小鼠全脑缺血模型海马区Bcl-2和Bax的表达

背景由C57black/6小鼠制成的全脑缺血模型在实验性脑缺血的研究中使用在明显增加,目前需要对这种模型的神经元损伤死亡在分子生物学方面的改变进行全面深入的研究,此项研究正是观察两种与缺血神经元死亡密切相关基因的表达水平.目的在小鼠全脑缺血模型上观察缺血后海马区Bcl-2和Bax的表达,在蛋白分子表达水平对该模型进行研究,为这种模型在今后脑缺血研究中的应用提供实验依据.设计以实验动物为研究对象,随机对照前瞻性研究.单位一所大学生理学和病理解剖学教研室.对象实验于2002-11/2003-05在首都医科大学生理系完成.选择C57black/6小鼠12只,随机分为假手术组和对照组,每组6只.干预双侧颈总动脉夹闭15 min诱发全脑缺血模型,24 h后取脑组织.全脑缺血后应用免疫组织化学染色,观察海马Bcl-2和Bax的表达水平.主要观察指标海马Bcl-2和Bax的表达水平.结果缺血组海马CA1区Bax阳性反应神经元数目为(57.3±2.9个)个,假手术组Bax阳性细胞数目为(17.2±1.3)个,两组比较,差异有显著性意义(t=30.91,P＜0.05).缺血组CA3区和齿状回Bcl-2阳性反应神经元数目为(43.9±1.1)个,假手术组Bcl-2阳性细胞数目为(28.6±1.7)个,两组比较,差异有显著性意义(t=18.51,P＜0.05).阳性着色区灰度值测定结果显示缺血组海马CA1区Bax阳性细胞染色灰度值为90.45±5.23,假手术组Bax阳性细胞染色灰度值为168.39±4.55,两组比较,差异有显著性意义(t=27.54,P＜0.05);缺血组CA3区和齿状回Bcl-2阳性细胞染色灰度值为113.10±4.20,假手术组Bcl-2阳性细胞染色灰度值为157.25±7.68,两组比较,差异有显著性意义(t=12.35,P＜0.05).结论小鼠全脑缺血模型在缺血24 h后,Bcl-2和Bax表达发生改变,Bax表达增加在CA1区,Bcl-2表达增加在CA3区和齿状回.     

APP17肽和救脑益智胶囊水提液对D-半乳糖脑老化小鼠海马蛋白磷酸酯酶1表达的影响

背景：D-半乳糖衰老模型具有与人类自然衰老相类似的生化改变，蛋白磷酸酯酶1在D-半乳糖脑老化小鼠表达降低是否与脑老化过程有关还有待于进一步研究。 目的：探讨APPl7肽及救脑益智胶囊水提液对D-半乳糖脑老化小鼠海马蛋白磷酸酯酶1表达的影响。 设计：随机对照观察。 单位：首都医科大学基础医学院病理学教研室和宣武医院脑老化研究室。 材料：实验于2003—07／2004—07在首都医科大学文验动物中心完成，选用雄性昆明小鼠40只。购自中国医学科学院药物研究所。 方法：将昆明小鼠随机分为5组：正常对照组、D-半乳糖对照组、APP17肽治疗组、中药小剂量治疗组、中药大剂量治疗组，每组动物8只。脑老化小鼠模型D-半乳糖组，APP17肽治疗组，中药小剂量治疗组，中药大剂量治疗组4组每日皮下注射半乳精50mg／kg体质量，同时在APP17肽治疗组皮下注射APPl7肽，每次每只小鼠注射含APP17肽0．35μg的生理盐水0．1mL，1次／d，连续注射3个月。中药冶疗组分别给予0．3g/kg和1．0g/kg的救脑益智水提液（由北京朝阳门医院和山西曲沃传统医学研究所研制，其主要成分有：党参、白术、龟甲、穿山甲等）灌胃，1次／d。两个对照组每天注射和灌注等量的生理盐水，3个月后取脑组织做蛋白磷酸酯酶1免疫组织化学染色。 主要观察指标：免疫组织化学染色检测各组动物海马蛋白磷酸酯酶1的表达。 结果：40只小鼠均进入结果分析，无脱失值。D-半乳糖小鼠和大剂量救脑益智胶囊水提液治疗组小鼠海马蛋白磷酸酯酶1阳性细胞数目少，染色淡；正常小鼠、APP17肽保护和救脑益智胶囊水提液小剂量治疗的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经冗数目多，胞浆与突起深染。 结论：抑制凋亡的蛋白磷酸酯酶1在D-半乳糖小鼠海马表达降低。APP17肽和小剂量救脑益智胶囊水提液治疗能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内蛋白磷酸酯酶1的表达，使之接近正常。而大剂量救脑益智胶囊水提液治疗无此作用．其量效关系特点还需要进一步考察验证。     

