B超在测定不同方法消毒的骨形成蛋白成骨诱导活性中的意义

目的 探讨B超在测定骨形成蛋白（bone morpho-genetic protein，BMP）成骨诱导活性的意义，为BMP成骨诱导活性的测定提供一种新方法。方法 将自行提取的牛BMP（bBP）分别经环氧乙烷熏蒸消毒和10000Gyγ-射线照射消毒后埋入小鼠右、左后腿肌袋内，于术后3，5，7，14，21和28d行B超、X射线照相和组织形态学观察。结果 B超3，5和7d与对照组相同，均为正常组织回声，14，21和28d有软骨和骨组织回声，在此时间段内随时间延长回声增强。X射线照相3，5，7和14d无骨组织影像，21，28d有明显的新生骨征象。组织形态学观察3，5，7d有大量间充质细胞在BMP植入部位聚集，并诱导间充质细胞分化为成软骨细胞，14d有新生软骨和新生骨组织形成，21，28d可见大量的新生的成熟骨组织。环氧乙烷熏蒸和10000Gy γ-射线照射消毒的bBMP均有很强的成骨诱导活性。结论 B超、X射线照射和组织形态学观察结果在时间上有很强的一致性，证明B超作为一种新的BMP成骨诱导活性的检测手段是切实可行的。γ-射线照射消毒BMP更方便、更安全。     

双膦酸盐对骨形成蛋白诱导骨的作用

目的：研究双膦酸盐对骨形成蛋白（BMP）诱导骨的作用。方法：42只大白鼠背部植入BMP,诱导出异位骨后,将大白鼠分成实验组和对照组。实验组在BMP植入后第3～7周,每周腹腔注射双膦酸盐（YM175）3次, 剂量1 μg·kg^-1·d ^-1。对照组按同样的方式给予等量的生理盐水。在BMP植入第3、4、7和10周,将BMP诱导骨取出,采用显微放射照片（CMR）和HE染色方法观察双膦酸盐对骨形成蛋白诱导骨的作用。结果：BMP诱导骨3周时（即双膦酸盐未投药前）,在BMP植入体周边形成编织骨,大量破骨细胞出现在新生骨组织表面。在4周时,实验组和对照组新生骨组织均向BMP植入体内生长。在10周时,对照组骨细胞变小,实验组可观察到有规律地排列的板层状骨的特征。结论：双膦酸盐对骨形成蛋白诱导骨破骨骨吸收有明显的抑制作用。     

重组人BMP-2骨诱导中神经生长因子的表达

目的通过观察重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)异位诱导成骨过程中神经生长因子(NGF)的表达,探讨NGF在BMP骨诱导中的作用.方法采用ICR小鼠48只,随机分为实验组和对照组,行右侧股后部肌袋异位成骨模型,实验组植入含0.125 mg rhBMP-2胶原海绵复合物,对照组仅植入相同体积胶原海绵,分别于术后3、7、14、21 d取材,进行放射学、组织学及免疫组化检测.结果放射学和组织学检测均证实,rhBMP-2胶原海绵复合物具有良好的诱导成骨能力;术后第7 d,在软骨大量形成期,NGF阳性染色达到高峰,在成纤维细胞、软骨前体细胞、软骨细胞、肥大软骨细胞和成骨细胞中均有阳性表达;术后14、21 d,阳性细胞数量和染色强度有所回落.对照组未见成骨现象.结论首次证实在外源性BMP诱导成骨过程中有明显的NGF表达,提示NGF可能通过直接或间接的方式参与并协同BMP的诱导成骨过程.     

鼠骨折愈合过程中膜内化骨和软骨内化骨的细胞组织学变化

目的:观察骨折不同的愈合修复阶段中膜内化骨和软骨内化骨等细胞组织学变化.方法:利用鼠股骨闭合性骨折模型,取骨折后3～17 d骨痂标本,染色观察新生小梁骨、软骨、软骨内骨化和骨重建等细胞事件变化.结果:骨折后3 d出现膜内化骨,7 d出现成熟小梁骨,3～5 d出现软骨形成,7～9 d出现软骨内化骨,7～9 d出现骨小梁重建.结论:骨折愈合过程中存在高度有序的细胞组织形态学的变化.骨痂内的膜内化骨,软骨形成,软骨内化骨和骨重建等过程可同时或连续出现.     

