反向钠钙交换体参与低钾加重的缺血再灌注后的心功能损伤

目的观察低钾灌注液（含3.1 mmol/L K＋的KH液）对缺血再灌注后对心功能的影响,并评价反向钠钙交换体在此效应中的作用。方法离体灌流大鼠心脏接受1 h缺血/1 h再灌注处理,通过记录左心室发展压（LVDP）、左心室舒张末压（LVEDP）的变化,评价不同处理对心脏功能的影响。结果正常钾KH液（含5.9 mmol/L K＋的KH液）灌注心脏在接受缺血再灌注处理后,LVDP恢复至缺血前（58.1±8.3）%,LVEDP升高至（23.2±1.7）mm Hg。与正常钾KH液灌注条件相比,低钾KH液灌注使得缺血再灌注处理后LVDP进一步降低（P〈0.01）,LVEDP进一步升高（P〈0.01）。10μmol/L KB-R7943（反向钠钙交换体抑制剂）改善低钾灌注液的作用显著大于正常钾KH液。结论低钾KH液灌注加重缺血再灌注后的心功能损伤,其作用与激活反向钠钙交换体活性有关。     

褪黑素通过抑制挛缩减轻大鼠离体心脏的缺血再灌注损伤

目的 探讨褪黑素（Mel）抑制挛缩改善大鼠离体心脏缺血再灌注（IR）损伤的作用及机制。方法 采用Langendorff离体心脏灌流方法模拟缺血再灌注模型,40只SD大鼠按随机数字表法分为4组（10只/组）。正常对照组（Control）：正常灌注175 min;IR组：全心缺血45 min,再灌注120 min;Mel+IR组：用Mel（5 μmol/L）灌注1 min,全心缺血45 min,用Mel（5 μmol/L）再灌注5 min,Krebs-Henseleit液再灌注115 min;挛缩抑制剂2,3-丁二酮单肟（BDM）干预缺血再灌注组（BDM+IR）：用BDM（20 mmol/L）灌注1 min,全心缺血45 min,用BDM（20 mmol/L）再灌注5 min,KH液再灌注115 min。以心肌死亡面积、caspase-3活性、细胞色素c（cytochrome c）和cleaved caspase-3蛋白表达检测各组心肌损伤程度;以HE染色、冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、肌钙蛋白（I cTnI）含量、左心室舒张末压（LVEDP）和电镜观察肌原纤维收缩带的形成评价各组心脏挛缩程度;检测心肌组织中ATP含量的变化。结果 与Control组相比,IR组心肌死亡面积、caspase-3活性、cytochrome c和cleaved caspase-3蛋白表达显著增加（P<0.01）;同时,冠脉流出液中LDH活性和cTnI含量明显增加,再灌注末LVEDP显著抬升,HE染色显示心肌纤维发生明显断裂,ELISA检测发现ATP含量显著降低（P<0.01）;另外,透射电镜结果表明IR组肌节过度收缩,形成明显的肌原纤维收缩带;而给予Mel和BDM处理后,可显著减小心肌死亡面积、aspase-3活性、cytochrome c和cleaved caspase-3蛋白表达,还可明显抑制LDH活性、cTnI含量和LVEDP,减少心肌纤维断裂,并增加胞内ATP含量;更为重要地是,Mel和BDM能减轻IR引起的肌节过度收缩,并抑制收缩带的形成。结论 Mel可通过抑制挛缩明显改善心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与增加心肌细胞内ATP含量,减轻心肌机械性损伤引起的肌膜撕裂,减少细胞内容物的漏出有关。     

