不同雷公藤单体对仓鼠卵巢细胞凋亡的影响

目的:观察雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤次碱、雷公藤红素及雷公藤内酯甲对仓鼠卵巢细胞凋亡的浓度及时间效应。方法:采用体外细胞培养,用不同质量浓度的雷公藤单体干预及相同质量浓度干预不同时间,显微镜下观察细胞形态及数量变化,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率及蛋白印迹法检测细胞ERK磷酸化及c-fos表达水平。结果:不同单体干预的细胞凋亡率、ERK磷酸化及c-fos表达水平不同,以雷公藤甲素、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲最显著。雷公藤甲素质量浓度在30μg·L~(-1)时细胞凋亡率最高,其后质量浓度增加,细胞凋亡率并不增加;雷酚内酯干预后细胞凋亡呈浓度效应即随质量浓度增加细胞凋亡率升高;雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲干预后随干预时间延长细胞ERK磷酸化及c-fos表达增加。结论:不同雷公藤单体引起细胞凋亡的质量浓度有差异,雷公藤甲素促进细胞凋亡的最佳质量浓度是30μg·L~(-1),而雷酚内酯在10~200μg·L~(-1)范围内随质量浓度增加,引起细胞凋亡增加的现象。此外雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲引起细胞凋亡相关蛋白的表达有时间效应。     

雷公藤甲素抗肿瘤作用的研究进展

雷公藤是卫矛科雷公藤属木质藤本植物，主要产于中国南部地区，其提取物的成分很复杂，雷公藤红素(Tripterine)、雷公藤内酯酮(Triptonme)、雷公藤甲素(TriptoIide)和雷公藤乙素(TripdioIme)是其主要活性成分。雷公藤具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤和抗生育等多种药理作用，临床上常用于治疗风湿性疾病、自身免疫性疾病、器官移植、肾病、哮喘、肿瘤等。近年来，雷公藤甲素的抗肿瘤作用及其机制倍受关注，现就其研究进展作一综述。     

雷公藤二萜成分研究

自福建产雷公藤的根皮部分离获得六个二萜成分(D_1～D_6)。又自湖北产雷公藤的根部得三个二萜成分(D_3、D_5和D_6)。根据其波谱数据和其他理化性质证明:D_1为雷公藤内酯酮,D_2为雷公藤内酯醇,D_3为雷酚内酯,D_4为雷酚酮内酯。D_5和D_6为两个新成分,其结构分别定为:-14-羟基-松香-8,11,13-三烯-3-酮和11-羟基,14-甲氧基-松香-8,11,13-三烯-3-酮。免疫学实验表明,以上二萜成分中D_1和D_2对由ConA引起的淋巴细胞增生有显著的抑制作用。     

多种雷公藤单体抑制HL-60细胞腺苷脱氨酶活性

目的研究多种雷公藤单体对HL-60细胞腺苷脱氨酶（ADA）的影响和诱导细胞凋亡作用。方法分别用雷公藤春碱、雷公藤内酯甲、雷公藤乙素、雷公藤黄素、雷公藤呋喃南蛇碱、雷公藤定碱（10mg／L、1mg／L、0．1mg／L）与HL-60细胞共孵育24h后测定ADA活性，选出抑制作用最强的雷公藤内酯甲。将HL-60细胞与雷公藤内酯甲10mg／L、1mg／L、0．1mg／L以及0．1mg／L雷公藤内酯甲＋腺苷0．5mmol／L、腺苷0．5mmol／L共孵育24h后测定细胞凋亡率。结果①雷公藤内酯甲和雷公藤呋喃南蛇碱均能明显抑制HL-60细胞ADA活性（P〈0．01），抑制作用与浓度成正比；雷公藤春碱仅在10mg／L浓度时有明显的ADA抑制作用（P〈0．01）；雷公藤黄素、雷公藤定碱与雷公藤乙素无明显ADA抑制作用（P〉0．05）。②HL-60细胞与雷公藤内酯甲10mg／L、1mg／L作用均可见明显的凋亡，单加内酯甲0．1mg／L时或单加腺苷时与对照组比较凋亡率无显著差异，但同时再加入腺苷有很高的凋亡率，两者有协同作用。结论雷公藤内酯甲、雷公藤呋喃南蛇碱和雷公藤春碱等雷公藤单体在一定浓度下对HL-60细胞ADA有抑制作用，可能是ADA一种抑制剂。雷公藤内酯甲在抑制细胞ADA活性的同时也造成明显的细胞凋亡。     