重组人BMP-2骨诱导中神经生长因子的表达

目的通过观察重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)异位诱导成骨过程中神经生长因子(NGF)的表达，探讨NGF在BMP骨诱导中的作用。方法采用ICR小鼠48只，随机分为实验组和对照组，行右侧股后部肌袋异位成骨模型，实验组植入含0．125mg rhBMP-2胶原海绵复合物，对照组仅植入相同体积胶原海绵，分别于术后3、7、14、21d取材，进行放射学、组织学及免疫组化检测。结果放射学和组织学检测均证实，rhBMP-2胶原海绵复合物具有良好的诱导成骨能力；术后第7d，在软骨大量形成期，NGF阳性染色达到高峰．在成纤维细胞、软骨前体细胞、软骨细胞、肥大软骨细胞和成骨细胞中均有阳性表达；术后14、2ld，阳性细胞数量和染色强度有所回落。对照组未见成骨现象。结论首次证实在外源性BMP诱导成骨过程中有明显的NGF表达，提示NGF可能通过直接或间接的方式参与并协同BMP的诱导成骨过程。     

复合rhBMP2的异种骨的研制及成骨活性

目的：研制新型具有诱导成骨活性的异种骨植骨材料。方法：在重组合异种骨（RBX）基础上,以基因重组人BMP2（rhBMP2）取代从牛皮质骨中提取的牛BMP,与去抗原牛松质骨载体（BCB）复合,制成复合rhBMP2的异种骨（rhBMP2/BCB）,并采用小鼠股部肌袋模型,通过组织学、骨计量学方法检测rhBMP2/BCB的诱导成骨活性。结果：实验组（rhBMP2/BCB组）术后7d在小鼠肌袋可诱导软骨生成,14d形成纺织骨,21d改建成板状骨并形成大量骨髓;对照组（BCB组）于术后各时间点均未见有软骨成骨形成。实验组的碱性磷酸酶活性和钙含量均高于对照组,有非常显性差异（P＜0．01）。结论：rhBMP2/BCB具有较好的骨诱导能力,是一种较理想的植骨材料。     

可溶性骨形成蛋白及其转染细胞对异位骨形成的作用

0　引言　我们曾报道[1 ,2 ] 重组人骨形成蛋白 - 2成熟肽和rh BMP- 2 c DNA转染的 NIH- 3T3细胞对小鼠急性放射损伤有治疗作用 ,可促进受照小鼠己损伤的造血功能的恢复 .众所周知 ,BMP可诱导植入部位间质细胞分化为骨组织和软骨组织 .有人提出 ,在治疗放射损伤的同时 ,BMP是否会在非骨组织 ,如心脏、肝脏等重要脏器组织异位诱发骨组织或软骨组织 ,从而成为治疗的副作用 ?我们应用组织学观察的方法 ,对上述两种治疗方法是否引起心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等脏器骨组织发生的可能性进行了初步探索 .1　材料和方法1.1　动物与照射条…     

羊成骨蛋白诱导成骨的电子显微镜观察

电镜观察到,sBMP6mg小鼠肌肉内植入后3天,间充质细胞在植入区内聚集并可见由此分化而来的中间型细胞;术后7天,软骨细胞及软骨基质形成;术后14天,软骨细胞变性,骨母细胞及纤维母细胞功能活跃;基质钙化;术后21天,骨母细胞被钙化基质包埋形成骨细胞。sBMP的诱导作用促发了一个完整的骨发育过程,通过软骨内化骨、骨母细胞化骨和纤维母细胞化骨三条途径在局部形成骨组织。文内还讨论了sBMP的靶细胞和诱导成骨过程等问题。     

