慢病毒介导miR-145对骨肉瘤MG-63细胞侵袭和迁移力的影响

目的 探讨慢病毒介导miR-145对成骨肉瘤细胞MG-63侵袭及迁移能力的影响。 方法 通过慢病毒携带miR-145表达载体转染骨肉瘤MG-63细胞,实验分为:转染组(转染miR-145阳性序列)、对照组(转染阴性对照序列)、空白组(PBS)。利用生物信息学软件预测血管内皮生长因子(VEGF)为miR-145的候选靶基因,利用双荧光素酶报告基因检测验证miR-145对靶基因VEGF的直接调控作用。实时荧光定量PCR检测基因表达,Western-blot检测蛋白表达,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移运动能力。 结果 与对照组比较,转染组细胞内荧光素酶活性明显下降(P<0.05); 与对照组和空白组比较,转染组miR-145 mRNA的表达量显著增加(P<0.05),VEGF mRNA及蛋白表达量显著减少(P<0.05),穿膜细胞数及细胞划痕愈合率均显著降低(P<0.05)。 结论 miR-145通过靶向VEGF基因,进而抑制骨肉瘤MG-63细胞的侵袭及迁移能力。     

miR-202通过降低肝癌细胞ROCK1表达抑制其迁移和侵袭

目的：研究微小RNA-202（miR-202）对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：通过实时定量PCR检测Hep3B、Huh7及HCCLM3人肝癌细胞和LO2人正常肝细胞中miR-202的表达水平。以miR-202表达水平最低的HCCLM3细胞为转染对象,转染miR-202模拟物或空白对照miRNA,以miR-202表达水平最高的Hep3B细胞为转染对象,转染miR-202抑制物或阴性对照miRNA,并利用实时定量PCR验证转染效率。采用Transwell迁移和侵袭实验检测过表达和敲低miR-202对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。生物信息学网站检索并应用荧光素酶报告基因实验验证miR-202的靶基因。实时定量PCR和Western blot检测miR-202靶基因的表达水平。结果：与正常肝细胞LO2相比,miR-202在肝癌细胞的表达水平显著降低;HCCLM3细胞转染miR-202模拟物后,细胞miR-202的表达水平显著增加;过表达miR-202后,HCCLM3细胞的迁移和侵袭能力显著降低;Hep3B细胞转染miR-202抑制物后,细胞miR-202的表达水平显著降低;敲低miR-202后,Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著增强;生物信息学检索及荧光素酶报告基因证明ROCK1基因为miR-202的靶基因。过表达miR-202可明显降低肝癌细胞中ROCK1基因的表达,而敲低miR-202可明显增加肝癌细胞中ROCK1基因的表达。结论：miR-202在肝癌细胞中低表达,miR-202通过抑制ROCK1的表达抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。     

miR-181b通过靶向调控N-myc下游调节基因2影响骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨miR-181b对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法培养骨肉瘤细胞,实时荧光定量PCR检测miR-181b在骨肉 瘤细胞中的表达。抑制miR-181b的表达,Transwell检测对骨肉瘤迁移和侵袭的影响;生物信息学分析miR-181b靶基因并采用 荧光素酶报告基因分析miR-181b和靶基因在骨肉瘤中是否直接作用,同时采用Western Blotting检测靶基因在骨肉瘤细胞中的 表达以及Transwell检测靶基因对骨肉瘤迁移和侵袭的影响。结果实时荧光定量PCR结果表明miR-181b在骨肉瘤细胞中高 表达。抑制miR-181b 的表达能够抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭;生物信息学分析表明N-myc 下游调节基因2（NDRG2）是 miR-181b直接作用的靶基因,荧光素酶报告基因分析验证了该结果;Western blotting检测表明NDRG2在骨肉瘤中低表达,而 抑制miR-181b 能够显著提高NDRG2 的表达。抑制miR-181b 的表达的同时抑制靶基因NDRG2 的表达,能够逆转抑制 miR-181b的表达对骨肉瘤细胞的迁移和侵袭的影响,从而显著提高骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。结论miR-181b在骨肉瘤中过 表达,NDRG2为miR-181b直接调控靶基因,抑制miR-181b能够提高NDRG2的表达从而抑制骨肉瘤细胞的迁移侵袭。     

