基因芯片探讨再生障碍性贫血小鼠脾脏基因表达

目的 研究正常与再生障碍性贫血(从)小鼠脾脏的基因表达谱，大规模分析再生障碍性贫血时基因表达水平的变化，探讨从的发病机制。方法 造成免疫介导再生障碍性贫血模型，从正常与再生障碍性贫血小鼠脾脏分别提取mR-NA，经反转录分别用Cy3、CY5荧火标记，获得两组的cDNA探针，与博星基因芯片表达谱杂交，扫描仪扫描结果，用分析软件分析统计。结果 模型小鼠外周血白细胞、血小板、血色素较正常小鼠组均有明显降低，两组比较有非常显著性差异，骨髓活检，发现模型组骨髓增生极度低下，造血细胞容量减少，脂肪细胞增多，问质水肿等改变。模型组和正常组差异表达基因共100条(4．88％)，其中AA时上调基因29条(1．41％)，下调基因71条(3．47％)。下凋基因占差异表达基因的多数(71％)。结论 利用基因芯片技术结合动物模型能大规模、高通量地研究从的基因表达谱，初步筛选出疾病相关基因，对进一步阐明从在基因水平上的发病机制有十分重要的作用。     

叶绿素铜钠盐对AA模型基因表达谱的实验研究

目的探讨叶绿素铜钠盐治疗再生障碍性贫血(AA)的作用机制。方法造成免疫介导 AA 小鼠模型,第15天从正常组、模型组及叶绿素铜钠盐组小鼠脾脏分别提取 mRNA,经反转录分别用 Cy_3、Cy_5荧光标记,获得 cDNA 探针,与博星基因芯片表达谱杂交,扫描仪扫描结果,用分析软件分析统计。结果模型组和正常组差异表达基因共100条(4.88%),其中 AA 时上调基因29条,下调基因71条。模型组和叶绿素铜钠盐组差异表达基因共53条(2.59%),其中上调基因25条,下调基因28条。结论叶绿素铜钠盐通过下调模型小鼠脾脏 H2-Bf 的 mRNA 基因表达,上调 CASH 基因表达达到治疗 AA 的目的。     

叶绿素铜钠盐对AA模型基因表达谱的实验研究

目的探讨叶绿素铜钠盐治疗再生障碍性贫血(从)的作用机制。方法造成免疫介导AA小鼠模型，第15天从正常组、模型组及叶绿素铜钠盐组小鼠脾脏分别提取mRNA，经反转录分别用Cy3、cy5荧光标记，获得eDNA探针，与博星基因芯片表达谱杂交，扫描仪扫描结果，用分析软件分析统计。结果模型组和正常组差异表达基因共100条(4．88％)，其中AA时上调基因29条，下调基因71条。模型组和叶绿素铜钠盐组差异表达基因共53条(2．59％)，其中上调基因25条，下调基因28条。结论叶绿素铜钠盐通过下调模型小鼠脾脏H2-Bf的mRNA基因表达，上调CASH基因表达达到治疗AA的目的。     

免疫介导的再生障碍性贫血小鼠模型脾脏T bet的表达水平及其意义

目的 探讨在再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)小鼠模型中,T-bet蛋白在脾脏的表达水平及意义.方法 将40只BALB/c小鼠随机分为正常对照组和AA模型组,每组20只,用免疫组织化学方法 检测AA模型组脾脏组织石蜡切片中T-b-et蛋白表达水平,并对T-bet蛋白与骨髓造血功能进行相关性分析.结果 ①AA模型组小鼠脾脏组织石蜡切片中T-bet蛋白表达水平[(4.25±0.50)%]明显高于正常对照组[(0.78±0.15)%,P＜0.01].②AA模型组小鼠脾脏T-bet蛋白表达与中性粒细胞绝对值(ANC)及网织红细胞相对值呈负相关(r分别为-0.510和-0.648,均P＜0.05),而与血小板数无明显的线性相关关系.结论 在AA发病机制中T-bet可能起一定作用.     