骨和软骨肉瘤中骨形成蛋白的免疫组织化学定位

用抗牛骨形成蛋白单克隆抗体(bBMP-McAb)研究了骨形成蛋白(BMP)在骨肉瘤及软骨肉瘤中的细胞定位。ABC法染色阳性12/14(骨肉瘤);4/4(软骨肉瘤)结果显示,BMP主要分布于骨和软骨肉瘤的肿瘤细胞胞浆及部分肿瘤性骨组织中,从而证实骨、软骨肉瘤都含有丰富的BMP。用bBMP-McAb染色不仅可以将骨肉瘤与纤维肉瘤等非骨源性肿瘤加以鉴别,而且可以根据BMP在肿瘤中的分布和含量,结合患者的临床情况可望对骨肉瘤进一步分类,为临床治疗提供依据。此外,对于软骨肉瘤内含有丰富的BMP的首次发现,揭示BMP可能与其它的骨疾患有密切的关系。     

骨形态发生蛋白和纤维蛋白复合物修复关节软骨全层缺损

目的　探讨骨形态发生蛋白/纤维蛋白载体(BMP/FG)复合物修复关节软骨缺损的效果。方法　30只新西兰种成年兔随机分为A,B,C三组,每只兔子左膝股骨髁间凹做一大小为4mm×5mm×25mm的全层关节软骨缺损。A,B组缺损内分别填充BMP/FG及FG,C组为空白。术后16周对缺损修复情况行大体形态和组织学观察。结果　BMP/FG组,植入物完全被吸收并被新生软骨替代,新生软骨特征与邻近正常软骨相似,而FG组和空白组大体形态和组织学特征基本相似,以纤维组织修复为主。结论　BMP/FG能在关节腔内诱导软骨再生,并能以透明软骨修复全层关节软骨缺损     

脱钙骨颗粒骨水泥骨形成蛋白复合材料配方优化研究

目的 探讨脱钙骨基质颗粒（DBM）、骨水泥（BC）、牛骨形成蛋白（bBMP)的最佳比例和最方便的复合方法。方法 提取bBMP,制备狗DBM,二者按1：25的质量比用直接掺合法和吸附法复合后,再用BC按不同的质量比复合,将复合后的材料行体外生物力学测定和扫描电镜观察,体内成骨诱导活性测定和植入实验。结果 bBMP与DBM直接掺合和吸附法复合后,所得材料的成骨诱导活性无差别。复合材料中DBM的质量比≤40%时,材料内部的大部分间隙＜100μm,空隙率＜20％,不利于新生血管长入和新骨形成。DBM的质量比≥80％时,DBM和BC不能复合在一起,从而失去塑形性,DBM的质量比在50％－75％的范围内,随DBM质量比的增加生物力学强度逐渐降低而成骨诱导和血运重建的质量越好。结论 bBMP与DBM复合以直接掺合法最方便而不影响复合材料的成骨诱导活性。DBM的质量比为50％－60％时,复合材料既具有相当的生物力学强度,又利于诱导新骨形成和血运重建,适宜于修复承重部位的骨缺损,比例为75％时可用于修复非承重部位的骨缺损。     

同种异体骨脱钙骨基质联合BMP修复兔桡骨骨缺损的实验研究

目的：探讨异体脱钙骨基质（DBM）骨泥复合骨形态发生蛋白（BMP）修复家兔桡骨节段性骨缺损的作用。方法：日本大耳白兔54只,雌雄不限,随机分为3组,A组：空白组（缺损区不植入任何材料）,B组：对照组（缺损区植入金世植骨灵）,C组：实验组（缺损区植入DBM骨泥）。建立家兔单侧桡骨骨缺损模型,采用同种异体骨DBM骨泥复合BMP进行修复,复合骨泥中加入骨胶原作为塑形剂,术后4、8、12周观察新骨生成情况,通过形态学、X线、组织学及计算机图像分析等观察指标,并与对照组及空白组进行比较,客观评价骨泥诱导成骨及骨缺损修复能力。结果：DBM与BMP复合骨泥易根据骨缺损大小塑形,术中操作简单。术后A组骨缺损未获骨性修复,B、C组骨缺损均获得骨性愈合,且新骨面积测定显示B、C组间成骨速度无明显差异（P〉0．05）,比A组快（P〈O．01）。结论：异体DBM骨泥复合BMP具有良好的骨修复作用。     