miR-181靶向TIMP3调控胆囊癌细胞迁移及侵袭的实验研究

目的 研究miR-181靶向金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)调控胆囊癌细胞迁移及侵袭的作用.方法 培养胆囊癌GBC-SD细胞,转染miR-181 mimic、阴性对照(NC)mimic、TIMP3 siRNA、NC siRNA、表达 TIMP3的重组质粒、空白质粒,荧光定量PCR检测miR-181的表达量,Western blot检测TIMP3的表达量,Transwell检测细胞迁移和侵袭活力,生物信息学分析及荧光素酶报告基因实验验证miR-181靶向TIMP3;皮下注射转染miR-181 mimic或NC mimic的GBC-SD细胞后建立荷瘤鼠模型,检测移植瘤质量及miR-181、TIMP3表达量.结果 细胞实验显示:转染miR-181 mimic促进细胞迁移及侵袭、抑制细胞中TIMP3的表达及双荧光素酶报告基因的荧光素酶活力;转染TIMP3 siRNA促进细胞迁移及侵袭;转染表达TIMP3的重组质粒后,miR-181 mimic促进细胞迁移、侵袭的作用减弱.动物实验显示:转染miR-181 mimic使移植瘤的质量减轻、移植瘤中TIMP3的表达增加.结论 miR-181具有促进胆囊癌细胞迁移和侵袭的作用,靶向抑制TIMP3是介导该作用的分子机制之一.     

miR-1-3p靶向TNKS2抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-1-3p靶向端锚聚合酶2(TNKS2)基因对宫颈癌Ca-Ski细胞增殖、迁移及侵袭的调控作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测正常宫颈鳞状细胞及不同宫颈癌细胞中miR-1-3p的表达情况,选取宫颈癌Ca-Ski细胞进行转染实验,利用脂质体转染法将miR-1-3p模拟物(miR-1-3p mimics)及模拟物对照(NC mimics)分别转染至Ca-Ski细胞,分别记为miR-1-3p mimics组和miR-NC组,将未经转染处理的Ca-Ski细胞记为Blank组(空白对照)。qRT-PCR检测各组Ca-Ski细胞中miR-1-3p的表达,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,通过生物信息学软件分析和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1-3p和TNKS2靶向关系,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中TNKS2蛋白表达。结果 miR-1-3p在宫颈癌细胞中的表达显著低于正常宫颈鳞状细胞(P0.05)。转染miR-1-3p mimics 48 h后,Ca-Ski细胞中miR-1-3p的表达显著升高(P0.05)。过表达miR-1-3p能够明显抑制Ca-Ski细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P0.05)。生物信息学软件分析显示miR-1-3p和TNKS2 3’UTR存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验显示TNKS2是miR-1-3p的靶基因,Western blot检测结果显示miR-1-3p可抑制TNKS2的表达。结论 miR-1-3p可靶向TNKS2基因抑制宫颈癌Ca-Ski细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-503靶向调控CXCL9抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭

目的:研究miR-503对人皮肤黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭能力的影响及相关机制.方法:实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测黑色素瘤组织及细胞系中miR-503的表达水平;将miR-503模拟物(miR-503 mimics)或miR-503抑制物(miR-503 inhibitors)瞬时转染A375细胞,Transwell实验检测转染后细胞迁移及侵袭能力的变化;生物信息学预测miR-503与CXCL9的结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测其靶向结合关系;将CXCL9单独转染或与miR-503共转染A375细胞后,检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:黑色素瘤组织中miR-503的表达明显低于癌旁组织(t=6.602,P=0.000),且黑色素瘤细胞(A375、SK-MEL-1及SK-MEL-5)中miR-503的表达也均明显低于人表皮黑色素细胞HEM(F=19.445,P=0.000);A375细胞转染miR-503 mimics后迁移及侵袭能力明显受到抑制(P=0.017,P=0.049),而转染miR-503 inhibitors后迁移及侵袭能力明显增强(P=0.004,P=0.000);CXCL9是miR-503的直接靶基因;CXCL9能促进A375细胞的迁移和侵袭(P=0.000,P=-0.009),但其作用效果能被miR-503逆转.结论:miR-503通过靶向调控CXCL9而抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭.     