基因芯片分析釉基质蛋白对hBMSCs基因表达谱的影响

目的 应用基因芯片技术分析釉基质蛋白(EMPs)对人骨髓基质细胞(hBMSCs)基因表达谱的影响.方法 全骨髓法体外传代培养hBMSCs.以200 μg/mL EMPs刺激hBMSCs作为实验组,以正常培养的hBMSCs作为对照组.培养5 d后,选择含4 096种人类基因的cDNA基因芯片进行检测和分析.运用实时PCR方法对呈差异表达基因中的4条进行扩增和检测,以验证基因芯片分析结果.结果 hBMSCs经EMPs刺激后,有27条差异表达基因,其中18条基因表达上调,9条基因表达下调.经实时PCR检测的4条差异表达基因结果与基因芯片结果一致.结论 应用基因表达谱芯片可筛选经EMPs诱导后hBMSCs的差异表达基因.为进一步研究EMPs促进牙周组织再生的分子学机制奠定了基础.     

基因芯片分析釉基质蛋白对hBMSCs基因表达谱的影响

目的应用基因芯片技术分析釉基质蛋白(EMPs)对人骨髓基质细胞(hBMSCs)基因表达谱的影响。方法全骨髓法体外传代培养hBMSCs。以200μg/mLEMPs刺激hBMSCs作为实验组,以正常培养的hBMSCs作为对照组。培养5d后,选择含4096种人类基因的cDNA基因芯片进行检测和分析。运用实时PCR方法对呈差异表达基因中的4条进行扩增和检测,以验证基因芯片分析结果。结果hBMSCs经EMPs刺激后,有27条差异表达基因,其中18条基因表达上调,9条基因表达下调。经实时PCR检测的4条差异表达基因结果与基因芯片结果一致。结论应用基因表达谱芯片可筛选经EMPs诱导后hBMSCs的差异表达基因。为进一步研究EMPs促进牙周组织再生的分子学机制奠定了基础。     

骨髓间充质干细胞治疗再生障碍性贫血的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）治疗再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）模型鼠的可行性。方法建立免疫介导AA小鼠模型。输入体外增殖培养的BALB/c小鼠骨髓MSC,作为MSC组,15只;用未治疗的AA模型小鼠作为第一对照组（模型组）,15只;正常BALB/c小鼠作为第二对照组（正常组）,10只。把MSC输注到实验组小鼠体内,分别于第1周、第2周、第3周、第4周观察各组小鼠的存活率、血常规、骨髓形态学变化等各项指标。结果模型组小鼠,3只于第2周内死亡,7只于第3周内死亡,2只于第4周内死亡,28d存活率20.0%;MSC组,4只于第3周内死亡,28d存活率73.3%,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。AA小鼠模型组与MSC组在8d时外周血象明显下降,14d时模型组外周血象仍明显降低,而MSC组开始回升,至28d血象基本恢复正常。骨髓行形态学检查显示模型组骨髓增生明显减低,有核细胞数明显减少,由大量脂肪细胞填充骨髓,而MSC组骨髓增生活跃,脂肪细胞较少。结论骨髓间充质干细胞可以提高再生障碍性贫血小鼠存活率,改善骨髓造血功能,对再生障碍性贫血模型鼠有治疗作用。     

参芪扶正注射液对再生障碍性贫血小鼠脾脏T-bet表达的影响

目的观察参芪扶正注射液对再生障碍性贫血(以下简称再障)小鼠的疗效及其对Th1细胞转录因子T-bet的影响,探讨参芪扶正注射液在再障治疗中的免疫调节作用。方法将小鼠随机分成正常组、模型组及用药组,用药组给予参芪扶正注射液腹腔注射治疗,正常组及模型组给予生理盐水对照治疗,治疗第11天观察外周血、骨髓象及T-bet蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠外周血象计数、骨髓造血细胞明显降低,T-bet蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,用药组小鼠外周血象计数、骨髓造血细胞明显升高,T-bet表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参芪扶正注射液能改善贫血症状,降低再障小鼠脾脏组织中转录因子T-bet的表达水平,逆转Th1型反应,调节免疫异常。     