不同产地雷公藤药材中总二萜内酯含量的测定

目的:比较不同产地雷公藤药材中总二萜内酯的含量。方法:采用Kedde显色法,在550 nm波长处进行总二萜内酯的含量测定。结果:比色法测定雷公藤总二萜内酯(以雷公藤甲素计)在7.8μg/mL～46.8μg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 5,平均加样回收率为96.86%,RSD为2.40%(n=6);江西产雷公藤总二萜内酯含量最高。结论:不同产地的雷公藤药材中总二萜内酯的含量变化较大,在临床用药时应引起重视。     

不同生长期辽宁省栽培五味子指标含量测定

目的：测定辽宁省8个产地不同生长期的五味子果实中5种木脂素类指标成分含量。方法：采用高效液相色谱法对五味子果实木脂素类指标成分含量进行测定。结果：不同生长期,各指标及指标总含量的最高值分别为：五味子醇甲（7.4785±0.4443）mg/g、五味子醇乙（2.7325±0.4542）mg/g、五味子酯甲（0.4397±0.1193）mg/g、五味子甲素（1.9215±0.3762）mg/g、五味子乙素（4.5677±0.6253）mg/g、指标总含量（17.0527±1.0826）mg/g。结论：就样品所得实验结果表明,除五味子酯甲外,其它4种指标成分及5种指标总含量在半成熟期时含量达到最大值。     

HPLC-DAD法研究雷公藤煨制后化学成分变化

目的:阐明雷公藤煨制减毒增效物质基础,提高其临床应用安全性。方法:采用HPLC-DAD法对雷公藤生品及其煨制品进行成分对比分析,根据对照品及紫外光谱特征进行鉴定,找出差异性成分。结果:雷公藤煨制后,南蛇藤肉桂酰胺碱,雷公藤定碱,雷公藤吉碱,雷公藤次碱,去甲泽拉木醛,雷公藤红素等10种成分含量显著降低。新产生成分12种,包括来源于雷公藤红素的煨制产物10种,来源于睛眯类生物碱的煨制产物2种。结论:雷公藤生物碱、去甲泽拉木醛和雷公藤红素均为雷公藤抗炎有效成分,并且毒性较大。结果表明生物碱、去甲泽拉木醛和雷公藤红素等成分变化可能是雷公藤煨制减毒增效的物质基础。     

不同生长期辽宁省栽培五味子指标含量测定

目的:测定辽宁省8个产地不同生长期的五味子果实中5种木脂素类指标成分含量。方法:采用高效液相色谱法对五味子果实木脂素类指标成分含量进行测定。结果:不同生长期,各指标及指标总含量的最高值分别为:五味子醇甲(7.4785±0.4443)mg/g、五味子醇乙(2.7325±0.4542)mg/g、五味子酯甲(0.4397±0.1193)mg/g、五味子甲素(1.9215±0.3762)mg/g、五味子乙素(4.5677±0.6253)mg/g、指标总含量(17.0527±1.0826)mg/g。结论:就样品所得实验结果表明,除五味子酯甲外,其它4种指标成分及5种指标总含量在半成熟期时含量达到最大值。     

HPLC法测定雷公藤提取物中雷公藤甲素及两种生物碱的含量

目的 建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定雷公藤提取物中雷公藤甲素、雷公藤精碱和wilfornine F的含量.方法 采用YMC-Pack ODS-A(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钠水溶液为流动相梯度洗脱,210 nm波长处检测,流速1.0 mL/min,温度25℃.结果 雷公藤甲素、雷公藤精碱和wilfornine F在一定范围内均呈良好的线性关系,平均加样回收率在98.81%～99.84%范围内,RSD≤1.42%(n=6).结论 该方法准确、重复性好,适用于雷公藤提取物的质量评价.     

一测多评法测定芹菜籽中芹菜甲素、芹菜乙素和新蛇床内酯

目的 建立一测多评法同时测定芹菜籽中芹菜甲素、芹菜乙素和新蛇床内酯的含量,验证该方法在芹菜籽中应用的准确可行性.方法 以芹菜籽原料药中主要成分芹菜甲素、芹菜乙素和新蛇床内酯为指标,在一定范围内建立芹菜甲素与芹菜乙素、芹菜甲素与新蛇床内酯的校正因子.测定芹菜甲素的含量,测得校正因子f芹菜甲素/芹菜乙素=0.226;用校正因子测定芹菜乙素和新蛇床内酯的含量,测得校正因子f芹菜甲素/新蛇床内酯=0.702,同时,采用外标法测定6批不同批次中3个成分的含量,以验证一测多评法的准确性和科学性.结果 不同仪器所得相对校正因子的RSD为4.4％～6.7％,同一台仪器不同色谱柱所得相对校正因子的RSD为2.3％～3.6％,建立的校正因子重现性良好,原料药中采用校正因子计算的含量值与外标法实测值之间没有明显差异.结论 在缺乏对照品的情况下,该方法可用于芹菜籽中多成分质量评价研究.     