2,3-丁二酮单肟改善大鼠离体心脏钙反常损伤的作用及机制

目的探讨挛缩抑制剂2,3-丁二酮单肟（2,3-butanedione monoxime, BDM）改善大鼠离体心脏钙反常损伤的作用及其机 制。方法32只SD雄性大鼠随机分为4组：正常对照组、BDM对照组、钙反常组和BDM干预组。大鼠离体心脏行Langendorff 灌流,记录左室内压（left ventricular pressure, LVP）、左室舒张末压（left ventricular end-diastolic pressure, LVEDP）,并计算左室 发展压（left ventricular developed pressure, LVDP）评价心功能;测定复灌期冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）的含量反映心肌损 伤;2、3、5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法评价心肌梗死面积的变化;TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数;Western blot法检测 cleaved caspase-3和细胞色素c（cytochrome c）蛋白的表达。结果与正常对照组相比,BDM（20 mmol/L）对照组大鼠心脏左室 功能、心肌梗死面积和凋亡指数及cleaved caspase-3和细胞色素c蛋白的表达,无显著性变化（P>0.05）;钙反常组LVEDP显著抬 升,LVDP为0,冠脉流出液中LDH含量明显增多（P<0.01）,cleaved caspase-3和细胞色素c蛋白的表达以及凋亡指数明显增加 （P<0.01）,心脏组织几乎全部死亡（P<0.01）;BDM（20 mmol/L）干预钙反常组大鼠心脏心梗面积显著减小（P<0.01）,LVEDP降 低、LVDP部分恢复（P<0.01）,LDH释放减少（P<0.01）,cleaved caspase-3和细胞色素c蛋白表达量以及凋亡指数明显降低（P< 0.01）。结论BDM明显抑制急性钙超载引起的挛缩和细胞凋亡,改善心功能,减轻大鼠离体心脏钙超载损伤,是一种潜在的缺 血再灌注心肌保护药物。     

辣椒素降低线粒体氧化应激水平拮抗心脏缺血再灌注损伤的研究

目的 探讨辣椒素（CAP）对心脏缺血再灌注损伤的保护作用及可能机制。方法 24只SD雄性大鼠随机分为4组（ n=6):①对照组,②缺血再灌注组（IR组）,③CAP干预缺血再灌注组（CAP+IR组）,④辣椒素受体拮抗剂辣椒平（CAPZ）预处理后加CAP干预缺血再灌注组（CAPZ+CAP+IR组）。采用大鼠离体心脏Langendorff灌流方法,再灌注30 min末以左室发展压（LVDP）和左室舒张末压（LVEDP）评价心脏功能。测定再灌注开始后前5 min冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）的含量。再灌注120 min后取心脏,采用2、3、5氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法评价心肌梗死面积的变化;HE染色观察心肌纤维形态学变化;线粒体氧化应激检测试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）。再灌注10 min取心脏组织,Western blot检测细胞色素c和caspase3蛋白表达。结果 与对照组相比,IR组LVEDP升高、LVDP降低（ P<0.01）,心肌梗死面积增大（ P<0.01）,心肌纤维排列紊乱,线粒体SOD活性降低、MDA质量摩尔浓度增加（ P<0.01）,冠脉流出液中LDH含量增多（ P<0.01）,caspase3、细胞色素c蛋白的表达量增加（ P<0.01）;与IR组比较,CAP+IR组LVEDP降低、LVDP部分恢复（ P<0.01）,心肌梗死面积减小（ P<0.01）,心肌纤维断裂减少,线粒体SOD活性增加,MDA质量摩尔浓度减少（ P<0.01）,冠脉流出液中LDH含量减少（ P<0.01）,caspase3和细胞色素c蛋白表达量降低（ P<0.01）;但CAPZ可阻断CAP的上述保护作用。结论 CAP可通过降低线粒体氧化应激减少缺血再灌注引起的细胞坏死和凋亡,改善心脏功能,减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤。     