牛骨形态发生蛋白的提取及异位诱导成骨的研究

本研究从1kg牛长骨中提取出部分纯化的牛骨形态发生蛋白(bBMP)160mg.电泳显示其主要区带分子量在33.7～13.4ku(34.0～13.5kd)之间,包括bBMP的生物活性成份18.1ku(18.2kd)蛋白质。将bBMP植入NIH小鼠肌肉内,5天诱导出软骨细胞,10天形成骨组织,14天出现骨髓。软骨或骨的诱发率87.5%。作者观察到bBMP诱导成骨的方式是软骨内成骨,其过程可分为间质细胞增生期、软骨细胞演变期和骨形成期。     

牛骨形态发生蛋白复合煅烧骨治疗缺损的实验研究

目的：验证从牛皮质骨中提取的骨形态发生蛋白（bBMP)的异位诱导成骨能力,探讨煅桡骨（SB）作为某载体对骨缺损的治疗作用。方法：（1）将bBMP植入16只balb/c小鼠肌袋内,每周宰杀4只行细胞学检查,连续4周,（2）16只新西兰大白兔手术造成双侧桡骨1cm缺损,分别植入bBMP-SB和SB进行自身对照,分批宰杀后行X－线照片和组织学检查,结果：植入肌袋内的bBMP术后一周即可诱导软骨细胞形成,2周时可见编织骨,4周时可见小梁骨及骨髓成形,而骨缺损实验中,bBMP-SB组在软骨诱导,小梁骨的形成数量,骨折愈合等方面均明显优于单纯SB组,结论：（1）bBMP有强大的异位诱导成骨能力;（2）bBMP-SB复合骨可促进骨缺损愈合。     

牛骨形态发生蛋白复合煅烧骨治疗骨缺损的实验研究

目的 :验证从牛皮质骨中提取的骨形态发生蛋白 (bBMP)的异位诱导成骨能力 ,探讨煅桡骨 (SB)作为其载体对骨缺损的治疗作用。方法 :①将bBMP植入 1 6只balb/c小鼠肌袋内 ,每周宰杀 4只行细胞学检查 ,连续 4周。② 1 6只新西兰大白兔手术造成双侧桡骨 1cm缺损 ,分别植入bBMP -SB和SB进行自身对照 ,分批宰杀后行X -线照片和组织学检查。结果 :植入肌袋内的bBMP术后一周即可诱导软骨细胞形成 ,2周时可见编织骨 ,4周时可见小梁骨及骨髓成形。而骨缺损实验中 ,bBMP -SB组在软骨诱导、小梁骨的形成数量、骨折愈合等方面均明显优于单纯SB组。结论 :①bBMP有强大的异位诱导成骨能力 ;②bBMP -SB复合骨可促进骨缺损愈合     

牛骨形态发生蛋白异位诱导小鼠成骨的超微结构观察

目的：牛骨形态发生蛋白（ｂＢＭＰ）植入小鼠肌袋后可诱导血管周围的间充质细胞分化形成软骨和骨组织．但ｂＢＭＰ诱导异位成骨过程的超微结构研究报道甚少．本研究的目的是利用透射电子显微镜（ＴＥＭ）观察ｂＢＭＰ植入区间充质细胞向生骨细胞分化及成骨的超微结构变化．方法：将牛骨中提取的ｂＢＭＰ５ｍｇ植入小鼠股部肌间隙内，术后５，９，１４和２１ｄ取材，制备光镜及电镜标本，镜下观察组织超微结构的变化．结果：ｂＢＭＰ植入后５ｄ，植入区内发现大量肥大的间充质细胞及纤维母细胞样细胞聚集；术后９ｄ，成熟的软骨细胞出现并可见丰富的细胞外软骨基质；术后１４ｄ，软骨细胞变性，基质钙化明显，骨母细胞功能活跃；术后２１ｄ，骨母细胞深陷于钙化基质中形成骨细胞，骨髓腔出现，原始骨髓形成．结论：ｂＢＭＰ能诱导具有分化潜能的间充质细胞进行分化，产生一个完整的骨发育过程．     