miR-503靶向调控CXCL9抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭

目的:研究miR-503对人皮肤黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭能力的影响及相关机制.方法:实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测黑色素瘤组织及细胞系中miR-503的表达水平;将miR-503模拟物(miR-503 mimics)或miR-503抑制物(miR-503 inhibitors)瞬时转染A375细胞,Transwell实验检测转染后细胞迁移及侵袭能力的变化;生物信息学预测miR-503与CXCL9的结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测其靶向结合关系;将CXCL9单独转染或与miR-503共转染A375细胞后,检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:黑色素瘤组织中miR-503的表达明显低于癌旁组织(t=6.602,P=0.000),且黑色素瘤细胞(A375、SK-MEL-1及SK-MEL-5)中miR-503的表达也均明显低于人表皮黑色素细胞HEM(F=19.445,P=0.000);A375细胞转染miR-503 mimics后迁移及侵袭能力明显受到抑制(P=0.017,P=0.049),而转染miR-503 inhibitors后迁移及侵袭能力明显增强(P=0.004,P=0.000);CXCL9是miR-503的直接靶基因;CXCL9能促进A375细胞的迁移和侵袭(P=0.000,P=-0.009),但其作用效果能被miR-503逆转.结论:miR-503通过靶向调控CXCL9而抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭.     

miR-185对肝癌细胞生长增殖及侵袭迁移的影响

目的 探讨miR-185对人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721生长增殖、侵袭迁移能力的影响.方法 构建miR-185过表达载体、合成miR-185反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO),经脂质体转染肝癌细胞HepG2和SMMC-7721.利用CCK-8和Transwell小室实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力;生物信息学数据库预测结合基因芯片结果确定miR-185的候选靶基因NRl D1;利用实时荧光定量PCR技术和Western blot检测miR-185对细胞中NRlD1基因表达水平的影响;荧光报告载体实验验证miR-185对靶基因的调控作用.结果 miR-185在人肝癌细胞中的mRNA表达水平显著低于正常肝细胞(P＜0.01);过表达miR-185使人肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低,下调肝癌细胞中NRl D1基因的mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.01);荧光报告载体实验证明miR-185可以通过作用于NRlDl mRNA的3’端非翻译区(untranslated region,UTR)下调其表达水平(P＜0.05).结论 miR-185能抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移能力,NRlD1是miR-185的直接靶基因.     

miR-197靶向调节CD82对结肠癌细胞侵袭转移的影响

【摘要】 目的 探讨下调microRNA-197 (miR-197)对结肠癌HCT116细胞侵袭转移能力的影响及其作用机制。方法 将对数生长期HCT 116细胞随机分为miR-197反义寡核苷酸（inhibitor）组、无义序列阴性对照（NC）组、空白对照（Mock）组,采用脂质体介导转染法,将miR-197反义寡核苷酸（miR 197 inhibitor）转染HCT116细胞。运用荧光定量PCR (qRT-PCR)检测miR-197的表达水平;通过生物信息学预测miR-197靶基因,应用Western blot法检测CD82蛋白的表达;采用transwell小室实验检测HCT116细胞的侵袭、迁移能力的改变。结果 miR-197反义寡核苷酸转染HCT116细胞后,inhibitor组miR-197的表达较NC组和Mock组明显降低(P＜0.05);下调miR-197的表达后,inhibitor组的CD82蛋白表达较其余两组显著增加(P＜0.05);转染miR-197反义寡核苷酸的HCT116细胞的侵袭与迁移能力inhibitor组较NC组、Mock组均降低 (P＜0.05)。结论 下调结肠癌HCT116细胞中miR-197的表达能抑制肿瘤细胞的侵袭和转移,其机制可能与其靶点CD82表达增加有关,这将为结肠癌的治疗提供新的靶点。     

