关于甲醛固定石蜡包埋组织提取DNA质量的探讨

目的:探讨甲醛固定石蜡包埋组织(FFPET)提取DNA后PCR扩增产物检测率的提高。方法:应用从FFPET提取的DNA,PCR反应扩增β-Globin(110bp),分析纯化前后DNAPCR产物的检测率。结果:纯化后的DNA模板PCR反应取得高质量目的基因。结论:纯化后能有效去除不能通过蛋白酶K消化和有机萃取法去除的PCR反应抑制因子,利于PCR反应成功。     

提高石蜡包埋组织中提取DNA质量的实验研究

目的 :确定从石蜡包埋组织中提取 DNA的最佳条件。方法 :改变石蜡切片厚度、组织脱蜡时间、消化液蛋白酶 K浓度、组织消化时间等参数 ,组合出 96种不同提取 DNA的条件 ,比较各种条件下所提取 DNA的数量和质量。结果 :各种条件均可以提取出一定数量的 DNA,但有些条件所提取的 DNA不适合于做 PCR及 DNA序列测定。结论 :从石蜡包埋组织中提取 DNA的最佳条件为 ,1 0 .0 μm组织切片 ;切片脱蜡 2次 ,脱蜡时间分别为 2 h和 1 2 h;消化液中蛋白酶 K浓度5 0 0 mg· L-1;组织消化 1 2 h     

一种从口腔拭子中提取DNA的简易方法

目的应用简便方法提取口腔拭子中DNA,并用特异引物扩增,评估该方法的应用价值。方法用1×PCR缓冲液、MgCl2及蛋白酶K混合裂解液在PCR仪上对口腔拭子进行消化,并以该产物为模板,应用角蛋白5基因1号外显子及1号染色体上2个微卫星标记特异性引物扩增,目的片段分别用于测序和毛细管电泳。结果通过上述方法可获得用于PCR反应及后续基因测序及微卫星标记毛细管电泳分型的足量DNA。结论利用PCR缓冲液、MgCl2及蛋白酶K混合裂解液从口腔拭子中提取DNA是一种简单、高效、快速、低成本的方法,更是一种无创的采样方法。     

甲基化特异性PCR技术的质量控制及改进

目的:改进甲基化特异性PCR(MSP)技术并控制实验质量.方法:采用改进的MSP法检测正常胃粘膜及胃癌组织中eaveolin-1基因的甲基化状况.运用饱和酚-氯仿抽提法提取DNA,其中石蜡包埋组织连续切片厚度为8μm;采用热启动PCR:反应体系为25μL、变性温度设定为95.5℃、循环数设定为30.结果:新鲜组织较石蜡包埋组织更适于MSP实验,但福尔马林固定石蜡包埋组织同样可用于MSP实验,并且8μm厚的石蜡包埋组织能获得较完整的DNA链.热启动PCR效果良好:25μL体系敏感性优于50μL体系,95.5℃可以使含CpG岛的DNA链解链更完全,30个循环足以扩增小于150 bp的目的片段.结论:采用改进的MSP技术,可获得较好的DNA模板,提高实验的灵敏度和成功率,更适于甲基化的研究.     

石蜡包埋组织中DNA甲基化特异性PCR技术

目的 以石蜡包埋组织提取的DNA为模板进行DNA甲基化特异性PCR(MSP)检测,研究其可行性.方法 35例石蜡包埋肺癌组织DNA样品制备和亚硫酸氢盐修饰后进行MSP扩增检测.结果 石蜡包埋组织MSP检出率与文献采用新鲜组织标本报道一致.结论 MSP通过选择合适的实验条件,可适用于石蜡包埋组织DNA甲基化分析.     

从石蜡包埋和甲醛浸泡组织中提取DNA进行PCR扩增

对石蜡色埋组织用二甲苯或水浴法脱石蜡,乙醇进行梯度水化,溶液A裂解细胞,对经抽提、纯化后的DNA进行PCR扩增,获得了较满意的效果。同时对石蜡包埋组织与甲醛浸泡组织中的DNA受损程度进行了比较,此工作为能使肿瘤等症病将在基因水平上进行回顾性分析提供了一个良好开端.     

