],NRG1β治疗组NFκB表达(25.90±6.67)明显减弱、细胞凋亡数量[(23.50±3.89)个]明显减少(t=4.63,2.23,P＜0.05).结论 NRG1β能抑制海马神经细胞NFκB表达,减少细胞凋亡,从而改善阿尔茨海默病大鼠的学习和记忆能力.     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马CA1区NF-κB激活与神经元凋亡的关系

目的 探讨新生大鼠脑缺氧缺血后海马CA1区核因子-κappaB (NF-κB)激活的动态变化及其与海马CA1区神经元凋亡的相关关系。方法 64只7日龄SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤组,每组32只,各组又均按时间点分为1、6、12、24 h四个亚组,每个亚组8只。经分离、结扎左颈总动脉和8%低氧暴露制备缺氧缺血性脑损伤模型。采用免疫组织化学检测左侧海马CA1区NF-κB P65核阳性表达以评价NF-κB活化情况和TUNEL法检测神经细胞凋亡情况。结果 缺氧缺血性脑损伤组各时间点海马CA1区NF-κB P65核阳性表达增强和神经细胞凋亡增多,与假手术组相应时间点比较差异有统计学意义（P<0.001);直线相关分析表明大鼠缺氧缺血后凋亡神经细胞数与NF-κB P65核阳性表达细胞数存在显著正相关（r=0.878,P<0.01）。结论 缺氧缺血诱导了海马CA1区NF-κB P65核移位即NF-κB激活;持续活化后的NF-κB可能与神经细胞的死亡机制有关。     

实验性脑出血后大鼠神经细胞凋亡与NF—κB的表达

目的：研究实验性脑出血后大鼠神经细胞凋亡与NF—κB表达的动态变化,并初步探讨两者的关系。方法：将大鼠随机分为脑出血组、假手术组和对照组,应用立体定向技术将自体不凝血注入大鼠尾状核制备脑出血模型,大鼠分别在不同时间点断头取脑,连续冠状切片做TUNEL染色和NF—κB免疫组化染色。结果：凋亡细胞在脑出血后6h出现,1d后开始增多,3d达到高峰,并持续到7d仍有表达,并且与NF—κB的表达变化一致,各组与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。脑出血后TUNEL阳性细胞与NF—κB的表达呈正相关（r=0．957,P〈0．01）。结论：脑出血后存在细胞凋亡,且可能与NF—κB的激活有关。     

大鼠脑缺血再灌注后核因子-кB的表达及纳洛酮的影响

目的:探讨核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)在缺血再灌注大鼠海马神经元中的表达及纳洛酮的影响。方法:用插线法制作大鼠大脑中动脉闭塞(middlecerebralarteryocclusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,海马区NF-κBP65亚单位的水平通过免疫组化来测定,苏木精-伊红染色观察缺血侧脑组织形态学变化。结果:缺血再灌注组大鼠缺血侧海马区P65亚单位的表达较假手术组显著增强(P<0.01),给予纳洛酮处理后,P65的表达减弱(P<0.01)。缺血再灌注组缺血侧海马区许多神经元有凋亡现象,缺血再灌注纳洛酮组凋亡神经元减少,假手术组未见凋亡神经元。结论:短暂的脑缺血可导致海马区NF-κB的表达增加,凋亡神经元增多。海马区NF-κB的激活与神经元的凋亡相关,纳洛酮可抑制海马区NF-κB的表达,减少神经元的凋亡。     