抑制CaMKII减轻线粒体氧化应激可改善离体心脏缺血再灌注损伤

目的探讨钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ（CaMKII）在离体心脏缺血再灌注（IR）损伤中的作用和可能机制。方法采用大 鼠离体心脏缺血再灌注（IR 45 min/120 min）模型,将40只大鼠随机分为对照组（Control）、KN-93药物对照组（2.5 μmol/L KN- 93）、IR组和CaMKII特异性抑制剂KN-93干预缺血再灌注组（KN-93+IR）,以左室心脏功能、冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH） 活性和心肌肌钙蛋白（cTnI）含量、心肌梗死面积评价心脏损伤程度,Western-blot检测CaMKII磷酸化（p-CaMKII）、CaMKII氧 化（ox-CaMKII）和PLN磷酸化（p-PLN）蛋白的表达,试剂盒检测线粒体超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）的含 量。结果与Control组相比,KN-93组各项指标均无明显变化;IR组心脏功能、线粒体SOD的活性降低（P<0.01）,而心肌梗死面 积、冠脉流出液中LDH活性和cTnI 含量、p-CaMKII、ox-CaMKII和p-PLN的表达、线粒体MDA的含量均明显升高（P<0.01）; KN-93干预IR组可明显改善心脏功能（P<0.01）,增加线粒体SOD活性,减小心肌梗死面积、LDH活性、cTnI含量、p-CaMKII、 ox-CaMKII和p-PLN的表达以及线粒体MDA含量（P<0.01）。结论CaMKII参与离体心脏缺血再灌注损伤,抑制CaMKII可通 过降低线粒体氧化应激进而减轻离体心脏缺血再灌注损伤。     

反向钠钙交换体在大鼠心脏钙预处理中的作用

目的探讨钙预处理时反向钠钙交换体对抗钙矛盾损伤的作用及机制。方法25只SD大鼠随机等分为5组：正常对照（Control）组、钙矛盾（Ca PD）组、钙预处理（CPC）组、反向钠钙交换体抑制剂（KB-R7943）＋CPC组和KB-R7943＋Ca PD组。采用离体大鼠心脏Langendorff逆行灌注模型,观察各组心脏冠状动脉流量（CF）、左心室发展压（LVDP）、左心室内压变化速率（dp/dt）及冠状动脉循环流出液心肌肌钙蛋白I（cTnI）浓度的变化,HE染色观察各组心脏组织形态。结果与Ca PD组相比,CPC组CF、LVDP、dp/dt均显著提高（P〈0.001）,冠状动脉循环流出液中cTnI水平显著降低（P〈0.001）。而钙预处理过程中加入反向钠钙交换体抑制剂KB-R7943,其心肌保护作用均被明显减弱（P〈0.05）。结论钙预处理能够有效对抗钙矛盾对心肌造成的损伤,其机制涉及钙预处理时钠钙交换体反向交换活性的上调。     

大鼠在体心肌缺血再灌注损伤组织间液钙离子动态与胞膜钠钙交换体表达

目的检测大鼠心肌在体缺血再灌注损伤(IR)组织间液钙离子浓度,比较IR前后心肌胞膜钠钙交换体(NCX)mRNA表达水平,探讨其对钙超载的意义。方法 12只SD大鼠随机分为IR组和对照组,以微透析技术连续收集心肌组织间液标本,原子吸收光谱法检测钙离子浓度。IR组通过结扎(20min)后松解(60min)冠状动脉前降支造成心肌缺血再灌注,结束时收取左心室缺血区和右心室心肌行NCX mRNA定量PCR检测,实验前后采血检测血钙和肌钙蛋白T(cTnT)。对照组免除结扎、松解前降支,其余操作与IR组一致。结果 IR组血浆cTnT浓度显著升高[对照组vs IR组,ng/mL:(1.62±0.60)vs.(4.29±2.22),P=0.031]。IR组心肌组织间液钙离子浓度在缺血期无明显变化,再灌注20min显著下降,心肌析出液钙离子浓度与对照组存在显著性差异[对照组vs.IR组,ng/mL:(224±31)vs.(136±39),P=0.002]。血浆Ca2+浓度实验前后无显著差异。心肌细胞膜NCX mRNA表达水平在组间和组内均无显著差异。结论大鼠在体心肌缺血20min再灌注60min,组织间液钙离子浓度在缺血期无明显变化,再灌注期迅速下降,这种变化趋势与胞膜NCX表达无关。     