60Co-γ照射后早期小鼠肝组织基因表达谱

目的:以基因芯片技术研究辐射后小鼠肝脏的基因表达谱,从分子水平探讨辐射引起小鼠肝脏损伤的机制.方法:采用小鼠基因表达谱芯片(4096个基因)对60Co-γ照射后48 h小鼠肝组织基因表达谱进行研究.RT-PCR验证基因芯片结果.结果:与正常小鼠相比,辐射后小鼠肝组织有124条基因差异表达,78条下调,46条上调.其中57条基因的功能已知,这些差异表达的基因按功能可分为6类:DNA修复和应激蛋白,细胞骨架,离子通道和转运蛋白,信号转导,免疫蛋白,代谢调控,其中下调基因主要为细胞骨架基因,而上调基因主要为细胞周期调控蛋白和转录因子.RT-PCR结果表明,Hspa5、Rasa3、Nqol基因的表达和芯片结果一致.结论:辐射造成的肝损伤具有多靶点、多层次及多通路的特点.     

以基因芯片技术研究Kkay小鼠2型糖尿病相关基因

目的以基因芯片技术研究Kkay2型糖尿病小鼠的差异表达基因。方法以包含8192条小鼠的cDNA基因表达谱芯片研究Kkay2型糖尿病小鼠肝脏的基因表达谱。结果共筛选出差异表达基因154条,包括全长基因68条,表达序列标识(EST)86条;其中40条基因表达增加,114条表达降低。结论多数已知功能基因的表达异常与以往的研究结论是一致的;cDNA基因芯片技术能够高通量分析糖尿病相关基因。     

基因芯片研究糖尿病肾病大鼠肾皮质基因表达

目的：研究正常与糖尿病肾病大鼠肾脏的基因表达谱,大规模分析糖尿病时基因表达水平的变化。方法：（1）实验大鼠分为两组,一组为正常对照组,另一组为糖尿病组;（2）从肾皮质中抽提mRNA,经反转录分别用Cy3,Cy5荧光标记,获得两组动物来源的cDNA探针;（3）cDNA探针与Biodoor基因表达谱芯片杂交,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果（1）18．4％的基因表达谱发生明显的变化,其中12条基因在糖尿病时表达量明显下降,而323条基因在糖尿 时表达量明显上升;（2）已报道基因占了差异表达基因总数的18．8％左右,大多数已报道基因在糖尿病时的表达模式与其他作者的报道类似。结论：利用基因芯片技术结合实验动物模型能大规模,高通是地研究糖尿病的基因表达谱,初步筛选出选出疾病相关基因,对进一步阐明疾病在基因水平上的发病机制有十分重要的作用。     

叶酸脂质体包裹的MYCN siRNA在裸鼠体内靶向治疗作用的初步研究

目的研究叶酸受体为靶向的脂质体包裹MYCN基因小干扰性RNA在神经母细胞瘤裸鼠骨髓、骨转移模型中的靶向性及治疗作用。方法 16只成功建立神经母细胞瘤骨髓、骨转移模型的裸鼠,将其随机分为靶向性研究组（4只）和疗效性研究组（12只）。靶向性研究组裸鼠静脉给予CY3荧光标记叶酸脂质体包裹的MYCN siRNA,荧光显微镜检测CY3在体内瘤组织及重要器官的荧光强度。疗效性研究组12只裸鼠随机分MYCN siRNA组和无关siRNA组,静脉分别给予叶酸脂质体包裹的MYCN siRNA与叶酸脂质体包裹的无关siRNA,采用荧光定量PCR检测肿瘤组织MYCN mRNA表达,原位细胞凋亡检测法（TUNEL）观察肿瘤细胞凋亡数。结果 CY3荧光标记的叶酸脂质体MYCN siRNA给药8 h后,荧光主要分布在肿瘤组织内,MYCN siRNA组瘤组织中MYCN mRNA的表达量明显较无关siRNA组降低（P〈0.05）,MYCN siRNA组凋亡细胞数量高于无关siRNA组（P〈0.05）。结论①叶酸脂质体MYCN siRNA经静脉给药后主要靶向瘤组织,叶酸脂质体是肿瘤基因治疗的有效载体;②叶酸脂质体MYCNsiRNA在体内显著下调肿瘤MYCN mRNA的表达,促进肿瘤细胞凋亡,有望成为神经母细胞瘤治疗的新药物。     