地塞米松对异氟醚麻醉手术大鼠SIRT1/NF-κB信号通路的影响

目的 探究地塞米松对异氟醚麻醉手术大鼠沉默信息调节因子1（SIRT1）/核因子（NF）-κB信号通路的影响。方法 选取40只SPF级SD大鼠随机分为4组：Sham组(不做任何处理);ISO组(持续4 h吸入1.4%异氟醚);5 Dex Iso组(吸入异氟醚前30 min腹腔注射5 mg/kg地塞米松);10 Dex Iso组(吸入异氟醚前30 min腹腔注射10 mg/kg地塞米松)。采用Morris水迷宫实验和物体位置识别实验评估大鼠认知功能,HE染色观察大鼠海马区形态学变化,TUNEL染色观察大鼠海马区神经元凋亡情况,ELISA法检测海马组织中IL-6、IL-1β和TNF-α水平,Western blot法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（caspase-3）、caspase-9、SIRT1、NF-κB、磷酸化（p）-NF-κB、NF-κB抑制蛋白（IκBα）。结果 与Sham组比较,ISO组第3至5天逃避潜伏期和物体记忆时间延长,原平台位置穿越次数减少,海马区神经元凋亡率、caspase-3、caspase-9相对表达量、IL-6、IL-1β、TNF-α及p-NF-κB/NF-κB水平明显升高,SIRT1和IκBα表达量明显降低（P＜0.05）;与ISO组比较,10 Dex Iso组第4至5天逃避潜伏期和物体记忆时间缩短,原平台位置穿越次数增加,海马区神经元凋亡率、caspase-3、caspase-9相对表达量、IL-6、IL-1β、TNF-α及p-NF-κB/NF-κB水平明显降低,SIRT1和IκBα表达量明显升高（P＜0.05）。结论 地塞米松可改善异氟醚麻醉所致大鼠认知功能障碍,减轻神经元凋亡,可能与调节SIRT1/NF-κB信号通路有关     

Relationship between c-fos gene expression and delayed neuronal death in rat neonatal hippocampus following hypoxic-ischemic insult

目的　探讨围生期脑缺氧缺血后c fos基因的表达及与海马迟发性神经元死亡的相关性。方法　采用逆转录扩增、免疫组化、原位末端标记法检测脑缺氧缺血新生大鼠模型海马组织中c fos基因转录、翻译及细胞凋亡情况。结果　观察到脑缺氧缺血后海马组织中存在c fos选择性表达和迟发性细胞凋亡现象 ,且c fos基因表达以CA4、齿状回为主 ,而细胞凋亡以CA1区锥体细胞较明显。结论　围生期脑缺氧缺血后c fos基因表达参与调节了细胞凋亡的发生 ,其表达与迟发性细胞死亡之间可能存在复杂的相关性     

APP17肽对糖尿病KK小鼠海马神经元胰岛素信号转导途径的影响

目的观察APP17肽对2型糖尿病KKAy小鼠(以下简称KK小鼠)大脑海马神经元胰岛素信号转导蛋白表达的影响。方法根据血糖水平将KK小鼠分为正常对照组(C组)、糖尿病组(DM组)和APP17肽治疗组(DM+APP17P组)。治疗组给予皮下注射APP17肽,每周3次,每次8μg/kg,共12周。处死前尾静脉取血测定糖化血红蛋白、血糖含量;将3组小鼠处死,心脏取血测血浆胰岛素;冰浴中快速分离海马组织,匀浆后,用于免疫沉淀并蛋白印迹检测,部分快速灌注固定做免疫组化染色和Tunel细胞染色。结果与C组相比,DM组与DM+APP17P组的血糖、糖化血红蛋白、胰岛素水平显著升高(P<0.05),但是DM组与DM+APP17P组之间无显著差异;DM组海马神经元胰岛素受体(InsR),胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达低于C组和DM+APP17 P(P<0.05);CREB、pCREB、Bc l-2的表达3组之间差异无统计学意义。Tunel细胞染色3组小鼠海马均未发现Tunel染色阳性细胞。结论2型糖尿病KK小鼠存在海马胰岛素信号转导通路的异常,主要表现为P13-K上游起始途径的异常。这种异常可通过神经元一定程度上的自我调节而改善,并不导致细胞凋亡状态;APP17肽作为神经营养因子能激活海马神经元存活信号转导通路上游成分,从而使存活信号转导通路恢复正常。     

APP17肽对糖尿病大鼠海马线粒体膜电位的影响

应用流式细胞仪分别观察糖尿病模型组、糖尿病APP1 7肽治疗组和正常对照组大鼠海马线粒体膜电位和凋亡率。结果 :糖尿病组大鼠海马线粒体膜电位明显下降 (P <0 .0 1 ) ,凋亡发生率增加 (P <0 .0 1 ) ;APP1 7肽治疗组与糖尿病组相比海马线粒体膜电位增高 (P <0 .0 5 ) ,凋亡发生率降低 (P <0 .0 5 ) ,与正常对照组比较无显著性差异。结果提示 :海马线粒体膜电位下降和细胞的凋亡可能参与糖尿病脑病的发生和发展 ;APP1 7肽具有改善这一病理过程的作用     