钙库操纵钙内流和钠钙交换体在卡巴胆碱引起的气管平滑肌收缩中的作用

目的 探讨钙库操纵钙内流(SOCE)和钠钙交换体(NCX)在卡巴胆碱引起的气管平滑肌收缩中的作用.方法 采用小鼠离体气管实验,观察NCX特异性阻断剂KB-R7943、电压依赖型钙通道阻断剂尼非地平、Orai1阻断剂BTP2对卡巴胆碱引起的气管收缩的抑制效应.结果 KB-R7943和BTP2显著阻断了累积浓度卡巴胆碱引起的小鼠气管收缩和卡巴胆碱引起的SOCE介导的气管收缩,而尼非地平未显著阻断卡巴胆碱引起的气管收缩.结论 NCX和Orai1都参与介导卡巴胆碱引起的气管平滑肌收缩,Orai1主要参与卡巴胆碱引起的起始阶段的瞬时收缩,NCX主要参与后期的持续收缩,而起始阶段的Orai1介导的钙内流可能是激活NCX的前提条件,阻断Orai1的同时也会导致后期NCX引起的收缩阻断,两者共同参与介导卡巴胆碱引起的收缩.     

钠钙离子交换体介导的钙超载对造影剂诱导NRK52E细胞损伤的影响

目的:本研究探讨钠钙离子交换体(NCX)是否参与了造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤及反向模式钠钙离子交换体抑制剂KB-R7943对造影剂诱导的肾小管上皮损伤的影响。方法:鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)被分成6组:正常对照组、造影剂组、甘露醇组、钙离子拮抗剂(CCB)组、KB-R7943(10-5mol/L)和KB-R7943(10-6mol/L)组。造影剂作用1 h后,细胞损伤采用LDH检测,细胞形态变化及细胞凋亡分别由倒置显微镜和流式细胞仪检测;细胞内钙采用共聚焦微镜测定;钠钙离子交换体mRNA表达采用RT-PCR测定。结果:造影剂作用1 h后,细胞损伤、细胞凋亡、细胞内钙进行性增加,显著高于相同渗透压甘露醇组;KB-R7943显著改善了上述异常,且较相同浓度CCB具有更好的效果并显示出剂量效应;钠钙离子交换体mRNA表达没有变化。结论:经反向模式钠钙离子交换体导致的细胞内钙超载参与了造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤;反向模式钠钙离子交换体抑制剂KB-R7943以呈剂量方式对造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤发挥保护作用。     

脑缺血预处理对离体大鼠心脏再灌注损伤的影响

目的:研究脑缺血预处理对离体大鼠心脏再灌注损伤有无保护作用.方法:采用离体大鼠缺血再灌注模型,22只雄性SD大鼠随机分成单纯缺血复灌组(IR),经典预处理组(IPC),脑缺血预处理组(BPC),在Langendorff装置上对大鼠离体心脏进行灌流.比较分析各组左室舒张末期压力(LVEDP),左室发展压(LVDP)和心肌梗死面积.结果与I/R组比较,脑缺血预处理能明显增加复灌各个时间点的LVDP恢复率,抑制LVEDP的增加(P＜0.01),明显减小心肌梗死范围;且与经典预处理组比较差异无显著性.结论:脑缺血预处理对离体大鼠的心脏有保护作用,其保护程度与经典预处理的保护作用相似.     