MicroRNA-338-3p通过下调SMO表达抑制结直肠癌细胞的侵袭与迁移

目的 探讨microRNA-338-3p (miR-338-3p)对结直肠癌细胞侵袭与迁移能力的影响及其调控机制.方法 脂质体分别转染miR-338-3p前体(pre-miR-338-3p)和miR-338-3p特异性抑制剂(miR-338-3p-inhibitor)至人结直肠癌SW620及SW480细胞系中,应用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)检测细胞中miR-338-3p表达状况,运用半定量RT-PCR及Westernblot分析Smoothened(SMO)mRNA及蛋白表达状况,Transwell侵袭、迁移实验检测转染前后细胞体外侵袭迁移能力;在经anti-SMO-siRNA预先处理的SW480细胞中转染miR-338-3p-inhibitor,检测转染细胞中SMO蛋白的表达变化以及侵袭能力的改变.结果 通过生物信息学网站预测SMO可能是miR-338-3p的作用靶基因;SW620细胞中miR-338-3p表达水平较SW480细胞减低,而SMO蛋白增高.转染pre-miR-338-3p至SW620细胞,miP-338-3p表达上调,SMO蛋白表达降低,且肿瘤细胞的侵袭及迁移能力下降;而转染miR-338-3p-inhibitor至SW480细胞后,miR-338-3p表达下降,SMO蛋白表达上升,肿瘤细胞侵袭、迁移能力增强,且此种增强效应可被an-ti-SMO-siRNA所部分逆转,说明miR-338-3p确实是通过抑制SMO而发挥抗癌作用.结论 MiR-338-3p通过下调SMO表达而抑制结直肠癌细胞侵袭与迁移.     

抗精子抗体和抗子宫内膜抗体与不孕及流产的关系

目的　探讨抗精子抗体（ＡｓＡｂ）与抗子宫内膜抗体（ＥＭＡｂ）在不孕、流产中的作用及二者关系,进一步 揭示不孕、流产的病因。方法　采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）同时检测３４５例不孕、流产妇女血清中的ＡｓＡｂ与 ＥＭＡｂ,按ＡｓＡｂ检测结果分阳性组和阴性组,比较两组ＥＭＡｂ阳性率的差异。结果　原发不孕及自然流产妇女中, ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率高达１６．６７％和１９．５１％,而ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率高达４３．６４％和４２．８６％,显著高于 ＡｓＡｂ（－）组（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）。继发不孕妇女中ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率为１８．１８％,ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率 为３２．２％,二者无显著性差异（０．０１＞Ｐ＞０．０５）。结论原发不孕及自然流产妇女中因个体免疫反应差异使某些 人易对体内、外物质发生免疫反应而产生抗体,从而导致不孕或流产。     

气血与足月妊娠分娩关系的探讨

论述足月妊娠分娩的发动和维持依靠气的推动、温煦、气化、固摄功能和血的营养、濡润功能。顺利分娩既要气血充足，还要气顺血和。临床研究结果表明调补气血，是促进产程，预防难产的重要手段。实验研究结果阐明调补气血中药加强产力、促进产程主要是从改善产妇全身情况，提高机体抗应激、抗疲劳、耐缺氧能力，即所谓使产妇气血充足调和，充分发挥气血在分娩过程中的生理作用。     

水疗联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响

目的探讨新生儿游泳联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响。方法将经阴道顺产分娩的正常新生儿100例随机分为两组，观察组（水疗联合抚触组）50例，对照组（单纯沫浴组）50例。①测定两组10日、28日的体重、身长、上臂围；②观察记录胎便转黄时间，测定皿清胆红素；③记录24h睡眠时间。结果两组新生儿10日、28日体重、身长、上臂同增长有显著差异（P〈0．05），两组新生儿5日时，胎便转黄时间及黄疸指数比较均有显著性差异（P〈0．01），两组睡眠时间比较有统计学意义（P〈0．05），两组并发症比较无统计学意义（P〉0．05）。结论新生儿水疗联合抚触可促进新生儿的生长发育，能加速胎粪的早排出，减轻生理性黄疸程度，有效地降低新生儿高胆红素血症的发病率，提高睡眠质量。     

亚硝基脲类和亚硝基硫脲类的理化性质及致突变能力

本题选择N,N′-二甲基亚硝基脲(DMNU),N,N′-二乙基亚硝基脲(DENU),及其类似物N,N′-二甲基亚硝基硫脲(DMNTU)、N,N′-二乙基亚硝基硫脲(DENTU)为代表,测定了这些化合物的水解反应速度、脂溶性(HPLC的logk′值)、水解产物和致突变能力。证明了硫脲的脂溶性大于脲的脂溶性。DMNTU对TA100菌株的致突变能力最强,其它较弱。