APP17肽对2型糖尿病KK小鼠海马神经元超微结构和InsR、IRS-1的影响

为观察APP1 7肽对糖尿病KKAy小鼠 (以下简称KK小鼠 )脑海马神经元部分信号转导蛋白表达的影响 ,并探讨APP1 7肽对神经元的营养作用 ,将KK小鼠分为正常对照组 (C组 )、糖尿病组 (DM组 )和APP1 7肽治疗组(DM +APP1 7P组 ,给予APP1 7肽皮下注射 )。 1 2周后将 3组小鼠处死 ,心脏取血测血糖和血浆胰岛素 ;灌注固定后 ,取海马送电镜检查并作免疫组织化学染色。结果显示 :①DM组与DM +APP1 7P组的血糖、胰岛素水平比C组显著升高 (P <0 .0 5 ) ,但是DM组与DM +APP1 7P组之间无显著差异 ;②DM组海马神经元胰岛素受体 (InsR)、胰岛素受体底物 1 (IRS 1 )的表达低于C组和DM +APP1 7P组 (P <0 .0 5 ) ;③海马超微结构显示DM组海马神经元线粒体肿胀 ,未见凋亡的神经元 ,DM +APP1 7P组和C组神经元基本正常。提示 :APP1 7肽作为神经营养因子能激活信息转导通路 ,从而对神经元凋亡有改善作用。     

APP17肽对Aβ导致神经元毒性作用的影响

通过观察β 淀粉样肽 (Aβ)前体蛋白 (APP1 7)中 3 1 9 3 3 5肽段 (APP1 7肽 )对Aβ引起神经毒性作用的影响 ,进一步证实APP1 7肽的神经营养作用。用固相法合成APP1 7肽、Aβ2 5 3 5,高效液相纯化 ,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型 ,分为正常对照组、Aβ2 5 3 51 0 μmol/L损伤组和Aβ2 5 3 51 0 μmol/L加APP1 7肽 1 0 μmol/L保护组。以细胞计数、噻唑蓝 (MTT)代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积、NT 3免疫细胞化学染色和细胞内游离钙离子(Ca2 + )浓度为观察指标。结果 :与正常对照组相比 ,Aβ2 5 3 5损伤组轴突长度和胞体面积均缩小 ,细胞计数减少 ,MTT代谢率降低 ,LDH漏出率升高 ,细胞内Ca2 + 浓度升高 ,而加入APP1 7肽保护后 ,可使上述指标恢复或接近正常。提示 :APP1 7肽具有神经营养和神经保护作用 ,可减轻Aβ引起的神经元损伤。     

APP17肽对糖尿病小鼠脑Tau蛋白的影响

应用免疫组化方法 ,观察对照组、糖尿病组和糖尿病APP1 7肽治疗组小鼠脑内Tau蛋白的分布 ,以探讨APP1 7肽对糖尿病小鼠脑神经元Tau蛋白表达的影响。结果 :用Tau 1单染 ,正常小鼠脑及APP1 7肽治疗的糖尿病小鼠脑压后颗粒皮质及海马阳性反应神经元数目多。糖尿病小鼠只有用蛋白磷酸酯酶 (PP 2B)脱磷酸后阳性反应神经元数目及染色程度才与正常组接近。提示 :糖尿病小鼠脑内正常Tau蛋白表达障碍 ,有过度磷酸化 ,而APP1 7肽可改善Tau蛋白过度磷酸化     

灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后脑内Fas表达的抑制作用

目的研究灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注引起脑损伤的保护作用,探讨其作用机制。方法选用40只雄性Wistar大鼠,随机分成5组：假手术组、生理盐水组（I-R组）、MgSO4治疗组、灯盏花素治疗组Ⅰ和Ⅱ（BreⅠ、Ⅱ组）。结扎中脑动脉,然后再灌注。用TUNEL法和免疫组化法分别检测脑组织凋亡细胞和Fas阳性细胞的变化。结果①降低脑组织凋亡细胞：MgSO4组、BreⅠ、Ⅱ组在脑缺血再灌注23 h后海马区凋亡神经元/海马神经元均较I-R组海马区凋亡神经元/海马神经元低,差异有显著性。②降低Fas阳性表达细胞数量：MgSO4组、BreⅠ组和BreⅡ组在脑缺血再灌注23 h后海马区Fas表达阳性神经元/海马神经元均较I-R组海马区Fas表达阳性神经元/海马神经元低,差异有显著性。结论灯盏花素可显著保护大脑缺血再灌注引起的脑损伤,可能与其抑制Fas蛋白的表达有关。其作用优于单用MgSO4。     