钾通道参与高铁血红素诱导的心肌保护作用

目的:研究血红素氧化酶1的诱导剂高铁血红素在对抗大鼠心肌缺血-复灌损伤中的作用及其相应机制。方法:利用离体大鼠心脏Langendorff灌流模型,观察心功能、心肌梗死面积等指标的变化。结果:腹腔注射高铁血红素后24 h,可明显改善缺血-复灌心脏(30 m in缺血/2 h复灌)的收缩功能,减少复灌期乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸磷酸(CK)的释放,缩小心肌梗死面积。在腹腔注射高铁血红素前给予线粒体KATP通道阻断剂5-HD或肌膜KATP通道阻断剂HMR-1098均可取消高铁血红素引发的心肌保护作用。在高铁血红素预处理后24 h,缺血/复灌前10 m in给予K ca通道阻断剂pax illine,与高铁血红素组相比,心肌梗死面积扩大,心脏收缩功能下降。结论:高铁血红素预处理可对抗心肌缺血-复灌性损伤,其作用可能与激活KATP通道和K ca通道有关。     

褪黑素在大鼠离体心脏急性钙超载损伤中的作用

目的：观察褪黑素(melatonin,Mel)对大鼠离体心脏急性钙超载损伤的保护作用。方法：将32只大鼠随机 分为4组：对照组(Control)、褪黑素组(Mel)、钙反常组(calcium paradox,CaP)和Mel干预钙反常组(Mel+CaP)。大鼠离 体心脏行Langendorff灌流,建立钙反常模型;观察左室发展压、心肌梗死面积、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性、细胞色素c及caspase-3蛋白的表达变化;HE染色观察心肌纤维形态学变化。结果：与Control组相比, CaP组心肌几乎全部梗死(P<0.01),冠状动脉流出液中LDH活性显著增加(P<0.01),心肌纤维排列紊乱,细胞色素c和 caspase-3蛋白表达均上调(P<0.01);Mel(10 μmol/L)干预钙反常组心脏损伤各项指标均明显降低(P<0.01)。结论：Mel可 明显减轻大鼠离体心脏急性钙超载诱导的损伤。     

七氟烷后处理通过调节Bcl-2家族蛋白表达减轻离体大鼠心肌细胞凋亡

目的 研究七氟烷后处理对离体大鼠心肌细胞凋亡蛋白表达的影响.方法 雄性SD大鼠30只,体重230～250 g,使用随机数字表法将实验动物随机分为3组(n=10):假手术组,缺血再灌注组(I/R组),七氟烷后处理组(SPC组).采用Langendroff离体心脏灌注模型,除假手术组外其余两组平衡灌注30 min,全心缺血40min,再灌注120 min.SPC组在再灌注即刻给予2.5%(约1.0MAC)七氟烷10 min后改用普通Krebs-Henseleit(K-H)液灌注.记录平衡灌注末,再灌注30、60、90、120min时左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左室内压上升最大速率(+dp/dt)、左室内压下降最大速率(-dp/dt)、心率(HR)以及冠脉流量(CF).分光光度法测量肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH).再灌注末TTC染色法测定心肌梗死面积.Western印迹法测定凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达情况.结果 SPC组LVSP、LVDP、±dp/dt和CF在再灌注30 min后各时点均高于I/R组(均P＜0.05),LVEDP均低于I/R组(均P＜0.05);HR较I/R组高,但差异无统计学意义(P＞0.05).SPC组LDH和CK释放量均低于I/R组(均P＜0.05),梗死面积低于I/R组(22.2%±2.8%比44.9%±6.6%,P＜0.05).与I/R组比较,SPC组Bcl-2表达高,Bax表达低(均P＜0.05).结论 七氟烷后处理可改善心功能,降低心肌梗死面积,通过调节凋亡蛋白表达减轻离体大鼠心肌细胞凋亡.