肿瘤转移相关基因的表达谱研究

目的：运用基因表达谱芯片技术对肿瘤转移相关基因的表达谱进行研究。方法：对临床切除的肝癌和胰腺癌组织及相应的对照正常组织进行总ＲＮＡ抽提,纯化后的ｍＲＮＡ进行逆转录制备杂交探针,应用ＢｉｏＤｏｏｒ４０９６和ＢｉｏＤｏｏｒ１２８００的全长基因ＤＮＡ芯片筛选与肝癌和胰腺癌转移相关的基因。杂交后的信号用ＳｃａｎＡｒｒａｙ３０００扫描,结果用ＩｍａＧｅｎｅ３．０软件分析。结果：对肝癌和胰腺癌基因表达谱进行分     

自拟地圣珠水煎剂对血管性痴呆小鼠海马IL-1β、IL-6的影响

目的观察自拟地圣珠水煎剂对血管性痴呆(VD)模型小鼠脑海马组织中IL-1β、IL-6的影响。方法 45只小鼠随机分为假手术组、模型组、中药组各15只,后2组采用夹闭小鼠双侧颈总动脉造成脑缺血再灌注脑损伤模型,而后中药组给予地圣珠水煎剂,模型组、假手术组给予等量生理盐水,2周后采用ELISA法测定小鼠模型脑海马组织中IL-1β、IL-6的水平。结果与假手术组相比,模型组小鼠脑海马IL-1β、IL-6水平显著升高(P<0.05),而与模型组比较,中药组IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.05)。结论地圣珠水煎剂能够通过下调脑海马组织中IL-1β、IL-6的水平,干扰炎性反应继发损伤过程,从而达到对VD的满意干预效果。     

WHV／myc转基因小鼠肝癌发生过程中c—jun,c—fos和c—H—ras基因的表达

用核酸分子原位杂交的方法，检测了ＷＨＶ／ｍｙｃ转基因小鼠肝癌发生于过程中ｃ－ｊｕｎ，ｃ－ｆｏｓ和ｃ－Ｈｒａｓ基因的表达情况。正常小鼠肝脏中可检测出上述三种基因呈低水平的表达。１０天龄转基因小鼠肝脏中这三种基因的表达与正常同龄小鼠相拟，而４月龄转基因小鼠肝脏中三种基因的表达强度明显高于下沉小鼠，且杂交信号的分布范围广。肿瘤形成阶段，仍可在肝肿瘤结节中检测到这三种癌基因较弱的表达信号。结果表明，在ＷＨ     

小鼠载脂蛋白E基因的组织表达谱分析

目的：探讨小鼠载脂蛋白E（apoE）基因的组织表达特点。方法：提取小鼠的肝、脑和心等17个组织的RNA,采用RT—PCR的方法对apoE基因在上述组织中的表达进行研究。结果：apoE基因在肝组织表达最强,其次是脊髓和脑,肺、肾、心、脾、胸腺、小肠、胃、膀胱、血液、肾上腺、子宫、胰腺和主动脉也有不同程度的表达,但在腹肌中几乎不表达。结论：小鼠的apoE基因组织表达谱与人的apoE基因组织表达谱有较高的一致性,与猪的相比差异也不大。     