pBMP/Ce-TZP陶瓷复合人工骨材料修复桡骨大段缺损的实验研究

目的：研究具有H—Z涂层的以氧化铈（CeO2）稳定的四方相氧化锆多孔陶瓷（Ce-TZP），与猪骨形态发生蛋白（pBMP）复合成的人工骨，用于骨缺损的修复。方法：将其pBMP／Ce-TZP复合人工骨和HA复合人工骨分别植入30只家兔桡骨大段缺损处，并植入后进行X线摄片和组织学检查。结果：pBMP／Ce-TZP复合人工骨与HA复合人工骨比较，pBMP／Ce-TZP复合人工骨在结构、理化性能和生物力学强度均占有明显优势，有利于诱导成骨能力和加速新骨形成，促进骨缺损的修复。结论：pBMP／Ce-TZP复合人工骨是目前较理想的骨移植材料。     

牦牛骨形态发生蛋白及其与陶瓷化异种骨复合修复兔桡骨缺损的实验研究

本实验采用yBMP和yBMP/CBB材料,修复1.5cm长的兔桡骨缺损。分yBMP和yBMP/CBB二个实验组。材料植入20天,缺损区均分别生成多量软骨及交织骨。40天,大量交织骨生成,其间出现骨髓组织。60天,板层骨增多。80天,板层骨进一步成熟,骨缺损修复。与之对照,空白组各期仅见两端形成交织骨。这表明:yBMP及yBMP/CBB对骨缺损的修复作用非常显著。     

注射型磷酸钙骨水泥/纤维蛋白胶作为BMP注射性载体的可行性研究

目的:了解以注射型磷酸钙骨水泥(ICPC)/纤维蛋白胶(FS)共同作为骨形态发生蛋白(BMP)复合载体的注射型骨修复材料在小鼠体内异位成骨的能力,探讨其作为注射性骨替代物的可行性. 方法:在小鼠肌袋随机注射或植入ICPC/FS/bBMP复合物、ICPC/FS复合物和单纯bBMP材料,术后2 wk, 4 wk取材,通过碱性磷酸酶测定和组织学检查,观察其异位诱导成骨能力. 并对术后4 wk时新生骨进行定量测定和统计学比较. 结果:ALP和组织学检查结果表明ICPC/FS/bBMP复合物有较多新骨形成,单纯bBMP诱导出少量骨,ICPC/FS复合物未见新生骨,诱导骨量有统计学意义(P＜0.05). 结论:可注射性ICPC/FS/BMP复合物具有良好的骨诱导活性,ICPC/FS是BMP的良好注射性载体之一.     

脱钙骨基质复合牛骨形态发生蛋白修复兔桡骨缺损实验的放射学评价

目的:对异体脱钙骨基质复合BMP修复节段性骨缺损能力进行放射学评价.方法:64只新西兰大白兔采用桡骨15 mm节段性骨缺损模型,随机分为4组,A组植入异体脱钙骨基质(Demineralized BoneMatrix,DBM)与牛骨形态发生蛋白(Bovine Bone Morphogentic Protein,bBMP)复合材料,B组植入异体DBM,C组植入异体骨粒,D组为空白对照组.术后4 w、8 w、12 w、16 w,进行放射学检查和相应的组织学检查.结果异体DBM与bBMP复合材料组X线和组织学检查显示骨愈合修复情况要明显优于异体DBM组、异体骨粒组和空白对照组.结论:DBM经bBMP复合后,可提高修复骨缺损的能力,是一种较为理想、具有高效成骨活性的植骨材料.