APP17肽对D-半乳糖脑老化小鼠海马神经元凋亡的影响

目的 研究APP17肽对D-半乳糖脑病小鼠海马神经元凋亡的影响，为进一步探讨APP17肽对脑老化的临床治疗意义提供理论依据。方法 雄性昆明小鼠66只，按随机数字表法分为3组：正常对照组(C组)、D-半乳糖对照组(D组)、APP17肽治疗组(P组)，每组动物22只。用D-半乳糖制备脑老化模型，并皮下注射APE，17肽对D-半乳糖脑老化小鼠进行治疗，3个月后取脑组织做Bcl-2，Bax，CREB，Akt，AIF免疫组织化学染色。结果 D-半乳糖脑病小鼠海马内Bax，AIF阳性反应神经元细胞数目多，细胞计数与C组及P组有显著性差异；胞质与突起深染，而正常小鼠及APt，17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性细胞数目少，染色淡；D-半乳糖小鼠海马内Bct-2，CREB(cAMP反应结合蛋白)，AKt阳性细胞数目少，染色淡，细胞计数与C组及P组有显著性差异；而正常小鼠及APP17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元细胞数目多，胞质与突起深染。结论 促进凋亡的Bax，AIF(凋亡诱导因子)在D-半乳糖小鼠海马表达增加；与凋亡呈负相关的Bct-2，CREB，Akt在D-半乳糖小鼠海马表达降低APP17肽能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内Bcl-2，Bax．CREB，Akt，AIF的表达，使之接近正常。     

小鼠全脑缺血模型海马区Bcl-2和Bax的表达

背景：由C57black／6小鼠制成的全脑缺血模型在实验性脑缺血的研究中使用在明显增加，目前需要对这种模型的神经元损伤死亡在分子生物学方面的改变进行全面深入的研究，此项研究正是观察两种与缺血神经元死亡密切相关基因的表达水平。目的：在小鼠全脑缺血模型上观察缺血后海马区Bcl-2和Bax的表达，在蛋白分子表达水平对该模型进行研究，为这种模型在今后脑缺血研究中的应用提供实验依据。设计：以实验动物为研究对象，随机对照前瞻性研究。单位：一所大学生理学和病理解剖学教研室。对象：实验于2002-11／2003-05在首都医科大学生理系完成。选择C57black／6小鼠12只，随机分为假手术组和对照组，每组6只。干预：双侧颈总动脉夹闭15min诱发全脑缺血模型，24h后取脑组织。全脑缺血后应用免疫组织化学染色，观察海马Bcl-2和Bax的表达水平。主要观察指标：海马Bcl-2和Bax的表达水平。结果：缺血组海马CA1区Bax阳性反应神经元数目为(57．3&;#177;2．9个)个，假手术组Bax阳性细胞数目为(17．2&;#177;1．3)个，两组比较，差异有显著性意义(t=30．91，P&;lt;0．05)。缺血组CA3区和齿状回Bcl-2阳性反应神经元数目为(43．9&;#177;1．1)个，假手术组Bcl．2阳性细胞数目为(28．6&;#177;1．7)个，两组比较，差异有显著性意义(t=18．51，P&;lt;0．05)。阳性着色区灰度值测定结果显示：缺血组海马CA1区Bax阳性细胞染色灰度值为90．45&;#177;5．23，假手术组Bax阳性细胞染色灰度值为：168．39&;#177;4．55，两组比较，差异有显著性意义(t=27．54，P&;lt;0．05)；缺血组CA3区和齿状回Bcl-2阳性细胞染色灰度值为113．10&;#177;4．20，假手术组Bcl-2阳性细胞染色灰度值为157．25&;#177;7．68，两组比较，差异有显著性意义(t=12．35，P&;lt;0．05)。结论：小鼠全脑缺血模型在缺血24h后，Bcl-2和Bax表达发生改变，Bax表达增加在CA1区，Bcl-2表达增加在CA3区和齿状回。     