石蜡包埋表皮组织中β-连环蛋白基因扩增技术的建立

目的∶建立从石蜡包埋表皮组织中提取DNA ,进行 β 连环蛋白基因 3号外显子聚合酶链反应 (PCR)扩增的方法。方法∶从 14例不同重量、不同年代石蜡包埋皮肤鲍温氏病病变组织中提取DNA ,再进行 β 连环蛋白基因 3号外显子PCR扩增。结果∶5mg组织提取DNA的PCR扩增未获成功 ,而用 10mg和 2 0mg组织提取的DNA可成功扩增 ;已包埋 10年以上的 5例标本仅 2例成功扩增 ,而 9例 10年以内的标本全部成功。结论 :10mg及 10mg以上且 10年以内的石蜡包埋表皮组织可用于目标基因PCR扩增。     

浅谈从石蜡包埋组织中提取DNA的方法及体会

用于聚合酶链式反应(PCR)扩增的从石蜡包埋组织中提取DNA的方法在理论上非常简单,但在实际操作中并非如此.必须先溶解组织切片中的石蜡,然后处理组织释放DNA.在实验过程中每一步骤都必须严格要求,否则提取的DNA就不理想,影响下一步实验.本文就从石蜡包埋组织中提取 DNA 的方法谈一些体会.     

肝癌石蜡包埋组织miRNA提取方法的优化

目的改进并优化从肝癌(HCC)甲醛固定石蜡包埋组织(FFPE)提取并检测微小RNA(miRNA)的方法。方法使用miRNeasy FFPE试剂盒探讨提取HCC石蜡组织miRNA最佳切片厚度及蛋白酶K作用时间。实时定量RT-PCR检测miR-221、miR-146a、let7-a、miR-191、miR-103及RNU6B的表达量。将HCC细胞制成石蜡组织,对比同一细胞系新鲜细胞及石蜡包埋细胞的各个miRNA表达量差异。结果切片厚度30μm,蛋白酶K作用时间48h时提取miRNA效果最佳。各HCC细胞系及临床HCC石蜡组织均有不同水平的miRNA-221、miR-146a、let7-a、miR-191、miR-103及RNU6B表达。同一细胞系新鲜细胞与石蜡包埋后的各miRNA表达无明显差别。结论改良后的miRNeasy FFPE提取方法能提取石蜡组织中的miRNA,可重复性强,可推广用于临床各种石蜡包埋组织的miRNA提取。     

石蜡包埋表皮组织中β-连环蛋白基因扩增技术的建立

目的：建立从石蜡包埋表皮组织中提取DNA，进行β-连环蛋白基因3号外显子聚合酶链反应(PCR)扩增的方法。方法：从14例不同重量、不同年代石蜡包埋皮肤鲍温氏病病变组织中提取DNA，再进行β-连环蛋白基因3号外显子PCR扩增。结果：5mg组织提取DNA的PCR扩增未获成功，而用10mg和20mg组织提取的DNA可成功扩增；已包埋10年以上的5例标本仅2例成功扩增，而9例10年以内的标本全部成功。结论：10mg及10mg以上且10年以内的石蜡包埋表皮组织可用于目标基因PCR扩增。     

微波照射对小白鼠DNA的影响

实验检测了微波照身地小白鼠核ＤＮＡ的影响及修复情况，结果表明照射后ＤＮＡ会产生单、双链断裂、双链缺口等损伤，睾丸组织ＤＮＡ最敏感，提示微波在计划生育的方面的有益应用。     

金电极上自组装DNA传感器的研究

目的:在金电极表面自组装DNA,制备DNA传感器.方法:以双层组装技术,先进行-SH化合物自组装,得到自组装单分子层,再在SAM上吸附固定DNA,制备DNA修饰电极,用电化学分析法对其组装过程及活性进行表征.结果:基于构建的新型电极,表明双层膜组装方法是组装DNA分子的有效手段,可进一步研究DNA的电化学特性及与其他分子的相互作用.结论:该电极显示良好灵敏度和稳定性.     

图像分析系统检测白血病细胞核多倍体的临床意义

目的研究急性白血病(AL)细胞DNA倍体及增殖细胞核抗原(PCNA)的变化,探讨AL细胞DNA倍体与白血病细胞增殖的关系及临床意义。方法图像细胞术分析41例AL细胞DNA倍体的变化;单克隆抗体免疫细胞化学染色技术检测42例AL细胞PCNA的表达。结果对照组细胞DNA含量以2C为主,未发现DNA含量≥5C的多倍体细胞;DNA含量分布范围较窄,倍体峰相较单一。AL组≥5C的多倍体细胞明显增加,DNA含量分布范围较宽,倍体峰相右移或多峰相。AL、ALL和ANLL的多倍体检出率分别为56.1%,62.5%和52.0%,均明显高于对照组(P<0.01)。对照组PCNA表达阴性,AL、ANLL和ALL的PCNA阳性率分别为59.5%,62%和56%;DNA多倍体阳性组PCNA阳性细胞数(47.6%±20.76%)明显高于DNA多倍体阴性组[(4.61%±11.01%),P<0.01]。结论AL细胞PCNA表达和DNA合成及细胞的恶性增殖潜能密切相关;图像分析技术可同步进行AL细胞DNA测定和形态观察;通过倍体直方图可直观、简便地观察DNA多倍体情况。     

对琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的有效性的再认识

目的探讨琼脂糖凝胶电泳对DNA酶切片段的分离效果.方法将酶切后DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳,回收单一目的片段并再行电泳,观察非目的片段的分离效果.结果第一次回收的"单一"目的片段中,除目的DNA外,还含有多条较小的DNA分子;再次电泳回收的单一目的片段中,肉眼已看不见其它DNA分子,其纯度已大为提高;但是将几个批次的再次回收的目的片段浓缩后进行电泳发现其中仍然含有其它DNA片段.结论琼脂糖凝胶电泳难以将大小不同的DNA片段彻底分开,电泳后回收的目的片段中含有大小不同的污染分子.     

联苯胺对大鼠P53基因损伤作用及器官特异性研究

目的探讨联苯胺对大鼠作用的主要靶器官及其遗传毒性作用机制。方法将联苯胺腹腔注射染毒SD大鼠，提取肝、肺、肾及膀胱组织的DNA，运用单链探针依赖随机化末端连接物聚合酶链反应（RDPCR）技术检测其对大鼠p53基因外显子7的DNA损伤作用。结果杂交显色后在大鼠肝、膀胱、肺组织检测到了杂交条带，而肾组织未检测到杂交条带。结论联苯胺对大鼠p53基因外显子7具有DNA损伤作用，其致癌机制可能与p53基因损伤有关，联苯胺对大鼠的主要靶器官为肝、膀胱和肺。     

CEQTM8800型遗传分析系统检测DNA序列的影响因素研究

目的:研究DNA循环测序过程中一些影响因素及其序列图谱.方法:对测序中模板、引物、测序反应条件和体系及其产物的纯化等因素进行比较研究.结果:模板因素是测序成败的主要原因,模板的质量直接影响着测序图谱;引物失效,与模板匹配不完全,Tm值过低等因素也能引起测序失败;利用乙醇沉淀纯化测序反应产物、效果好且简单、经济.结论:模板的纯度和浓度对测序成功与否起决定作用.最佳反应条件可降低成本,提高测序成功率.仪器操作熟练、正确与否也会影响测序结果.     

405例人体肿瘤细胞DNA含量的流式细胞术检测分析

为探讨不同类型的人体肿瘤细胞周期中 Ｄ Ｎ Ａ 含量与肿瘤组织学间的关系,采用流式细胞术检测了４０５例新鲜肿瘤组织中瘤细胞的 Ｄ Ｎ Ａ 含量,并用光学显微镜观察了肿瘤组织的病理改变。结果显示： ２２例良性肿瘤及３８３例恶性肿瘤中异倍体出现率分别是２７％ 及５２％ ;不同组织类型的恶性肿瘤中异倍体的出现率以腺癌为最高,其中肝癌、肠癌及胃癌异倍体的出现率分别为６１％ 、５５％ 及５１％ ,肉瘤次之,为３７％ ,鳞癌最少,为１７％ ;细胞增殖周期 Ｓ≥１０、 Ｇ２／ Ｍ ≥１０或 Ｓ≥２０、 Ｇ２／ Ｍ ≥５仅在恶性肿瘤中出现,良性肿瘤中无１例达到此值。８例多倍体肿瘤全是恶性。由此提示良性、恶性及不同组织类型的恶性肿瘤异倍体出现率有明显区别（ Ｐ＜ ０．０５）; Ｓ期细胞比率（ Ｓ Ｐ Ｆ）及 Ｇ２／ Ｍ 达到一定数值时,良恶性肿瘤有明显的区别（ Ｐ＜ ０．０１）。     

青椒碱对DEN诱发大鼠肝癌抑制作用的流式细胞光度术分析

用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌为动物模型,采用流式细胞术(FCM)观察中药青椒碱对肝细胞DNA合成的影响。实验结果表明治疗组S期细胞数较模型组明显减少,而G     

从血液中提取DNA方法探讨

目的:研究从血液中提取DNA的方法以应用。方法:静脉抽取血样,分别抗凝或不加抗凝处理后,提取DNA,通过电泳和PCR进行检测。结果:凝血和抗凝血的DNA产量和纯度分别是(40.2±8.86)mgDNA/L血液和(1.87±0.11)mgDNA/L,(39.1±10.2)mgDNA/L血液和(1.92±0.12)mgDNA/L。所有样本的DNA分子量都很高,从两者的DNA样本中能很容易地扩增出t-PA基因的第8内含子区Alu等位基因二态性,因此所提取的DNA是完整可靠的。结论:该方法能快速、简单、有效、无毒地从新鲜血液和凝血中提取DNA,适合于临床检测和分子生物学研究。