雷公藤单体对胶质瘤细胞体外抑制作用的实验研究

目的：研究雷公藤单体对胶质瘤细胞的体外抑制作用。方法：MTT法测定3种雷公藤单体对胶质瘤细胞株SHG44、C6、U251的体外抑制作用；免疫组化法观察雷公藤甲素与雷公藤红素对SHG44胶质瘤细胞bax,bcl-2蛋白表达的变化。结果：雷公藤二萜类单体雷公藤甲素对胶质瘤细胞有极明显的抑制作用；雷公藤三萜类单体雷公藤红素的抑制作用次之。两者均使SHG44细胞bax表达增加，bcl-2表达下降。结论：雷公藤甲素与雷公藤红素对胶质瘤细胞有明显的抗肿瘤作用，其作用与促进bax表达，抑制bcl-2表达，促进细胞凋亡有关。     

甘草对雷公藤二萜内酯体内代谢产物的影响研究

目的：研究甘草对雷公藤甲素和雷公藤内酯酮体内代谢产物的影响,为阐明甘草对雷公藤的减毒增效作用机制奠定基础。方法采用LC-MS/MS法研究雷公藤甲素和雷公藤内酯酮单独给药以及与甘草联合给药后在大鼠尿液中的相应代谢成分,分析比较单独给药及联合给药后代谢产物种类和生成量的差异。结果在雷公藤甲素单独给药和与甘草联合给药的大鼠尿液中,均发现代谢产物5个：m/z（[M＋H]^＋）377,359,359,359,375;在雷公藤内酯酮单独给药和与甘草联合给药的大鼠尿液中,均发现代谢产物3个：m/z（[M＋H]^＋）413,397,375;各代谢产物生成量在单独给药组和联合给药组中有很大差异。结论雷公藤甲素和雷公藤内酯酮单独给药和与甘草联合给药后其部分代谢产物相同,但是代谢产物的生成量存在很大差异。     

-标多测法测定橘核中五种柠檬苦素类成分的含量

目的:建立一标多测(QAMS)法同时测定橘核中Ichangin、去乙酰基诺米林、诺米林、黄柏酮与柠檬苦素的含量。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法测定上述5种成分的含量,并进行方法学考察。选用Prevail C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 ml/min,柱温30℃,紫外检测波长215 nm,进样量10μl。采用QAMS法,以柠檬苦素为内参物,计算该成分与Ichangin、去乙酰基诺米林、诺米林、黄柏酮的相对校正因子,并考察相对校正因子的重现性。分别采用外标法和QAMS法对20批橘核药材进行含量测定,比较两种方法的测定结果。结果:所建立的HPLC分析方法,经线性关系、精密度、重复性、稳定性、加样回收率实验考察,均符合相关规定。以柠檬苦素为内参物,测得Ichangin、去乙酰基诺米林、诺米林、黄柏酮的相对校正因子,重现性良好。QAMS法测定的20批橘核药材中5种成分的含量,与外标法的测定值无显著性差异。结论:所建立的分析方法准确、可行,QAMS法可用于橘核中5种柠檬苦素类成分的含量测定。     

雷公藤甲素的半合成研究

以雷酚内酯为原料,经甲基化、氧化、去甲基化、还原、环氧化等七步反应合成了雷公藤甲素。其结构经红外光谱、核磁共振光谱、质谱确证。     

HPLC-DAD法测定炮制辅料吴茱萸汁中绿原酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱

目的 测定萸黄连的炮制辅料吴茱萸汁中3类组分的4个代表性成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯、绿原酸,为萸黄连炮制辅料吴茱萸汁的质量控制提供重要依据。方法 采用HPLC-DAD法,色谱柱为Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相：乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱程序;体积流量：1 mL/min;检测波长：205、225、324 nm;柱温：25 ℃。结果 绿原酸、吴茱萸内酯均为水溶性成分,在吴茱萸汁中的质量分数分别为 6.638、8.234 mg/g,吴茱萸碱和吴茱萸次碱均为脂溶性成分,在吴茱萸汁中的质量分数分别为0.406、0.380 mg/g。结论 萸黄连的炮制辅料吴茱萸汁中主要含有绿原酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱等成分,对这些成分进行测定,可为萸黄连炮制辅料吴茱萸汁的质量控制提供重要依据。     