胰岛素样生长因子-1受体在糖尿病小鼠脑内的分布

目的:观察糖尿病小鼠脑内胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的分布及APP17肽对其分布的影响,为多肽对糖尿病脑病和AD的治疗提供理论依据。方法:雄性昆明小鼠体质量28～32g,鼠龄8周,共18只。随机分为3组,正常对照组(C组)、糖尿病对照组(DM组)和APP17肽治疗组(APP17peptide+DM组)。用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型,并皮下注射APP17肽(β-淀粉样肽前体蛋白319～335)给予治疗。4周后取脑组织进行IGF-1R免疫组化染色。结果:糖尿病组IGF-1R阳性反应细胞广泛分布于皮质、海马、丘脑、下丘脑等部位,而正常对照组及APP17肽治疗组仅在皮质、海马可见阳性反应细胞,DM组与C组、APP17peptide+DM组海马阳性反应细胞数分别为(22.3±1.7),(14.5±1.4),(15.2±1.1)个/10倍物镜。后两组与DM组比较差异有显著性意义(F=0.1,0.2,P<0.001)。C组与DM+APP17peptide组小鼠海马IGF-1R免疫组化红、绿、蓝像素值分别为86±8,101±6,130±5(F=3.3,0.6,0.5,P<0.01)和84±6,102±6,132±6(F=1.2,6.0,7.0,P<0.01),且着色淡。结论:糖尿病小鼠脑内多个区域存在较多的IGF-1R阳性神经元,而APP17肽能使IGF-1R阳性反应细胞出现的部位和数量正常化。     

胰岛素样生长因子-1受体在糖尿病小鼠脑内的分布

目的：观察糖尿病小鼠脑内胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的分布及APPl7肽对其分布的影响，为多肽对糖尿病脑病和AD的治疗提供理论依据。方法：雄性昆明小鼠体质量28—32g，鼠龄8周，共18只。随机分为3组，正常对照组(C组)、糖尿病对照组(DM组)和APPl7肽治疗组(APPl7peptide+DM组)。用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型，并皮下注射APPl7肽(B-淀粉样肽前体蛋白319—335)给予治疗。4周后取脑组织进行IGF-1R免疫组化染色。结果：糖尿病组IGF-1R阳性反应细胞广泛分布于皮质、海马、丘脑、下丘脑等部位，而正常对照组及APPl7肽治疗组仅在皮质、海马可见阳性反应细胞，DM组与C组、APPl7peplide+DM组海马阳性反应细胞数分别为(22．3&;#177;1．7)，(14．5&;#177;1．4)，(15．2&;#177;1．1)个／10倍物镜。后两组与DM组比较差异有显著性意义(F=0．1，0．2，p&;lt;0．001)。C组与DM+APPl7ueutide组小鼠海马IGF-1R免疫组化红、绿、蓝像素值分别为86&;#177;8，101&;#177;6，130&;#177;5(F=3．3，0．6，0．5，P&;lt;0．01)和84&;#177;6，102&;#177;6，132&;#177;6(F=1．2，6．0，7．0，P&;lt;0．01)，且着色淡。结论：糖尿病小鼠脑内多个区域存在较多的IGF-lR阳性神经元，而APPl7肽能使IGF-IR阳性反应细胞出现的部位和数量正常化。     