Abstract：

Objective To explore the effects of sevoflurane postconditioning on ischemic/reperfused myocardial apoptosis.Methods Isolated perfused rat hearts were randomly assigned into 3 groups:shamoperation ( sham), ischemia/reperfusion (I/R) and sevoflurane postconditioning (SPC).Except for the sham group, the hearts were subjected to 40 min global myocardial ischemia and 120 min reperfusion.Left ventricular systolic pressure (LVSP), left ventricular developed pressure (LVDP), left ventricular enddiastolic pressure ( LVEDP), maximum increase rate of LVDP ( + dp/dt), maximum decrease rate of LVDP ( - dp/dt), heart rate (HR) and coronary flow (CF) were measured at baseline, R (reperfusion) 30 min, R60 min, R90 ain and R120 min.Creatine kinase (CK) and lactate dehydrogenase (LDH) were measured at 5 min and 10 min post-reperfusion.Infarct size was determined by triphenyltetrazolium chloride staining at the end of reperfusion.The expressions of Bcl-2 and Bax were determined by Western blot.Results The values of LVSP, LVDP, ± dp/dt and CF were higher while that of LVEDP was lower in the SPC group than the I/R group at all time points of reperfusion ( P ＜ 0.05 ).The releases of CK and LDH and infarct size were significantly reduced in the SPC group versus the I/R group (22.2% ±2.8% vs L/R:44.9% ±6.6%, P ＜0.05).The expression of Bcl-2 increased significantly while that of Bax decreased in the SPC group verus the I/R group.Conclusion Sevoflurane postconditioning may improve myocardial functions, reduce infarct size and attenuate myocardial apoptosis.And the modulated expression of apoptotic proteins plays an important role in sevoflurane-induced myocardial protection.     

Myocardial protection of immature rabbits with an ATP- sensitive K+ channel opener pinacidil

Objective To investigate the effectiveness of pinacidil, an opener of ATP- sensitive K(+) channels, in protecting the myocardium of immature rabbit hearts from ischemic r eperfusion injury. Methods Rabbit hearts underwent 30 min of global normothermic ischemia followed by 30 mi n of reperfusion on the modified Langendorff apparatus. Fifty- two isolated hea rts of 3-4 week- old immature rabbits were divided into 4 groups randomly. Duri ng ischemia, 3 different cardioplegic solutions were administered intermittently by infusion every 15 min (20-25 ml each time in all groups). Group 1: con trol group (n=13); group 2: Krebs- Henseleit (K- H) solution with potassium (16 mmo l/L) (n=13); group 3: K- H solution with potassium (16 mmol/L) and pinacidil (5 0 μmol/L) (n=13); group 4: K- H solution with potassium (16 mmol/L), pinacidi l (50 μmol/L) and glibenclamide (10 μmol/L) (n=13). The pre- ischemic and p ost- ischemic myocardial functions were assessed by the percentage recovery of t he left ventricular developed pressure (LVDP); the left ventricular end- diastol ic pressure (LVEDP); both the positive peak and negative peaks of the first deri vative of the left ventricular pressures (±dp/dt(max)); coronary flow; the level of creatine kinase (CK), lactic dehydrogenase (LDH) and aspartate transcar bamoylase (AST) in coronary sinus venous effluent; and by myocardial ultrastruct ural changes. Results Before myocardial ischemia, there were no significant differences among the four groups in any of the parameters mentioned above. Post- ischemic recovery of LV DP, LVEDP, ±dp/dt(max), coronary flow, the level of CK, LDH and AST, and my ocardial ultrastructural changes were better in group 3 than those in the three other groups.Conclusions As a new and effective composition, pinacidil can significantly improve myocardi al protection from cardioplegia for immature rabbit hearts.     

培哚普利对慢性心功能不全大鼠心肌肌浆网Ca^2＋泵功能？…

目的 探讨血管紧张素转移酶抑制剂（ＡＣＥＩ）干预慢性心功能不全对心肌肌浆网（ＳＲ）Ｃａ＾２＋泵活性和Ｃａ＾２＋摄取功能的影响及意义。方法 ８０只大鼠分为心功能不全组（Ｆ组）,培哚普利组（Ｐ组）,对照组（Ｃ组）。通过结扎大鼠左冠脉建立慢性心功能不全模型,以培哚普利进行干预,对照观察血流动力学,左室心肌ＳＲ Ｃａ＾２＋泵活性,ＳＲ Ｃａ＾２＋摄取Ｖｍａｘ、Ｋｄ值和最大摄取量。结果 Ｆ组左室舒张末压（Ｌ