人鼻咽癌组织中转录因子相关基因的差异表达分析

目的 用cDNA微阵列膜比较鼻咽癌组织及正常组织的基因表达谱,研究鼻咽癌组织中转录因子相关基因的差异表达,为进一步探讨差异表达基因的调控机制奠定基础.方法 24例鼻咽癌组织总RNA和正常对照总RNA(24例正常鼻咽组织RNA等质量混合)分别经逆转录探针标记与微阵列膜杂交.然后用Pathway4.0软件分析杂交结果,并用RT-PCR反应验证微阵列杂交结果.结果 在1625个鼻咽癌差异表达基因中,共有转录因子相关基因35个,12个基因表达上调,23个基因表达下调.结论 在鼻咽癌组织中,多个转录因子相关基因的表达水平发生了变化,这些转录因子在鼻咽癌组织的基因表达调控中发挥重要作用.     

肿瘤转移相关基因cDNA芯片的制备与应用

目的建立制备肿瘤转移相关基因cDNA基因芯片的方法,并探讨其在肿瘤转移表达谱应用方面的意义。方法选择了399个已知转移相关基因克隆,经PCR扩增纯化后,以Cartesian Pixsys 5500芯片点样仪点布于多聚赖氨酸包被的玻片上;采用Cy3-dUTP和Cy5-dUTP双重荧光标记人大肠癌和肺癌细胞、正常组织、大肠癌和肺癌组织总RNA并与阵列进行杂交。结果经ScanArrayTM 4000共聚焦荧光扫描仪检测,图像背景均匀,信号清晰,效果满意。对大肠癌细胞系和组织标本及肺癌标本表达基因扫描结果行联合聚类分析发现:两种癌的基因表达大多数相同,仅少数有差别,有30种在两种转移癌中呈持续上调或下调的基因,包括运动因子基因、粘附分子、蛋白水解酶、癌基因、抑癌基因、抑制或促进凋亡基因以及诱导血管增生和信号转导的基因等。结论优化的cDNA基因芯片制备技术用于基因表达分析有较高的效率和可靠的实用性能。检测的肿瘤转移相关基因的表达在两种癌无明显差别,表明不同癌其浸润和转移的分子机制大致相同。     

骨髓间充质干细胞移植在卵巢早衰小鼠卵巢及生育功能重建中的作用

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植在卵巢早衰小鼠卵巢及生育功能重建中的作用.方法 一次性腹腔注射环磷酰胺和白消安建立卵巢早衰小鼠模型,将实验动物分为建模组、移植组和空白对照组.建模后14 d,将绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠的BMSCs经尾静脉注射至移植组小鼠体内,取等量生理盐水经尾静脉注射至建模组和空白对照组小鼠体内.建模后14 d及BMSCs移植2个月检测各组血清卵泡刺激素(FSH)和雌二醇(E2)水平,BMSCs移植2个月观察BMSCs在卵巢组织的定位及卵巢颗粒细胞凋亡情况,记录各组超促排卵后的获卵数、受精率、卵裂率、囊胚形成率,以及与雄性小鼠合笼后妊娠及生育子代数量.结果 BMSCs移植后2个月,移植组卵巢间质内可见大量绿色荧光细胞和标记的BMSCs,但并不表达FSH受体;FSH水平和颗粒细胞凋亡指数显著低于建模组(P＜0.05),E2水平及获卵数及受精率、卵裂率、囊胚形成率均显著高于建模组(P＜0.05),但各项指标仍显著低于空白对照组(P＜0.05);建模组无小鼠妊娠,移植组中2只小鼠妊娠,分别生育外观正常仔鼠4、2只.结论 BMSCs可定位于卵巢间质,显著降低卵巢颗粒细胞凋亡指数,改善卵巢内分泌功能,提高小鼠生育能力.