APP17肽调节胰岛素受体底物1在糖尿病小鼠脑内分布及对脑海马区神经元退行性变的作用

背景:胰岛素在脑内通过胰岛素受体底物发挥作用,APP17肽有神经营养功能,可能通过影响胰岛素受体底物改善胰岛素缺乏引起的糖尿病脑病。目的:制备小鼠糖尿病模型熏观察APP17肽对糖尿病小鼠胰岛素受体底物1的影响。设计:随机对照动物实验。单位:首都医科大学基础医学院病理学教研室,宣武医院脑老化研究室。材料:实验于2003-09/10在首都医科大学基础医学院病理学教研室及宣武医院脑老化研究室完成,选择雄性昆明小鼠18只,随机分为正常对照组、糖尿病组和APP17肽治疗组3组,每组6只。方法:①糖尿病组和APP17肽治疗组小鼠按200mg/kg剂量腹腔注射链脲佐菌素熏3d后测尾部非禁食血糖熏大于15mmol/L者被认为糖尿病模型建立。②APP17肽治疗组于糖尿病造模2周后皮下注射APP17肽熏每次0.35μg/只熏1次/d熏共注射2周。正常对照组大鼠不干预。③给链脲佐菌素4周后熏处死动物取脑组织进行胰岛素受体底物1免疫组化染色。主要观察指标:各组小鼠脑胰岛素受体底物1阳性细胞形态及分布。结果:18只小鼠全部进入结果分析。①糖尿病组胰岛素受体底物1阳性反应细胞广泛分布于皮质、海马、丘脑、下丘脑等部位熏而正常对照组及APP17肽治疗组仅在皮质、海马见有阳性反应细胞熏且着色淡。②糖尿病组、正常对照组及APP17肽治疗组脑海马胰岛素受体底物1免疫组化阳性反应细胞数分别为(28.7±1.5),(9.2±1.5),(10.1±1.4)个/10倍物镜,糖尿病组高于其他两组(P<0.001)。结论:糖尿病小鼠脑内多个区域的神经元存在较多的胰岛素受体底物1阳性细胞熏APP17肽能使胰岛素受体底物1阳性反应细胞出现的部位和数量正常化熏从而改善糖尿病小鼠海马神经元的退行性变。     

甘丙素、甘丙素受体与老年痴呆的关系

神经肽甘丙素存在于哺乳动物前脑基底部及其投射区。中枢性甘丙素抑制海马乙酰胆碱的释放，使学习、记忆下降。老年痴呆患者甘丙素在基底神经元内的近轴突终末中过度表达，选择性甘丙素受体拮抗剂具有增强胆碱能神经的功能。     

以舌为靶点的寒冷诱导血瘀证研究

目的:观察在寒冷刺激为主的多种方法诱导下出现血瘀证病理状态时模型动物舌象变化特征,探讨舌象作为血瘀证证候靶点和药物治疗靶点的证据。方法:主要采用反复冰水冷冻法诱导血瘀证模型,以数码相机采集实验动物舌象,观察血瘀证模型大鼠舌象的变化,以及舌质灰度值和舌部微血管超微结构对不同治法药物反应的差异。结果:血瘀证模型大鼠舌质紫暗;冰水冷冻组大鼠的舌质紫暗的稳定期为7d,冷冻后3d的舌质灰度值与正常组的差异最显著(P<0.01);冰水冷冻组大鼠舌质灰度值高于正常组(P<0.01)。给药实验参附组和血塞通组舌质灰度值低于模型组(P<0.01);电镜下,冰水冷冻组大鼠舌部微血管管腔狭窄皱缩,血管内皮细胞核增大,内皮细胞向管腔侧有微绒毛伸出,正常组、参附组和血塞通组无明显上述改变。结论:舌质紫暗程度和舌质灰度值可作为机体病理状态(血瘀证)轻重程度的预测指标,可能是药物治疗的新靶点。     

NGF与细胞凋亡

神经长生因子是一种影响神经细胞发育、存活的多能神经营养因子，其中枢和周围效应与神经细胞凋亡密切相关。本文对NGF与神经系统发育、神经损伤及疾病过程中所发生的细胞凋亡的关系以及NGF的抗凋亡作用等方面的研究状况进行了综述。