TRH类似物YM14673对缺血神经元c-fos表达的影响

为探讨促甲状腺素释放激素 (TRH)类似物YM1 4673 (YM)对脑缺血损伤保护作用的机制 ,用无损伤小动脉瘤夹夹闭Wistar大鼠大脑中动脉 (MCA)和双侧颈总动脉 (CCAs) 1h ,造成脑缺血再循环模型。大鼠脑冠状切片 (1 0μm)分别进行苏木素 伊红 (HE)染色和免疫组化染色。结果 :缺血 1h再灌 2 4h给药组 (术前 3 0min,ip ,YM 1mg/kg)与缺血组比较大脑皮质神经元降解相对减少。缺血 1h再灌 4h ,缺血组海马结构齿状回及CA4区有强的c fos蛋白样免疫反应 (CFPLI) ,而给药组在上述区域CFPLI相对较低。表明YM对缺血神经元c fos的表达有一定的抑制作用。     

人参皂甙Rg1对Aβ25～35引起大鼠海马mTOR／p70S6K通路和凋亡基因表达的影响

目的探讨心,娟对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR／核糖体亚基S6蛋白激酶（p70S6K）信号转导通路及凋亡相关基因表达的影响,观察人参皂甙Rg1对Aβ25-35;引起细胞凋亡的对抗作用和作用机制。方法取SD大鼠30只,随机分为5组,每组6只,即生理盐水对照组、鹪,埘损伤组、A＆5嘣＋Rg1（20、40、80mg／kg）3个剂量组。连续用Rg1灌胃3周后,脑室注射觞,娟10μL（1．0mmol／L）,生理盐水对照组注射等量生理盐水。脑室注射后7d,快速取海马CA1区,-70℃冰箱冻存,ImPCR分析mTOR、p70S6K以及凋亡相关基因c—fos、Jun-B、c-jun的mRNA表达水平。结果脑室内注射Aβ25～35能使mTOR和p70S6K的mRNA表达水平降低,使凋亡相关基因c—fOS、Jun-B、c-jHn的mRNA表达明显增加。Rg1可剂量依赖性对抗鹅5哂引起的p70S6KmRNA表达水平降低及c—los、Jun—B、c—jun的mRNA表达水平增加。结论mTOR／p70S6K信号转导通路下调可能参与了Aβ25～35引起的海马神经细胞的凋亡,Rg1通过对抗心5～35引起mTOR／p70S6K信号转导通路下调,抑制促凋亡基因的表达,保护海马神经细胞。     

大鼠癫癎持续状态后海马神经元凋亡的研究

目的：通过美解眠诱导鼠癫癎持续状态后观察海马神经元的细胞凋亡现象。　材料和方法：给ＳＤ大鼠腹腔注射美解眠（２０ ｍ ｇ／ｋｇ）,２４ ｈ 后在光镜和电镜下观察大鼠海马神经元的形态学改变,并以ＤＮＡ 末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测海马神经元的凋亡。　结果：ＳＤ大鼠注射美解眠后出现典型的癫癎发作,光镜和电镜下可观察到海马神经元有典型的细胞凋亡现象,包括细胞体皱缩、胞质浓缩、染色质凝聚成块状、有边集现象, 同时有少量凋亡小体形成。ＴＵＮＥＬ检测发现海马结构内可见ＴＵＮＥＬ染色阳性细胞,其分布不均匀,有区域性差异,以ＣＡ３ 区最为多见。致癎组海马ＣＡ３ 区ＴＵＮＥＬ阳性细胞数的平均百分率（７５．１４％ ）与对照组（９．４％ ）相比有极显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）。　结论：癫癎发作可诱导大鼠海马神经元发生凋亡。     

大鼠高胆红素血症与海马神经细胞凋亡关系的实验研究

目的探讨高胆红素血症新生大鼠海马区Fas蛋白、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的表达、神经细胞凋亡率及其相关性，以进一步阐明胆红素的神经毒性机制。方法通过制作高胆红素血症动物模型，采用免疫组化法、TUNEL法及流式细胞术检测大鼠海马区Fas蛋白、NMDA受体的表达率及神经细胞的凋亡率，并探讨其问相关性。结果高胆红素血症时，海马区神经组织，Fas蛋白、NMDA受体表达率及神经细胞凋亡率明显增高，且与脑组织胆红素浓度呈正相关。结论高胆红素血症时，胆红索可通过NMDA受体过度活化和Fas系统的参与，传递凋亡信号，介导胆红素神经毒性的发生，导致神经细胞凋亡。