雷公藤化学成分的研究

雷公藤Tripterygium wilfordiiHook．f．系卫矛科雷公藤属植物，用于治疗类风湿性关节炎、慢性肾炎、红斑狼仓、接触性皮炎等自身免疫性疾病，均有显著性疗效。为了更深入地认识和研究雷公藤，本实验将其根皮提取物经溶剂处理，硅胶柱色谱分离，初步得到4种化学成分。经过理化常数、光谱数据分析，并与对照品及文献报道的数据对照，鉴定了这4个化合物，分别为：雷公藤内酯甲（wilforlideA，Ⅰ）、雷公藤内酯三醇（triptriolide，Ⅱ）、雷酚新内酯（neotriptophenolide，Ⅲ）、雷公藤醌A（triptoquinonoic acid A，Ⅳ）。化合物Ⅳ首次从雷公藤中分得。     

8种雷公藤单体免疫抑制活性的筛选

目的筛选具有免疫抑制活性的雷公藤单体。方法以BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞为研究对象,用刀豆素A(Con A)及脂多糖(LPS)活化淋巴细胞,用噻唑盐(MTT)体外检测雷公藤单体对淋巴细胞的增殖反应。结果有1种二萜化合物及2种三萜类化合物表现了明显的免疫抑制活性,且随着浓度的增大,免疫抑制活性增强。结论雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲有明显的免疫抑制活性。     

基于一测多评法同时测定乌发丸中7种成分的含量

目的:建立一测多评(QAMS)法,同时测定乌发丸中梓醇、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B_1、马替诺皂苷、2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、异去甲基蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯的含量。方法:采用高效液相色谱法,选取Agilent SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.5%冰醋酸水溶液,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃。以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为内参物,建立其他6个成分的相对校正因子,并计算其含量。结果:梓醇、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B_1、马替诺皂苷、2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、异去甲基蟛蜞菊内酯和蟛蜞菊内酯分别在4.67～116.75、2.74～68.50、1.06～26.50、1.68～42.00、6.44～161.00、0.86～21.50、1.29～32.25μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.999 1),平均加样回收率及相对标准偏差(RSD)分别为98.79%(1.38%)、97.85%(1.05%)、97.29%(1.40%)、99.05%(0.83%)、100.19%(0.71%)、98.22%(0.96%)和96.98%(1.20%),QAMS法所测乌发丸中7种指标性成分的含量与外标法差异均无统计学意义(P 0.05)。结论:本研究建立的QAMS法简单、准确,可同时测定乌发丸中7种成分含量。     

西青果丙酮及水提取物体外抗氧化活性初步研究

目的 探讨西青果丙酮提取物和水提取物在3种评价体系下的体外抗氧化活性.方法 采用福林酚比色法测定西青果丙酮提取物和水提取物的总酚含量;利用清除1,1-二.苯基-2-苦肼基自由基(DPPH·)、2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS+·)评价法、还原法测定西青果两种溶剂提取物的抗氧化活性.结果 西青果丙酮提取物和水提取物总酚含量分别为(622.19±1.35)mg/g和(457.43±0.96) mg/g;两种溶剂提取物均表现出良好的抗氧化活性,对DPPH、ABTS自由基清除率的IC50值分别为8.427、19.575 μg/mL和20.273、33.064 μg/mL;对Fe3+均有一定的还原能力,其结果与浓度呈良好的量效关系,丙酮提取物还原效果最为明显.结论 西青果丙酮提取物和水提取物具有较强的抗氧化活性.     

大庆产胡芦巴种子中生物碱及总黄酮成分的研究

目的 对大庆产胡芦巴种子中生物碱及总黄酮进行定性及定量分析.方法 将植物的种子粉末进行提取,在酸性条件下提取物溶液分别与4种沉淀剂反应,判定提取物中有生物碱成分;利用HPLC法对种子提取物中胡芦巴碱做定量分析;继而利用紫外分光光度法,测定胡芦巴提取物中总黄酮的含量.结果 胡芦巴碱的含量为0.508mg/g,胡芦巴提取物中总黄酮的含量为9.488mg/g.结论 本实验测定了大庆产胡芦巴种子中生物碱及总黄酮的含量,为进一步研究该药材的有效成分提供了科学依据.